ATP浓度和缺氧暴露对大鼠脑线粒体RNA和蛋白质体外合成的影响

本文探讨介质中ATP浓度和急、慢性缺氧暴露对大鼠脑线粒体内RNA和蛋白质合成的影响。用差速离心法分离正常和低压舱模拟 4 0 0 0m高原急性连续缺氧暴露 3d和慢性连续缺氧暴露 40d大鼠脑线粒体 ,用体外无细胞 (cell freeinvitro) 3H UTP和3H Leucine掺入法分别测定线粒体RNA和蛋白质合成活性。结果显示 ,大鼠急性缺氧暴露后大脑皮质线粒体RNA体外合成活性降低 40 % ,蛋白质合成活性降低 60 % ;慢性缺氧暴露后线粒体RNA和蛋白质合成活性分别为对照的 72 %和 76% ;ATP对正常大鼠脑线粒体RNA以及蛋白质的体外合成活性的影响均呈双相性 ,大于或小于 1mmol/L均可产生不同程度的抑制效应。结果提示 ,缺氧可在转录和翻译两个水平上影响脑线粒体mtDNA的表达 ,而慢性缺氧暴露时 ,线粒体半自主性功能的改善可能是机体对缺氧适应的细胞机制之一 ;

金属离子对面包酵母合成ATP的影响机制初探

对Mg2+,K+和Na+在面包酵母酶系合成ATP过程中的影响机制进行了初步研究.发现Mg2+对ATP的合成影响很大,当Mg2+浓度为40mmol/L时,ATP合成量达到最大值,为6.07mmol/L;高浓度磷酸钾缓冲液会抑制ATP的合成,进一步研究发现高浓度K+对ATP合成具有明显抑制作用,但K+完全缺乏时,也不利于腺苷的转化;Na+可通过激活腺苷酸激酶的活性来促进ATP合成,同时激活腺苷脱氨酶的活性,其存在会使底物腺苷向肌苷转化.

饱和ATP为原料合成多级孔ZSM-5沸石分子筛的制备与表征

研究以饱和ATP吸附材料为合成沸石分子筛的硅源,采用双模板法,用四丙基氢氧化铵(TPAOH)为微孔模板剂和十六烷基三甲基溴化烷(CTAB)为介孔模板剂直接合成多级孔ZSM-5沸石分子筛,通过XRD、SEM、比表面积及孔径分析仪进行N2吸附-脱附等手段对多级孔ZSM-5沸石分子筛表征测试分析。结果表明,饱和ATP吸附材料在180℃下,水热提纯12 h获得硅源,再加入TPAOH和CTAB进行初始凝胶反应,后移入水热反应釜中,控温180℃,水热晶化反应15 h,即得多级孔ZSM-5沸石分子筛。

ADK基因在酿酒酵母中的表达和ATP合成研究

采用基因工程技术 ,将催化ATP合成的酶—ADK的基因克隆进表达载体YEpN181P2获得重组质粒YEpN ADK ,转化酿酒酵母GRF18后 ,ADK基因获得表达 .用重组菌株GRF18(YEpN ADK)发酵合成ATP其产率比对照菌株GRF18提高 75% .

一种双核铁(Ⅲ)配合物的合成、表征、电化学性质及催化水解ATP的研究

合成了双核铁（Ⅲ）配合物Ｎａ２［Ｆｅ２（μ－Ｏ）（μ－ＯＡｃ）２（ＩＤＡ）２］·５Ｈ２Ｏ（Ⅰ），其中ＯＡｃ为乙酸根（ＣＨ３ＣＯＯ－），ＩＤＡ为亚氨基二乙酸根［ＨＮ（ＣＨ２ＣＯＯ－）２］．通过元素分析、摩尔电导、紫外可见光谱、红外光谱等方法对该配合物进行了表征，研究了它的电化学性质，并采用微量热法测定了其催化水解ＡＴＰ的动力学参数［Ｋｍ＝（２．８９８±０．１９５）×１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１，ｋ２＝（４．６１７±０．１９３）×１０－３ｓ－１］．

