贝母素乙调节RhoA/ROCK信号通路对膝骨关节炎大鼠软骨损伤的影响

目的 探讨贝母素乙调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK)信号通路对膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA)大鼠软骨损伤的影响。方法 以碘乙酸钠(MIA)法制备KOA大鼠模型,随机分为模型组、贝母素乙(3.5 mg/kg)组、贝母素乙(3.5 mg/kg)+LPA(RhoA激活剂,1 mg/kg)组,每组10只,另选10只大鼠为对照组。机械刺激法和热辐射法检测大鼠膝关节疼痛症状;检测大鼠关节肿胀度、膝关节宽度并以步态评分评测其关节功能;透射电镜检测大鼠膝关节软骨细胞超微结构;TUNEL染色检测大鼠关节软骨细胞凋亡比;酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清和关节液促炎因子白细胞介素(IL)-18、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平;免疫印迹检测各组大鼠关节软骨组织凋亡(Cleaved caspase-3、Bax)和RhoA/ROCK通路相关蛋白表达。结果 贝母素乙可降低KOA大鼠关节肿胀度、膝关节宽度、步态评分、软骨细胞凋亡比、血清及关节液IL-18、MCP-1水平、软骨组织Cleaved caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK1蛋白表达,升高机械痛阈值、热痛阈值(P<0.05);LPA可减弱贝母素乙对KOA大鼠关节软骨损伤的改善作用。结论 贝母素乙可通过抑制RhoA/ROCK信号激活而抑制KOA大鼠关节炎症反应和关节软骨细胞凋亡,减轻软骨损伤。

桃叶珊瑚苷调节RhoA/ROCK信号通路对胶质母细胞瘤细胞活力和上皮间质转化的影响

[目的]研究桃叶珊瑚苷(AU)对胶质母细胞瘤(GBM)细胞活力和上皮间质转化(EMT)的影响,并对其作用机制进行探讨。[方法]将U87细胞随机分为对照组、AU低浓度组、AU中浓度组、AU高浓度组、Y-27632组、AU高浓度+Y-27632组。细胞计数器试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)1、ROCK2表达。构建GBM裸鼠模型,随机分为裸鼠对照组、AU组、Y-27632组、AU+Y-27632组,测量肿瘤质量与体积,免疫组化法检测移植瘤组织RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。[结果]GBM细胞活力随着AU浓度的升高而逐渐降低(P<0.05),选择U87作为后续实验细胞,选择10、25、50μmol/L浓度作为AU后续实验浓度。与对照组比较,AU低、中、高浓度组和Y-27632组细胞活力、迁移和侵袭细胞数、MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimentin、RhoA、ROCK1、ROCK2表达显著下降,凋亡率、E-cadherin表达显著升高(P<0.05),其中高浓度AU和Y-27632组共同处理的细胞变化更显著(P<0.05)。AU和Y-27632均能抑制移植瘤质量和体积,降低RhoA/ROCK信号通路蛋白表达(P<0.05)。[结论]AU能抑制GBM细胞活力、迁移侵袭和EMT,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。

