六味地黄丸对钛颗粒诱导骨溶解成骨影响的机制

背景:目前已有大量研究发现六味地黄丸可用来治疗骨质疏松,而鲜有关于六味地黄丸对磨损微粒诱导的成骨细胞分化与矿化方面的相关研究。目的:探讨不同浓度六味地黄丸含药血清对钛颗粒诱导的小鼠MC3T3-E1成骨细胞体外骨溶解模型的积极作用。方法:大鼠口服六味地黄丸后提取含药血清,筛选六味地黄丸含药血清和钛颗粒对MC3T3-E1细胞活力影响的最佳浓度。将MC3T3-E1细胞为3组:空白组给予成骨分化培养;模型组给予钛颗粒(5μg/mL)+成骨分化培养;加含药血清组给予钛颗粒(5μg/mL)+六味地黄丸含药血清(分为10%,15%,20%剂量)共培养+成骨诱导。通过CCK-8法检测成骨细胞活力,碱性磷酸酶染色检测细胞碱性磷酸酶活性,通过硝酸银(Von Kossa)和茜素红染色检测细胞矿化情况,qRT-PCR检测成骨分化相关基因Runx-2、Osterix、Ocn、Axin、ALP和Opn的表达,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、p-GSK-3β、GSK-3β、Runx2和Osterix蛋白表达。结果与结论:①六味地黄丸含药血清培养可以逆转钛颗粒诱导的MC3T3E-1细胞碱性磷酸酶活性的降低,增加MC3T3E-1细胞茜素红染色及钙化结节,增加MC3T3E-1细胞成骨相关基因的表达,同时提高Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。②结果说明,六味地黄丸含药血清体外可以逆转钛颗粒对成骨细胞分化矿化的抑制作用,上调成骨相关基因的表达,其机制与调控Wnt/β-catenin信号通路相关,提示六味地黄丸有望成为防治人工关节无菌性松动的有效药物。

楮实子含药血清对成骨细胞功能的影响

目的 研究楮实子对体外培养的成骨细胞增殖、分化及其功能的影响,为楮实子在骨代谢疾病中的应用提供实验依据。方法 采用酶消化法培养大鼠成骨细胞,MTT比色法检测不同浓度(5%、10%和20%)楮实子含药血清对细胞增殖的影响,并据此选择最佳浓度进行后续实验;以AKP试剂盒检测成骨细胞AKP活性、以茜素红染色检测成骨细胞形成矿化结节数量;Western blot法检测成骨细胞功能指标基因如成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX)、I型胶原(collagen type I, Coll-I)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、骨桥蛋白(osteopontin, OPN)、骨保护素(osteoprotegerin, OPG)和骨钙素(osteocalcin, OCN)等蛋白的表达水平。结果 楮实子含药血清可显著促进成骨细胞增殖(P<0.01)、提高AKP分泌水平(P<0.01)、促进矿化结节形成(P <0.01),并显著上调OSX、Coll-I、ALP、OPN和OPG等成骨功能指标相关基因的蛋白表达(P<0.05)。结论 楮实子含药血清能提高成骨细胞功能,具有较好的促成骨活性。

益骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞雌激素受体mRNA及其蛋白表达的影响

目的从mRNA及蛋白水平研究益骨胶囊含药血清对成骨细胞雌激素受体(ER)表达的影响,从雌激素调控途径探讨益骨胶囊防治骨质疏松症的机理。方法分离、培养新生大鼠成骨细胞,传代后分为3组,即含药血清组、空白血清对照组、DMEM对照组。采用RT- PCR法检测ERα和ERβ的mRNA相对表达量,采用放射性配基结合分析检测ER的亲和力(以平衡解离常数KD表示)和受体数量(以RT表示)。结果益骨胶囊含药血清组和两对照组比较,ERβmRNA的相对表达量增加,差异有显著性(P <0 .0 5 ) ;ERαmRNA表达差异无显著性(P >0. 0 5 ) ;益骨胶囊含药血清组和两对照组比较KD值差异无显著性(P >0 . 0 5 ) ,但RT有提高,差异有显著性(P <0. 0 1)。结论益骨胶囊含药血清能上调成骨细胞ERβmRNA表达,能增加雌激素受体数量。通过雌激素调控途径防治骨质疏松症可能是益骨胶囊的药理机制之一。

