Iodogen法^(125)I标记重组人粒细胞集落刺激因子的研究

采用Iodogen(四氯二苯基苷脲 )法进行12 5 I标记重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF) ,标记物用SephadexG 2 5柱凝胶过滤法分离、纯化 ,用薄层层析法和三氯醋酸法鉴定标记物的放射化学纯度、游离碘率及碘标记率和标记物的稳定性。结果标记物的放化纯度为 97.8% ,碘标记率为 78.4% ,比活度为 86.3 4TBq/mmol。用Iodogen法12 5 I标记rhG CSF ,方法简便、标记率高。

氯氨T氧化法制备高纯度^(125)I-施万细胞源神经营养因子

【目的】探讨施万细胞源神经营养因子(SDNF)的放射性碘标记方法,以进一步用于放射免疫分析和放射性示踪研究。【方法】采用氯氨T氧化法对SDNF进行放射性碘标记,并对标记物质量进行鉴定。【结果】标记SDNF的放化纯度>98％,标记物在-20℃保存,22d内比较稳定,标记后对其生物活性没有影响。【结论】氯氨T氧化法可获得高纯度125I-SDNF,方法简便、可靠,标记物性质稳定。

同位素示踪法测定^(125)I-NGF在小鼠体内的血药浓度变化

本文涉及应用Idogn法对神经生长因子(NGF)进行125I标记并利用同位素示踪与电泳分离相结合的方法测定125I-NGF在小鼠体内的血药浓度与时间变化关系。结果显示,静脉注射125I-NGF在小鼠体内的代谢规律符合二房室开放模型。分布相半衰期为0.13h,消除相半衰期为3.68h,125I-NGF在小鼠体内分布和消除均较快,清除率为0.125L/h/Kg,表观分布容积为0.697L/kg,曲线所围面积为16.01μg.h/L。

125I─后标记方法检测DNA─蛋白质交联物的实验与应用研究

１２５Ｉ─后标记方法检测ＤＮＡ─蛋白质交联物的实验与应用研究庄志雄，张桥，雷毅雄，任泽舫，刘移民（广州中山医科大学，分子毒理研究室５１００８９）我们最近建立了一种快速、敏感、简便的１２５Ⅰ─后标记方法，用于检测环境污染物和致癌物引起的ＤＮＡ─蛋白质交...

抗人CD40 mAb 5H6的^125I标记及其与卵巢癌细胞株HO8910体外结合的生物学特性

目的:研究抗人CD40单克隆抗体(mAb)5H6的125I标记及与卵巢癌细胞株HO8910体外结合的生物学特性。方法:氯氨-T法125I标记mAb5H6(125I-5H6),纸层析法测定125I-5H6的标记率和放射化学纯度,三氯醋酸沉淀法分析125I-5H6体外稳定性,细胞结合饱和实验进行Scatchard分析,lindmo法及其改良方法计算125I-5H6的免疫活性分数,细胞结合实验分析125I-5H6同HO8910细胞的内化和滞留。结果:(1)mAb5H6的125I标记率为(85.4±5.2)%,放射化学纯度为(99.2±0.5)%。(2)125I-5H6存放于4℃磷酸缓冲液中7d后其放射化学纯度为(80.3±4.7)%,在37℃血浆中存放24h后其放射化学纯度为(95.3±0.8)%。(3)125I-5H6与HO8910细胞亲和力Kd=(0.711±0.06)nmol/L,最大结合位点数(Bmax)=(2.17±0.08)×105个/细胞。(4)125I-5H6免疫活性分数达(38.6±5.4)%。(5)4℃2h125I-5H6同HO8910细胞滞留率为(89.8±6.0)%,37℃2h125I-5H6同HO8910细胞内化率达(54.9±2.6)%。结论:氯氨-T法进行125I-5H6标记具有良好的标记率和放射化学纯度,以及良好的体外稳定性和较高的免疫活性分数,且125I-5H6与HO8910细胞具有很高的亲和力,可用于动物体内实验。

