针刺对脑源性神经营养因子在脊髓Ⅱ板层可塑性中表达的影响

采用免疫组化和原位杂交技术 ,探讨了针刺促进脊髓 板层可塑性过程中脑源性神经营养因子及其 m RNA表达的变化。结果显示 :针刺侧备用背根节的脑源性神经营养因子及其 m RNA阳性中 (4 2～ 5 7μm)、小 (<42 μm)型神经元的百分数有所增加 (P<0 .0 5 ) ;脊髓 板层的脑源性神经营养因子的阳性神经膨体密度明显增多 (P<0 .0 1)而阳性神经元百分数无变化 (P>0 .0 5 ) ;针刺后脊髓 板层未见脑源性神经营养因子 m RNA的杂交信号。提示针刺促进脊髓 板层可塑性可能与背根节中。

部分去背根猫备用背根节和脊髓Ⅱ板层NT-3及其mRNA的表达变化

采用免疫组化和原位杂交技术探讨了部分去背根猫备用背根节 (L6 )和 L3、L5脊髓 II板层 NT-3及其 m RNA的表达变化。结果发现 ,正常组 NT-3及其 m RNA阳性产物主要分布于背根节的大型神经元和少数中、小型神经元。部分去背根后 ,3 d和10 d两时相 NT-3 m RNA大型神经元阳性数明显减少 ,而 NT-3阳性大型神经元数术后 10 d时方明显减少 (P<0 .0 1) ;NT-3及其 m RNA阳性小型细胞数在术后两时相均较正常组者增多 (P<0 .0 1) ;而在中型神经元只有 NT-3阳性神经元数有增加。相对地 ,在脊髓 板层 ,两时相 NT-3阳性神经元及胶质细胞百分数均较正常者明显增加 (P<0 .0 1) ,且以 3 d组者为最明显 ,但均未见 NT-3 m RNA阳性信号。结果表明 ,部分去背根不仅导致背根节各类神经元中 NT-3的表达发生了变化 ,且对 板层 NT-3阳性神经元及胶质细胞数量也有明显影响。提示 NT-3可能在脊髓

应用超微结构定量法探讨针剌对猫脊髓后角第Ⅱ板层的可塑性影响

本实验采用双侧备用根模型(切断双侧L_1-L_5,L_7—S_2脊神经背根,保留L_6背根),针刺动物一侧后肢L_6背根支配范围内的足三里、悬钟、伏兔和三阴交四穴,应用电镜超微结构定量方法,观察电针刺激穴位28天后,对脊髓后角第Ⅱ板层终末可塑性的影响。结果显示,第Ⅱ板层单位面积中复合终末的数量,针刺侧比未针刺侧增多32％。提示针刺能促进完好背根纤维更快地侧支出芽和重建突触联系,以代偿损伤的背根纤维终末。本文也对针刺后第Ⅱ板层中复合终末的形态、面积,简单终末的数量以及电针刺激的某些条件进行了初步的探讨。

大鼠脊髓半横断损伤对脊髓Ⅱ板层SP表达的影响

目的 探讨脊髓半横断对脊髓 板层 SP表达的影响。方法 2 0只成年 SD大鼠随机分为正常对照组 ,术后 3d、7d、2 1d组。建立成年 SD大鼠脊髓半横断 (T1 3～ L1 )模型。取各组尾侧 L3节段脊髓作冰冻切片。通过免疫组化 ABC法观察 SP免疫阳性反应物的分布 ,计数各组脊髓两侧 板层内 SP免疫阳性神经膨体数。结果 SP免疫阳性产物以神经膨体形式集中分布在脊髓背角 板层内。脊髓半横断后 3d,手术侧脊髓 板层内 SP阳性膨体数较正常组明显增多 ,7d组较 3d组开始下降 ,2 1d恢复正常。非手术侧仅表现为术后 3d一过性增高 ,且反应强度较手术侧有增强。结论 脊髓半横断损伤导致 板层 SP免疫阳性膨体数量改变 ,提示 SP作为伤害感受的一种神经递质或调质可能在脊髓半横断损伤过程中发挥作用。