芍药苷调节RhoA/ROCK信号通路对实验性自身免疫性葡萄膜炎小鼠Th17/Treg免疫平衡的影响

目的探讨芍药苷调节Ras同源基因家族蛋白A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)小鼠辅助性T淋巴细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)免疫平衡的影响。方法随机选出10只小鼠作为正常对照组,其余小鼠构建EAU模型,将造模成功小鼠随机平分为模型组、芍药苷组(10 mg·kg^(-1)芍药苷)、RhoA/ROCK信号通路激活剂溶血磷脂酸(LPA)组(25μmol·L^(-1)LPA)、芍药苷+LPA组(10 mg·kg^(-1)芍药苷+25μmol·L^(-1)LPA),每组10只。模型组和正常对照组给予等量生理盐水,给药每天1次,持续14 d。眼前节临床表现评分评估炎症严重程度;HE染色观察眼球组织病理形态;ELISA法检测血清中炎性因子转化生长因子-β(trarsforming growth factor beta,TGF-β)、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素23(IL-23)水平;流式细胞术检测脾脏Th17/Treg细胞水平;Western Blot法检测维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、叉头状转录因子3(Foxp3)以及RhoA/ROCK信号通路蛋白表达。结果正常对照组小鼠无虹膜、结膜血管舒张充血,与正常对照组比,模型组小鼠出现虹膜血管舒张充血,前房、虹膜、睫状体和视网膜内均有大量炎性细胞膨胀,眼前节临床表现评分、IL-17和IL-23含量、Th17细胞水平、Th17/Treg、RORγt、RhoA、ROCK1蛋白水平明显升高(P<0.05),IL-10和TGF-β含量、Treg细胞水平、Foxp3水平明显下降(P<0.05)。与模型组比,芍药苷组小鼠虹膜血管充血症状明显缓解,眼前节临床表现评分、IL-17和IL-23含量、Th17细胞水平、Th17/Treg、RORγt、RhoA、ROCK1蛋白水平明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β含量、Treg细胞水平、Foxp3水平明显升高(P<0.05);而LPA加重了眼部损伤(P<0.05),逆转了芍药苷对EAU小鼠的改善效果(P<0.05)。结论芍药苷可通过下调RhoA/ROCK信号通路调节EAU小鼠Th17/Treg免疫平衡减轻EAU小鼠葡萄膜炎。

艾灸联合保真汤加减治疗糖尿病肾病的疗效观察及对CT灌注参数、Rho/ROCK信号通路蛋白的影响

目的 观察艾灸联合保真汤加减治疗糖尿病肾病气阴两虚证的临床疗效及对CT灌注参数、Rho/ROCK信号通路蛋白的影响。方法 将146例糖尿病肾病气阴两虚证患者随机分为观察组(74例)和对照组(72例)。在对症治疗的基础上,对照组给予厄贝沙坦片,观察组给予艾灸联合保真汤加减。观察两组中医主症积分、CT灌注参数[血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、血肌酐(serum creatinine, SCr)、尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate, UAER)和24 h尿蛋白定量(24-hour urinary protein quantification, 24 h Upro)]、肾血流指标[舒张末期血流速度(end-diastolic velocity, EDV)、肾段动脉的收缩期峰值流速(peak-systolic velocity, PSV)、搏动指数(pulsatility index, PI)和阻力指数(resistive index, RI)]、血清炎性因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)和C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)]水平及Rho/ROCK信号通路[Ras同源基因家族成员A(Ras homolog gene family member A, RhoA)、Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶Ⅰ(Rho-associated coiled-coil containing protein kinaseⅠ, ROCKI)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)和钙黏附蛋白-E(E-cadherin, E-Cad)]蛋白水平,并比较两组临床疗效及不良反应。结果 观察组总有效率为97.3%(72/74),明显高于对照组的81.9%(59/72)(P<0.05)。观察组治疗后中医主症积分低于治疗前和对照组(P<0.05)。两组治疗后CT灌注参数降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。观察组治疗后PSV、EDV较治疗前和对照组加快(P<0.05),RI、PI较治疗前和对照组降低(P<0.05)。观察组治疗后血清炎性因子水平较治疗前和对照组降低(P<0.05)。观察组治疗后Rho A、ROCKI、α-SMA蛋白水平较治疗前和对照组降低(P<0.05),E-Cad蛋白水平较治疗前和对照组升高(P<0.05)。观察组不良反应发生率为1.4%(1/74),低于对照组的19.4%(14/72)(P<0.05)。结论 在对症治疗的基础上,艾灸联合保真汤加减可明显提高糖尿病肾病气阴两虚证患者的治疗效果,其机制可能与改善CT灌注参数,调节血清Rho/ROCK信号通路蛋白相关。

