RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2在胃癌患者中的表达及对预后和生存时间的影响

目的:探讨RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、成髓细胞瘤转录因子第2亚型(MYBL2)在胃癌患者中的表达及对预后和生存时间的影响。方法:选取2017年1月至2019年1月于本院就诊的134例胃癌患者术后癌组织标本作为研究对象,另选取其中62例胃癌患者相应的癌旁组织标本及40例同期非胃癌患者正常胃黏膜组织标本进行对照,检测癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织中RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2的表达情况,分析其对胃癌预后及生存时间的影响。结果:RhoA,CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2在癌组织中的阳性率均明显高于癌旁组织和正常胃黏膜组织(P<0.05)。胃癌患者术后平均生存时间为(28.61±1.34)个月,其中RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2阳性患者的生存时间均短于阴性患者(P<0.05)。RhoA(+)、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞(+)、MYBL2(+)是胃癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论:检测RhoA,CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2的表达可作为胃癌病情严重程度、预后及生存时间评估的重要补充手段。

浆细胞性乳腺炎患者外周血CD4^+CD25^+CD127^-调节性T细胞变化

目的:观察浆细胞性乳腺炎(Plasma cell mastitis,PCM)患者外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞(CD4+CD25+CD127-Treg)数量和功能变化,以探讨PCM免疫病理机制。方法:将58例浆细胞乳腺炎患者分成三组:其中急性组13例(22%)、亚急性组25例(43%)和慢性组20例(34%)。并设正常对照组20例及乳腺癌对照组16例。以流式细胞术检测各型PCM患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg细胞百分率;实时荧光定量RT-PCR检测转录因子Foxp3表达及ELISA检测TGF-β水平。结果:三组PCM组与正常组相比,外周血CD4+CD25+CD127-Treg数量,外周血PBMC中Foxp3表达及血浆TGF-β水平均下降(P<0.05),其中急性PCM组下降最为明显(P<0.01),乳腺癌组三项指标均升高(P<0.05)。结论:浆细胞性乳腺炎患者的CD4+CD25+CD127-Treg数量及功能有所下降。

卵巢癌患者外周血CD4^＋ CD25^＋ CD127^-调节性T细胞的检测及其临床意义

目的探讨卵巢癌患者外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞数量的变化。方法采集30例卵巢癌患者和10例健康人的外周抗凝血,应用CD4(PE-CY5),CD25(FITC),CD127(PE)等特异性荧光抗体标记后,通过流式细胞仪对CD4+CD25+CD127-调节性T细胞进行三色荧光抗体检测。结果卵巢癌患者的外周血中CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的百分比明显高于正常人(P<0.05),其中卵巢癌患者外周血调节性T细胞的比例高达4.39%±1.36%,而正常人仅为0.77%±0.09%。结论CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的比例增加可能引起卵巢癌免疫逃逸,并可能在卵巢癌的发生发展中起了重要作用。

慢性丙型肝炎患者中CD4^+CD25^+CD127^-调节性T细胞的表达及意义

目的探讨CD4^+CD25^+CD127^-调节性T细胞在慢性丙型肝炎(HCV)患者中的表达及其临床意义。方法收集HCV患者67例,并根据是否吸毒分为吸毒丙肝组35例和非吸毒丙肝组32例;健康体检人员32例作为对照。采用流式细胞仪检测患者外周血中CD^4+CD25^+CD127^-调节性T细胞的表达;应用实时荧光定量PCR的方法检测其HCV RNA含量。结果慢性HCV患者中的吸毒感染组与非吸毒感染组的外周血中CD4+CD25+CD127-调节性T细胞在CD4+T细胞中所占比率分别为:3.84±1.95%、4.44±1.67%,明显低于对照组6.10±1.65%(P<0.01);而吸毒组与非吸毒组慢性HCV患者血液CD4^+CD25^+CD127^-调节性T细胞的表达值相比差异无统计学意义;HCV患者抗病毒治疗前血液CD4^+CD25^+CD127^-调节性T细胞的表达值明显低于治疗后和正常对照组(P<0.01)。结论 HCV患者治疗前患者外周血CD4^+CD25^+CD127^-调节性T细胞的表达值较正常对照组明显降低,而在治疗有效后升高,说明CD4^+CD25^+CD127^-调节性T细胞参与了HCV患者的机体免疫过程,而CD4^+CD25^+CD127^-调节性T细胞在外周血中的表达水平可能成为监测HCV患者体内细胞免疫状态和机体抗病毒免疫应答的指标。