吗啡对大鼠脊髓Ⅱ板层中受损伤坐骨神经的传入纤维终末的影响——抗氟化物酸性磷酸酶组织化学研究

目的 探讨吗啡对钳夹损伤坐骨神经后其传入纤维终末在脊髓Ⅱ板层分布的影响。 方法 用显示抗氟化物酸性磷酸酶 (FRAP)组织化学方法 ,借助图像分析仪测量损伤坐骨神经后 15d和 30d吗啡组和对照组大鼠脊髓Ⅱ板层FRAP阳性反应物面积。 结果 损伤坐骨神经后吗啡组和对照组大鼠脊髓Ⅱ板层FRAP阳性反应区均有不同程度的缺失 ;对照组损伤坐骨神经后 30d的FRAP阳性反应物面积比 15d的FRAP阳性反应物面积增大 40 %。吗啡组损伤坐骨神经后 30d的FRAP阳性反应物面积比 15d的FRAP阳性反应物面积增大 2 2 %;同时也比对照组损伤坐骨神经后 30d的FRAP阳性反应物面积增大 19%。 结论 随着损伤坐骨神经后大鼠存活时间延长 ,其脊髓Ⅱ板层FRAP阳性反应物面积呈恢复性增大 ;吗啡能使坐骨神经损伤大鼠脊髓Ⅱ板层的FRAP阳性反应物面积明显增大。

切断部分背根对脊髓Ⅱ板层c-jun,c-fos表达的影响——免疫组织化学研究

目的 探讨 c- fos、c- jun与脊髓可塑性的关系。方法 将成年雄猫 2 5只分为正常组、假手术后 3天组 ,假手术后 10天组、单侧备用根术 (切除一侧 L1 - L5,L7- S2 背根节 ,保留 L6为备用根 )后 3天组和单侧备用根术后 10天组 (每组 5只 )。取各组动物的 L5脊髓用 4%多聚甲醛固定后制作 2 0μm厚冰冻切片。每例动物间隔取 5张切片 ,分别用 c- fos (稀释度 1∶ 30 0 0 ,Sigm a) ,c- jun (稀释度 1∶ 10 0 0 ,Santa Cruz)抗体行 ABC免疫组化染色。 DAB棕色反应显色。结果 正常组及假手术组猫脊髓灰质各层内 ,c- jun的免疫阳性反应物主要出现在神经元胞核 ,但胞浆亦有弱阳性反应。部份去背根后 3天及 10天 ,单侧备用根手术组 板层 c- jun阳性神经元的数量及反应强度均较正常组及假手术者明显增多 (P<0 .0 5 )。但术后 3天与 10天组间无显著差异 (P>0 .0 5 )。与 c- jun比较 ,各组脊髓内均未见 c- fos的阳性细胞。结论 切断部分背根导致脊髓 板层 c- jun表达上调 ,提示 c- jun可能与脊髓 板层可塑性有关。

切断猫L_2背根后脊髓Ⅱ板层一氧化氮合酶的表达变化

采用 NADPH- d酶组织化学方法 ,观察一氧化氮合酶 (NOS)在成年猫脊髓 L2 节段板层的分布 ,并探讨切断 L2背根对 板层 NOS含量的影响。结果显示 ,NOS主要分布于正常成年猫脊髓 板层的神经膨体及少数神经元胞浆内。切断L2 背根 10天后 ,手术侧 板层 NOS的平均灰度较非手术侧明显增加 (P<0 .0 5 ) ,神经膨体密度则较非手术侧明显减少 (P<0 .0 1) ,这表明 ,切断背根可致相应节段脊髓 板层 NOS含量明显减少。提示 NOS在成年猫脊髓

腰骶背根全切猫脊髓Ⅱ板层突触性终末的代偿性变化──电镜定量分析

为深入探索脊髓的可塑性变化规律，用５只单侧腰骶背根全切猫，术后存活３～４个月。发现实验侧脊髓Ⅱ板层内背根来源的复合终末数下降至正常的２４％；非背根来源的简单终末数却增加至正常的１３４％；还新发现了一类双重突触性终末，本文将之称为非典型复合终末。上述变化使突触总数仍维持在正常水平。在Ｌ＿６节段的简单终末中，形成对称性突触的简单终末，其增幅（７１％）显著地大于形成非对称性突触者（３６％）；含有致密核心小泡的简单终末，其增幅（１１９％）又明显地大于仅含清亮小泡者（３４％）。这种简单终末各亚类的增幅不同，可能与丢失大量背根来源的复合终末后进行的机能调整有关。还发现一个树突截面上同时与两个简单终末形成突触的机率增加了４４％。其中含一个对称性突触者更成倍增加，达正常的２１９％。表明新形成的简单终末，除与丢失终末存留的突触后部位恢复突触性联系外，还可能有新的突触性联系形成。

