IL-17F、ANKRD49在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的分析白细胞介素-17F(IL-17F)和锚蛋白重复结构域49(ANKRD49)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义。方法收集60例NSCLC患者NSCLC组织及癌旁正常组织。采取免疫组化法检测NSCLC组织、癌旁组织ANKRD49、IL-17F表达情况。采用多元线性回归分析ANKRD49、IL-17F表达与NSCLC临床病理特征的关系;绘制Kaplan-Meier生存曲线分析ANKRD49、IL-17F表达情况对患者生存率的影响。结果NSCLC组织ANKRD49、IL-17F表达阳性率高于癌旁组织(P<0.05)。TNMⅠ期、无淋巴结转移、高分化程度的NSCLC组织中IL-17F表达阳性率分别高于TNMⅡ和Ⅲ期、有淋巴结转移和低分化程度(P<0.05);TNMⅢ期、有淋巴结转移、低分化程度的NSCLC患者癌组织中ANKRD49表达阳性率分别高于TNMⅠ和Ⅱ期、无淋巴结转移和中高分化程度者(P<0.05)。TNM分期是NSCLC组织IL-17F表达的影响因素;淋巴转移、分化程度是NSCLC组织ANKRD49表达的影响因素(P<0.05)。NSCLC患者IL-17F表达阳性者生存率高于阴性者(P<0.05),而ANKRD49表达阳性者生存率低于阴性者(P<0.05)。结论IL-17F、ANKRD49在NSCLC患者癌组织中的表达较高,且均与NSCLC患者预后关系密切,可作为评估NSCLC患者预后的潜在靶点。

胃癌组织中IL-17A和IL-17F的表达及意义

目的探讨胃癌组织中促炎因子IL-17A和IL-17F的表达及其对临床预后的影响。方法采用免疫组化SP法检测41例胃癌组织和26例癌旁组织(对照组)中IL-17A和IL-17F的表达,分析IL-17A和IL-17F与胃癌患者临床病理特征的关系。结果胃癌组织中IL-17A和IL-17F的阳性率及中～强阳性率均明显高于对照组(P<0.01)。胃癌组织中IL-17A和IL-17F表达与临床分期、淋巴结转移均呈正相关(P<0.001),与患者性别、年龄及病理分化程度均无相关性(P>0.05)。胃癌组织中IL-17A和IL-17F的表达呈正相关(r=0.407,P<0.009)。结论 IL-17A和IL-17F促进了胃癌的发生、发展,且其高表达预示预后不良。IL-17A和IL-17F作用机制相似。

IL-17E和IL-17F及其受体在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的:观察配体白细胞介素17E(IL-17E)、白细胞介素17F(IL-17F)及其受体白细胞介素17RB(IL-17RB)和白细胞介素17RC(IL-17RC)在肠炎、肠息肉及结直肠癌组织中的表达,探讨其与直结肠癌恶性度的关系。方法:收集15例肠炎、5例增生性肠息肉及30例结直肠腺癌组织病理标本,采用免疫组织化学染色法检测IL-17E、IL-17RB、IL-17F和IL-17RC在肠炎、肠息肉和肠癌组织中的阳性表达率,分析配体与受体阳性表达率的相关性以及配体阳性表达率与肠癌恶性度的关联。结果:IL-17E、IL-17F、IL-17RB和IL-17RC主要表达于腺上皮细胞、单个核细胞、血管内皮细胞和部分癌细胞;IL-17E在肠炎和肠息肉组织中的阳性表达率明显高于肠癌组织(P<0.05),且随肠癌恶性度升高而降低;IL-17F在肠息肉和肠癌组织中阳性表达率明显高于肠炎组织(P<0.05),且随肠癌恶性度的升高而升高;IL-17RB在肠炎及息肉组织中的阳性表达率明显高于肠癌组织(P<0.05)。与肠炎和肠息肉比较,肠癌组织中IL-17RC阳性表达率升高(P<0.05)。在肠癌组织中,IL-17F阳性表达率与IL-17RC阳性表达率呈正相关关系(r=0.667,P=0.001)。结论:IL-17F、IL-17RC、IL-17E和IL-17RB信号可能参与了肠癌的发生发展。