外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平对早期宫颈癌患者腹腔镜根治术后预后的预测价值

目的分析外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平对早期宫颈癌(CC)患者腹腔镜根治术后预后的预测价值。方法招募2018年9月至2020年9月于儋州市人民医院接受腹腔镜根治术治疗的早期CC患者204例,根据患者术后随访期间预后情况分为预后不良组(43例)和预后良好组(161例)。比较两组临床资料。采用Spearman秩相关分析外周血CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞水平与CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平的相关性。采用多因素logistic回归分析早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平对早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良的预测价值。结果预后不良组CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)水平,术后切缘阳性占比以及术中宫旁浸润占比高于预后良好组,CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman秩相关分析结果显示,早期CC患者外周血CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞水平与CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平呈负相关(r_(s)=-0.478,P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,较高的CEA、CA125、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞水平是促进早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良发生的独立危险因素(P<0.05),较高的CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平是抑制早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良发生的独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平能有效预测早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良(P<0.05),两项指标联合可进一步提高预测效能[AUC(95%CI)=0.939(0.898~0.979),P<0.001],灵敏度和特异度分别为86.00%、88.20%。结论外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平与早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良有关,二者能有效预测早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良。

中国健康人外周血中具有CD4^+CD25^(nt/hi)CD127^(lo)特征的调节性T细胞频率

目的:初步确定健康人外周血中具有CD4+CD25nt/hiCD127lo特征的调节性T细胞(Treg)频率,为临床相关疾病的研究及Treg的分选提供参考。方法:采集312名8~60岁(5个年龄组)、不同性别健康人的静脉血,经三重免疫荧光染色,用流式细胞术分析CD4+CD25nt/hiCD127loTreg细胞频率,并观察细胞内Foxp3转录因子的表达。结果:健康人CD4+CD25nt/hiCD127loTreg细胞在外周血中约占CD4+T细胞的(6.55±0.11)%,各年龄组之间有差异(P=0.015),组内性别之间也存在统计学意义(P<0.05);CD25nt/hiCD127lo细胞特异性地表达Foxp3转录因子。结论:初步确定了中国健康人外周血中具有CD4+CD25nt/hiCD127lo表达特征的细胞频率,为Treg细胞的临床研究奠定了基础;CD25nt/hiCD127lo作为CD4+CD25+Treg细胞表面的特征性标志,可在分选时排除其他细胞干扰,获得较完整的Treg细胞。

CD4^+CD25^+CD127^(low/-)调节性T细胞在寻常型银屑病发病机制中的作用

目的:探讨CD4^+CD25^+CD127^(low/-)调节性T细胞(Treg)在寻常型银屑病(PV)发病机制中的作用。方法:利用流式细胞仪检测外周血Treg细胞的数量;MTT法检测Treg细胞对自身CD4^+CD25-T细胞增殖的抑制作用;采用酶联免疫吸附试验法检测血清中白介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量。结果:PV患者外周血Treg细胞数量与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05),但对自身CD4^+CD25-T细胞增殖的抑制百分率降低(P<0.01);PV患者血清IL-10含量较正常对照组低(P<0.01),血清TGF-β1的含量较正常对照组高(P<0.01)。结论:PV患者Treg细胞的功能缺陷及分泌IL-10的降低可能参与PV的发病机制。