膜表面质子可能是ATP合成的主要驱动力

利用细胞压破碎仪破碎鼠肝线粒体，得到了具有良好生物活性的ＳＭＰ，其呼吸控制率为１．４。分别采用荧光探针ｏｘｏｎｏｌＶＩ和ａｃｒｉｄｉｎｅｏｒａｎｇｅ，利用荧光淬灭法测定了丙二酸滴定过程中，ＳＭＰΔΨ和ΔｐＨ的变化趋势，结果表明：当丙二酸浓度达到０．７５ｍｍｏｌ／Ｌ时，ΔΨ的建立完全被抑制，而ΔｐＨ仍然保持了８３．９％。当丙二酸浓度达到１．００ｍｍｏｌ／Ｌ时，ΔｐＨ的建立才完全被抑制。ＳＭＰＡＴＰ合成活性的测定显示，当ΔΨ的建立被完全抑制，而ΔｐＨ仍然存在时，仍有部分ＡＴＰ合成活性（３４．１％）。上述现象为膜表面高能质子是ＡＴＰ合成的主要驱动力的观点提供了又一佐证。此外，当丙二酸浓度从０ｍｍｏｌ／Ｌ增加到０．７５ｍｍｏｌ／Ｌ时，尽管ΔΨ与ΔｐＨ的变化不很大，但ＳＭＰＡＴＰ合成活性却出现明显降低，与氧化呼吸链活性的变化类似，二者呈对数关系，也表明ＡＴＰ合成很可能与ΔμＨ＋并不直接相关。

ATP的合成机制教学方法探讨

采用设问式、图表式、动画模拟和实验证据等多种方法相结合,来生动形象地展示ATP的合成机制内容,在教学实践中获得了较好的教学效果。

慢病毒介导的ROBO1沉默抑制乳腺癌细胞生长克隆及ATP合成

目的研究沉默ROBO1对乳腺癌细胞生长、克隆及三磷酸腺苷(ATP)合成的影响。方法乳腺癌细胞MDA-MB-231感染ROBO1 siRNA重组病毒和siRNA control重组病毒记为干扰组和阴性组,以不做处理的细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blot检测细胞中ROBO1 mRNA和蛋白水平,以MTT法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,荧光素酶法检测细胞合成的ATP水平,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞中周期蛋白D1(Cyclin D1)、p21蛋白水平。结果阴性组细胞中ROBO1 mRNA和蛋白水平、细胞OD值、克隆形成率、ATP水平、细胞周期比率及cyclin D1、p21蛋白水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。干扰组细胞中ROBO1mRNA和蛋白水平降低,细胞OD值也降低,克隆形成率及ATP水平下降,G_0/G_1期细胞比率升高,细胞中cyclin D1蛋白水平降低,p21蛋白水平升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论沉默ROBO1抑制乳腺癌细胞的生长、克隆及ATP合成能力,并且能将细胞周期阻滞在G_0/G_1期。

生物氧化CO_2释放与氧化磷酸化生成ATP的相关性

通过解析葡萄糖有氧氧化过程中有机酸脱羧生成CO2的全部O原子来源,以及呼吸链-氧化磷酸化生成ATP的葡萄糖以外H原子的来源,明晰了葡萄糖有氧氧化过程中直接或者间接加H2O的特殊意义:H2O的H原子进入呼吸链-氧化磷酸化释放能量生成ATP;O原子结合到中间产物的C原子上形成羧基-COOH,以有机酸脱酸形式生成CO2释放出来。

PVA和PEG(6000)预处理对大豆胚轴生长、蛋白质合成和ATP含量的影响

在低温吸胀阶段,经PVA(聚乙烯醇)和PEG(聚乙二醇6000)预处理的大豆胚轴蛋白质合成和ATP含量均比对照高。在萌发阶段,胚轴生长增快,蛋白质合成明显加快,ATP迅速被消耗,而对照胚轴则相反。试验结果表明,预处理大豆种子萌发和生长与其蛋白质合成、ATP水平和消耗能力有密切关系。

点突变对HSP70蛋白自身磷酸化和ATP反应的影响

目的通过比较HSP70野生型和突变型蛋白的自身磷酸化及ATP分解合成反应的不同,探讨HSP70的作用机制。方法运用基因定位诱导突变技术,将89和227位组氨酸分别替代以丝氨酸(H89S,H227S),分析野生型和突变型HSP70蛋白的自身磷酸化过程,对两种蛋白的ATP分解和合成变化进行研究。结果突变的H89S蛋白自身磷酸化、ATP分解和合成受到抑制,有剂量反应关系存在;野生型和H227S蛋白的ATP交换过程未受到影响。结论89位组氨酸点突变能显著降低ATP酶交换反应,但它的自身磷酸化可能并非必须的介导位点或只是一个选择性的功能侧链。