基于ROCK/NOX4信号通路探究刺芒柄花素对2型糖尿病大鼠内质网应激损伤及肾功能的影响

目的基于RAS同源基因家族成员相关激酶(ROCK)/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)4信号通路探究刺芒柄花素对2型糖尿病大鼠内质网应激损伤及肾功能的影响。方法SPF级健康8周龄雄性C57BL/6大鼠60只,随机分为5组,各12只,健康组、模型组、刺芒柄花素低、中、高组,除健康组外均建立2型糖尿病大鼠模型,刺芒柄花素低组、刺芒柄花素中组、刺芒柄花素高组分别给予20、40、100 mg/kg刺芒柄花素灌胃,其余组别灌胃等体积生理盐水。采用自动生化分析仪测定肾功能指标。苏木素-伊红(HE)染色与Masson染色观察大鼠肾组织病形态。TUNEL检测肾小管上皮细胞凋亡。免疫组化检测RAS同源基因家族成员(Rho)A、NOX4、ROCK阳性表达。Western印迹检测内质网应激相关蛋白表达。结果HE染色结果显示:健康组肾脏组织结构正常;模型组肾小球有一定程度萎缩,组织结构排列不均匀,并且有肿胀、脱落现象、还存在空泡样变性、鲍曼囊腔扩,而经过刺芒柄花素干预后,上述情况有所改善,且呈现出明显的剂量依赖性。Masson染色结果显示:健康组肾组织正常;模型组肾小球、肾小管基底膜增厚,产生空泡样病变,肾间质胶原纤维沉积明显;在经过刺芒柄花素干预后上述状况明显改善,且呈现出明显的剂量依赖性。健康组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著低于模型组(P<0.05)。模型组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著高于刺芒柄花素低组(P<0.05)。刺芒柄花素低组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著高于刺芒柄花素中组(P<0.05)。刺芒柄花素中组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著高于刺芒柄花素高组(P<0.05)。结论刺芒柄花素可能是通过调控Rho/ROCK/NOX4信号通路抑制了2型糖尿病大鼠内质网应激,改善肾功能,对肾脏起保护作用。

益母草碱调节RhoA/ROCK信号通路对冠心病大鼠主动脉内皮细胞损伤的影响

目的:研究益母草碱(Leo)通过调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK)信号通路对冠心病(CHD)大鼠主动脉内皮细胞损伤的影响及机制。方法:将造模成功的75只CHD大鼠随机分为模型组(CHD组)、Leo低、中、高剂量组(Leo-L组、Leo-M组、Leo-H组)和Leo高剂量组+RhoA激活剂LPA组(Leo-H+LPA组),每组15只。Leo-L、Leo-M、Leo-H组分别灌胃15、30、60mg·kg^(-1)·d^(-1)的Leo,Leo-H+LPA组灌胃60mg·kg^(-1)·d^(-1)的Leo,另需腹腔注射1mg·kg^(-1)·d^(-1)的LPA,Control组和CHD组以相同方式给予等量生理盐水,均连续干预4周。超声心动图测定心功能指标;全自动生化分析仪测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)、内皮细胞特异性分子-1(EMS1)、血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察主动脉内皮损伤;流式细胞仪检测主动脉内皮细胞凋亡;免疫印迹法(Western blot)检测RhoA/ROCK信号通路相关蛋白表达。结果:与Control组相比,CHD组主动脉壁增厚且染色不均匀,细胞膨大,排列紊乱,内皮粗糙;左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、ET-1、VCAM-1和EMS1水平、细胞凋亡率及RhoA、ROCK1和ROCK2蛋白表达显著升高(P<0.05),左室射血分数(LVEF)、缩短分数(FS)、HDL-C、NO水平显著降低(P<0.05)。与CHD组相比,Leo-L组、Leo-M组、Leo-H组主动脉染色均匀,动脉壁结构清晰,细胞排列紧密且形态较正常,内膜较平滑;LVEDD、LVESD、TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、ET-1、VCAM-1和EMS1水平、细胞凋亡率及RhoA、ROCK1和ROCK2蛋白表达逐渐降低(P<0.05),LVEF、FS、HDL-C、NO水平逐渐升高(P<0.05)。Leo-H+LPA组逆转了Leo对CHD大鼠的保护作用(P<0.05)。结论:Leo可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善CHD大鼠心功能,降低血脂,抑制炎症,进而减轻CHD大鼠主动脉内皮细胞损伤。

