Gli2调控Hedgehog通路活化对Tca8113细胞增殖、转移和上皮间充质转化的影响

目的 本研究通过在细胞水平检测Gli2对口腔癌细胞Tca8113增殖、生长、迁移和侵袭的影响,明确Gli2调控口腔癌细胞迁移和侵袭的分子机制。方法 本研究利用siRNA抑制Tca8113细胞中Gli2的表达,通过CCK-8、平板克隆以及transwell小室实验分别检测Gli2对Tca8113细胞增殖、生长、迁移与侵袭的影响。进一步利用qRT-PCR与Western blot实验探究Gli2调控Tca8113细胞恶性增殖和转移机制。结果 口腔癌细胞Tca8113中Gli2的mRNA和蛋白表达升高。干扰Gli2表达可抑制Tca8113细胞增殖、生长、迁移及侵袭。进一步研究发现干扰Gli2表达可抑制Hedgehog(Hh)通路关键因子的mRNA与蛋白表达。此外,干扰Gli2表达可显著影响上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)通路关键因子的mRNA与蛋白表达。结论 口腔癌病变过程中Gli2被异常激活,干扰Gli2表达显著抑制口腔癌细胞的增殖、生长、迁移和侵袭。Gli2通过调控Hh通路与EMT通路,进而影响口腔癌细胞的迁移和侵袭。本研究为阐明口腔癌的发病机制提供新思路,并为口腔癌的临床治疗提供新视角。

Survivin和Bcl-2基因靶向siRNA对舌癌Tca-8113细胞生长抑制及诱导凋亡作用的影响

目的:探讨Survivin联合Bcl-2siRNA对舌癌细胞的诱导凋亡作用。方法:实验分空白组、脂质体组、阴性干扰组、Survivin干扰组、bcl-2干扰组、Survivin/bcl-2干扰组,以舌癌细胞系Tca-8113为研究对象,应用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)分别和同时沉默下调Survivin和Bcl-2两种基因的表达,采用MTT检测细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡,透射电镜检测细胞超微结构变化,比较各组对肿瘤细胞生长的抑制及诱导凋亡作用。结果:转染24h后可见Survivin/bcl-2干扰组的细胞形态发生明显改变,体积缩小变圆,染色质浓集于核膜内侧,核碎裂,电镜下呈典型的细胞凋亡形态学改变,并有凋亡小体出现,MTT显示细胞生长明显抑制,MCF检测凋亡率分别为空白组0.85%、脂质体组2.46%、阴性干扰组3.06%、Survivin干扰组15.48%、bcl-2干扰组11.02%、Survivin/bcl-2干扰组29.18%,与空白组相比差异有统计学显著性意义(P<0.01),转染阴性siRNA及脂质体组无抑制和诱导凋亡作用,两组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:靶向特异性Survivin联合Bcl-2siRNA双基因沉默下调较单基因沉默下调作用显著增强,并且能有效抑制舌癌细胞的增殖及诱导其发生凋亡。

CD151对人舌鳞癌细胞Tca8113迁移作用的影响

背景与目的:CD151在肿瘤组织中的高表达与肿瘤的转移和预后密切相关,但其具体机制尚不清楚。本研究旨在探讨携带全长正义和反义CD151基因的重组腺相关病毒(rAAV-CD151,rAAV-antiCD151)对人舌鳞癌细胞Tca8113细胞迁移的影响。方法:利用含酶切位点的PCR引物克隆CD151基因,分别呈正向和反向插入包装质粒pAAV,并包装成rAAV-CD151,rAAV-antiCD151,斑点杂交测定病毒滴度;rAAV-CD151与rAAV-antiCD151分别转染Tca8113细胞2周后,Westernblot检测CD151表达,通过Boyden趋化小室研究其对Tca8113细胞迁移的影响。结果:斑点杂交结果显示rAAV-CD151和rAAV-antiCD151病毒滴度分别为2.0×1011pfu/ml,1.0×1011pfu/ml;转染rAAV-CD151后,Tca8113细胞CD151的表达较未转染组增加了108%,细胞迁移数(93.6±11.6)显著高于未转染组和转染rAAV-GFP对照组(53.0±6.6和46.0±7.0,P<0.05);转染rAAV-antiCD151后,Tca8113细胞CD151的表达较未转染组减少了79%,细胞迁移数(24.0±4.4)显著低于未转染组和转染rAAV-GFP对照组(P<0.05)。结论:CD151在肿瘤细胞的迁移中起重要的作用,是肿瘤转移的重要分子基础。携带反义CD151基因的重组腺相关病毒作为一种新的治疗工具,可以特异性阻断肿瘤细胞CD151表达,抑制肿瘤细胞的迁移。