射干麻黄汤对急性哮喘小鼠模型IL-17A及IL-17F表达的影响

目的:探讨射干麻黄汤对急性哮喘小鼠模型肺组织及血清中IL-17A及IL-17F表达的影响,以近一步阐明其治疗哮喘的作用机制。方法:选取60只SD小鼠随机分为6组,分别为空白对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、地塞米松对照组(F组)、射干麻黄汤高、中、低浓度组(C、D、E组)。显微镜镜下观察经HE染色的肺组织的病理性改变,哮喘小鼠血清检测IL-17A及IL-17F水平,肺组织中IL-17A mRNA及IL-17F mRNA的水平采用逆转录-聚合酶链反应法检测。结果:小鼠肺组织中B组IL-17A mRNA及IL-17F mRNA的表达量均明显高于A组(P<0.01)。与B组比较,C、D、E组BALF中IL-17A mRNA及IL-17F mRNA水平降低(P<0.05),且C组IL-17A mRNA及IL-17F mRNA表达量下降最为明显。C组与F组IL-17A mRNA及IL-17F mRNA表达量相接近。小鼠血清中IL-17A及IL-17F水平变化与小鼠肺组织IL-17A mRNA及IL-17F mRNA水平变化趋势基本相同。结论:射干麻黄汤可能是通过降低IL-17A及IL-17F细胞因子的分泌,来起到治疗哮喘的目的。

IL-17F在银屑病皮损中的表达及意义

目的探讨IL-17F在银屑病皮损中的表达及意义。方法收集寻常性银屑病患者皮损及正常皮肤作为对照,荧光定量PCR法检测两种组织中IL-17F和IL-8表达的差异;IL-17F诱导人角质形成细胞系HaCaT24h后,荧光定量PCR法检测IL-8的表达变化。结果银屑病患者皮损IL-17F表达明显高于正常组,差异有统计学意义(P均<0.01);银屑病患者皮损同时伴有IL-8的高表达;IL-17F可诱导HaCaT细胞系IL-8的表达增高。结论IL-17F在银屑病皮损中表达上调,IL-17F可诱导HaCaT产生IL-8,这可能是IL-17F参与银屑病发生和发展的机制之一。

人IL-17F对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响

利用RT-PCR方法从PHA活化的人外周血单个核细胞(PBMCs)中克隆hIL-17F基因,亚克隆至逆转录病毒载体pSIV-1,与辅助病毒载体pHIT456和pHIT60脂质体法共转染293T包装细胞,获得的成熟重组逆转录病毒(RV-hIL-17F)再感染SMMC-7721人肝癌细胞,并经G418筛选建立hIL-17F转基因肝癌细胞。PCR、RT-PCR和Westernblot结果表明hIL-17F基因在肝癌细胞中能成功整合、转录和表达。MTT和FCM结果表明hIL-17F不能改变SMMC-7721肝癌细胞的增殖活力和细胞周期,但ELISA结果表明其能明显下调肝癌细胞IL-6、IL-8和VEGF的表达。转基因肝癌细胞rhIL-17F表达上清具有抑制ECV304人脐静脉内皮细胞生长的作用。裸鼠皮下成瘤试验结果表明hIL-17F转基因肝癌细胞裸鼠致瘤能力明显减弱,VEGF和CD34表达降低,血管形成显著减少。hIL-17F可通过减少肿瘤血管形成显著抑制裸鼠人肝癌移植瘤的生长,为其进一步开展肿瘤血管靶向基因治疗和开发抗血管新药提供了一定的实验依据。