补阳还五汤黄芪不同配比组方通过ROCK信号通路抑制动脉粥样硬化的机制研究

目的 观察补阳还五汤(BYHWD)黄芪不同配比组方通过调控ROCK信号通路对氧化型低密度脂蛋白(oxidized-low density lipoprotein, ox-LDL)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(A10)氧化应激及炎性反应的影响,探讨补阳还五汤黄芪不同配比组方抑制动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)的作用机制,明确补阳还五汤黄芪最佳配比组方抗AS的新靶点和新思路。方法 将大鼠主动脉血管平滑肌细胞分为空白对照组、模型对照组、BYHWD黄芪低剂量组(黄芪30g)、BYHWD黄芪中剂量组(黄芪60g)、BYHWD黄芪高剂量组(黄芪90g)、BYHWD黄芪超高剂量组(黄芪120g)、辛伐他汀组。除空白对照组外,其他治疗组均在ox-LDL刺激后予以BYHWD黄芪低、中、高、超高剂量含药血清和辛伐他汀血清干预。采用MTT法检测不同组别细胞的活力情况;试剂盒检测细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)的水平;免疫荧光法检测基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase2, MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase 9, MMP-9)的表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测肌球蛋白磷酸酶靶向亚基1(Myosin phosphatase target subunit 1,MYPT-1)、磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶向亚基1(Phosphorylation myosin phosphatase target subunit 1,p-MYPT-1)、肌球蛋白轻链磷酸酶(Myosin light chain Phosphorylase, MLCP)、组织因子(Tissue factor, TF)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的蛋白表达水平。结果 MTT实验结果显示,与空白对照组和模型对照组相比,补阳还五汤黄芪不同配比各组间和辛伐他汀组细胞活力明显增强(P<0.05);试剂盒检测结果显示,与模型对照组相比,补阳还五汤黄芪低、中、高、超高剂量组和辛伐他汀含药血清干预后,细胞上清液中SOD、CAT水平上升,MDA水平降低(P<0.05);免疫荧光结果显示,补阳还五汤黄芪低、中、高、超高剂量组和辛伐他汀组MMP-2、MMP-9阳性细胞数量明显减少(P<0.05);Western Blot结果显示,与正常对照组相比,模型对照组MYPT-1、p-MYPT-1、MLCP、TF、PAI-1蛋白的表达量明显增多,经过补阳还五汤黄芪低、中、高、超高剂量和辛伐他汀含药血清干预治疗后,各组细胞MYPT-1、p-MYPT-1、MLCP、TF、PAI-1蛋白的表达量明显降低(P<0.05)。补阳还五汤黄芪低、中、高、超高剂量组各组间比较,黄芪超高剂量组(黄芪120g)的蛋白表达水平明显少于其他黄芪不同配比组方各组(P<0.05)。BYHWD黄芪超高剂量(黄芪120g)组与辛伐他汀组相比,BYHWD黄芪超高剂量(黄芪120g)组p-MYPT-1、MLCP、TF的蛋白表达水平较低(P<0.05)。结论 补阳还五汤黄芪不同配比组方可能有调控ROCK信号通路,下调MYPT-1、p-MYPT-1、MLCP表达,抑制动脉粥样硬化氧化应激及炎性反应的作用,其中补阳还五汤黄芪超高剂量组(黄芪120g)的治疗效果最佳。

基于RhoA/ROCK信号通路探讨中药干预缺血性脑卒中的研究进展

基于Ras同源基因家族成员A/Rho相关卷曲螺旋激酶(RhoA/ROCK)信号通路综述中药干预缺血性脑卒中的研究进展。RhoA/ROCK信号通路在缺血性脑卒中的病理过程中发挥着重要作用,主要涉及细胞凋亡、兴奋性毒性、神经炎症、血脑屏障和神经功能等方面。部分中药复方及其活性成分可以通过调控RhoA/ROCK信号通路及上下游靶基因的表达,起到减少神经元凋亡、减轻炎症反应、减小脑梗死面积、保护血脑屏障、促进突触修复和再生等作用,为中药治疗缺血性脑卒中后续作用机制的研究及治疗新靶点的开发提供新思路。