大黄素抑制人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖及细胞周期进程的实验研究

目的：探讨大黄素对人口腔鳞癌细胞体外生长增殖及细胞周期改变的影响。方法采用2.5、5.0、10、20、40、60和80μmol/L大黄素分别干预体外培养的口腔鳞癌细胞Tca8113，作用24、48和72 h后，并设含0.1%二甲基亚砜的培养液作为对照组，通过MTT检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞Tca8113的增殖作用；以FCM检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞周期的影响；结合Western blotting方法分析大黄素干预后对口腔鳞癌细胞周期相关蛋白CDK2、Cyclin E和P21表达水平的变化。结果大黄素能够在72 h内明显抑制Tca8113细胞生长以及增殖行为。MTT结果显示，随作用时间从24、48到72 h，大黄素对于Tca8113细胞的抑制效应呈明显的时间—浓度依赖关系；由细胞周期检测结果显示，大黄素作用使口腔鳞癌Tca8113细胞周期表现为G0~G1期细胞时相阻滞；蛋白免疫印迹则表明经大黄素干预口腔鳞癌Tca8113细胞的细胞周期相关蛋白CDK2、Cyclin E和P21表达水平明显降低，与空白对照组相比较，具有显著的统计学差异（P〈0.05）。结论大黄素能够明确抑制人口腔鳞癌细胞Tca8113的生长增殖以及影响其细胞分裂周期，这可能与抑制细胞周期调控信号通路中分子的活化与转导有关。

Cox-2在舌鳞癌细胞Tca8113增殖机制中的作用

目的:观察并探讨Cox-2在舌鳞癌细胞(Tca8113)增殖机制中的作用。方法:通过免疫细胞化学检测Cox-2在Tca8113细胞中的表达;再通过建立裸鼠荷瘤模型及应用Cox-2特异性抑制剂(SC236)进行干预的方法,观察SC236对Tca8113细胞的增殖活性、致瘤性和成瘤速度的影响。结果:在Tca8113细胞中存在Cox-2的表达;将Tca8113细胞接种于裸鼠颈部皮下可成功诱导出组织学形态与人舌鳞癌基本一致、且表达Cox-2的移植瘤。SC236能够显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的生长(P<0.01),并明显延缓Tca8113细胞的成瘤速度(P<0.05)。结论:Cox-2在Tca8113细胞的增殖过程中可能发挥重要作用;Cox-2特异性抑制剂可显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的增殖和生长。

野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞周期及Fas蛋白表达的影响

目的:观察野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞周期及Fas蛋白表达的影响。方法:用浓度为80、120和160μg/ml的野黄芩苷处理体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,用流式细胞技术观察细胞周期的变化;用蛋白印迹法定量检测Fas蛋白表达。结果:与对照组相比,加入不同浓度野黄芩苷后DNA合成前期(G1)细胞所占百分比(G1%)升高(P<0.05),160μg/ml野黄芩苷处理后DNA合成期(S)细胞所占百分比(S%)降低(P<0.05)。蛋白印迹法结果显示,随着药物浓度的增加,Fas蛋白表达量有增高趋势,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:野黄芩苷可能通过抑制肿瘤细胞增殖,提高人舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白的表达而达到抗肿瘤的作用。

加热与紫杉醇联合应用对人舌癌Tca8113细胞增殖的影响

目的:探讨加热与紫杉醇联合应用对人舌癌Tca8113细胞增殖的影响,为临床热疗与紫杉醇化疗的联合应用提供依据。方法:将不同温度(39℃、41℃和43℃)及不同浓度紫杉醇(1.25μg/L、2.50μg/L、5.00μg/L、10.00μg/L和20.00μg/L)采用组内分组设计,共15个组,并设各浓度37℃对照组(5组)。在紫杉醇对人舌癌Tca8113细胞作用24h后加温40min,应用MTT比色分析法测定加热和紫杉醇联合应用对细胞增殖率的影响。结果:41℃组细胞增殖率与不同温度同剂量组比较,除与39℃1.25μg/L紫杉醇组比较差异无统计学意义外(P>0.05),与其余各组比较均降低,比较差异均有统计学意义(P<0.05或0.01);39℃和43℃10μg/L紫杉醇组细胞增殖率与37℃对照组比较均升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:41℃时各浓度紫杉醇对Tca8113细胞均有增殖抑制作用;39℃或43℃联合10μg/L紫杉醇时Tca8113细胞增殖能力最强。