部分去背根传入猫脊髓Ⅱ板层神经生长因子的免疫组化研究

为探讨神经生长因子（NGF）在部分去背根传入猫脊髓Ⅱ板层可塑性中的作用，本文采用成年雄猫15只，建立单侧备用根模型（即切断一侧L1～5、L7～S2节段脊髓背根，保留L6背根），术后分别存活3、5和11d，灌流固定，取L5、L6、L7脊髓冻切．用2.5sNGF抗体进行ABC法免疫组化反应．每例在7张切片上测两侧Ⅱ板层内、中、外三个固定大小对应区域的灰度值。结果：三个时间组手术例L6平面Ⅱ板层NGF的平均灰度均显著地小于非手术例（P＜0．05）；而手术侧L5、L7平面Ⅱ板层NGF的平均灰度3d时均大于非手术侧（P＜0．05），5d时无显著差异（P＞0．05），11d时小于非手术侧（P＜0．05），即手术侧L5、L7Ⅱ板层灰度值随时间推移而显著减小。结果表明，手术侧L6Ⅱ板层NGF含量在三个时间组均有增加；而L5、L7Ⅱ板层NGF含量在3d时下降，5d恢复，11d增多．这种内源性NGF含量的变化可能与部分去背根脊髓Ⅱ板层的可塑性变化有关．

去部分背根后猫脊髓Ⅱ板trKC表达的变化

目的 探讨部分去背根猫脊髓 板 (L3 、 L5) trk C的表达变化。方法 将 15只成年猫分正常组、单侧备用根术 (切除一侧 L1 - L5,L7- S2 背根节 ,保留 L6备用根 )后 3天和 10天组 (n=5 )。取各组脊髓 L3 、L5节段制作 2 0 μm冰冻切片 ,用 trk C兔抗血清以免疫组织化学 ABC法染片 ,观察 tr KC在脊髓 板层的分布 ,测量各组 板层 tr KC的平均灰度。结果 在正常组 tr KC阳性物主要分布于脊髓腹角中间带及背角深部的神经元。而 板层仅见 tr KC匀质状阳性染色。去部分背根后 3天 ,手术侧 L3 、 L5脊髓 板层 tr KC的平均灰度均较非手术侧及正常组者增加 (P<0 .0 5 )。 10天时 ,手术侧 L5平面 tr KC的平均灰度已恢复到近对侧和正常对照组水平 (P>0 .0 5 ) ,而 L3 平面仍较对侧及正常组者高 (P<0 .0 5 ) ,但已较3天者减少 (P<0 .0 5 )。去部分背根后 3天 ,手术侧 L3 、 L5脊髓 板层 tr KC的含量均较非手术侧及正常组者减少。 10天时 ,手术侧 L5平面 tr KC的含量已恢复近对侧及正常水平 ,而 L3 平面虽有恢复 ,但仍未达正常者水平。结论 tr KC的表达变化可能与脊髓可塑性有关。

脊髓薄片制备方法的改进及其脊髓Ⅱ板层神经元突触后电流的记录

目的探讨记录脊髓Ⅱ板层神经元兴奋性和抑制性突触后电流的方法。方法SD雄性大鼠,160～180 g,2%氟烷和100%氧气吸入麻醉后快速取腰段脊髓,迅速放入冰冷充氧的人工脑脊液,将约1 cm长的脊髓粘立于振动切片机载物台上,同时覆以冰冷的人工脑脊液进行横切片,片厚350～450μm,Kreb’S液提前30 min用95%CO2和5%O2预充氧,将切好的脊髓薄片转移其中,34～35℃孵育至少1 h后,以备实验记录用。结果在倒置显微镜下可清楚分辨出脊髓Ⅱ板层神经元。采用全细胞电压钳记录技术,给予选择性受体阻断剂以分离不同的突触后受体电流。在钳制电压为-70 mV时,可以记录到谷氨酸能的兴奋性突触后电流（EPSCs）;而在钳制电压为0 mV时,可以记录到抑制性突触后电流（IPSCs）。结论该方法为研究脊髓Ⅱ板层神经元递质释放提供了有效的途径。

大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核Ⅱ层内CB样、PV样阳性终末与向臂旁核投射神经元的突触联系