外周血CD4^+CD25^+CD127^(low)调节性T细胞在恶性肿瘤患者免疫功能评估中的作用

目的观察恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+CD127low调节性T细胞(CD4+CD25+CD127lowTreg)的数量变化,探讨外周血CD4+CD25+CD127lowTreg检测在恶性肿瘤患者免疫功能评估中的作用。方法以35例正常人作为对照组,采用流式细胞术检测74例肿瘤患者外周血CD4+CD25+CD127lowTreg在CD4+T细胞的比例,分析不同TNM分期恶性肿瘤患者外周血中CD4+CD25+CD127lowTreg占CD4+T细胞的百分比,采用实时荧光定量RT-PCR技术检测PBMC转录因子Foxp3表达水平。结果肿瘤患者外周血中CD4+CD25+CD127low Treg占CD4+T细胞百分比为(6.19±1.82)%,明显高于对照组(3.12±1.16)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。其中Ⅲ、Ⅳ期患者外周血CD4+CD25+CD127lowTreg百分比分别为(6.08±2.14)%、(6.88±2.65)%,明显高于Ⅰ-Ⅱ期患者(5.65±1.86)%,P<0.05;病理分型为低分化者CD4+CD25+CD127lowTreg百分比为(6.72±2.60)%,明显高于高分化者(5.94±2.11)%,P<0.05;有淋巴结转移者CD4+CD25+CD127lowTreg百分比为(6.95±3.12)%,明显高于无淋巴结转移者(5.02±2.09)%,P<0.05。结论恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+CD127lowTreg占CD4+T细胞的比例明显升高,监测CD4+CD25+CD127lowTreg有利于评估肿瘤患者的免疫功能和辅助判断肿瘤患者的病情进展及预后。

CD4^+CD25^+调节性T细胞的发育与胸腺CD4^-CD25^+细胞关联性的探讨

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+regulatoryTcells,CD4+CD25+Tr)的发育及其与胸腺CD4-CD25+细胞的关系。方法:以流式细胞术检测小鼠从出生至发育成熟过程中,胸腺、脾脏、淋巴结和外周血中CD4+CD25+Tr比例变化,以及胸腺CD4-CD25+细胞比例变化;通过磁激活细胞分选(MACS)从小鼠淋巴结纯化CD4+CD25+T和CD4+CD25-T细胞,经CFDA-SE标记,以多种刺激形式诱导增殖。结果:小鼠出生1d到10周的发育过程中,胸腺CD4+CD25+Tr比例一直比较恒定,但在脾脏、淋巴结和外周血,随鼠龄增加而不断升高,从1d龄到1周时升高最迅速,其后的升高速度逐渐减慢,10周龄时达平台期。胸腺中CD4-CD25+细胞在出生1d的小鼠比例非常高,1d龄到1周龄期间迅速下降,10周龄时达平台期。ConA不能诱导CD4+CD25+Tr和CD4+CD25-T细胞增殖,但CD4+CD25+Tr出现一过性细胞增大;佛波醇酯加离子霉素能诱导CD4+CD25+Tr和CD4+CD25-T细胞增殖;包被的抗CD3抗体加可溶性抗CD28抗体能刺激CD4+CD25-T细胞增殖,但CD4+CD25+Tr不增殖,加入高浓度IL-2,CD4+CD25-T细胞增殖更强,CD4+CD25+Tr出现增殖。结论:胸腺CD4-CD25+细胞很有可能是CD4+CD25+Tr的前体。

