壳寡糖通过调控SOCS3/STAT3信号通路改善脂多糖诱导的小鼠神经炎症

目的探讨壳寡糖(chitosan oligosaccharide,COS)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠神经炎症的改善作用及机制。方法通过对10周龄C57BL/6N小鼠腹腔注射LPS建立神经炎症模型。动物随机分为5组,分别是:对照(CON)组、LPS组、LPS+COS低剂量(LPS+COS 50 mg/kg)组、LPS+COS中剂量(LPS+COS 100 mg/kg)组、LPS+COS高剂量(LPS+COS 200 mg/kg)组。LPS注射完毕后进行旷场实验、新物体识别、Morris水迷宫等行为学实验。处死动物后,收集脑组织,酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分析脑内促炎因子白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和抗炎因子白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)的表达;Western blot分析脑内信号传导及转录激活蛋白(STAT3)、细胞因子信号抑制物(SOCS3)蛋白的表达水平。结果行为学实验结果表明,COS可以改善LPS诱发的小鼠认知障碍下降等表现。ELISA结果表明,LPS组小鼠的促炎细胞因子的释放量显著增加,抗炎细胞因子的释放量显著降低;而COS灌胃可逆转这一变化趋势。Western blot结果提示,与CON组相比,LPS的STAT3磷酸化水平显著升高,同时也促进SOCS3的蛋白表达升高;而COS则显著下调这两个蛋白的表达。结论COS可能通过抑制SOCS3/STAT3信号通路改善LPS引起的小鼠神经炎症。

SOCS3在病理性疼痛中的作用

细胞因子信号传导抑制因子3(SOCS3)是细胞因子信号传导抑制因子蛋白质家族(SOCS)的一员。SOCS3是一种重要的细胞内蛋白质,在体内负调控细胞因子介导的信号通路,参与机体免疫、生长、造血、新陈代谢及肿瘤增殖等各种关键过程。近年的研究发现,SOCS3参与疼痛的调控,在神经病理性疼痛、炎性疼痛等多种类型疼痛及吗啡耐受中发生表达的变化。在坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)模型中,磷酸二聚化的STAT3转移到细胞核内诱导脊髓背角SOCS3表达增加,在完全弗氏佐剂(CFA)炎性疼痛大鼠中,下丘脑室旁核(PVN)内SOCS3在急性期蛋白质表达水平增加、其慢性期表达下降,在骨癌疼痛大鼠腰2~5背根神经节(DRG)中SOCS3蛋白质水平显著下降。鞘内注射SOCS3慢病毒载体、阿司匹林触发的脂蛋白A4(ATL)和芍药苷,或通过抑制非编码RNA表达降低非编码RNA对SOCS3的抑制作用,能够增加SOCS3表达发挥镇痛作用。SOCS3通过抑制Janus激酶/信号转导子和转录激活子3(JAK/STAT3)信号通路及下游基因的表达,阻碍白细胞介素-1(IL-1)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等多种炎性因子的分泌,以及核因子κB(NF-κB)的激活和转移等,发挥抗炎和镇痛作用。本文主要对SOCS3缓解疼痛的可能机制进行综述,探讨SOCS3在病理性疼痛中的作用。

下调Socs3表达增加肾癌细胞对干扰素α敏感性的实验研究

目的探索抑制细胞因子信号转导SOCS蛋白是否可以降低肾细胞癌的IFN抗性及可能机制。方法培养人肾癌ACHN细胞并转染SOCS3 siRNA,采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blotting检测SOCS家族的mRNA、蛋白表达;采用MTT法检测细胞增殖活性;建立小鼠肾癌肺转移模型,记录小鼠的生存情况。结果与对照组比较,IFN-α处理组SOCS3 mRNA表达显著增加(4.96±0.21 vs.103.22±0.24,P<0.001)。MTT法结果显示,与阴性对照组(转染NC-siRNA)比较,5.0、12.5、25.0、50 nmol/L SOCS3 siRNA可显著降低IFN-α处理组ACHN细胞增殖率(P<0.05)。Western blotting结果显示,与阴性对照组比较,SOCS3 siRNA组中p-STAT1及p-STAT3表达明显升高(p-STAT1:1.87±0.07 vs.1.02±0.01,P<0.001;p-STAT3:1.35±0.24 vs.1.12±0.03,P<0.05)。敲低SOCS3表达可增强IFN-α治疗肾癌肺转移小鼠的生存。结论下调SOCS3表达增强了STAT1激活和IFN-α的体外和体内抗肿瘤活性。基于SOCS3在介导对IFN-α免疫疗法的耐药性中发挥的作用,使用靶向SOCS3的siRNA和IFN-α的联合疗法可能是治疗肾癌及肾癌肺转移癌的有吸引力的候选药物。