重组hIL-17F原核蛋白表达和生物学活性初步研究

目的:研制hIL-17F/His重组蛋白并初步研究其体外生物学活性。方法:RT-PCR法克隆得到hIL-17F基因序列。将测序正确的hIL-17F基因片段装入PQE3.0原核表达载体构建重组载体hIL-17F/PQE3.0。将该重组载体导入宿主菌M15,经异丙基B-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后产生hIL-17F/His重组蛋白,并用Western blot实验确认。结果:原核表达的hIL-17F/His重组蛋白变性、复性后,经过HiTrapTM亲和层析得到纯品蛋白。体外活性实验表明,该融合蛋白具有上调人巨噬细胞TNF-α、IL-6等分子表达的作用,并促进He-La细胞的增殖。结论:制备了具有生物学活性的hIL-17F/His重组蛋白,为进一步研究该分子独特的生物学功能奠定了基础。

Th17细胞及白细胞介素17A、17F对特应性皮炎患者病情的影响

目的研究不同严重程度特应性皮炎患者Th17细胞及白细胞介素(IL)-17A、IL-17F的变化,探讨其在特应性皮炎发病中的作用。方法采用流式细胞术检测不同严重程度特应性皮炎患者外周血Th17细胞的比例,采用ELISA测定培养上清液中IL-17A、IL-17F表达水平,以健康成人作为对照。结果轻度AD患者与正常人比较,外周血Th17细胞比例、IL-17A水平增高(P<0.05);中度AD患者与正常人比较,外周血Th17细胞比例及IL-17A水平明显增高(P<0.01);重度AD患者与正常对照组比较,IL-17F水平增高(P<0.05);中度AD患者与轻度AD患者比较,外周血Th17细胞比例及IL-17A水平增高(P<0.05);重度AD患者与中度AD患者比较,外周血Th17细胞比例及IL-17A水平增高(P<0.05)。结论 Th17细胞及IL-17A、IL-17F可能在AD的发生及发展过程中发挥重要作用。

阻断IL-17F通路对小鼠实验性溃疡性结肠炎的影响

目的:探讨阻断白介素-17F(interleukin-17F,I L-17 F)通路对小鼠实验性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的疗效观察.方法:24只C57BL/6J♀小鼠随机分为3组,分别为Normal组、葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)+anti-IL-17F组、DSS+PBS组.DSS+anti-IL-17F组、DSS+PBS组以5%DSS溶液为唯一饮用水由动物自由饮用;Normal组以蒸馏水为唯一饮用水由动物自由饮用.分别于第4、7、10天予以DSS+anti-IL-17F组经腹腔注射IL-17F antibody(anti-IL-17F)100μg,予以DSS+PBS组同等剂量的PBS溶液.观察小鼠每日的体质量变化、大便性状和隐血情况.14 d后取小鼠结肠组织,进行大体形态和组织病理学改变观察,收集血清进行ELISA检测.结果:通过中和性使用anti-IL-17F阻断IL-17F通路发现,与N o r m a l组相比,D S S+a n t iI L-1 7 F组、D S S+P B S组每日疾病活动度(disease activity index,DAI)评分明显增高(P<0.01),DSS+anti-IL-17F组与DSS+PBS组相比,DSS+anti-IL-17F组DAI评分降低(P<0.05);DSS+PBS组结肠长度与DSS+anti-IL-17F组相比缩短程度更为显著[5.855 cm±0.1139 cm、7.300 cm±0.1732 cm vs Normal组(8.500 cm±0.1789 cm),P<0.01];在IL-17F含量测定方面,DSS+PBS组含量明显高于其他2组[207.3 pg/m L±12.74 pg/m L vs Normal组(10.06 pg/m L±2.310 pg/m L)、DSS+anti-IL-17F组(73.63 pg/m L±8.114 pg/m L),P<0.01].结论:阻断IL-17F通路明显缓解UC的发生发展,为UC的临床治疗提供一种新的可能的治疗方法.

