循环CD4^(+)CD45RA^(+)CD62L^(+)T细胞与接受EGFR-TKI治疗的转移性非小细胞肺癌预后相关

目的探索外周血循环淋巴细胞的基线水平及动态变化与接受表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗的EGFR突变阳性的转移性非小细胞肺癌患者预后之间的相关性。方法设计一个回顾性队列,包括在北京协和医院接受EGFR-TKI治疗的40例非小细胞肺癌患者。在EGFR-TKI治疗期间,使用流式细胞仪测量术收集外周血循环淋巴细胞亚群进行动态监测,并通过电话随访每位患者的生存情况,分别比较基线以及治疗1月后外周血循环淋巴细胞亚群与无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)的关系。结果在接受EGFR-TKI治疗的患者中,更高的基线循环CD4^(+)CD45RA^(+)CD62L^(+)T细胞计数与更高的肿瘤治疗应答相关(P<0.001)。整个人群的PFS为27.1个月,而OS未达到。然而,基线CD4^(+)CD45RA^(+)CD62L^(+)T细胞计数与中位PFS无相关性。此外,在EGFR-TKI治疗期间,CD4^(+)CD45RA^(+)CD62L^(+)T细胞计数稳定或升高的患者的PFS明显长于CD4^(+)CD45RA^(+)CD62L^(+)T细胞计数降低的患者(29.1个月对比9.4个月;P<0.001)。结论更高的基线循环CD4^(+)CD45RA^(+)CD62L^(+)T细胞计数与更好的EGFR-TKI治疗应答相关,CD4^(+)CD45RA^(+)CD62L^(+)T细胞计数的动态变化与PFS延长有关。

人CD4^+CD25^-CD45RA^+T细胞和CD4^+CD25^-T细胞诱导获得iTreg细胞的方法学研究

目的:分析比较CD4^+CD25 ^-CD45RA^+T细胞和CD4^+CD25^-T细胞在普通/炎性(加入IL-1β和IL-6)条件下,由TGF-β、IL-2和CD3/CD28磁珠共刺激诱导生成iTreg细胞的效率,并对比各组iTreg细胞相关蛋白和细胞因子表达水平变化及其免疫抑制能力的差异。方法:通过Ficoll细胞分离液分离出淋巴细胞,利用MACS分选机,结合CD4阴选磁珠筛出CD4阳性的T细胞,最后再提取其中CD45RA ^+和CD25 ^-T细胞。体外实验中,在普通/炎性条件下诱导iTreg生成,3、6 d通过流式观察各组iTreg细胞的诱导情况及相关分子的表达变化趋势。体内实验分为:CD4 +CD25^-CD45RA ^+T细胞诱导的iTreg组、CD4^+CD25 ^-T细胞诱导的iTreg组和空白对照组,通过观察iTreg对GVHD小鼠模型的免疫调节,分析其免疫抑制能力的差异。结果: CD4^+CD25 -CD45RA +T细胞组和CD4 +CD25 -T细胞组普通条件下iTreg产率分别为(96.00±0.21)%和(60.23±0.50)%,炎性环境下为(81.97±1.29)%和(56.80±0.43)%,前者都显著高于后者( P <0.001)。各组iTreg细胞中CTLA-4、TGF-β和IL-10的表达未见明显差异,而炎性因子IL-2、IL-17前者均低于后者( P <0.001),前者IFN-γ也低于后者( P <0.05)。体内实验表明iTreg均具有免疫调节能力,但CD4^+CD25 ^-CD45RA^+T细胞组诱导的iTreg能力强于后者。结论: CD4^+CD25 ^-CD45RA^+T细胞组和CD4^+CD25^-T细胞组都可以成功诱导iTreg细胞,但是前者在普通和炎性微环境下诱导效率高于后者,免疫调节能力也优于后者。

腔镜手术对直肠癌患者免疫平衡及CD_4^+CD_(45)RA^+T和CD_4^+CD_(45)RO^+T细胞的影响

目的探讨腔镜手术对直肠癌患者免疫平衡及CD4+CD45RA+T细胞和CD4+CD45RO+T细胞表达的影响。方法67例直肠癌患者中,33例拟进行腹腔镜手术,设为L组,34例拟进行开腹手术,设为O组。观察术前1 d、术后2 d、术后7 d患者Th1、Th2、CD4+CD45RA+T、CD4+CD45RO+T细胞表达水平。结果 L组患者术前和术后Th1、Th2、CD4+CD45RA+T、CD4+CD45RO+T细胞表达无显著差异(P>0.05)。O组术后2 d、术后7 d患者Th1细胞表达水平显著下降(P<0.01),Th2细胞表达显著升高(P<0.01);CD4+CD45RA+T细胞的表达显著升高(P<0.01),CD4+CD45RO+T细胞的表达显著降低(P<0.05)。结论腹腔镜手术较开腹手术对直肠癌患者的免疫平衡、CD4+CD45RA+T细胞和CD4+CD45RO+T细胞表达的影响小,对机体细胞免疫功能干扰较轻。