淫羊藿总黄酮及其含药血清对成骨细胞增殖及功能表达的影响

目的研究淫羊藿总黄酮及其含药血清对体外培养大鼠成骨细胞(ROB)增殖和功能表达的影响。方法将淫羊藿总黄酮(TFE)以0.2、2、20、100、200 mg.L-15种质量浓度、含淫羊藿总黄酮大鼠血清(SRAT)以2%、4%、8%、16%等4种体积浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,研究其对细胞增殖和功能表达的影响。细胞增殖采用MTT法进行分析,细胞功能表达是于培养d 5、10、15、20分别检测碱性磷酸酶活性(比色法)、骨钙素分泌量(放射免疫法)、钙盐沉积量(比色法)和矿化结节(组织化学法)等。结果TFE5种质量浓度均对ROB细胞增殖和分化无影响,2%和4%SRAT则表现出强烈的刺激细胞增殖活性并提高碱性磷酸酶活性、骨钙素分泌量、矿化结节数和钙盐沉积量。结论淫羊藿治疗骨质疏松的直接物质基础可能并非TFE,而与其经口给予后吸收入血的TFE代谢产物及其诱生物有关。血清中的TFE代谢产物可促进细胞的功能表达增殖。

15种中西药物含药血清对大鼠成骨细胞增殖成熟的影响

目的 用含药血清体外观察 1 5种中、西药物对大鼠新生鼠颅骨成骨细胞增殖成熟的影响 ,比较它们的作用。方法 将所试药物口饲大鼠 ,每日 2次 ,连续 5次 ,于末次给药后 1h采血 ,分离获得含药血清 ,加入成骨细胞培养液中 ,培养 3d,以MTT法和金氏法测定光密度值 ,探讨对成骨细胞增殖和细胞外液中碱性磷酸酶活性的影响。结果 所试 1 5种药物的含药血清对成骨细胞增殖均无显著作用 ;3种西药、4种中成药能显著增强碱性磷酸酶活性 ,其作用强度分别依次为安雄、特乐定、福善美以及泰格、骨疏康、鹿茸健骨、仙灵骨葆。 6种中医古方对碱性磷酸酶活性无显著增强作用。结论 安雄胶囊 (雄激素制剂 )、特乐定片 (氟制剂 )、福善美片 (双膦酸盐制剂 )和中药泰格胶囊、骨疏康颗粒、鹿茸健骨胶囊。

老年大鼠含淫羊藿血清对成骨细胞的增殖与分化的影响

目的 观察老年雄性大鼠含淫羊藿血清对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响。方法 雄性 ,19月龄SD大鼠 2 4只 ,随机分为 3组 ,分别为生理盐水组、淫羊藿低剂量组 (1g ml)、淫羊藿高剂量组 (2g ml) ,按 0 5ml 10 0g的量 ,每日两次 ,连续灌胃 1个月 ,处死前 1h ,再灌胃一次 ,取血清 (灭活 ,过滤 ) ,最终稀释成 1∶2 0、1∶4 0、1∶80加入新生大鼠颅骨成骨细胞体系 ,用MTT法检测细胞增殖 ,另外 ,分别在第 2天、第 3天、第 4天动态观察细胞生长过程 ,做生长曲线和检测分化指标ALP。结果 老年大鼠含药血清在 1∶80稀释比 ,MTT测得的OD值给药组高于对照组 (P <0 0 5 )且以高剂量组高于低剂量组 (P <0 0 5 ) ,生长曲线表现为 ,在第 2天各组无明显差别 ,从第 3天开始 ,含药血清增殖速度加快 ,仍以高剂量组最快。ALP检测结果 ,含药血清OD值高于对照组 (P <0 0 5 ) ,但不同剂量之间没有差异 (P >0 0 5 )。结论 老年雄性SD大鼠连续服用淫羊藿水提液 1个月 。