^(125)I-WH16制备及与HepG2人肝癌细胞结合特性研究

目的 研究高比活度亲肝癌肽1 2 5I WH16的制备及其与HepG2人肝癌细胞的体外结合特性。方法 采用Iodogen法碘标记WH16 ,用高效液相色谱法分离纯化并鉴定标记产物。①将1 2 5I WH16与HepG2细胞进行体外细胞量 (或保温时间 ) 计数实验 ,以得到较佳的体外结合条件 ;②比较HepG2与正常肝细胞 (L0 2 )的1 2 5I WH16平均结合计数 ,以检验其特异性 ;③1 2 5I WH16与HepG2细胞进行体外饱和结合实验 ,研究其亲和特性。结果 ①1 2 5I标记率 5 0 % ,1 2 5I WH16比活度 8 2 1× 10 1 5Bq mol,放化纯 95 % ,放射性浓度 6 6 4× 10 9Bq/L ,- 2 0℃保存 2 4h后放化纯仍为 95 %。②1 2 5I WH16与HepG2细胞结合具有细胞依赖性 ,较佳保温时间为 3h;相同条件下 ,1 2 5I WH16与HepG2细胞、L0 2细胞之间平均特异性结合计数有明显差异 ;1 2 5I WH16与HepG2细胞结合具有可饱和性 ,Scatchard作图提示HepG2细胞仅含一种WH16受体 ,Kd 为 (1 4 2± 0 2 8)nmol L ,Bmax为 (12 15± 0 6 3)pmol L ;Hill系数为1 0 3,接近于 1。结论 WH16的放射性标记物在肝癌显像及生物靶向治疗中可能有潜在的应用前景。

储存磷光质屏放射自显影在测定兔血浆中^(125)I-重组人尿激酶原浓度的应用

目的 探讨储存磷光质屏放射自显影结合聚丙烯酰胺凝胶电泳测定兔血中12 5I 重组人尿激酶原 (12 5I rhpro UK)浓度的方法。方法 将含12 5I rhpro UK样品的聚丙烯酰胺凝胶贴于储存磷光质屏上曝光 ,根据储存磷光质屏上检出的吸收度值计算12 5I rhpro UK浓度。结果与结论 该方法特异性、线性及线性范围、灵敏度、重现性、回收率均可达到蛋白多肽药物药代动力学研究的要求。并测定了 0 .8mg·kg-1静脉给药时 (12 5I rhpro UK/rhpro UK =1∶9混合 ) ,兔血浆12 5I rhpro UK浓度

^(125)I-吗啡试剂盒测定海洛因成瘾者尿吗啡含量

目的 了解海洛因成瘾者尿吗啡含量 ,为戒断治疗提供依据。方法 采用12 5I -吗啡试剂药盒测定尿吗啡含量。结果 海洛因成瘾者尿吗啡含量最低为 3 2 8ng/ml ,5 0 %以上的人超过 12 0 0ng/ml,较对照组 (2 5 1± 2 79ng/ml)相比差异有显著性。另外通过对食入含阿片的甘草片试验观察 ,尿吗啡含量可达到数千ng/ml,但到第三天尿吗啡的含量就恢复到正常值 (2 5ng/ml)以下 ,而海洛因成瘾者尿吗啡排出量恢复到正常值至少需要 5d ,一般为 2个月左右。结论 海洛因成瘾者尿吗啡含量能较长时间保持较高水平 。

^125I-NGF在小鼠体内的血药浓度-时间过程

本研究涉及应用Idogn法对神经生长因子（NGF）进行^125I-NGF标记，并用同位素示踪法与电泳法相结合的方法研究^125I-NGF在小鼠体内的血药浓度-时间过程。结果显示，静脉注射^125I-NGF在小鼠体内的代谢规律符合二房室开放模型。分布相半衰期为0．13h，消除相半衰期为3．68h，^125I-NGF在小鼠体内分布和消除均较快，清除率为0．125L·h^-1·kg^-1，表观分布容积为0．697L·kg^-1，曲线所匍面积为16．01μg·h^-1·L^-1。

^(125)I-VIP与小鼠肝癌H22细胞受体结合特性研究

目的 探讨放射性碘标记血管活性肠肽(VIP)与肝癌细胞的体内、外结合特性。方法 氯胺 T法标记、Seph adexG 5 0柱层析分离纯化制备1 2 5I VIP。通过饱和结合实验与竞争结合实验,评价1 2 5I VIP与鼠H2 2肝癌细胞受体的体外介导结合特性;进行体内动态生物分布及非标记VIP竞争分布实验,观察1 2 5I VIP在荷H2 2小鼠体内尤其在移植瘤中的分布变化规律,评价其体内受体结合特性。结果 1 2 5I标记率为73 8% ,1 2 5I VIP比活度18 2TBq mmol,放射化学纯度(RCP)98%。1 2 5I VIP与H2 2细胞受体的结合具有饱和性,Scatchard作图显示为双位点系统,高、低亲和力结合位点的解离常数(Kd)分别为1 74nmol L与2 8 63nmol L ,最大结合容量(Bmax)分别为0 2 7pmol 10 6 细胞与5 75pmol 10 6 细胞,非标记VIP以剂量依赖方式抑制1 2 5I VIP与H2 2细胞结合。各时相肿瘤组织放射性均高于肌肉(P <0 0 5 ,P <0 0 0 1) ,2 0minT NT比值达最大为2 68,肺放射性高于血液与肝脏(P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,体内放射性主要经肾脏排泄;10 μg和40 μg非标记VIP对T NT比值的抑制率分别为2 6 87%与3 5 82 %。结论 1 2 5I VIP在体内、外与鼠H2 2肝癌细胞的结合由受体介导。此结果为进一步应用放射性核素标记VIP靶向诊治肝细胞癌研究提供了理论依据。