补肾益气扶正汤联合化疗对肾癌根治性切除术后外周血CD4^+CD45RA^+和CD4^+CD45RO^+T细胞的影响

目的观察补肾益气扶正汤联合化疗对肾癌根治性切除术后外周血CD4^+CD45RA^+和CD4^+CD45RO^+T细胞及不良反应发生情况的影响。方法将146例肾癌根治性切除术后患者随机分为2组,对照组73例给予化疗治疗,研究组73例给予补肾益气扶正汤联合化疗治疗,2组均持续治疗3个化疗疗程。记录2组治疗前后中医症状积分及KPS评分,检测2组治疗前后外周血CD4^+CD45RA^+和CD4^+CD45RO^+T细胞水平,统计2组治疗后临床疗效及治疗期间不良反应发生情况。结果治疗后,2组中医症状积分均较治疗前显著降低(P均<0.05),且研究组显著低于对照组(P<0.05);研究组临床治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05);2组CD4^+CD45RA^+T细胞均较治疗前显著降低(P均<0.05)、CD4^+CD45RO^+T细胞均较治疗前显著升高(P均<0.05),且研究组CD4^+CD45RA^+T细胞均显著低于对照组(P均<0.05)、CD4^+CD45RO^+T细胞均显著高于对照组(P均<0.05);2组KPS评分均较治疗前显著升高(P均<0.05),且研究组显著高于对照组(P<0.05)。治疗期间,研究组消化道反应、感冒样症状、神经系统症状以及白细胞降低发生率均显著低于对照组(P均<0.05)。结论补肾益气扶正汤联合化疗可明显减轻肾癌根治性切除术后患者症状体征,调节外周血CD4^+CD45RA^+和CD4^+CD45RO^+T细胞水平,减少不良反应,且疗效更好。

AHZ和PHN患者CD4^+CD45RO^+、CD4^+CD45RA^+T细胞的表达及其意义

目的探讨急性期带状疱疹和带状疱疹后遗神经痛患者外周血CD4^+CD45RO^+、CD4^+CD45RA^+T细胞的表达及其意义。方法收集带状疱疹患者47例(其中急性期带状疱疹患者35例,带状疱疹后遗神经痛患者12例)、健康对照者20例,采用流式细胞术检测研究对象外周血中CD4^+CD45RA^+、CD4^+CD45RO^+T细胞水平并进行比较。结果急性期带状疱疹患者CD4^+CD45RA^+T细胞水平明显低于带状疱疹后遗神经痛患者及健康对照者(P<0.05);急性期带状疱疹患者CD4^+CD45RO^+/CD4^+CD45RA^+比值均明显高于带状疱疹后遗神经痛患者及健康对照者(P<0.05)。结论CD4^+CD45RA^+T细胞的减少可能与急性期带状疱疹的发病相关。

CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞、CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞水平与ACS患者GRACE评分的关系

目的探讨CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞、CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞水平与急性冠状动脉综合征(ACS)患者全球急性冠状动脉事件注册(GRACE)评分之间的关系。方法选取2018年3月至2020年3月武警特色医学中心收治的212例ACS患者作为研究组,并以同期168例非冠心病检查者作为对照组,根据GRACE评分结果对ACS组患者病情进行分级,分为低危组(GRACE<109分,68例)、中危组(109分≤GRACE≤140分,62例)以及高危组(GRACE>140分,82例)。检测各组CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞、CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞水平。应用Pearson相关性分析CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞、CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞水平与ACS患者GRACE评分之间相关性,并应用受试者工作特征(ROC)曲线分析CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞、CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞水平诊断ACS患者的价值。结果研究组ACS患者生化检查指标总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、脑利钠肽前体(Pro-BNP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)以及CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞、CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞水平较对照组均明显升高,高密度脂蛋白水平(HDL)较对照组降低(P<0.05);且高、中、低危组3组ACS患者间生化指标和CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞、CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞水平差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,ACS患者的CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞水平、CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞水平均与GRACE评分呈正相关(r=0.644、0.518,P<0.05)。ROC曲线分析显示,CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞诊断高危ACS患者最佳截断值为0.129,曲线下面积为0.856(95%CI:0.790~0.910),灵敏度、特异度分别为79.27%、78.46%。CD4^(+)CD45RA^(+)T诊断诊断高危ACS患者最佳截断值为0.165,曲线下面积分别为0.837(95%CI:0.874~0.901),灵敏度、特异度分别为75.61%、80.77%。且低CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞组和低CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞组患者发生院内心脏不良事件发生率分别明显高于高CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞组和高CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞组(P<0.05)。结论ACS患者CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞、CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞水平均显著高于健康人群,且二者均与ACS患者GRACE评分呈正相关,并对预测高危ACS和患者预后情况具有较高诊断价值。