炎调方调控Rho/ROCK信号通路对脓毒症急性胃肠损伤小鼠肠上皮细胞凋亡的研究

目的探讨炎调方调控Rho/ROCK信号通路对脓毒症急性胃肠损伤小鼠肠上皮细胞凋亡的影响。方法取70只BALB/c小鼠随机分为空白组、假手术组和造模小鼠。除空白组、假手术组外,各组小鼠均采用盲肠结扎穿孔术(cecum ligation and puncture,CLP)构建脓毒症急性胃肠损伤小鼠模型,将造模成功的小鼠随机分为模型组、炎调方低、中、高剂量组和ROCK抑制剂组。采用HE染色观察小鼠回肠组织病理学改变;ELISA法检测各组小鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平;免疫组织化学检测观察PCNA、Ki-67的表达;蛋白印迹法检测回肠组织凋亡指标cleaved caspase3蛋白、Bax蛋白表达;RT-qPCR检测小鼠回肠组织ROCK mRNA、MLC mRNA表达。结果较空白组和假手术组相比,模型组小鼠的Chiu’s病理评分、促炎介质(IL-1β、IL-6、TNF-α)水平、cleaved caspase3蛋白、Bax蛋白、ROCK mRNA、MLC mRNA水平升高(P<0.05),而抑炎介质(IL-10)水平和回肠组织中PCNA、Ki-67表达降低(P<0.05)。与模型组比较,炎调方各组随着剂量增加,回肠组织病理学改变均得到不同程度改善,其Chiu’s病理评分、血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平、cleaved caspase3蛋白、Bax蛋白、ROCK mRNA、MLC mRNA的表达降低(P<0.05),而IL-10水平、回肠组织中PCNA、Ki-67表达升高(P<0.05)。结论炎调方可能通过调控Rho/ROCK信号通路抑制脓毒症急性胃肠损伤小鼠的肠上皮细胞凋亡,从而具有减轻肠道组织炎症反应,最终达到防止肠黏膜组织损伤的作用。

地诺孕素配合腹腔镜治疗子宫内膜异位症的效果及对Rho/ROCK信号通路的影响

目的探讨地诺孕素配合腹腔镜治疗子宫内膜异位症(EMT)的效果及对Rho/Rho激酶(ROCK)信号通路的影响。方法选取2020年6月至2022年6月湖南妇女儿童医院救治的80例EMT患者,按随机数字表法分为对照组(40例)和观察组(40例)。对照组采用单纯腹腔镜+醋酸亮丙瑞林微球治疗,观察组采用地诺孕素配合腹腔镜+醋酸亮丙瑞林微球治疗。治疗6个月后对比两组的临床疗效及不良反应发生情况;比较治疗前及治疗6个月后两组性交痛、月经期间疼痛、非经期下腹疼痛的视觉模拟评分法(VAS),卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)水平,以及Rho/ROCK信号通路相关分子(RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ)水平。结果观察组治疗总有效率为95.00%,高于对照组的85.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组性交痛、月经期间疼痛、非经期下腹疼痛的VAS评分比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗6个月后,两组性交痛、月经期间疼痛、非经期下腹疼痛的VAS评分均较治疗前降低(P<0.05),且观察组性交痛、月经期间疼痛、非经期下腹疼痛的VAS评分均低于对照组(P<0.05)。治疗前,两组FSH、LH、E2水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗6个月后,两组FSH、LH、E2水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组FSH、LH、E2水平均低于对照组(P<0.05)。治疗前,两组RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗6个月后,两组RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ水平均低于对照组(P<0.05)。治疗6个月后,观察组的不良反应总发生率为5.00%,明显低于对照组的15.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论地诺孕素配合腹腔镜治疗EMT有助于提高临床疗效,改善患者疼痛评分,降低患者雌激素水平,还可抑制Rho/ROCK信号通路相关因子的表达,降低不良反应发生率。