为了观察三叉神经脊束核尾侧亚核 层神经元与向臂旁核投射神经元的突触关系 ,选用 Calbindin D-2 8k和 Parvalbu-min作为标志物 ,采用 HRP逆行追踪与免疫组织化学技术相结合的双重反应技术对 层内的 Calbindin D-2 8k样和 Parvalbumin样阳性神经元与三叉神经脊束核尾侧亚核向臂旁核投射神经元之间的突触联系进行了观察。HRP注入臂旁核后 ,逆标神经元主要位于同侧三叉尾侧亚核 层至 层。Calbindin D-2 8k和 Parvalbumin样阳性胞体、纤维和终末主要集中在 层内侧带。电镜下观察 ,此二者的阳性反应产物呈弥散分布 ;两者的阳性终末与 HRP逆标神经元的胞体和树突之间主要形成轴 -树突触 ,偶见轴 -体突触 ;Calbindin D-2 8k样阳性终末与 HRP逆标神经元的树突形成的非对称性突触占 83% ,Parvalbumin样阳性终末与 HRP逆标神经元的树突形成的对称性突触占 85 %。此外 ,还观察到参与突触小球组成的初级传入纤维终末与 HRP逆标神经元的树突形成突触联系。以上结果提示 :(1)三叉神经脊束核尾侧亚核 层的 Calbindin D-2 8k样或 Parvalbumin样阳性神经元可通过突触传递机制对三叉神经脊束核尾侧亚核向臂旁核投射的神经元进行调控 ,影响外周伤害性信息向上位脑结构的传递 ;(2 )三叉神经脊束核尾侧亚核向臂旁核投?

吗啡对备用根大鼠脊髓Ⅱ板层背根终未的影响——抗氟化物酸性磷酸酶组化定量研究

应用酶组化方法和图象分析探讨脊髓Ⅱ板层无髓传入纤维终末标记物——抗氟化物酸性磷酸酶(fluoride-resistant acid phoshatase,FRAP)活性的变化,从而了解吗啡对备用根大鼠的侧支出芽有无促进作用。结果显示:备用根大鼠手术侧L_3、L_4和L_5节段Ⅱ板层FRAP阳性反应物面积因切除了大部分腰段背根于17天时下降到最低水平,于34天时L_3平面开始回升,即其阳性面积比17天时增大5倍多。吗啡备用根大鼠17天时其术侧Ⅱ板层阳性反应物面积也降到最低水平,唯L_3Ⅱ板层的阳性面积比17天备用根者大4倍,表明17天时阳性面积已开始回升;而到34天时术侧L_4Ⅱ板层阳性面积比17天时增大75％,比34天备用根大鼠增大一倍。表明吗啡促进了背根无髓纤维的侧支出芽,而出芽的纤维更快地分布到L_4节段,稍后也分布到L_4节段Ⅱ板层。

备用背根猫脊髓Ⅱ板层组织对鸡胚背根节神经突起生长的影响

用１０只存活５ｄ的单侧后肢备用根猫（切除Ｌ１～Ｌ５、Ｌ７～Ｓ２背根节，保留Ｌ６背根），取手术侧（实验组）和非手术侧（对照组）脊髓Ⅱ板层组织块及提取液分别与Ｈａｍｂｕｒｇｅｒ３５期鸡胚背根节进行悬滴培养，并以不加植块的背根节培养作参照。比较各组在同一观测时间的差异．结果：（１）各组背根节从培养２４ｈ到４８ｈ，其神经突起均明显增长；（２）同一观测时间内，对照组与参照组的神经突起少而短，从背根节迁出的细胞较多，而实验组神经突起多且长，迁出的细胞较少；（３）在两个观测时间，植块与提取液培养的实验组背根节神经突起平均长度均显著长于对照组者，而对照组与参照组背根节神经突起长度的差异无显著性．表明部分腰骶背根切除猫，其脊髓Ⅱ板层及其提取液的促神经突起生长活性增强．

吗啡对坐骨神经钳夹伤大鼠脊髓Ⅱ板层初级传入纤维终末突触重建的影响

目的 探讨吗啡能否促进大鼠受损伤的初级传入纤维终末在脊髓Ⅱ板层再生及其突触重建。 方法 采用电镜定量方法计数吗啡组、生理盐水组和纳络酮吗啡组坐骨神经损伤后 15d和 30d ,L4脊髓Ⅱ板层背根无髓传入纤维来源的Ⅰ型复合终末、背根有髓传入纤维来源的Ⅱ型复合终末和由中间神经元轴突和下行传导束轴突形成的简单终末。 结果 吗啡组大鼠脊髓Ⅱ板层的Ⅰ型复合终末数比生理盐水组和纳络酮吗啡组明显增多 ,然而 ,Ⅱ型复合终末却比生理盐水组和纳络酮吗啡组少。 3组大鼠脊髓Ⅱ板层的突触性终末总数 ,复合终末数和简单终末数没有差异。 结论 吗啡能够促进大鼠脊髓Ⅱ板层受损伤的初级无髓传入纤维终末再生及其突触重建 ,这可能通过阿片受体介导。