染料木黄酮通过抑制VEGF表达抑制人口腔癌TCA8113细胞增殖

目的:观察染料木黄酮对人口腔癌TCA8113细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:MTT法、细胞计数法及集落形成实验检测细胞增殖;蛋白质免疫印迹检测血管内皮生长因子(VEGF)、细胞外信号调节激酶(ERK)及p-ERK的蛋白水平。结果:染料木黄酮能显著抑制TCA8113细胞的增殖,其抗增殖活性具有浓度依赖性;染料木黄酮还可剂量依赖性地降低VEGF、ERK及p-ERK的蛋白水平;VEGF的表达可被ERK特异性抑制剂U0126所抑制;VEGF受体拮抗剂阿西替尼及U0126均显著抑制TCA8113细胞的增殖。结论:染料木黄酮可抑制人口腔癌TCA8113细胞的增殖,其机制可能与其抑制ERK表达及活化,进而抑制VEGF的表达有关。

β-榄香烯乳对体外培养Tca-8113细胞放射增敏、细胞周期、凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:观察β-榄香烯乳对人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞体外放射敏感性的影响,并探讨其相关机制。方法:集落形成法观察β-榄香烯乳对Tca-8113细胞的放射增敏作用:对照组(0mg/L)、实验A、B组(40、60mg/L)细胞经β-榄香烯乳作用24h后,分别进行0、2、4、6、8Gy的剂量照射1min,14d后进行集落计数。对照组、实验组β-榄香烯乳作用Tca-8113细胞24h后,流式细胞术分析作用前后细胞周期及凋亡变化,免疫细胞化学染色观察Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果:2～8Gy照射后实验组(40、60mg/L)集落计数(个)分别为:(60.67±3.56)、(52.67±3.44);(50.00±2.45)、(49.39±6.15);(39.00±3.74)、(25.00±2.53);(31.00±2.37)、(13.00±2.00)。对照组(0mg/L)集落计数(个)为:(74.17±3.60)、(55.17±4.59)、(48.00±2.90)、(38.50±3.62)。3组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。实验组(40、60mg/L)凋亡率分别为(10.00±4.95)%、(18.50±6.57)%,对照组为(0.42±0.33)%,3组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。实验组(40、60mg/L)G2/M期细胞百分比分别为(18.30±6.45)%、(30.90±7.94)%,对照组为(4.40±2.61)%,3组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。β-榄香烯乳作用Tca-8113细胞后,凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达减弱,凋亡促进蛋白Bax的表达增强,3组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:β-榄香烯乳在低细胞毒性浓度下对Tca-8113细胞有放射增敏作用;其机制可能是诱导凋亡和促使细胞G2/M期阻滞。

超声加热诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的机制探讨

目的:通过检测超声加热处理后Tca8113细胞凋亡的主要相关参数变化,探讨超声加热诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法:应用超声热辐射系统,分别对Tca8113细胞进行不同温度、时间的加热处理,流式细胞仪连续检测42℃超声加热10min后Tca8113细胞早期凋亡和继发性坏死的动态变化,以及不同处理组的线粒体跨膜电位(ΔΨm)、Caspase-3活性的变化。采用SAS6.12统计软件包进行方差分析,比较各组均数间的显著性水平。结果:42℃超声加热(10min)Tca8113细胞后1h,即检测到细胞早期凋亡,6～8h达到高峰,以后迅速下降,12h后保持在较低水平,细胞的继发性坏死伴随着凋亡出现,在高水平保持一段时间,10h后开始下降。其与早期凋亡呈正相关(r=0.7909,P=0.0064);无论温度梯度(38℃～44℃,10min)还是时间梯度(42℃,10min～60min)的超声加热,均能导致ΔΨm显著降低(P<0.01)、Caspase-3活性显著升高(P<0.01),且两者具有显著相关性(温度梯度组r=0.89189,P=0.0029,时间梯度组r=0.9679,P=0.0003)。结论:超声加热能诱导Tca8113细胞凋亡,导致ΔΨm降低、Caspase-3活性水平升高。说明超声加热通过线粒体-Caspase途径,诱导Tca8113细胞凋亡。