新风胶囊对类风湿关节炎活动期伴贫血患者外周血CD4^+CD25^+CD127^(lo)调节性T细胞的影响

目的:探讨类风湿关节炎(RA)活动期伴贫血患者外周血CD4+CD25+CD127lo调节性T细胞(Treg)的变化及新风胶囊对其的影响。方法:40例RA活动期伴贫血的患者按随机数字表法分为新风胶囊组(XFC)和正清风痛宁组各20例,均1月1疗程,1疗程后观察疗效;同时设健康志愿者正常对照组20例。采用流式细胞仪检测三组外周血中CD4+CD25+CD127loTreg的数量及其在CD4+T淋巴细胞中所占的比例,并研究其与临床症状积分、疾病活动度指标(DAS28分值)、实验室指标之间的关系。结果:①与正常对照组相比,RA活动期伴贫血患者外周血CD4+CD25+CD127loTreg数量明显下降(P<0.01),活动期伴贫血患者及正常对照组外周血CD4+CD25+CD127loTreg占CD4+T淋巴细胞的百分比分别为(2.75±1.01)%和(4.18±0.89)%,前者明显低于后者(P<0.01)。②RA活动期伴贫血患者CD4+CD25+CD127loTreg表达水平与临床症状积分、DAS28评分、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、血小板(PLT)呈负相关(P<0.05),与血红蛋白(HGB)、血清铁(SI)及补体C3、C4呈正相关(P<0.05),而与类风湿因子(RF)、红细胞(RBC)、血清铁蛋白(SF)、转铁蛋白(TF)无明显相关性(P>0.05)。③两治疗组相比,XFC组在总有效率及改善关节症状及部分实验室指标方面与正清风痛宁组相似(P>0.05),但在上调CD4+CD25+CD127loTreg表达水平、降低DAS28分值及升高HGB、降低PLT数量方面显著优于正清风痛宁组(P<0.05)。结论:RA活动期伴贫血患者外周血中CD4+CD25+CD127loTreg表达水平低,并且与疾病活动度及贫血相关指标密切相关,提示该细胞参与了RA的发病和疾病的活动,同时也可能为RA引起贫血的原因之一,XFC可上调CD4+CD25+CD127loTreg表达水平,升高HGB、降低PLT数量,改善RA患者临床症状、改善贫血,可能为XFC治疗机制的重要方面。

半乳凝素-10在CD4^+ CD25^+ CD127^(low/-)调节性T细胞中的表达与意义

目的探讨半乳凝素-10(galectin-10)在CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)中的表达及其与Foxp3的相关性。方法通过流式细胞术分选健康人外周血和胃癌患者癌旁淋巴结中Treg细胞与CD4+CD25-CD127+T细胞,经微量抽提RNA后,用RT-PCR检测galectin-10和Foxp3的mRNA表达水平。结果galectin-10和Foxp3的mRNA显著表达于Treg细胞,几乎不表达于CD4+CD25-CD127+T细胞。健康人外周血和胃癌患者癌旁淋巴结中的结果一致。结论ga-lectin-10基因高表达于Treg细胞中,可以作为Treg细胞一项新的标志物。

首发抑郁症患者外周血CD4^+CD25^+CD127^-调节性T细胞的研究

目的探讨首发抑郁症患者治疗前后外周血中CD4^+CD25^+CD127^-占CD4^+的比例及Treg细胞与抗抑郁治疗的相关性。方法纳入在大庆市第三医院住院治疗的首发抑郁症患者共20例,均符合《精神障碍诊断与统计手册(第5版)》(DSM-5)关于抑郁障碍的诊断标准,汉密尔顿抑郁量表17项版(HAMD-17)总评分>20分;同期纳入在大庆市第三医院体检中心的健康成人作为对照组,共20例。对抑郁症患者治疗前及治疗12周后分别进行HAMD-17评定。对抑郁症患者治疗前、治疗12周后及健康对照组分别采取其外周血,利用流式细胞术(FCM)测定外周血CD4^+CD25^+CD127^-占淋巴细胞的百分比及CD4^+CD25^+CD127^-占CD4^+T细胞的百分比,并作对照分析。结果在CD4^+CD25^+CD127^-/CD4^+的水平上,抑郁症患者治疗前、治疗后均高于健康对照组,差异均有统计学意义(P均<0.01);抑郁症患者HAMD-17评分及血清CD4^+CD25^+CD127-/CD4^+的水平均下降,差异均有统计学意义(P均<0.05),且抑郁症显效组CD4^+CD25^+CD127^-/CD4^+的变化率与HAMD-17评分减分率呈正相关(r=0.716,P<0.05)。结论抑郁症患者经SSRIs类药物治疗后,外周血CD4^+CD25^+CD127^-/CD4^+水平的降低预示抗抑郁疗效较好,有效的抗抑郁治疗可能与调节T细胞有一定的相关性。