应用四色荧光分析技术测定造血干细胞移植后患者CD45RA^+细胞的变化

目的探讨流式细胞技术测定造血干细胞移植(HSCT)后患者外周血中初始T细胞CD45RA+的变化与临床意义。方法收集来自南方医院的49例造血干细胞移植病人的移植前、移植之后15、30、90和180 d不同时间点的90份肝素抗凝外周血标本。应用流式细胞技术测定外周血CD4+CD45RA+/CD8+CD45RA+细胞数的动态变化。结果在49名造血干细胞移植患者外周血标本中选择90份样本进行检测,移植后30 d,CD8+CD45RA+细胞即能恢复到正常水平,而CD4+CD45RA+细胞产量半年之内仍低于正常并持续缓慢增长。经HSCT患者的胸腺再生输出功能明显低于自体干细胞移植患者(P<0.01)。异体外周血干细胞移植患者的胸腺恢复能力显著比异体骨髓移植患者更快(P<0.05)。结论通过流式细胞仪检测患者外周血中CD4+CD45RA+/ CD8+CD45RA+细胞的变化,可以相对定量地检测患者的胸腺再生输出功能,并通过测量新生T细胞的合成来监视胸腺功能在免疫重建中的作用,为临床干细胞移植治疗提供有力的数据。

左金丸对结肠炎小鼠外周血CD45RA^+CD62L^+CCR7^+T细胞及其CD4^+、CD8^+亚群的影响

目的:探讨左金丸对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠结肠炎外周血中CD45RA+CD62L+CCR7+T细胞及其亚群的影响。方法:将40只雄性BALB/c小鼠随机平均分为正常组、模型组、左金丸组、美沙拉嗪组。除正常组外,其余各组均用3%DSS自由饮水7d诱导小鼠结肠炎,第8天开始予左金丸、美沙拉唑肠溶片治疗7d。观察小鼠一般情况及结肠病理损伤变化,采用流式细胞术测定外周血中CD45RA+CD62L+CCR7+T细胞及其CD4+、CD8+亚群水平,Western blotting检测结肠组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达水平并计算p-Akt/Akt值。结果:与模型组比较,左金丸组可有效改善DSS诱导结肠炎小鼠体质量、结肠长度、肠重指数和黏膜镜下评分(P<0.05,P<0.01),显著升高外周血中CD45RA+CD62L+CCR7+T细胞及其CD4+、CD8+亚群水平(P<0.01,P<0.05),同时伴见结肠组织中PI3K、p-Akt蛋白表达量显著降低(P<0.01,P<0.05)和p-Akt/Akt比值显著下降(P<0.01)。结论:左金丸可通过抑制PI3K/Akt信号活化调节CD45RA+CD62L+CCR7+T细胞及其CD4+、CD8+亚群水平而达到治疗DSS诱导小鼠结肠炎的目的。