Rho/ROCK信号通路在糖尿病视网膜病变中的研究进展

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是导致劳动年龄人群视力障碍的重要原因,其复杂的发病机制尚未完全明确。虽然一些新兴治疗方法在DR的治疗中取得显著疗效,但仍存在治疗效果欠佳及并发症等问题。Rho GTP酶是一种小分子蛋白,通过激活下游蛋白ROCK参与细胞骨架调节等多种细胞活动。在DR发病过程中Rho/ROCK信号通路被激活,抑制Rho/ROCK信号传导可能抑制DR的进展。本文从炎症、新生血管、血-视网膜屏障(blood retinal barrier,BRB)、晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)、糖尿病视网膜神经变性(diabetic retinal neurodegeneration,DRN)等方面阐述Rho/ROCK信号通路在DR发病机制中的研究进展,以期为DR的治疗提供新思路。

宣肺平喘方对哮喘大鼠Rho/Rock信号通路调控作用的实验研究

目的:观察宣肺平喘方对支气管哮喘大鼠气道重建中Rho/Rock信号通路蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、宣肺平喘方组和地塞米松组4组,每组10只。除正常组外,其余3组均采用卵蛋白雾化吸入诱发哮喘,宣肺平喘方组和地塞米松组在雾化吸入的同时分别给予宣肺平喘方及地塞米松治疗,共2 W。HE染色法观察大鼠肺组织病理学变化,荧光免疫组化法测定大鼠肺支气管壁Rho A蛋白、Rock 2蛋白表达。结果:HE染色显示模型组大鼠支气管壁塌陷,周围有大量炎性细胞渗出;宣肺平喘方组及地塞米松组支气管形态完整,炎性细胞渗出较少;荧光免疫组化法检测结果显示Rho A蛋白、Rock 2蛋白在大鼠支气管壁和肺泡壁均有表达;模型组Rho A蛋白、Rock 2蛋白表达量明显高于正常组,宣肺平喘方组和地塞米松组与模型组比较Rho A蛋白、Rock 2蛋白表达明显下降。结论:宣肺平喘方对哮喘气道重建中Rho/Rock信号通路有良好的调控作用。

桃叶珊瑚苷调控RhoA/ROCK信号通路对胃癌MGC803细胞上皮间质转化和血管生成拟态的影响

目的:探究桃叶珊瑚苷(AU)调控RhoA/ROCK信号通路对胃癌MGC803细胞上皮间质转化(EMT)进程和血管生成拟态(VM)形成的影响。方法:常规培养人胃癌MGC803细胞,将其随机分为对照组、AU-L组(20μmol/L AU)、AU-M组(40μmol/L AU)、AU-H组(80μmol/L AU)、AU-H+RhoA激活剂水仙环素(Nar)组(AU-H+Nar组,80μmol/L AU+30μmol/L Nar)。采用CCK-8法、Transwell实验、细胞划痕实验分别检测不同浓度AU对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,三维细胞培养法观察不同浓度AU对细胞体外VM管腔结构形成的影响,WB法检测AU对各组细胞RhoA、ROCK、VM与EMT相关蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,AU-M组、AU-H组MGC803细胞增殖率(48、72 h时)、细胞迁移率、细胞侵袭数目、VM管腔结构数,以及RhoA、ROCK1、N-cadherin、vimentin、VE-cadherin的蛋白表达均显著降低(均P<0.05),E-cadherin表达显著升高(P<0.05);同时,使用Nar处理显著减弱了AU对MGC803细胞EMT和VM形成的抑制作用(均P<0.05)。结论:AU通过下调RhoA/ROCK信号通路抑制胃癌MGC803细胞的增殖、迁移、侵袭、EMT和VM形成过程。