体外诱导Tca8113细胞产生耐药性的分析

目的探讨Tca8113细胞长期接触卡铂以后耐药性表达情况。方法以Tca8113细胞系为研究对象,采用间歇性加药,逐步递增剂量,体外连续培养诱导其产生耐药性。用MTT法检测细胞耐药指数,LsAB免疫组化法检测耐药蛋白P糖蛋白-170(Pgp-170)、谷胱苷肽S转移酶-π(GST-π)、多药抗药性相关蛋白(MRP)和拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)的表达,RT-PCR检测多药耐药基因(MDR)、MRP和GST-π的表达。结果诱导后Tca8113/卡铂(CBP)对氨甲喋呤(MTX)、CBP、平阳霉素(PYM)、长春新碱(VCR)的抗药性明显升高,但对5-氟尿嘧啶(5-FU)抗药性增加不明显。在免疫组化和RT-PCR中Pgp-170、MRP和GST-π表达升高,TopoⅡ表达降低。结论Tca8113细胞系在卡铂长期刺激的环境中多种耐药相关蛋白表达上升,表明肿瘤细胞的耐药现象受到多种基因的调节。Tca8113/CBP可以作为一个肿瘤耐药研究的平台。

野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Bcl-2、Bax表达的影响

目的:观察野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Bcl-2、Bax表达的影响。方法:分别用80、120、160μg/ml的野黄芩苷培养液处理体外培养的Tca8113细胞48 h后,采用免疫细胞化学法、RT-PCR技术观察野黄芩苷对Tca8113细胞Bcl-2、Bax表达的影响。结果:免疫细胞化学染色结果:随着野黄芩苷浓度的增高,Tca8113细胞中Bcl-2的阳性信号减弱,Bax的阳性信号增强(P<0.05)。RT-PCR检测结果:随野黄芩苷浓度的不断增高,Bcl-2 mRNA表达水平逐渐降低,Bax mRNA表达水平逐渐增高(P<0.05)。结论:野黄芩苷可以下调Tca8113细胞Bcl-2表达,上调Bax的表达,达到抗肿瘤的作用。

人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系的建立及其生物学特性

舌癌高发于东南亚,尤其是印度。在我国,据上海市区1963～1977年恶性肿瘤死亡统计,舌癌占口腔癌肿死亡率的26.4％;上海第二医学院附属第九人民医院口腔颌面外科,1957～1976年舌癌占口腔鳞癌住院病人的37.2％。口腔癌组织体外培养的研究,国外开展较早,Hela细胞株建立后1954年就有口底癌的KB细胞株和颊粘膜癌的HEp-3细胞株的建立;

体外短期化疗诱导Tca8113细胞株产生耐药性的研究

目的 探讨短期接触化疗药物后肿瘤细胞耐药性的产生情况及与化疗药物的关系。方法 将Tca8113细胞株在体外与化疗药物短期接触后 ,采用RT_PCR法检测其在mRNA水平上多药耐药基因 (MDR1)及多药耐药相关蛋白基因 (MRP)的表达情况 ,采用荧光分光光度计检测细胞内药物浓度的变化 ,以耐药的白血病细胞株K5 6 2 ADM作为对照。结果 化疗对敏感的Tca8113细胞株有明显的抑制作用 ,而对K5 6 2 ADM抑制作用不明显 ;Tca8113细胞株短期接触化疗药物后 ,在mRNA水平可检测到微量的MDR1和MRP的表达 ;耐药的K5 6 2 ADM细胞内药物浓度明显低于敏感的Tca8113细胞株。结论 耐药性的产生与MDR1和MRP表达水平密切相关。Tca8113细胞株短期接触化疗后即有微量的MDR1mRNA和MRPmRNA的表达 。

c-myc转染对舌鳞癌细胞系Tca8113fas表达和凋亡的影响

背景与目的:恶性肿瘤的发生不仅与细胞的异常增殖有关,还与细胞的凋亡异常有关。本实验目的在于研究原癌基因c-myc(cellularavianmyelocytomavirus)介导舌鳞癌细胞凋亡的可能性和分子机制。方法:脂质体法将含c-myc的重组质粒转染到舌鳞癌细胞Tca8113,G418筛选阳性克隆,RT-PCR检测转染前后fas(fattyacidsynthase)表达水平,TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果:转染后fasmRNA表达上调。正常培养条件下,转染前后细胞凋亡指数无明显改变,低浓度血清条件下细胞凋亡指数增加。结论:低营养状态下c-myc可以介导舌鳞癌细胞凋亡,凋亡机制可能与上调fasmRNA表达有关。