急性心肌梗死患者不同时期外周血LXA4与CD4^+CD25^+CD127^-调节性T细胞水平及相关性研究

目的通过检测急性心肌梗死患者不同时期外周血脂氧素A4(LXA4)与CD4+CD25+CD127-调节性T细胞(Treg)水平,研究LXA4在急性心肌梗死患者中的作用及机制,探讨其在此类疾病发病及预后中的作用。方法采用流式细胞分析法和酶联免疫吸附法(ELISA),检测58例急性心肌梗死患者(AMI组)及30名健康体检者(对照组)入院及48 h后外周血LXA4、CD4+CD25+CD127-Treg细胞水平,并进行相关性分析。结果 AMI患者入院时外周血CD4+CD25+CD127-Treg细胞占CD4+CD25+T细胞的百分率显著低于入院48 h及对照组(P<0.05或P<0.01);AMI患者入院48 h后的外周血CD4+CD25+CD127-Treg细胞占CD4+CD25+T细胞的百分率显著高于对照组(P<0.01)。AMI患者入院时血浆LXA4水平显著高于48 h后及对照组(P<0.01或P<0.05);AMI患者入院48 h后血浆LXA4水平显著高于对照组(P<0.01);AMI患者血浆LXA4水平与CD4+CD25+CD127-Treg细胞百分率呈显著负相关(r=-0.738,P=0.002)。结论 CD4+CD25+CD127-Treg细胞及LXA4均在急性心肌梗死的发生发展中起到了重要的免疫调节作用,在心肌细胞缺血再灌注损伤中起到了保护细胞的作用。

CD4^+CD25^+CD127^-调节性T细胞在小儿EB病毒相关噬血细胞综合征发病作用中的研究

目的:观察EB病毒(EBV)相关噬血细胞淋巴组织细胞增生症(EBV-HLH)患儿外周血CD4^+CD25^+CD127^-调节性T细胞(CD4^+CD25^+CD127^-Treg)亚群的含量,对比EBV-HLH患儿与同期来院体检的健康儿童的不同,了解EBV-HLH患儿的免疫状态,以探讨CD4^+CD25^+CD127^-Treg细胞在小儿EBV-HLH免疫中的意义。方法:建立流式细胞术检测外周血CD4^+CD25^+CD127^-Treg细胞的含量,检测30例EBV-HLH初诊患儿及30例同期来院体检的健康儿童的外周血CD4^+CD25^+Treg细胞数量。结果:EBV-HLH初诊组与正常对照组外周血CD4^+CD25^+CD127^-占CD4^+T细胞的比例分别为(3.65±1.12)%和(6.90±1.16)%,EBV-HLH初诊患儿组低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:EBV相关HLH患儿外周血中CD4^+CD25^+CD127^-Treg数量减低,表明EBV-HLH患儿免疫功能处于失衡状态。Treg细胞可能在EBV相关HLH的发生、发展中起一定作用,参与细胞免疫的调节可能是Treg细胞在EBV相关HLH免疫中的一个环节。

γ-干扰素诱导人外周血CD4^+CD25^-T细胞转化为CD4^+CD25^+调节性T细胞的可行性研究

目的研究γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)将人外周血CD4^+CD25^- T细胞诱导为CD4^+CD25^+调节性T细胞(CD4^+CD25^+Tregs)的可行性。方法采用免疫磁珠法分离19名健康志愿者外周血单个核细胞中的CD4^+CD25^- T细胞,在抗CD3和抗CD28抗体存在条件下给予不同水平IFN-γ刺激72 h,以流式细胞仪检测CD4^+CD25^+T细胞比例并以real time-PCR法检测其特异性表型标志FoxP3表达水平。将诱导生成的CD4^+CD25^+T细胞与自体CD4^+CD25^-T细胞共培养检测诱导生成的CD4^+CD25^+T细胞抑制CD4^+CD25^-T细胞增殖的能力。结果IFN-γ刺激后CD4^+CD25^+T细胞比例上调且其FoxP3表达较诱导前明显增高,当IFN-γ水平为20、40 ng/mL时,CD4^+CD25^+T细胞上调比例最高;40 ng/mL IFN-γ诱导的CD4^+CD25^+T细胞FoxP3表达最高,但不及CD4^+CD25^+Tregs。IFN-γ诱导所得CD4^+CD25^+T细胞可抑制自体CD4^+CD25^-T细胞增殖,40 ng/mL IFN-γ诱导的CD4^+CD25^+T细胞抑制能力与CD4^+CD25^+Tregs相当。结论 IFN-γ可诱导CD4^+CD25^-T细胞转化为CD4^+CD25^+T细胞,当IFN-γ水平为40 ng/mL时诱导率最高且诱导生成的CD4^+CD25^+T细胞表型和功能与CD4^+CD25^+Tregs相当。