巴戟天多糖含药血清对体外成骨细胞DKK-1表达的影响

目的探讨巴戟天多糖含药血清对成骨细胞增殖、分化及DKK-1蛋白表达的影响。方法源于大鼠颅盖骨的原代成骨细胞中加入不同浓度的巴戟天多糖含药血清进行干预。MTT法观察巴戟天多糖含药血清对成骨细胞增殖的影响,用硝基苯磷酸盐(P-nitrophenyl phosphate,PNPP)偶氮法观察含药血清对成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,用蛋白印记法观察含药血清对成骨细胞DKK-1蛋白表达的影响。结果巴戟天多糖含药血清可使体外培养成骨细胞的增殖率明显提高(P<0.01),并能提高成骨细胞ALP活性(P<0.01)。此外,巴戟天多糖含药血清可以下调成骨细胞DKK-1蛋白的表达。结论巴戟天多糖含药血清可促进成骨细胞的增殖能力和ALP活性,并可通过下调成骨细胞DKK-1蛋白的表达影响骨代谢。

补肾活血健骨方含药血清对人成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的观察补肾活血健骨方含药血清对体外培养的人成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响,为其治疗骨质疏松症提供理论依据。方法取骨质疏松症合并股骨颈骨折患者松质骨进行成骨细胞培养,构建成骨细胞分化模型;制备低、中、高3种浓度的补肾活血健骨方含药血清;采用MTT法、细胞上清液ALP测定和茜素红染色观察含药血清对成骨细胞的影响。结果加入含药血清干预细胞生长48h后,MTT检测显示中、高剂量组出现不同程度的细胞增殖现象,并存在一定程度的剂量依赖;作用72h后,低、中、高3个剂量组ALP活性增高,高剂量组茜素红染色钙盐沉积明显增多。结论补肾活血健骨方含药血清具有促进体外培养的人成骨细胞增殖、分化及矿化的作用。

健步虎潜丸含药血清对体外成骨样细胞增殖和功能的影响

背景:寻找不仅能够抑制骨吸收,而且能够促进骨形成的补肾中药复方防治骨质疏松症是目前研究的热点。目的:探讨健步虎潜丸含药血清对体外成骨样细胞增殖及功能的影响。方法:24只成年雌性SD大鼠随机分为健步虎潜丸组低剂量组、中剂量组、高剂量组及生理盐水组,并分别以含生药1.5,3.0,6.0 g/kg健步虎潜丸及等体积生理盐水灌胃,每天2次,连续给药1周,末次给药后1 h处死制备含药血清。以各组血清分别处理成骨样细胞24,48,72 h,观察细胞形态,MTT法测定细胞增殖能力,碱性磷酸酶染色法检测碱性磷酸酶活性。结果与结论:(1)从24 h开始健步虎潜丸低剂量组、中剂量组及高剂量组的细胞密度高于对照组,核分裂相多见,细胞重叠生长,分泌物多,基质堆积明显,健步虎潜丸高剂量组细胞改变尤为显著;(2)各药物干预组较对照组吸光度值明显增加,差异有显著性意义。24 h时健步虎潜丸中、高剂量组较低剂量组吸光度值明显增加,差异有显著性意义。48,72 h时各药物干预组组间比较,差异有显著性意义;(3)各药物干预组较对照组碱性磷酸酶活性值明显增加,差异有显著性意义。各药物干预组组间比较,差异有显著性意义;(4)结果表明,健步虎潜丸含药血清能提高成骨样细胞的活性且存在浓度依赖性及时间依赖性。