人工老化玉米种胚ROS产生及ATP合成酶亚基mRNA完整性研究

为了揭示玉米种子衰老机理,本研究以“郑单958”玉米杂交种为材料,研究了人工老化处理(温度45℃﹑相对湿度100%)后种子活力﹑种胚O_(2)^(-)产生和积累﹑种胚ATP含量和ATP合成酶活性,并用反转录阻断-双引物扩增法分析种胚及不同器官(盾片﹑胚根和胚芽)ATP合成酶亚基mRNA的完整性。结果表明,人工老化处理后,玉米种子的萌发率和胚根生长速率下降;种胚生活力降低;种子呼吸强度减弱。种胚O_(2)^(-)产生速率在老化3d时达到高峰,随后下降;胚根和胚芽O_(2)^(-)产生速率和含量显著增加;种胚ATP含量和ATP合成酶活性降低。ATP合成酶ε亚基和γ亚基的mRNA完整性先升高后降低;δ亚基mRNA的完整性没有明显变化;α亚基和β亚基mRNA的完整性则持续降低;胚根和胚芽ATP合成酶亚基mRNA的损伤程度大于盾片。说明在老化过程中胚根和胚芽ROS产生和积累,导致ATP合成酶亚基mRNA不同程度的损伤,ATP合成酶活性降低,ATP含量减少,造成萌发过程种胚供能不足,这可能是导致玉米种子衰老的重要原因之一。

两价阳离子在类囊体膜上H＋—ATP酶活化中的作用

在高盐介质中用ＥＤＴＡ去除叶绿体内源游离Ｍｇ２＋后制备的类囊体具有与正常类囊体相似的△ｐＨ幅度和光合磷酸化反应速率，即膜上ＣＦ０与ＣＦ１仍处于正常的耦联状态。以此为材料研究不同两价阳离子（Ｍ２＋）在ＡＴＰ酶活化及催化反应中的作用，结果表明：（１）Ｍｇ２＋Ｃａ２＋Ｍ２＋Ｚｎ２＋Ｃｏ２＋Ｂａ２＋分别对光下ＡＴｈ形成与水解的效应大小与它们的离子半径有一定关系。（２）这些Ｍ２＋以不同方式不同程度地抑制了Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶的合成或水解ＡＴＰ的活性。（３）低浓度Ｍ２＋的电荷屏蔽效应可稳定酶在光下的活化构象，这有利于暗中进行的需Ｍｇ２＋的催化ＡＴＰ合成与水解反应。

ATP合成菌株的构建及用于联合生产S-腺苷甲硫氨酸

为降低S-腺苷甲硫氨酸的生产成本,构建了同时表达腺苷激酶、腺苷酸激酶和乙酸激酶3 种酶的重组大肠杆菌菌株用于ATP 的合成,并对ATP 的转化条件进行了优化,优化后的反应体系为:腺苷30 mmol/L,乙酰磷酸二锂盐135 mmol/L,硫酸镁5 mmol/L,硼砂50 mmol/L,菌体2 g/L(湿重),反应液初始pH7.5,反应温度为35℃,反应时间为3 h,反应转化率可以达到99%以上。按照上述反应体系进行5 L 放大,反应结束后再投入65 mmol/L D,L-甲硫氨酸和50 g/L(湿重)表达腺苷甲硫氨酸合成酶的重组大肠杆菌菌体,并补加15 mmol/L 硫酸镁,转化18 h S-腺苷甲硫酸浓度能达到8.7 g/L,转化率达到72.5%。

ATP基沸石膜的制备与表征

沸石作为一种优异的吸附材料被应用于印染废水以及重金属离子等废水处理和放射性元素的吸附,但目前存在易流失、难回收、操作困难等问题,妨碍了沸石的工业化应用。本文通过原位水热合成法在自制的凹凸棒石(ATP)基支撑体表面成功合成A型沸石膜,可以有效地解决沸石吸附剂与产物分离困难的问题。通过对支撑体表面的A型沸石进行吸附实验,结果表明:A型沸石对中性红(NR)的吸附是自发的吸热过程,反应符合准二级动力学模型。