SOCS3负调控流感病毒诱导干扰素表达机理的初步研究

【目的】探究细胞因子信号转导抑制因子3(Suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)在流感病毒(Influenza virus)感染过程中对干扰素(Interferon,IFN)信号通路的调控作用。【方法】通过慢病毒感染的方式在人非小细胞肺癌细胞(A549细胞)中过表达SOCS3,利用siRNA技术在A549细胞中敲低SOCS3的表达,然后使用流感病毒感染SOCS3过表达或敲低的细胞系以及对照细胞系,于不同时间点收取RNA或蛋白样品,采用RT-PCR和Western blot技术检测干扰素信号通路中关键节点分子的表达或活化情况。【结果】检测发现细胞中过表达SOCS3后I型干扰素IFN-β和III型干扰素IL-28(Interleukin-28)、IL-29(Interleukin-29)表达水平下降,而敲低SOCS3表达后IFN-β及IL-28、IL-29的表达水平升高。进一步研究发现,过表达SOCS3对识别流感病毒RNA的模式识别受体视黄酸诱导基因-I(Retinoic acid-inducible gene 1,RIG-I)、黑色素瘤分化相关蛋白5(Melanoma differentiation-associated protein 5,MDA5)、Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)以及干扰素调节因子7(Interferon regulatory factor 7,IRF7)的mRNA表达均有抑制作用。同时SOCS3还能影响干扰素下游信号转导与转录激活因子1(Signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)的活化,细胞中过表达SOCS3抑制流感病毒诱导的STAT1的磷酸化,而敲低SOCS3表达则使STAT1的磷酸化水平升高。【结论】流感病毒感染后,SOCS3能够在转录水平下调模式识别受体及干扰素调节因子的表达,抑制Ⅰ型和Ⅲ型干扰素的产生,同时还影响STAT1的活化从而阻断干扰素信号的传递。

芹菜素通过miR-181a-5p/SOCS3信号通路调节Treg/Th17细胞平衡减轻类风湿关节炎进展

目的探讨芹菜素调节miR-181a-5p/SOCS3信号通路对类风湿关节炎大鼠关节炎的影响及其可能的作用机制。方法将Wistar大鼠随机分为对照组、模型组[胶原诱导性关节炎(CIA)组]、芹菜素组(API组)、芹菜素^(+)敲减对照组(API^(+)sh-NC组)和芹菜素^(+)敲减SOCS3组(API^(+)sh-SOCS3组)。CIA组、API组、API^(+)sh-NC组和API^(+)sh-SOCS3组大鼠注射乳化剂制备CIA模型,对照组同时间注射等量的生理盐水。采用关节炎指数评分评价各组大鼠关节炎症情况;采用HE染色比较各组大鼠关节滑膜病理损伤情况;采用ELISA检测各组大鼠血清中Th17相关细胞因子白细胞介素(IL)-17A和IL-6以及Treg相关细胞因子肿瘤坏死因子(TGF)-β和IL-10水平;流式细胞术检测大鼠脾细胞中Th17细胞(CD4^(+)IL-17A^(+))和Treg细胞(CD25^(+)Foxp3^(+))的细胞比例。采用RT-qPCR和Western blotting检测大鼠滑膜组织中miR-181a-5p和SOCS3表达情况。双萤光素酶报告基因实验验证miR-181a-5p与SOCS3之间的结合关系。结果与对照组比较,CIA组大鼠足部肿胀程度和踝关节滑膜病理损伤加重,关节炎指数评分、血清中IL-17A和IL-6水平以及脾细胞中CD4^(+)IL-17A^(+)细胞数明显升高,血清中TGF-β和IL-10水平以及脾细胞中CD25^(+)Foxp3^(+)细胞数明显降低(均P<0.05);与CIA组比较,API组和API^(+)sh-NC组大鼠足部肿胀程度和踝关节滑膜病理损伤改善,关节炎指数评分、血清中IL-17A和IL-6水平以及脾细胞中CD4^(+)IL-17A^(+)细胞数明显降低,血清中TGF-β和IL-10水平以及脾细胞中CD25^(+)Foxp3^(+)细胞数明显升高(均P<0.05);与API组和API^(+)sh-NC组比较,API^(+)sh-SOCS3组大鼠足部肿胀程度和踝关节滑膜病理损伤加重,关节炎指数评分、血清中IL-17A和IL-6水平以及脾细胞中CD4^(+)IL-17A^(+)细胞数明显升高,血清中TGF-β和IL-10水平以及脾细胞中CD25^(+)Foxp3^(+)细胞数明显降低(P<0.05)。与对照组比较,CIA组大鼠滑膜组织中miR-181a-5p表达明显升高,SOCS3 mRNA和蛋白表达明显降低(均P<0.05)。与CIA组比较,API组大鼠滑膜组织中miR-181a-5p表达明显降低,SOCS3 mRNA和蛋白表达明显升高(均P<0.05)。与mimics NC组比较,miR-181a-5p mimics组转染SOCS3-WT的HEK-293T细胞相对萤光素酶活性明显降低(P<0.05),而转染SOCS3-MUT的HEK-293T细胞相对萤光素酶活性无明显差异(P>0.05)。结论芹菜素通过下调miR-181a-5p表达上调其下游靶基因SOCS3表达来改善类风湿关节炎中Treg/Th17细胞失衡状态,从而改善类风湿关节炎诱导的关节损伤。