VEGF-ASODN转染对舌癌Tca8113细胞VEGF表达及生长的抑制作用

目的:研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)-反义寡核苷酸(ASODN)转染舌癌Tca8113细胞对其VEGF表达和生长的抑制作用。方法:人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染舌癌Tca8113细胞,24h后,应用原位杂交及免疫细胞化学法检测细胞VEGF mRNA及蛋白表达,ELISA法检测培养液上清中VEGF蛋白含量,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用MTT实验检测转染对细胞活性的影响,用细胞生长曲线表示转染对细胞生长的影响。结果与对照组比较,采用SPSS12.0软件包进行统计学分析。结果:VEGF-ASODN能显著降低VEGF mRNA及蛋白水平,降低培养液中VEGF蛋白含量,增加细胞凋亡,抑制细胞活性及生长(P<0.05)。结论:VEGF-ASODN转染舌鳞癌Tca8113细胞,能显著抑制VEGF mRNA及蛋白表达,增加细胞凋亡,抑制细胞生长。

水蛭素联合阿霉素对TCA8113细胞株作用机制的研究

目的研究水蛭素与阿霉素(ADM)联合应用对人舌鳞癌细胞株TCA8113生长的影响。方法通过MTT法测定其对TCA8113细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术检测凋亡及分析细胞周期的变化;利用吖啶橙-溴化乙啶(Ao-EB)染色观察水蛭素作用前后细胞形态的改变;应用透射电镜观察药物对细胞超微结构的影响。结果水蛭素、ADM对TCA 8113有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,并呈时间-剂量效应(P<0.05);水蛭素(15ATU/mL)与ADM(0.39～3.125 mg/L)联合给药可对TCA 8113产生增强的联合杀伤效果(P<0.05);流式细胞术检测提示水蛭素可促使细胞凋亡并阻滞细胞周期于G0/G1期;透射电镜和荧光染色观察可见凋亡细胞染色质凝聚、边集,并出现凋亡小体。结论水蛭素和阿霉素均对TCA8113有抑制作用,水蛭素的作用机制可能为诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期于G0/G1期。水蛭素可增强TCA8113对ADM的敏感性,对于阿霉素化疗有增效减毒作用。

不同浓度苦丁茶对TCA8113人舌鳞癌细胞的体外抗癌效果

对一种市售苦丁茶进行TCA8113人舌鳞癌细胞体外抗癌效果评价。通过MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)比色法实验、DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚)荧光染色分析、RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)和Westernblot分析,研究其抗癌效果。通过MTT法测定苦丁茶对癌细胞体外生长抑制效果时发现,200μg/mL浓度的苦丁茶(75%癌细胞生长抑制率)对TCA8113人舌鳞癌细胞生长有相对最强的抑制效果。DAPI染色分析显示,与100、50μg/mL苦丁茶相比,使用200μg/mL浓度的苦丁茶,对TCA8113细胞有较强的诱其凋亡的能力。在RT-PCR和Westernblot分析结果中,凋亡因子Bax(B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x)、caspase-3(半胱天冬氨酸酶-3)、caspase-9(半胱天冬氨酸酶-9)的mRNA和蛋白质表达得到增强,Bcl-2(B细胞淋巴瘤/白血病基因-2)表达减弱。综合分析得出,一定浓度的苦丁茶具有良好的防癌抗癌效果。

细胞外基质对舌鳞癌Tca8113细胞黏附性及迁移性的影响

目的 :观察细胞外基质成分在体外对舌鳞癌Tca8113细胞黏附和迁移的影响。方法 :运用细胞黏附实验和细胞迁移实验进行观察。结果 :显示随着纤连蛋白、层连蛋白、IV型胶原浓度升高 ,Tca8113细胞在相应的基质上黏附及迁移能力有所升高 ,低浓度时增强幅度更大 ,I、III型胶原在低浓度 ( <5mg/L)时表现为轻微促进黏附作用 ,高浓度时 ( >5mg/L)抑制黏附和迁移且随着浓度加大抑制作用更明显。结论 :纤连蛋白、层连蛋白、IV型胶原可通过诱导肿瘤细胞黏附和迁移 ,从而促进肿瘤细胞浸润和转移 ;而I、III型胶原则相反 ,可抑制肿瘤细胞的浸润和转移。

地鳖虫活性蛋白对人舌癌细胞Tea-8113的抑制作用

目的研究地鳖虫蛋白对人舌癌细胞Tea-8113增殖的抑制作用,探索地鳖虫蛋白质的抗肿瘤活性。方法采用MTT法测定地鳖虫蛋白质对人舌癌细胞Tea-8113增殖的抑制效果。结果地鳖虫蛋白质在体外能显著抑制人舌癌细胞Tea-8113的增殖,药物浓度0.0902 g.ml-1,药物作用72 h抑制率最高,达到92.96%,并呈现明显的药物剂量依赖关系。结论地鳖虫蛋白质有较强的体外抗肿瘤活性。