小白菊内酯对食管癌细胞增殖 凋亡和能量代谢的影响

目的 探讨小白菊内酯对食管癌细胞增殖、凋亡和能量代谢的影响。方法 对人食管癌细胞Eca109转染肝激酶B1(LKB1)的短发夹RNA(shRNA)重组pLK0.1质粒(LKB1-shRNA)及阴性对照质粒(NC-shRNA),然后应用不同浓度的小白菊内酯处理Eca109细胞。使用细胞计数试剂(CCK-8)检测试剂盒测量细胞活力。使用Annexin V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双重染色分析细胞凋亡。使用定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法检测LKB1、cleaved PARP、磷酸化腺苷酸(AMP)激活蛋白激酶-α(p-AMPK-α)和AMPK-α的蛋白表达。使用Screen Quest荧光法葡萄糖摄取检测试剂盒检测葡萄糖摄取。使用三磷酸腺苷(ATP)分析试剂盒测量细胞ATP水平。结果 与未处理的Eca109细胞相比,10μmol/L小白菊内酯孵育24 h后细胞中LKB1的表达水平升高(P<0.05)。小白菊内酯处理抑制了Eca109细胞的增殖、葡萄糖摄取和ATP合成,并诱导了细胞凋亡(P<0.05)。小白菊内酯处理升高了LKB1、p-AMPK-α和cleaved PARP的蛋白相对表达量(P<0.05)。然而,沉默LKB1则逆转了小白菊内酯对细胞增殖、凋亡、葡萄糖摄取和ATP合成的影响(P<0.05)。结论 小白菊内酯通过激活LKB1-AMPK轴来抑制食管癌细胞增殖、葡萄糖摄取和ATP合成,并诱导细胞凋亡。

Relationship Between Electron Transport or Proton Transduction and ATP Synthesis in Fusion Membranes in Light

The phosphorylation coupling factors of the chloroplast thylakoid membranes were plucked off to form deficient membranes which were combined with crista membranes to form a fusion system. This membranes reconstituted ATP synthesis activity in light. However, the △pH in the reaction medium was not observed.This paper is a report on some of the results obtained recently in connection with the problem. Various examinations and measurements were used and this phenomenon was repeated. Through the reconstituted system, (thylakoid membranes combined with crista membranes) the kinetic proton changes were studied. It proved that the photophosphorylation activity of this system increased with the increase of the quantity of the combined crista membranes to which, however, the △pH in medium, the effects of 9-AA fluorescence quenching, and the absorption change of neutral red in the membrane pockets were inversely proportional. For this phenomenon, analyses and discussions on the relationship between electron

Mitochondrial membrane fusion and ATP synthesis both compete for interfacial △pH of PMF,but not △Ψ:An Inter-play between membrane fusion and energy coupling of mitochondria

Although some fusogenic proteins have been established to tether two opposite outer or inner mitochondrial membranes into contact, a prerequisite for whole mitochondrial fusion events,

用于5′-三磷酸腺苷生产的酶及细胞酶系

文章对用于合成 5′ 三磷酸腺苷 (ATP)的生物酶及细胞酶系的研究情况作了扼要综述 ,分析了我国ATP生产的工业化现状 ,并对今后的研究和开发提出了建议。

凹凸棒负载KF催化合成乙二醇烯丙基醚

采用浸渍法制备氟化钾/凹凸棒（KF/ATP）固体碱催化剂,催化丙烯醇与环氧乙烷（EO）反应合成乙二醇烯丙基醚。考察了催化剂焙烧温度、KF负载量对催化性能的影响,采用X射线衍射（XRD）、透射电子显微镜（TEM）、Hammett指示剂法等手段对催化剂进行表征。结果表明：焙烧温度为400℃,KF负载量为30%时,生成的活性组分K2MgF4均匀分散在ATP表面,K2MgF4与KF的协同作用使得催化剂对烯丙醇和EO反应的催化活性最高。KF/ATP固体碱催化剂用于催化合成乙二醇丙烯基醚的最佳工艺条件为：反应温度100℃,反应压力为0.20-0.35 MPa,催化剂用量为1.5%,n（丙烯醇）：n（EO）为5：1,反应时间为2 h,EO转化率达97.5%。