SOCS3基因多态性与急性脑梗死遗传易感性及进展的关系

目的:分析急性脑梗死(ACI)病人的SOCS3基因多态性,并探讨其与疾病进展的关系。方法:根据入院时美国国家卒中量表(NIHSS),将310例ACI病人分为轻度和中重度。根据入院后7 d的NIHSS评分将病人进一步分为进展组和非进展组。根据SOCS3基因rs8064821的测序结果,检测到CC、CA和AA三种基因型,分析各基因型的分布差异及其对疾病进展的预测价值。结果:ACI病人SOCS3基因rs8064821位点的基因型分布为CC(161例)、CA(127例)和AA(22例),频率分别为51.93%、40.97%和7.10%。中重度组病人的CC基因型比例低于轻度组,CA、AA基因型比例高于轻度组(P<0.01)。与非进展组相比,进展为神经功能缺损的病人CC基因型比例较低,CA和AA基因型比例较高(P<0.01)。结论:CA和AA基因型是皖北地区ACI病人SOCS3基因rs8064821位点的主要基因型,携带CA和AA基因型的病人更易出现神经功能障碍。

FGF21通过SOCS3/JAK/STAT通路调控肝细胞脂质代谢研究

目的通过敲减细胞内成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factors 21,FGF21)的表达,观察其对肝细胞脂质代谢的影响,并探讨FGF21调控肝细胞脂质代谢的分子机制。方法通过FGF21干扰慢病毒转染HepG2细胞,降低FGF21的表达,以空载体转染HepG2细胞作为对照,分为干扰组和对照组。两组均以棕榈酸油酸刺激构建非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)细胞模型。采用油红O染色法观察肝细胞内脂质沉积情况,测定分光光度值,计算脂质含量;利用蛋白质印迹(Western blot)法检测肝细胞中SOCS3、JAK2、STAT3蛋白的变化。结果油红O染色及吸光度值显示,与对照组相比,干扰组肝细胞内脂滴含量显著减少;Western blot结果表明,干扰组肝细胞内细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)、Janus激酶2(Janus kinase 2,JAK2)、信号转导和转录活化因子3(signal transducer and activator of transcription,STAT3)蛋白表达水平均显著升高。结论在肝细胞模型中,敲减FGF21表达,可通过激活SOCS3/JAK/STAT信号通路从而抑制肝细胞脂质沉积。但其具体作用机制仍需进一步深入研究。