类风湿性关节炎患者血清IL-17A和IL-17F的表达及临床意义

目的研究类风湿性关节炎(RA)患者血清IL-17A和IL-17F含量并分析其临床意义。方法 ELISA检测60例RA患者和25例健康自愿者外周血血清IL-17A和IL-17F含量,免疫比浊法检测血清类风湿因子RF值,并分析其相关性。结果 RA患者血清IL-17A含量显著高于健康自愿者(P<0.01),IL-17F含量差异无统计学意义(P>0.05)。活动期RA患者血清IL-17含量显著高于非活动期RA患者(P<0.01)。活动期RA患者和非活动期RA患者血清IL-17F含量差异无统计学意义(P>0.05)。RF值阳性患者IL-17A含量显著高于RF值阴性患者(P<0.01);RF值阳性患者和RF值阴性患者血清IL-17F含量差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关性分析显示,患者血清IL-17A含量与RF值大小呈正相关。患者血清IL-17F含量与RF值及患者血清IL-17A含量无相关性。结论 IL-17A在RA的发生、发展中起更重要的作用。

人IL-17F融合蛋白在E.coli中表达及其生物学活性研究

目的:构建重组原核表达载体pGEX-5X-3/hIL-17F,使其在大肠杆菌中表达,获得GST-hIL-17F融合蛋白,并研究其生物学活性。方法:利用PCR法从自行构建的含hIL-17F基因的pUCm-T/hIL-17F载体中扩增其成熟肽基因序列,亚克隆于pGEX-5X-3中,构建原核表达载体pGEX-5X-3/hIL-17F,并在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达包涵体融合蛋白,经纯化后进行Westernblot鉴定。MTT法分析GST-hIL-17F纯品蛋白对人脐静脉内皮细胞ECV304的生长抑制作用,ELISA法检测对ECV304内皮细胞表达IL-6、IFN-γ和TNF-α的生物学作用,并采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)法分析其对血管形成的影响结果:GST-hIL-17F融合蛋白在大肠杆菌BL21中获得了高效表达,约占菌体总蛋白的55%,能产生约41kD的融合蛋白,且Westernblot证实确为GST-hIL-17F目的蛋白。GST-hIL-17F具有明显抑制ECV304内皮细胞增殖和上调表达IL-6的生物学效应,并具有显著的抗血管形成活性。结论:hIL-17F重组原核表达和血管形成抑制效应的初步研究已获成功,为进一步研究rhIL-17F的抗血管形成机制和临床应用奠定了基础。

IL-17F在结直肠癌组织中的表达及与患者临床病理特征及其预后的关系

目的分析白介素-17F(IL-17F)在结直肠癌组织中的表达情况与患者临床病理特征及其预后的关系。方法收集2015年1月至2017年1月沈阳市肛肠医院手术切除的86例结直肠癌组织标本和癌旁组织标本,通过免疫组化法测定组织标本中IL-17F和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达情况;分析IL-17F与VEGF的相关性,并比较不同临床病理特征、预后患者IL-17F的表达水平。结果结直肠癌组织中,IL-17F表达阳性率为43.02%,低于癌旁组织的100.00%,VEGF表达阳性率为82.56%,高于癌旁组织的10.47%,差异均有统计学意义(均P<0.05);相关性分析结果显示,IL-17F表达水平与VEGF表达水平呈负相关性(r=-0.689,P<0.05);不同分化程度、浸润深度以及有无淋巴结转移患者之间IL-17F阳性表达率比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);IL-17F阳性表达患者生存率、中位生存期均高于IL-17F阴性表达患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论IL-17F与结直肠癌预后有密切相关,可抑制结直肠癌的发生、发展。

人IL-17F重组逆转录病毒载体的构建及其在293T细胞中的稳定表达

目的构建hIL-17F重组逆转录病毒载体并研究它在293T细胞中的表达。方法以测序验证的pUCm-T/hIL-17F为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因片段(包括20aa信号肽序列,而且hIL-17F基因内EcoR I酶切位点GAA T TC→GAA C TC同义点突变,即AA T→AA C,均为Asn),并正向插入逆转录病毒载体pSIV-1后经PCR、双酶切和测序鉴定。将构建正确的pSIV-1/hIL-17F与辅助病毒载体pHIT456和pHIT60混合后,采用脂质体法共转染293T包装细胞,获得具有感染能力的成熟重组逆转录病毒感染293T细胞,经G418筛选获得阳性细胞株,并应用PCR、RT-PCR和dot-ELISA法检测hIL-17F目的基因在293T细胞中的整合、转录和表达。结果成功构建了hIL-17F基因内EcoRI酶切位点GAA T TC→GAA C TC同义点突变的重组逆转录病毒载体pSIV-1/hIL-17F,并在293T细胞中稳定表达。结论以逆转录病毒为载体感染的稳定表达rhIL-17F的293T转基因细胞株的首次获得,为进一步研究hIL-17F的生物学功能及其机制奠定了良好的基础。