肺癌患者CD4^+ CD25^(high) Foxp3^+调节性T细胞的格局变化及意义

目的:研究肺癌患者外周血(PBMC)及肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中CD4+CD25h ighFoxp3+调节性T细胞(Treg)的比例改变,探讨其在抗肿瘤免疫中的调节作用。方法:分离肺癌患者PBMC及TIL,FACS分析CD4+/CD8+T细胞的比值及CD4+CD25h ighT细胞占CD4+T细胞的比例。Real-tim e PCR检测Treg特异性转录因子Foxp3基因在PBMC及TIL中的表达。结果:肺癌患者PBMC及TIL中CD4+/CD8+比值降低;而CD4+CD25h ighT细胞在CD4+T细胞中所占比例升高;Foxp3基因仅在TIL中高表达,而在PBMC中低或不表达,表明肿瘤局部的CD4+CD25h ighT细胞主要是CD4+CD25h ighFoxp3+Treg。结合临床资料分析显示Treg在肺腺癌比例较高。结论:CD4+CD25h ighFoxp3+Treg在肺癌患者肿瘤浸润淋巴细胞中明显升高,可能与其通过细胞与细胞间接触抑制CD8+T细胞的杀伤效应,最终发挥免疫抑制效应相关。

糖皮质激素对哮喘小鼠CD4^+CD25^+调节性T细胞的作用

目的建立哮喘小鼠动物模型并给予吸入糖皮质激素治疗,通过分析CD4+CD25+调节性T细胞及相关细胞因子在哮喘发病中的变化情况,以及观察糖皮质激素治疗对该细胞的影响和干预作用,探讨哮喘发作的新的免疫机制。方法分别制备哮喘组(OVA),哮喘吸入激素治疗组(OVA/GC)及对照组(NS)动物模型。所有小鼠于末次激发后24 h,取右肺中叶标本作病理切片,观察炎症改变;同时收集外周抗凝血及肺组织细胞悬液,通过流式细胞仪及酶联免疫吸附试验(ELISA)测定CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比和血浆中IL-10和TGF-β1水平。结果①哮喘小鼠外周血及肺组织细胞悬液中CD4+CD25+调节性T细胞百分率明显降低(P<0.01),吸入糖皮质激素治疗后CD4+CD25+调节性T细胞百分率明显升高(P<0.01)。②IL-10在哮喘组较对照组明显降低(P<0.01),糖皮质激素治疗组IL-10明显升高(P<0.01)。③TGF-β1在哮喘小鼠较对照组明显降低(P<0.01),吸入糖皮质激素治疗后TGF-β1有所升高,但差异无显著性。结论①哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10,TGF-β1数量和分泌水平降低,尤其是肺部CD4+CD25+调节性T细胞不能有效聚集,导致全身和局部对炎症反应的抑制作用减弱,可能是导致哮喘发生的原因之一。②糖皮质激素可通过增加CD4+CD25+调节性T细胞及IL-10数量和分泌水平,增强其免疫抑制功能而发挥治疗作用。③外周血和肺部CD4+CD25+调节性T细胞百分率变化具有一致性,监测外周血CD4+CD25+调节性T细胞变化情况可以了解肺部变化趋势。