大鼠SOCS3腺病毒的构建及鉴定

目的:构建大鼠细胞因子信号途径抑制物3(SOCS3)腺病毒载体,并对腺病毒感染后的HEK293细胞的SOCS3表达情况进行观察。方法:提取大鼠腹腔巨噬细胞中总RNA,克隆出SOCS3基因,亚克隆于含有GFP报告基因的穿梭质粒pAdtrack-CMV,通过pAdeasy-1腺病毒系统将含有目的基因的穿梭质粒和骨架质粒共转入BJ5183感受态细胞。线性化重组的病毒转染入HEK293细胞,并在其中对重组的腺病毒进行包装及扩增。结果:构建的大鼠SOCS3腺病毒能够高效率的感染HEK293细胞,mRNA和蛋白水平均证实SOCS3表达显著增加。结论:大鼠SOCS3腺病毒载体构建成功,可用于体内转染或细胞试验的进一步研究。

电针“阳陵泉”、“环跳”对神经病理性疼痛大鼠脊髓SOCS3的影响

目的:观察电针对神经病理性疼痛大鼠痛行为学及脊髓细胞因子信号转导抑制蛋白3(SOCS3)表达的影响。方法:SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组、非电针组,每组10只。采用坐骨神经结扎压迫建立慢性限制性损伤(CCI)神经痛模型,电针组选取双侧"阳陵泉"、"环跳"穴进行电针治疗,观察大鼠痛行为学和脊髓SOCS3、IL-6基因表达的变化,检测脊髓SOCS3神经细胞定位情况。结果:与模型组相比,电针可显著提高CCI大鼠机械痛及热痛阈值(P<0.01);与正常组相比,模型组大鼠脊髓SOCS3、IL-6 m RNA表达显著上调(P<0.01),而电针可显著降低IL-6m RNA表达,并进一步上调脊髓SOCS3表达水平(P<0.01)。在CCI大鼠中,SOCS3主要表达于脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞中。结论:电针可能通过下调IL-6基因表达,并上调SOCS3表达,减轻神经痛大鼠痛敏反应。

热补针法对类风湿关节炎大鼠滑膜细胞JAK-STAT信号通路调节因子SOCS1、SOCS3表达的影响

目的观察热补针法对类风湿关节炎(RA)大鼠关节滑膜细胞JAK-STAT信号通路SOCS1、SOCS3表达的影响,探讨热补针法治疗RA的作用机制。方法将48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、平补平泻组、热补针法组,每组12只。除正常组外,其余大鼠制备胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型。成模后平补平泻组和热补针法组取双侧“足三里”,前者施平补平泻法,后者施热补针法,持续1 min,每日1次,共治疗7次,每次留针30 min。测量各组大鼠足趾容积和足底痛反应时间;免疫荧光染色和Western blot检测关节滑膜组织SOCS1、SOCS3的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠关节肿胀,足趾容积明显增加,足底痛反应时间明显缩短,关节滑膜组织SOCS1、SOCS3表达下降(P<0.05);与模型组比较,平补平泻组和热补针法组大鼠足趾容积明显减少,足底痛反应时间明显延长,关节滑膜组织SOCS1、SOCS3表达明显升高(P<0.05),且热补针法组均优于平补平泻组(P<0.05)。结论热补针法通过提高模型大鼠滑膜细胞JAK-STAT信号通路细胞因子SOCS1、SOCS3表达,达到抗炎效应及调整滑膜细胞分泌功能的作用。

沙棘多糖提取物对LPS/D-GalN诱导的小鼠肝损伤的保护作用及其对TLR4,SOCS3表达的调控

目的:研究沙棘多糖提取物对LPS联合D-Gal N诱导的肝损伤的保护作用以及对肝脏TLR4,SOCS3蛋白表达的调控。方法:将C57BL/6系雄性小鼠随机分为6组,即空白对照组、模型组、地塞米松阳性对照组、沙棘多糖低、中、高剂量组;沙棘多糖低、中、高剂量组分别以50、100和200 mg/kg沙棘多糖溶液连续灌胃14 d。通过腹腔注射LPS(10μg/kg)和DGal N(700 mg/kg)建立急性肝损伤模型,阳性药物组在建模前腹腔注射地塞米松(10 mg/kg)。建模4 h后采集血清和肝脏组织,检测血清ALT和AST水平,HE染色观察沙棘多糖提取物对肝损伤的影响。Western blot检测TLR4,SOCS3的表达情况。结果:沙棘多糖提取物显著降低了LPS/D-Gal N诱导的小鼠血清中ALT和AST水平(P<0.01,P<0.05);HE染色观察显示,沙棘多糖明显减轻了肝细胞损伤和炎性细胞浸润。Western blot检测表明,沙棘多糖提取物抑制了LPS/D-Gal N诱导的TLR4的表达,但是对SOCS3的表达影响不明显。结论:沙棘多糖提取物有效抑制了LPS/D-Gal N诱导的肝损伤,这种保护作用可能是通过抑制TLR4的表达来发挥作用的,而非通过调控SOCS3来实现的。