槐耳多糖调节Rho/ROCK信号通路对结肠癌SW620细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨槐耳多糖调节Rho/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路影响结肠癌SW620细胞恶性生物学行为。方法:人结肠癌细胞株SW620分为对照组、槐耳多糖组、水仙环素(Rho/ROCK途径激活剂)组、槐耳多糖+水仙环素组。分析各组细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和集落形成能力。免疫印迹检测RhoA、ROCK1、增殖细胞周期相关核抗原(Ki67)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、caspase-3蛋白表达水平。建立裸鼠结肠癌移植瘤模型验证槐耳多糖对裸鼠体内移植瘤生长的影响。结果:槐耳多糖抑制SW620细胞增殖、迁移、侵袭、克隆集落数,并增加细胞凋亡以及RhoA、ROCK1、Ki67、MMP2蛋白表达水平。水仙环素逆转了槐耳多糖对SW620细胞恶性生物学行为的抑制作用。结论:槐耳多糖通过抑制Rho/ROCK信号通路抑制SW620细胞恶性生物学行为。

基于RhoA/Rock1信号通路探讨养心汤保护血管内皮的作用机制

目的:观察养心汤对SD模型大鼠血管内皮损伤的影响并探讨其作用机制。方法:将40只SD雄性大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、法舒地尔组、养心汤组,每组10只。空白组喂养普通饲料,模型组、法舒地尔组、养心汤组喂养含3%L-蛋氨酸的普通饲料共12周,建立大鼠血管损伤模型。建模成功后,法舒地尔组以2.7 mg/(kg·d)剂量腹腔注射盐酸法舒地尔,养心汤组以2.34 g/(kg·d)剂量灌胃养心汤浸膏混悬剂,空白组和模型组大鼠灌胃等体积纯净水,各组均干预4周。干预结束后,大鼠麻醉称重并取材,苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察大鼠胸主动脉血管内皮形态学改变情况;反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测大鼠胸主动脉RhoA、Rock1、eNOS mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测大鼠胸主动脉RhoA、Rock1、p-MYPT1、eNOS蛋白表达。结果:HE染色结果显示,空白组大鼠血管内皮完整、连续,未见明显损伤;模型组大鼠血管内皮大部分脱落,偶见残存内皮,损伤程度明显加重;养心汤组、法舒地尔组大鼠血管内皮基本连续、完好,损伤程度明显减轻。RT-PCR、WB结果显示,养心汤对RhoA/Rock1信号通路的蛋白及基因表达均有下调作用(P<0.05),同时能够上调eNOS蛋白及基因的表达(P<0.05)。结论:养心汤能够改善血管内皮损伤模型大鼠病理损伤状态,其作用机制可能与下调大鼠胸主动脉RhoA、Rock1蛋白及mRNA表达,抑制RhoA/Rock1信号通路相关。

Rho/ROCK信号通路在神经可塑性中的研究进展

神经可塑性是大脑在发育过程中产生的能够适应外界环境变化的能力,发生机制是神经元产生突触可塑性,通过突触与大脑其他部位的神经元相互作用,最终实现大脑功能的可塑性变化。神经可塑性是神经发生过程中一种重要的分子基础,对中枢神经系统疾病的治疗具有重要意义。Rho/ROCK(Rho GTPase/Rho-associated protein kinase)信号通路是目前研究最为广泛的信号通路之一,它在神经发育和突触可塑性中都发挥了重要作用。本文就Rho/ROCK信号通路在神经可塑性中的作用及相关研究进展进行综述。

基于Rho/ROCK信号通路的麦粒灸对自发性高血压大鼠主动脉血管内皮功能保护作用机制探讨

目的观察麦粒灸对自发性高血压大鼠(SHR)降压作用及主动脉血管内皮功能的保护并探讨其可能的机制`。方法将SHRs随机分为模型组和麦粒灸组,WKY大鼠设为空白组。模型组、空白组不施灸,麦粒灸组实行麦粒灸治疗。观测各组大鼠血压、血清一氧化氮(NO)含量、主动脉形态学改变。采用Western blot法和qPCR法测定各组大鼠主动脉组织中RhoA、ROCK1和RhoA、ROCK1mRNA表达水平。结果与模型组相比,麦粒灸组血压下降,主动脉内膜增生不明显,仅部分内膜脱落,血清NO含量明显上升,主动脉RhoA、ROCK1和RhoA、ROCK1 mRNA含量显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论麦粒灸能有效降低SHR血压,保护主动脉血管内皮功能,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路表达相关。