支气管哮喘儿童的IL-17F基因突变分析

目的探讨白细胞介素-17F基因多态性与儿童支气管哮喘的相关性,为支气管哮喘的易感基因筛选提供可能的理论依据。方法取本院门诊随诊的60例哮喘患儿设为哮喘组,60例健康儿童设为对照组,两组儿童均于清晨空腹留取外周静脉血2ml,提取全基因组DNA,应用聚合酶链反应及克隆、基因测序方法分析IL-17F基因序列rs763780(H161R)基因多态性。结果 IL-17F基因序列rs763780(H161R)基因型在两组内均未检测到突变型CC,rs763780(H161R)基因型(TC/TT)在两组间内的分布有明显的差异(χ2=5.71,P<0.05)。TC基因型OR和95%可信区间(CI)为2.09(1.12-3.90),TT基因型OR和95%CI为0.76(0.60-0.95)。结论 IL-17F基因多态性rs763780(H161R)基因型分布(TC/TT)在两组间存在差异,其多态性可能与哮喘相关,两组内均未发现基因型CC在,基因型TC可能是哮喘发病的危险因素。

人白细胞介素-17F基因克隆及在大肠杆菌中的表达

目的克隆人白细胞介素-17F基因,并构建含有该目的基因的重组原核表达载体,获得高效表达hIL-17F的基因工程菌。方法利用RT-PCR法,以PHA活化的人外周血单个核细胞的总RNA为模板,扩增出hIL-17F cDNA的编码序列,并分别亚克隆至pUCm-T载体和原核表达载体pGEX-5X-3中,进行PCR、酶切鉴定和DNA序列测定。将重组原核表达载体转化感受态大肠杆菌BL21后经IPTG诱导表达获得包涵体融合蛋白,且Western印迹鉴定。结果PCR产物大小及其单酶切鉴定均证明所克隆的基因是hIL-17F,DNA序列测定进一步证实与GeneBank报道的序列完全一致。成功构建了重组原核表达载体pGEX-5X-3/hIL-17F,并在大肠杆菌中获得高效表达,约占菌体总蛋白的55%,且Western印迹证实确为目的蛋白。结论该基因系国内首次克隆,hIL-17F基因重组体的构建和在大肠杆菌BL21中的高效表达,为进一步探讨其生物学活性和应用奠定了基础。

NGX6与IL-17F在大肠癌及大肠腺瘤中的表达及其与VEGF的相关性分析

目的探讨NGX6与白细胞介素-17F(IL-17F)在大肠癌及大肠腺瘤中的表达及其与血管内皮细胞生长因子(VEGF)的相关性。方法选取67例大肠癌患者的大肠癌组织标本,82例大肠腺瘤患者的大肠腺瘤组织标本及35例健康体检者的左半结肠正常组织标本。采用免疫组化法检测3种组织中NGX6、IL-17F及VEGF的表达情况,并分析NGX6、IL-17F与VEGF表达的相关性。结果大肠癌组织中,VEGF的阳性表达率高于大肠腺瘤组织和正常结肠组织(P﹤0.05),IL-17F、NGX6的阳性表达率均低于大肠腺瘤组织和正常结肠组织(P﹤0.05)。大肠腺瘤组织中,VEGF的阳性表达率高于正常结肠组织(P﹤0.05),IL-17、NGX6的阳性表达率均低于正常结肠组织(P﹤0.05)。NGX6的阳性表达与大肠癌患者的浸润深度、TNM分期和淋巴结转移情况有关(P﹤0.05);IL-17F的阳性表达与大肠癌患者的浸润深度、组织分化程度和淋巴结转移情况有关(P﹤0.05)。大肠癌中,IL-17F、NGX6均与VEGF的表达呈负相关(r=-0.72、-0.63,P﹤0.05)。结论 IL-17F、NGX6可以通过下调VEGF表达,抑制新生血管形成,从而抑制肿瘤的发生。

