牙龈卟啉菌牙龈蛋白酶K催化结构域的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 :克隆牙龈卟啉菌蛋白酶K催化结构域 (kgpcd)基因 ,并使其在大肠杆菌中获得表达。方法 :利用PCR方法克隆kgpcd ,并用基因重组融合表达技术获得在大肠杆菌中的表达。结果 :克隆基因测序结果与GeneBank数据库中的序列一致 ,经诱导表达见Mr为 5 6× 1 0 3 的融合蛋白。结论 :成功克隆了kgpcd的基因 ,并在大肠杆菌中表达了KGPcd蛋白 。

牙龈卟啉菌蛋白酶rgpA的基因克隆和序列分析

目的:扩增牙龈卟啉菌蛋白酶rgpA催化结构域(rgpAcd)的基因片断并作鉴定。方法:利用PCR方法,克隆牙龈卟啉菌rgpAcd基因,并将基因片断插入pMD18-TVector,通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定。结果:克隆基因测序结果与GeneBank数据库中的序列一致。结论:成功克隆了牙龈卟啉菌rgpAcd的基因,为体外表达其活性蛋白奠定了基础。

牙龈卟啉单胞菌Hgp44基因的克隆表达与纯化

目的克隆表达牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）牙龈素中黏附素区域的Hgp44基因，并纯化目的蛋白。方法通过聚合酶链反应（PCR）和基因重组技术，克隆得到PgATCC33277的Hgp44基因，插入到克隆载体pMD18-T中并测序鉴定。经过酶切后将目的基因片段与表达载体pET22b相连，构建出表达质粒pET22b—Hgp44。将重组质粒转化到感受态细胞BL21（DE3）中，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl—β-D—thiogalactoside，IPTG）诱导表达融合蛋白，通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白质印迹法进行分析。用固定化金属亲和层析法对重组蛋白进行分离纯化。结果目的基因片段约为1100bp，与预期大小相符，测序结果与GenBank中ATCC33277国际标准菌株的RgpA的等位基因序列U15282-致。IPTG诱导后的菌体经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳后形成一个以包涵体形式存在的44000的融合蛋白。蛋白质印迹法检测证实其具有免疫原性。用镍离子金属螯合层析柱纯化出了目的蛋白，最后得到约3．5mg／L的目的蛋白。结论成功克隆表达了PgHgp44基因，并纯化出了目的蛋白。