拨法对CCI大鼠脊髓中IL-6及SOCS3的影响

目的从炎症反应的角度探索拨法对神经病理性疼痛大鼠的影响。方法采用推拿手法模拟仪定性、定量模拟拨法,对CCI大鼠进行干预,通过光热耐痛阈观察大鼠行为学的改善情况,通过免疫组化观察大鼠脊髓中IL-6及SOCS3表达的变化。结果造模7d后,模型组大鼠光热耐痛阈结果与正常组相比有显著差异(P<0.01),模型组大鼠脊髓中IL-6及SOCS3的表达较正常组显著升高(P<0.01);拨法组用拨法治疗20次后,大鼠光热耐痛阈结果与同期模型组相比有显著差异(P<0.05),且逐渐趋向于正常水平,大鼠脊髓中IL-6的表达较同期模型组有显著降低(P<0.01),脊髓中SOCS3的表达较同期模型组有显著性升高(P<0.01)。结论拨法可一定程度上改善神经病理性疼痛大鼠的痛觉和温度觉,同时可抑制大鼠体内促炎症因子的表达。

STAT3及SOCS3在鼻息肉患者中对Th17分化的作用观察

目的观察鼻息肉患者磷酸化信号转导与转录激活因子3(phospho-signal transducers and activators of transcription,p-STAT3)、SOCS3(suppressor of cytokine signaling,SOCS3)及Th17相关因子的水平,初步探讨STAT3及SOCS3对鼻息肉患者Th17细胞功能的作用。方法选取40例鼻息肉患者标本及15例对照组标本,采用免疫组化和蛋白免疫印迹法检测p-STAT3及SOCS3在鼻息肉组织中的分布及表达,运用ELISA法检测IL-6和IL-17A的表达情况,采用RT-PCR检测RORγt的表达水平,并对数据进行统计学分析。结果鼻息肉组的p-STAT3、IL-6、IL-17A以及RORγt表达明显高于对照组(P<0.01),SOCS3在鼻息肉组中的表达则低于对照组(P<0.01)。相关性分析显示p-STAT3、RORγt及IL-17A与SOCS3呈负相关(p-STAT3/SOCS3:r=-0.545,P<0.01;RORγt/SOCS3:r=-0.627,P<0.05;IL-17A/SOCS3:r=-0.631,P<0.01),而p-STAT3与RORγt、IL-6、IL-17A呈正相关(p-STAT3/RORγt:r=0.594,P<0.001;p-STAT3/IL-6:r=0.632,P<0.001;p-STAT3/IL-17A:r=0.647,P<0.01)。结论 STAT3异常活化,以及SOCS3低表达所致抑制作用缺失可能是造成鼻息肉中Th17细胞过度活化的重要原因。

SOCS3过表达对铜绿假单胞菌慢性肺部感染小鼠Th17免疫反应的影响

目的探讨铜绿假单胞菌慢性肺部感染小鼠CD4^+T淋巴细胞SOCS3过表达对Th17免疫反应的作用。方法构建铜绿假单胞菌慢性肺部感染小鼠模型,并分离培养小鼠脾脏的CD4^+T淋巴细胞。构建SOCS3慢病毒过表达载体。在体外通过慢病毒基因转染的方法实现CD4^+T淋巴细胞SOCS3基因过表达。对SOCS3过表达细胞给予IL-23刺激,采用Western blot检测细胞中的p-STAT3水平,real-time PCR检测细胞中的RORγt水平,流式细胞分析IL-17+细胞数量,ELISA检测细胞培养液中的IL-17水平。结果铜绿假单胞菌慢性肺部感染小鼠CD4^+T淋巴细胞SOCS3过表达后,IL-23刺激诱导的p-STAT3蛋白水平、RORγt mRNA水平、IL-17^+细胞数量以及培养液中的IL-17水平均较对照组明显降低。结论体外研究表明SOCS3过表达对铜绿假单胞菌感染小鼠的Th17免疫反应具有抑制作用。