淫羊藿总黄酮含药血清对成骨细胞OPG/OPGL基因表达的影响

目的研究淫羊藿总黄酮含药血清对体外培养成骨细胞骨保护素(OPG)和骨保护素配体(OPGL)基因表达的影响,进一步揭示淫羊藿"补肾壮阳,益精健骨"的作用机制。方法采用中药血清药理学方法制备含淫羊藿总黄酮大鼠血清;用多次酶消化法体外培养成骨细胞;将含淫羊藿总黄酮大鼠血清(SRAT)以5%的质量浓度加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,研究它们对OPG/OPGL基因表达水平的影响。OPG/OPGL基因表达水平用RT-PCR法检测。结果半定量RT-PCR显示5%含淫羊藿总黄酮大鼠血清干预成骨细胞时,存在OPG mRNA的转录,在此浓度下,随着时间的延长转录水平逐渐增加,而OPGL mRNA水平随着时间的延长转录水平逐渐减弱。结论淫羊藿总黄酮代谢产物能上调成骨细胞中OPG mRNA的表达、抑制OPGL mRNA的表达,说明淫羊藿总黄酮代谢产物具有促进骨形成活性。

林蛙油含药血清对成骨细胞和破骨细胞增殖和活性的影响

目的探讨林蛙油含药血清对成骨细胞(Osteoblast,OB)增殖、分化和矿化能力的影响,及其对破骨细胞(Osteoclast,OC)分化的影响。方法源于大鼠颅盖骨的原代OB中加入不同浓度的林蛙油含药血清进行干预。MTT法观察林蛙油含药血清对OB增殖的影响,用硝基苯磷酸盐(p-nitrophenyl phosphate,PNPP)偶氮法观察林蛙油含药血清对OB碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,茜素红(alizarin red S,ARS)进行矿化结节染色并计算面积以观察林蛙油含药血清对OB矿化能力的影响。RANKL诱导前破骨细胞株RAW264.7细胞6d后,加入林蛙油含药血清,用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate Resistant Acid Phosphatase,TRAP)染色法观察TRAP阳性多核细胞。结果林蛙油含药血清可使体外培养OB的增殖率明显提高(P<0.01),并可明显促进OB的矿化能力(P<0.05),但其对OB的ALP活性影响作用不明显(P>0.05)。此外,林蛙油含药血清对RANKL诱导体外培养的破骨前体细胞RAW264.7形成的成熟多核破骨细胞有抑制作用,表现为TRAP(+)成熟多核破骨细胞数明显减少(P<0.01)。结论林蛙油含药血清可促进OB的增殖能力和矿化能力,并可抑制破骨细胞的形成。

补肾活血含药血清对成骨细胞经典Wnt/β-catenin通路的影响研究

目的：通过观察补肾活血含药血清对成骨细胞的经典Wnt/β-catenin信号通路的影响,探究补肾活血颗粒防治骨质疏松症（osteoporosis,OP）的作用机制。方法：将20只健康SD雌性大鼠随机分为补肾活血组和生理盐水组,每组10只,分别给予补肾活血溶液和生理盐水进行灌胃1周,按照药物含药血清制备方法得到补肾活血含药血清和生理盐水含药血清。采用体外分离乳鼠颅骨按照酶消法培养细胞,通过瑞氏-姬姆萨（R-J）染色观察细胞形态及碱性磷酸酶（ALP）染色进行成骨细胞的鉴定,鉴定成功后取第3代成骨细胞分为生理盐水含药血清组、正常培养基组及补肾活血含药血清组,加入含15%相应的含药血清的培养基培养后检测成骨细胞的ALP含量及增殖率,观察各组的矿化结节的情况,采用RT-PCR检测β-catenin、Runx2、Osx m RNA的表达。结果：培养的细胞经过瑞氏-姬姆萨染色显示胞浆有蓝色颗粒,细胞核呈紫褐色,有的可见1~3个核仁,呈现传代后的成骨细胞的形态,且ALP染色可见胞浆内含紫红色颗粒,表明培养的细胞是成骨细胞。补肾活血含药血清组细胞的ALP含量为（6.272±0.131）金氏单位/100 ml,增殖率为（0.81±0.172）%,与生理盐水含药血清组比较能够明显增强成骨细胞的增殖分化活性（P〈0.01）;补肾活血含药血清组细胞经过茜素红染色可见4个不同大小的橘红色结节,最大1.0 cm×1.0 cm,能够明显的促进成骨细胞的矿化功能;RT-PCR检测发现β-catenin、Runx2及Osx m RNA表达量分别为（1.782±0.944）、（1.935±0.994）、（1.610±0.811）,与生理盐水组比较有明显的提高（P〈0.01）,但与正常培养基组比较无明显差异（P〉0.05）。结论 ：补肾活血含药血清能够明显促进成骨细胞的分化增殖及矿化功能,并且推测激活经典Wnt/β-catenin信号通路可能是补肾活血颗粒防治骨质疏松症的作用机制。