AIDS患者HAART治疗免疫重建过程中检测CD4^+CD45RO^+/CD45RA^+CD127^+T细胞的意义及其相关免疫调节分析

目的探讨CD4^+CD45RO^+/CD45RA^+CD127^+T细胞在AIDS病程中的评价及其临床意义。方法采用流式细胞术检测经高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的AIDS的CD4^+以及CD8^+T细胞表面CD127分子的表达,以CD4^+T细胞绝对数分为三组:A组,<350个/mm^3;B组,350~800个/mm^3;C组,>800个/mm^3。同时用荧光定量PCR技术检测AIDS患者血浆中HIV(病毒载量小于50 copies/ml,病情稳定者),用流式细胞术检测上述患者外周血B淋巴细胞及自然杀伤细胞表面分子CD19、CD8/38和CD56的表达,比较组间差异。结果在经HAART有效的39例AIDS中,其CD4^+CD45 RO^+CD127^+T细胞数与患者CD4^+、CD4^+CD45 RA^+和CD4^+CD45RO^+细胞数呈显著正相关(相关系数分别为0.649、0.539和0.977,P<0.05);CD4^+CD45RA^+CD127^+与患者CD4^+、CD4^+CD45RO^+和CD4^+CD45RA^+有显著相关性(相关系数分别为0.550、0.497和0.992,p<0.05)。CD4^+CD45RA^+、CD4^+CD45RO^+、CD4^+CD45RA^+CD127^+和CD4^+CD45RO^+CD127^+标记CD19分子组间比较均有统计学差异(P<0.05)。结论在AIDS免疫重建过程中,CD4^+T细胞亚群在对抗病毒的复制起了主要作用,CD4^+CD45RO^+CD127^+T调节细胞群对于AIDS患者的免疫重建作用比较重要。

七氟烷吸入与丙泊酚静脉麻醉对结肠癌患者外周血CD_(45)RA^+/CD_(45)RO^+表达的影响

目的比较结肠癌手术中使用七氟烷吸入麻醉与丙泊酚静脉麻醉对患者外周血T淋巴细胞亚群CD45RA+/CD45RO+表达的影响。方法选择2010年1月至2014年6月根治性结肠癌切除术患者50例,随机分为七氟烷吸入麻醉组(A组,n=25)与丙泊酚静脉麻醉组(B组,n=25)。分别于入手术室吸氧后的基础值(T1)、手术结束时(T2)、术后2 h(T3)、术后24 h(T4)和术后72 h(T5)这5个时点抽取患者外周静脉血2 ml,采用流式细胞术直接免疫荧光标记技术测定CD45RA+T淋巴细胞、CD45RO+T淋巴细胞,计算CD45RA+/CD45RO+比值。用Western blot法检测PD-1蛋白的表达。结果与基础值相比,两组T2至T3时CD45RA+和CD45RO+逐渐降低,A组T4至T5时CD45RA+开始恢复,而CD45RO+活性仍降低,导致CD45RA+/CD45RO+比值升高。B组T4至T5时CD45RA+和CD45RO+均开始恢复,CD45RA+/CD45RO+比值于T5时恢复至基础值水平,与A组相比差异有统计学意义(P<0.05)。两组术后72 h T淋巴细胞内PD-1表达与术前比较均明显降低(P均<0.01)。结论七氟烷吸入与丙泊酚静脉麻醉均可用于结肠癌患者的手术治疗,但七氟烷对T淋巴细胞亚群CD45RO+有轻度抑制作用,丙泊酚静脉麻醉优势更明显。

静脉免疫球蛋白对新生儿脐带血淋巴细胞免疫抑制机制的研究

目的从脐带血单个核细胞(CBMC)和CD3+T淋巴细胞膜表面CD25、CD45RA、CD45RO分子表达的角度,探讨静脉免疫球蛋白(IVIG)对新生儿免疫功能的抑制机制。方法利用IVIG和植物血凝素(PHA)不同组合对CBMC或CD3+T淋巴细胞进行刺激培养,再利用四色免疫荧光抗体标记-流式细胞技术检测细胞表面CD25、CD45RA、CD45RO分子的表达情况。结果IVIG可以抑制PHA诱导的CBMC的活化,表现为CD25分子表达的明显抑制;并且随着CD25分子表达的抑制,CD4+细胞表面的CD45RO分子的表达也被抑制,阻止了CBMC中的CD4+CD45RA+细胞向CD4+CD45RO+细胞转换。IVIG也可以抑制PHA诱导的脐带血CD3+T淋巴细胞CD25分子和CD45RO分子的表达,但这种抑制程度远远不如对CBMC作用明显。结论IVIG可以抑制脐带血T淋巴细胞的活化过程,这种抑制作用除了与IVIG对T淋巴细胞的直接作用外,还可能通过了其他免疫细胞或免疫分子的间接介导。IVIG对CD4+CD45RO+T淋巴细胞的抑制作用可能是IVIG抑制B淋巴细胞免疫球蛋白释放的重要机制之一。新生儿期应用IVIG有可能使免疫功能低下加重。