SOCS3基因转染对肺腺癌细胞株A549原癌基因c-fos、c-jun mRNA表达及细胞增殖的影响

目的 探讨SOCS3基因对人肺腺癌细胞株A5 49中c fos、c junmRNA表达及细胞增殖的影响。方法 以脂质体为载体将pEFSOCS3和pSV2neo共转染至人肺腺癌细胞株A5 49,RT PCR和免疫细胞化学法测定转染前后细胞中SOCS3mRNA和蛋白表达 ;半定量RT PCR测定转染前后细胞中c fos、c junmRNA水平表达变化 ;3H TdR掺入法检测基因转染前后细胞增殖情况。结果 RT PCR和免疫细胞化学证实转染后细胞中有SOCS3稳定表达 ;半定量RT PCR证实转染后细胞中c fos、c junmRNA水平显著降低 (P <0 .0 1) ;且转染组细胞 3H TdR掺入量显著降低 (P <0 .0 1)。结论 SOCS3蛋白可能通过负性调控STAT3介导的信号通路降低c fos、c jun的表达 ,从而抑制肺癌细胞增殖。

苦参碱通过下调SOCS3表达抑制支气管哮喘大鼠炎性反应并调节Th1/Th2平衡

目的探讨苦参碱减轻支气管哮喘大鼠炎性反应、纠正Th1/Th2失衡的作用,以及SOCS3在此过程中的表达变化。方法将大鼠分为对照组、模型组(卵清蛋白致敏法构建大鼠急性哮喘模型)和药物干预A组及B组(建模成功后,分别接受60和120 mg/kg的苦参碱治疗)。计算支气管肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸粒细胞(EOS)绝对值、EOS百分比及肺组织中的杯状细胞百分比和炎性细胞浸润积分。酶联免疫法分析BALF中的IFN-γ和IL-4水平,并计算IFN-γ/IL-4。荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分析肺组织中细胞因子传导抑制因子3(SOCS3)mRNA与蛋白的表达。结果模型组大鼠BALF中EOS计数、EOS百分比、杯状细胞百分比、炎性细胞浸润评分和IL-4水平,肺组织中的SOCS3 mRNA及蛋白表达均较对照组显著增高(P<0.05)。而BALF中IFN-γ水平显著降低(P<0.05)。低剂量和高剂量苦参碱分别显著缓解模型组的上述变化(P<0.05)。结论苦参碱可以抑制支气管哮喘大鼠炎性反应、纠正Th1/Th2的失衡,该过程中存在SOCS3的表达变化。苦参碱可能通过降低SOCS3表达调节Th1/Th2的平衡。

TLR4、SOCS3、miR-203在IgA肾病大鼠肾组织中的表达变化及意义

目的观察IgA肾病(IgAN)大鼠模型建立过程中Toll样受体4(TLR4)、细胞因子信号传导抑制因子3(SOCS3)及miR-203在肾组织中的表达变化,初步探讨其在IgAN发病机制中的作用。方法 20只SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常对照组和IgAN模型组,运用联合免疫诱导方法建立实验性IgAN大鼠模型,分别在建模第8、9周收获大鼠肾脏,免疫荧光检测肾组织IgA表达以验证模型成功建立,通过高碘酸-希夫(PAS)染色评价肾小球系膜增生病变,采用Western blotting免疫印迹法检测TLR4及SOCS3蛋白表达变化,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测TLR4、SOCS3 mRNA及miR-203的表达变化。结果 IgAN大鼠模型建立第8周肾脏病理显示肾小球有系膜增生改变,与正常对照比较,肾脏TLR4、SOCS3蛋白及mRNA表达显著增加,miR-203表达水平也明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);第9周肾小球系膜增生病变加重,TLR4蛋白及mRNA表达与第8周相比无显著变化,但SOCS3蛋白及mRNA表达水平较第8周明显下降(P<0.05),miR-203表达则较第8周升高(P<0.05)。结论 IgAN大鼠模型肾组织中TLR4、SOCS3、miR-203表达增加,可能与IgAN的发生发展有关,随着系膜增生病变加重SOCS3表达反而下降,提示SOCS3可能在IgAN进展中起保护作用。