亚铜催化法^(131)I标记间碘苄胍的研究

采用亚铜做催化剂, 研究了131I标记间碘苄胍的方法, 即是沸水浴温度, 标记时间 15 min, 用铜量 2. 5μg和抗坏血酸量5. 0 mg; 纸层析法分析标记物, 标记率大于97%. 此标记方法不需要进一步的分离, 具有简单、快速的特点.

小鼠尾静脉注射^(125)I标记的抗CEA人鼠嵌合抗体rch24的药代动力学研究

目的探讨125I-rch24在小鼠体内的药代动力学过程。方法7只BABL/c小鼠,溴代琥珀酰亚胺(NBS)法标记的抗体125I-rch24尾静脉注射,于注射后不同时间尾根部取血,测定放射性计数,绘制血清除曲线,计算药代动力学参数。结果①125I与CEA人鼠嵌合抗体rch24结合,采用纸层析法测定的标记率为95.5%±02%;②标记抗体的放射化学纯度至14天后为92.6%,35天后为89.3%;③经计算机模拟,为双指数曲线,标记抗体的血液分布、清除符合二房室模型。结论正常小鼠尾静脉注射标记抗体125I-rch24后的药代动力学过程符合二房室模型,静脉注射适宜用于结肠癌放射免疫导向手术。

多巴胺D_3体显像剂^(125)I-7-OH-PIPAT生物学特性初探

目的 研究自行研制的多巴胺D3受体显像剂1 2 5I 7 羟基 2 [N 丙基 N (3′ 碘 2′ 烯丙基 ) ]氨基四氢萘满 (7 OH PIPAT)的生物学特性。方法 用核素示踪法研究1 2 5I 7 OH PIPAT在大鼠体内的生物分布 ,用放射自显影法研究1 2 5I 7 OH PIPAT在大鼠脑组织的键合部位。结果 1 2 5I 7 OH PIPAT在脑中浓集达 1% ;放射自显影结果示 ,1 2 5I 7 OH PIPAT在边缘脑区 ,尤其嗅结节部位有较高浓度结合。结论 1 2 5I 7 OH PIPAT可通过血脑屏障 ,对多巴胺D3受体有亲和性 ,具脑功能显像的潜在活性。

N-琥珀酰亚胺3-[^(125)I]碘苯甲酸酯(S^(125)IB)的放射化学合成

利用Iodogen法成功地对N-琥珀酰亚胺 3-(三正丁基锡)苯甲酸酯(ATE)进行了放射性碘-125标记,利用Sep-Pak硅胶柱实现了干扰蛋白标记的ATE及Iodogen与S125IB的分离,得到了放射性碘间标蛋白质有用的中间体S125IB,标记率93%以上。并研究了影响标记的因素,得出较佳标记条件为:ATE与 Na125I摩尔比6:1、氧化剂 Iodogen用量7mg、室温反应5min。

放射性同位素示踪法和酶联免疫法研究重组人碱性成纤维细胞生长因子在家兔体内的药代动力学

目的比较用放射性同位素示踪法和酶联免疫法两种方法研究重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF)在家兔体内的药代动力学结果的异同。方法用放射性同位素125I标记示踪法和酶联免疫法(ELISA)两种方法测定rhbFGF在家兔血清中的经时浓度。结果家兔耳缘静脉注射4,2,1μg/kgrhbFGF后,用放射性同位素125I标记示踪法测得的t1/2分别为9884,7515,7157min,Cltot约5min;酶联免疫法测得的t1/2分别为1718,1624,2392min,Cltot约10min;剂量与AUC皆有良好的线性关系(r同位素=09999;rElisa=09982)。两种方法所得的结果有相关性,同时也存在较大差异,rhbFGF在家兔体内的消除比125IrhbFGF快。结论放射性标记的药物在动物体内的处置不等同于非标记药物。

封闭式反应标记放射性碘化油

为了提高12 5I -碘化油的标记回收率 ,在原有方法基础上 ,用 5 0ml玻璃瓶代替无菌无热源青霉素瓶 ,反应时封闭瓶口 ,防止12 5I的挥发逸出。结果表明 ,此法可使放射性碘的回收率由 2 0 %左右提高到 86 .8% ,同时减少了对环境的空气污染。提示封闭式反应标记放射性碘化油是一种较好的方法。