补肾健骨汤对成骨细胞增殖及碱性磷酸酶、骨钙素合成的影响

目的 考察补肾健骨汤体外对大鼠成骨细胞增殖及碱性磷酸酶、骨钙素合成的影响。方法 采用酶消化法分离大鼠颅骨成骨细胞 ,取第 3代为实验模型 ,用常规计数法每日同时间检测成骨细胞增殖情况 ,连续 7d,观察补肾健骨汤提取液及载药血清对成骨细胞增殖的影响 ;以酶免法测定培养第 5天细胞内骨钙素的含量。结果 补肾健骨汤提取液及载药血清对体外培养的成骨细胞增殖均有显著的促进作用 ,其中提取液的作用在 0～ 10 0 μg/ m L浓度范围内呈剂量依赖性 ;提取液与载药血清均提高细胞内碱性磷酸酶和骨钙素含量 ,与空白对照组比较均有显著差异 (P<0 .0 5 )。结论 补肾健骨汤体外对成骨细胞的增殖及碱性磷酸酶。

淫羊藿含药血清对成骨细胞增殖与分化影响的实验研究进展

近年,含药血清试验已成为研究中药淫羊藿对成骨细胞作用的热点。笔者回顾了淫羊藿含药血清对成骨细胞增值与分化影响的相关实验研究的文献,从淫羊藿含药血清试验、成骨细胞体外培养、淫羊藿含药血清对成骨细胞作用机理等方面进行分析,进一步探讨淫羊藿对成骨细胞功能产生影响的有效部位、活性成分和作用机制,为中药淫羊藿防治骨质疏松奠定基础。

抗骨松丹杞颗粒含药血清对成骨-破骨细胞共培养体系中破骨细胞功能的影响

目的:观察补肾方抗骨松丹杞颗粒含药血清在成骨-破骨细胞共同培养体系中对大鼠破骨细胞(OC)骨吸收功能的影响。方法:取1 d龄SD大鼠的胎鼠颅骨与四肢骨分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞,建立细胞上清相通但细胞间不相互混杂的平面式成骨-破骨细胞共育体系,实验分为不同浓度(低、中、高)的补肾方含药血清组和对照组进行比较,用重氮盐法检测抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和光镜观察骨陷窝数。结果:25%的补肾方含药血清组在48 h、72 h、96 h成骨-破骨细胞共育体系中OC分泌TRAP的活性明显降低于对照组;25%的补肾方含药血清组在48 h、72 h、120 h所形成骨吸收陷窝的数目明显低于对照组(P<0.01)。结论:补肾方抗骨松丹杞颗粒含药血清在共育体系中能够抑制OC活性。