大鼠延髓背角Ⅱ层神经元向臂旁区、延髓尾侧腹外侧区和脊髓的投射

将逆行追踪剂荧光金分别注入大鼠一侧臂旁区、延髓尾侧腹外侧区和颈髓第四节段 ,观察到延髓背角浅层 ( 、 层 )向上述部位均有投射 , 层外侧部的投射神经元多于 层内侧部。臂旁区接受双侧延髓背角浅层的投射 ,但以同侧为主 ;延髓尾侧腹外侧区和第 4颈髓接受同侧延髓背角浅层神经元的投射但延髓背角浅层向第 4颈髓投射的神经元数量较少。结合免疫荧光组织化学研究表明 , 层向臂旁区和延髓尾侧腹外侧区投射的神经元部分呈 calbindin-D2 8k样阳性 ,而未见呈 parvalbumin样阳性者。向第 4颈髓投射的 层神经元数量很少 ,未见有呈 calbindin-D2 8K和 parvalbumin样阳性者。本研究结果进一步支持 层有传出投射的观点 ,也提示 层的 calbindin-D2 8K样和 parvalbumin样阳性神经元可能分别属于不同的细胞亚群。

猫腰骶背根全切后脊髓Ⅱ板层非典型复合终末神经活性物质的探讨

采用光镜电镜技术探测猫腰骶背根全切后脊髓Ⅱ板层内新出现的一类终末—非典型复合终末(ACT)神经活性物质的性质。实验结果表明:光镜下Ⅱ板层内SP与CCK阳性反应强度早期(7～24天)减弱、范围减小;晚期(2—4.5月)有所回升。m-ENK与5-HT阳性反应强度和范围早期无变化,晚期增加。电镜下分别找到SP、CCK、m-ENK,5-HT阳性的ACT,表明至少存在这四种神经活性物质类型的ACT。本文讨论了四种ACT的机能意义和可能的来源。

针刺对去部分背根猫脊髓和背根节NGF及NGF mRNA的影响

用免疫组织化学和地高辛标记 c RNA探针原位分子杂交技术 ,观察了针刺对成年备用背根猫 (切断一侧 L1～ 5 、L7～ S2节段脊髓背根 ,保留 L6 背根 )脊髓 板层、背核和背根节内神经生长因子和神经生长因子 m RNA的影响。结果证明 ,针刺促进了备用根背根节的神经生长因子基因的表达 ,使备用背根节内神经生长因子、神经生长因子 m RNA阳性神经元数量明显增多 ,并且针刺时间越长促进作用也越强 ;而对脊髓 板层与背核则无明显影响。本实验结果提示 ,针刺对备用根猫脊髓侧支生芽具有促进作用 。

切断L_(4)背根对脊髓板层一氧化氮合酶表达的影响

为探讨背根切断对脊髓 板层一氧化氮合酶 (NOS)的影响 ,采用 NADPH- d酶组织化学方法 ,观察了切断 L4背根 7天后脊髓 板层 NOS的分布及变化。结果 :NOS主要分布于脊髓 板层的神经膨体及少数神经元胞浆内。切断背根 7天后 ,手术侧 L4脊髓 板层 NOS的平均灰度较非手术侧明显增加 (P<0 .0 5 ) ,神经膨体密度则较非手术侧明显减少 (P<0 .0 1) ,表明切断背根可致相应节段脊髓 板层 NOS含量明显减少。提示由 NOS产生的一氧化氮 (NO)可能在背根切断后脊髓 板层的病理过程中发挥作用。

大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核向三叉神经感觉核簇其它核团的投射:兼论胶状质投射神经元的存在

将逆行追踪剂荧光金分别注射到三叉神经感觉主核、三叉神经脊束核吻侧亚核和极间亚核，观察到尾侧亚核Ⅰ～Ⅴ层的神经元均向同侧上述核团发出上行投射。值得注意的是尾侧亚核Ⅱ层（胶状质）也有神经元向上述各核团投射。结合免疫荧光组织化学研究表明，在尾侧亚核浅层（Ⅰ、Ⅱ层）约10％～30％荧光金逆标神经元呈calbindin－D28k样阳性．而在浅层仅偶见荧光金逆标神经元呈parvalbumin样阳性者。本研究的结果进一步支持Ⅱ层神经元有传出投射的观点，也提示calbindin－D28k样阳性神经元和parvalbumin样阳性神经元在尾侧亚核浅层可能分别代表着具有不同特性的两类神经元。