^(125)I标记外泌体在Pan02胰腺癌荷瘤小鼠体内的生物分布研究

目的旨在开发用^(125)I-NaI标记外泌体的方法,并通过γ计数仪考察其在Pan02胰腺癌荷瘤小鼠体内的生物分布特征。方法通过非放射性NaI对用于治疗胰腺癌的工程化外泌体进行冷标记,采用透射电子显微镜、纳米粒子跟踪分析和Western blotting实验对标记前后外泌体进行表征。在此基础上采用Iodogen法进行外泌体的放射性^(125)I-NaI标记,分离纯化后测定^(125)I-NaI的标记率,Radio-HPLC法测定给药前后^(125)I-外泌体的放化纯度以考察其稳定性;将^(125)I-外泌体单次尾iv于Pan02胰腺癌荷瘤小鼠体内,分别于给药后2、6、24、72 h(每个时间点雌雄各3只)经CO_(2)麻醉后心脏放血处死小鼠,取血清、主要组织器官及肿瘤,γ计数仪测量其放射性计数,计算各组织/血清在不同时间点的蛋白沉淀率;并计算在不同时间点的每克组织(或每毫升血清)放射性计数占总注入放射性计数的百分比(%ID·g^(−1)或%ID·mL^(−1))。结果外泌体表征的结果显示,标记前后的外泌体形态一致,均成圆形或茶托样结构;标记前外泌体粒径峰值为113 nm,标记后外泌体粒径峰值为122 nm,粒径大小主要分布在50~200 nm;均表达其标志性蛋白CD63及TSG101,符合外泌体特征。^(125)I-NaI标记外泌体的标记率为27.82%,纯化后HPLC法测得即时放化纯度为100%,给药后放化纯度为(93.34±5.48)%。在小鼠尾iv给药后2 h,标记的外泌体主要分布在肝脏[(10.8992±1.5181)%ID·g^(−1)]和脾脏[(2.5664±0.7998)%ID·g^(−1)],肿瘤中为[(0.2910±0.0560)%ID·g^(−1)],脑、心脏、脂肪和肌肉组织摄取较少;给药后72 h,肝脏中仍有较高摄取,肿瘤中仍有放射性分布。给药后2~6 h各组织脏器的蛋白沉淀率较低,表明^(125)I-NaI标记外泌体稳定性有所降低。结论外泌体可以进行^(125)I标记,而且标记同位素前后对外泌体物理形态、生物学活性无明显影响;^(125)I标记外泌体的方法简便,标记率和放化纯度均较高;该外泌体产品在荷瘤小鼠体内大部分血流丰富的组织器官均有分布,且具有一定的肿瘤靶向定位能力。

^(125)I籽源连续照射诱导人乳腺癌细胞凋亡的研究

目的探讨^(125)I籽源低剂量率γ射线持续照射诱导MCF7人乳腺癌细胞凋亡过程中Bcl2Bax的变化情况。方法用9粒表面放射活度为2775MBq的6711型^(125)I籽源连续照射MCF7细胞72h后,采用RTPCR和Westernblot法检测Bcl2和BaxmRNA和蛋白表达。常规细胞流式法和AnnexinV标记法直接检测MCF7细胞凋亡率。结果MCF7细胞经125I籽源照射后较对照组Bcl2mRNA的表达降低,BaxmRNA的表达升高;Westernblot检测Bcl2Bax比值,结果对照组为189±009,125I籽源照射组为062±008,两者差异有统计学意义(P<005)。常规细胞流式法检测照射组(n=10)和对照组(n=12)细胞凋亡率分别为(2361±727)%和(281±168)%,P<005。AnnexinV标记法检测两组细胞早期凋亡率分别为(2146±829)%和(194±138)%,P<005。结论125I籽源连续照射能够诱导Bcl2Bax比值的降低,促进MCF7细胞的凋亡。

LHRH药代动力学试验

目的:研究黄体激素释放激素(Luteinizinghormone releasinghormone,LHRH)在大鼠体内的药动学规律。方法:用氯胺T法将125I标记到LHRH分子上(放化纯度96.2%),14只SD大鼠随机分为大剂量、小剂量组,每组7只,分别肌肉注射125I LHRH(小剂量组0.5mg.kg,大剂量组1.00mg.kg),给药后在21个不同时间点逐一取各鼠尾动脉血做放射性测定。结果:大鼠试验结果显示,大剂量组t1/2平均为67.83±20.84h;小剂量组半衰期平均为64.68±22.90h。LHRH的药—时曲线符合二室模型,大剂量LHRH和小剂量LHRH的主要药动学指标差别不大。结论:LHRH在大鼠体内的消除模式为二室模型,为一级动力学消除。