骨髓间充质干细胞在CD4^+CD25^+调节性T细胞减轻大鼠移植物抗宿主反应中的作用

本研究探讨间充质干细胞(MSC)对GVHD的作用及其机制。建立大鼠同种异体骨髓移植模型,同时输入供者的T淋巴细胞诱导出移植物抗宿主反应,联合或不联合移植供体来源的MSC,观察受鼠的GVHD的发生情况;利用双荧光标记抗体标记受鼠脾脏和胸腺单个淋巴细胞,通过流式细胞术分析CD4+CD25+调节性T细胞亚群比例的变化,分析MSC的作用机制。结果显示实验组的GVHD的发生程度减轻,存活率提高,而CD4/CD8比值在GVHD组出现不同程度的减少,CD4+CD25+调节性T细胞在实验组中的脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞的比例分别为31.55±7.58%、93.20±2.69%,在GVHD组中的比例分别为20.90±1.90%、57.17±6.79%,实验组中CD4+CD25+调节性T细胞比例比GVHD组中增多,具有显著性差异。结论MSC能有效抑制HSC移植后致死性GVHD的发生,提高生存率,同时MSC可能通过作用于体内调节性T淋巴细胞而间接发挥了抑制GVHD的作用。

标本放置时间及年龄对CD4^+CD25^+调节性T细胞的影响

目的探讨标本放置时间及年龄对外周血CD4+CD25+调节性T细胞的影响,明确标本可放置的时间界限,建立不同年龄段的正常参考值范围。方法以171例不同年龄健康人的外周血为标本,采用双色直接荧光素标记法和多参数流式细胞术检测和分析。结果10份标本均分别在室温下放置0、1、2、3、4、5和6h检测时,CD4+CD25+Treg及CD4+CD25highT细胞分别为(12.00±1.12)%、(11.56±1.19)%、(10.72±1.29)%、(10.29±1.57)%、(8.11±1.28)%、(7.97±1.07)%、(7.70±0.93)%及(1.41±0.26)%、(1.45±0.26)%、(1.32±0.26)%、(1.27±0.28)%、(1.09±0.24)%、(0.95±0.18)%、(0.91±0.21)%。4~6岁组(n=34)、7~14岁组(n=24)、20~59岁组(n=95)、60岁以上组(n=18)健康人群CD4+CD25+Treg参考值分别是(6.55±1.28)%、(9.41±2.08)%、(11.67±2.14)%和(9.73±2.79)%,CD4+CD25high分别是(0.92±0.30)%、(1.21±0.45)%、(1.44±0.52)%及(1.51±0.55)%。结论外周血CD4+CD25+Treg和CD4+CD25highT细胞的检测结果随标本放置时间延长呈逐渐降低趋势,因此为真实反映体内CD4+CD25+Treg水平,标本放置时间应限制在3h以内。不同年龄段健康人群外周血中的CD4+CD25+Treg和CD4+CD25highT数值有明显差异,在探讨各种免疫相关性疾病与CD4+CD25+Treg之间的关系时,应该以与其年龄段相匹配的正常参考值为依据。

急性冠脉综合征患者外周血中CD4^+ CD25^+调节性T细胞的检测及意义

目的探讨急性冠脉综合征(ACS)患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的异常与疾病的关系。方法28例ACS患者(ACS组)2、6例稳定性心绞痛(SAP)患者(SAP组)和30例正常人(对照组)作为入选对象,均采用流式细胞术检测各组外周血中Treg表达百分比,并检测各组Treg的功能状态,ELISA法检测循环及上清液中细胞因子TNF-α和IL-10浓度,常规检测循环CRP及血脂水平。结果外周血中Treg表达百分比水平及功能ACS组显著低于SAP组(P<0.05)和对照组(P<0.05),CRP、TNF-α的水平ACS组显著高于SAP组(P<0.05)和对照组(P<0.05),ACS组IL-10的水平显著低于SAP组(P<0.05)和对照组(P<0.05)。结论ACS患者外周血中Treg比例减少及功能的降低可能破坏了外周免疫耐受的平衡,参与炎症反应激活致动脉粥样硬化发生发展这一病理过程。