白细胞介素-17A和白细胞介素-17F在卵巢上皮性癌组织中的表达情况及与患者临床特征的关系

目的探讨白细胞介素-17A(IL-17A)和白细胞介素-17F(IL-17F)在卵巢上皮性癌组织中的表达情况及与患者临床特征的关系。方法收集90例卵巢上皮性癌、23例交界性卵巢肿瘤、21例良性卵巢肿瘤患者的肿瘤组织标本,采用免疫组织化学染色法检测3种肿瘤组织中IL-17A和IL-17F的表达情况,分析IL-17A和IL-17F表达与卵巢上皮性癌患者临床特征的关系。结果卵巢上皮性癌患者中IL-17A和IL-17F的阳性表达率均高于交界性卵巢肿瘤患者和良性卵巢肿瘤患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。国际妇产科联盟(FIGO)分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、中/低分化的卵巢上皮性癌患者中IL-17A和IL-17F的阳性表达率分别高于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、高分化的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论卵巢上皮性癌患者中IL-17A和IL-17F的阳性表达率较高,IL-17A和IL-17F可能参与卵巢上皮性癌的发生与发展,可能作为卵巢上皮性癌的诊断指标和潜在治疗靶点。

IL-17F、IL-17A在大肠癌组织中的表达

目的探讨IL-17F、IL-17A与大肠癌发生发展的关系。方法对72例大肠癌组织中的IL-17F、IL-17A的表达水平进行免疫组化法检测,分析不同病理因素中,IL-17F、IL-17A的表达水平。结果癌组织中的IL-17F、IL-17A的表达水平均显著高于癌旁组织(P<0.05);多因素回归分析结果显示,IL-17F、IL-17A的表达水平与淋巴结转移、分化程度以及TNM分期有关(P<0.05)。结论大肠癌组织中的IL-17F、IL-17A的阳性表达率高,二者的表达均与患者的淋巴结转移、大肠癌分化程度以及TNM分期有关。

IL-17F基因多态性和儿童哮喘易感性相关性分析

目的探讨IL-17F基因多态性和哮喘易感性、IL-17水平的关系。方法选择133例哮喘患儿和114例对照儿童,测定IL-17F基因rs763780、rs1889570位点多态性,并分析其与儿童支气管哮喘易感性及外周血IL-17水平的相关性。结果哮喘组和对照组两组间等位基因、基因型频数分布在rs 1889570位点的差异有统计学意义(P=0.049、P=0.043),哮喘组携带A等位基因者明显高于对照组(OR=1.43,95%CI:1.001~2.004,P=0.049);rs 763780位点等位基因、基因型分布在两组间的差异均无统计学意义(P>0.05)。哮喘组rs 763780和rs 1889570位点各基因型间IL-17水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论IL-17F基因rs 1889570位点与儿童哮喘易感性有关,携带A等位基因者发生哮喘的危险性高。

IL-17F与肿瘤关系的研究进展

白细胞介素17F(interleukin-17F,IL-17F)是主要由Th17细胞分泌的促炎症因子,属于IL-17家族,与家族另一成员IL-17A有极强的同源性。IL-17F具有独特的生物学功能,可诱导多种趋化因子和细胞因子的表达,参与免疫细胞应答及炎症反应,在发挥抑制肿瘤细胞进展的同时亦有促进肿瘤进展和转移的风险。本文对IL-17F的生物学功能、抑瘤效应及促瘤效应等方面的研究进展和取得的新成果进行了综述,为IL-17F在相关肿瘤治疗方面提供依据。