含骨松宝的老龄大鼠血清对兔成骨细胞增殖作用的实验研究

目的 :观察骨松宝对体外培养成骨细胞增殖和代谢的影响。方法 :给 18月龄老年大鼠灌胃骨松宝 1 5 g/kg体重 ,每日 2次 ,连续 3天 ,末次灌胃后 1h取血分离血清 ,用D890 0培养基分别配成含药鼠血清7 5 %和 15 %的培养基 ,并用于培养成骨细胞 2 4h ,同时以加有 7 5 %和 15 %未用药老龄大鼠血清的D890 0培养基、含 2 0 μmol/L氟化钠 (NaF)的D890 0无血清培养基及D890 0无血清培养基作对照 ,用MTT法检测细胞增殖 ,并测定培养基上清液中Ca2 + 浓度及碱性磷酸酶 (ALP)的含量变化。结果 :与加有相同浓度鼠血清的D890 0培养基组、D890 0培养基加NaF组和D890 0培养基组比较 ,含药鼠血清组的成骨细胞增殖明显 ,差异有显著性 (P <0 0 1) ,培养基中的Ca2 + 消耗量明显增加 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,ALP浓度明显升高 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论 :骨松宝能促进成骨细胞DNA合成和提高对Ca2 + 的利用 ,促进成骨细胞的生长增殖。

淫羊藿苷含药血清对体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖与分化的影响

目的研究淫羊藿苷含药血清（Serum of rat sadministered icariin,SI）对体外培养大鼠颅骨成骨细胞（Rat calvarial osteoblasts,ROB）增殖和分化成熟的影响。方法以每1kg体重0.25g淫羊藿苷的剂量灌服成年大鼠制得淫羊藿苷含药血清,以灌服等体积生理盐水制得对照血清。分别以2.5%,5%和10%3种浓度加入ROB培养基,检测对成骨细胞增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性和钙化结节数等的影响。结果2.5%和5%SI均促进细胞的增殖,尤以5%浓度更为明显,该浓度含药血清提高ROB的ALP活性,增加Ⅰ型胶原表达,并显著提高钙化结节形成数量。结论淫羊藿经口服后的代谢产物可刺激成骨细胞增殖,促进其分化成熟,是淫羊藿抗骨质疏松的有效成分。

甘肃产华中五味子对成骨细胞成骨能力的影响

目的探讨甘肃产华中五味子对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法采用血清药理学方法,对体外培养的大鼠成骨细胞以MTT法进行细胞增殖测定、以PNPP法测定碱性磷酸酶(ALP)活性、以茜素红染色进行矿化结节计数。结果培养48h的10%、15%和培养72h的5%、10%华中五味子75%醇提取物血清组的细胞增殖速度较对照组快(P<0.05或P<0.01);培养48h的10%、15%和培养72h的10%华中五味子75%醇提取物血清组的ALP活性较对照组增加(P<0.05);培养2周的矿化结节计数显示,10%华中五味子75%醇提取物血清组多于对照组(P<0.01)。结论甘肃产华中五味子75%醇提取物对体外大鼠成骨细胞的增殖和分化具有促进作用。

红曲有效成分对体外培养成骨细胞增殖分化及矿化功能的影响

[目的]通过红曲有效成分对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能影响的研究,对有效成分抗骨质疏松症的作用机理进行初步探讨。[方法]取成年SD大鼠40只,随机分为空白组、倍美力组、-αD3组、红曲有效成分组4组,每组10只,分别予以生理盐水、倍美力水溶液、-αD3水溶液及红曲有效成分水溶液灌胃,10d后,制备含药血清;将从出生24h内的新生大鼠颅骨取材的成骨细胞培养于上述含药血清培养基中,应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、BMP-2免疫组化染色及茜素红染色方法观察红曲有效成分对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶表达、BMP-2表达及矿化结节形成的影响。[结果]红曲有效成分组的成骨细胞数量、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成明显增加,而且发现BMP-2阳性率高于空白组。[结论]红曲有效成分能治疗骨质疏松症,其机制可能是通过促进成骨细胞增殖、分化、矿化及BMP-2表达来实现的。