杜仲醇提取物通过RhoA/ROCK信号通路调控大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化作用研究

目的:分析杜仲醇提取物通过RhoA/ROCK信号通路调控骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化中的影响。方法:选取实验用纯系大鼠50只,随机数字表法分成5组:正常组(10只)、模型组(10只)、杜仲低剂量组(10只)、杜仲中剂量组(10只)与杜仲高剂量组(10只),模型组与杜仲低、中、高剂量组制备OP大鼠模型,杜仲低、中、高剂量组大鼠分别使用50、100、200 mg/kg杜仲醇提取物灌胃,正常组、模型组大鼠5 mL/kg生理盐水灌胃,末次给药后断颈处死大鼠,经过BMSCs培养并察看大鼠细胞成长及矿化状况,RT-PCR检测大鼠软骨细胞内ROCK1、RhoA表达状况及BMSCs成骨诱导后骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)mRNA表达。结果:模型组、杜仲低剂量组大鼠细胞矿化率较正常组显著降低,杜仲中、高剂量组大鼠细胞矿化率较模型组、杜仲低剂量组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、杜仲低剂量组大鼠ROCK1、RhoA mRNA表达量较正常组显著降低,杜仲中剂量组、杜仲高剂量组大鼠ROCK1、RhoA mRNA表达量较模型组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、杜仲低剂量组OPN、Runx2及OCN mRNA表达量较正常组显著降低,杜仲中、高剂量组OPN、Run×2及OCN mRNA表达量较模型组、杜仲低剂量组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:杜仲醇提取物可提升BMSCs内RhoA/ROCK信号路径ROCK1、RhoA mRNA表达量,促进成骨分化和BMSCs增殖,但其具体机制仍需行更深入研究。

中药调控Rho/ROCK信号通路治疗平滑肌细胞功能异常疾病机制及研究进展

中药调控Rho/ROCK信号通路的研究是近年研究的热点之一,其介导了多种平滑肌细胞功能异常的疾病。单味中药及其提取物和一些中药复方可以通过调节Rho/ROCK信号通路治疗表型转化异常所导致的平滑肌细胞功能异常疾病。中药干预Rho/ROCK信号通路的优势和作用靶点尚未明确,需要归纳与总结。就此查阅近十几年来国内外文献,对Rho/ROCK信号通路与平滑肌细胞的相关性和作为治疗靶点的中药治疗优势等进行综述。

Rho/ROCK信号通路对在异位子宫内膜间质细胞NF-κB、MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的探讨Rho/ROCK信号通路激活后,在异位子宫内膜间质细胞中NF-κB、MMP-9和TIMP-1表达的变化情况及可能的作用机制,为临床提供新的治疗靶点。方法取90例卵巢处子宫内膜在异位病灶以及90例正常子宫内膜,分离、纯化间质细胞,建立体外间质细胞培养模型。酶免疫吸附的方法分析ROCKⅠ激酶活性。QPCR法检测NF-κB、MMP-9和TIMP-1的转录水平,免疫印迹(Western blot)法检测NF-κB、MMP-9和TIMP-1的蛋白表达水平。结果在异位子宫内膜间质细胞多呈梭形或者多角形,贴壁和增殖较快;在异位子宫内膜间质细胞的ROCKⅠ激酶活性和转录水平显著高于正常子宫内膜(P<0.01);在异位子宫内膜间质细胞的NF-κB、MMP-9转录水平和蛋白表达水平显著高于正常子宫内膜(P<0.01),而TIMP-1的转录水平和蛋白表达水平显著低于正常子宫内膜(P<0.01)。结论在异位子宫内膜间质细胞中Rho/ROCK信号通路处于激活状态,Rho/ROCK信号通路激活以后,在异位子宫内膜间质细胞NF-κB、MMP-9的表达均升高,TIMP-1的表达降低。其机制可能与该通路激活后引起下游基因表达变化有关。