GPRC5A、SOCS3和STAT3在结直肠癌组织中的表达及相关性分析

目的探讨G蛋白偶联受体C家族5A(G protein-coupled receptor,family C,group 5,member A,GPRC5A)、信号转导和转录激活因子3 (signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)和细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)在结直肠癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法选取76例结直肠癌组织和30例癌旁正常组织标本,采用免疫组织化学法检测组织中GPRC5A、SOCS3和STAT3的表达情况,并分析其与患者临床病理特征的关系,采用Spearman相关分析方法分析三者表达的相关性。结果在结直肠癌组织中,GPRC5A和STAT3的阳性表达率均高于癌旁正常组织(59.2%vs 33.3%,P=0.016;69.7%vs 30.0%,P=0.001),而SOCS3的阳性表达率则低于癌旁正常组织(38.2%vs 80.0%,P=0.001)。GPRC5A表达水平与结直肠癌患者的肿瘤分化程度、淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05),SOCS3和STAT3的表达水平与结直肠癌患者的分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05)。Spearman相关分析显示,SOCS3与STAT3和GPRC5A的表达均呈负相关(r=-0.308,P=0.007;r=-0.340,P=0.003),GPRC5A与STAT3表达呈正相关(r=0.327;P=0.004)。结论 GPRC5A在结直肠癌组织中高表达,可能对SOCS3的表达具有负调控作用,对STAT3的表达有正调控作用,三者可能与结直肠癌的发生发展密切相关。

STAT3与SOCS3在子宫内膜腺癌中的表达及生物学行为相关性分析

目的探讨STAT3、SOCS3基因蛋白在子宫内膜腺癌中的表达及意义,以期了解这两种蛋白在子宫内膜腺癌癌变过程中的作用。方法收集46例手术切除的子宫内膜腺癌组织标本,同时取30例正常子宫内膜组织作为对照,运用组织芯片技术以及免疫组织化学的方法检测子宫内膜癌组织、正常子宫内膜组织中STAT3、SOCS3蛋白的表达。结果 46例子宫内膜癌组织中STAT3的阳性表达率为76.1%,SOCS3的阳性表达率为19.6%,两者在子宫内膜腺癌与正常子宫内膜组织之间的阳性率表达差异有显著的统计学意义(P<0.05)。二者的阳性表达与子宫内膜腺癌患者的肿瘤分化程度有关,与手术病理分期、肌层浸润及绝经情况等临床特征无相关性(P>0.05)。子宫内膜腺癌中STAT3与SOCS3呈负相关。结论子宫内膜腺癌中STAT3呈高表达,SOCS3呈低表达,提示STAT3促进了子宫内膜腺癌的发生发展,而SOCS3抑制子宫内膜腺癌癌变的作用。

高糖环境LIF介导STAT3/SOCS3信号通路参与成骨细胞分化机制研究

目的研究高糖环境下白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)介导STAT3/SOCS3信号通路对成骨细胞分化的影响及其作用机制。方法利用ELISA检测2型糖尿病患者血清白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)家族中LIF及炎性因子的水平;通过RT-PCR、Western blot检测体外高糖环境下成骨分化标志物ALP、RUNX2、OCN、OPN以及细胞因子信号抑制因子3(suppressors of cytokine signaling,SOCS3)的m RNA和蛋白表达情况。结果 2型糖尿病患者血清炎性因子和LIF的水平明显升高。高糖或LIF显著降低了成骨分化标志物ALP、RUNX2、OCN和OPN的m RNA和蛋白水平,同时上调了SOCS 3和PSTAT3的表达。加入50 nmol/L或100 nmol/L STAT 3抑制剂JSI-124可改善成骨分化标志物的表达下调。结论 LIF通过介导STAT3/SOCS3信号通路参与高糖诱导下的成骨细胞分化。本研究为高糖导致的成骨障碍奠定了分子生物学理论基础并对靶点药物的研发提供了实验依据。