^188Re-cNGQGEQc放射性标记及其对肺腺癌细胞的抑制作用

【目的】探讨放射性核素^188Re间接法标记小分子肽cNGQGEQc的可行性,并观察^188Re-cNGQGEQc对肺腺癌A549细胞的体外抑制作用。【方法】^188Re-cNGQGEQc和^188Re-cNAQAEQc(阴性多肽)的制备采用双半胱氨酸(EC)为双功能螯合剂的间接标记法,测定标记多肽的标记率、比活度、放化纯度、脂水分配系数,并观察在正常人血清中的稳定性。采用CCK-8法测定^188Re-cNGQGEQc对体外培养的肺腺癌A549细胞株的抑制效应,观察不同放射性剂量的^188Re-cNGQGEQc对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用,计算相对抑制率及半数有效抑制浓度(IC50),并与^188Re标记的阴性多肽及^188ReO4-进行比较。【结果】^188Re-cNGQGEQc的标记率为(90.24±1.58)%,比活度为(4.07±0.14)TBq/(mmol/L),C18柱纯化后放化纯度为(98.42±0.32)%,^188Re-cNGQGEQc的脂水分配系数lgP为(-2.90±0.03),在37℃正常人血清中放置24 h其放化纯度为(89.08±0.94)%。抑制性实验结果表明^188Re-cNGQGEQc对肺腺癌A549细胞的增殖具有显著的抑制作用,且与放射剂量呈明显正相关;而且^188Re-cNGQGEQc的IC50值为44.88×10^7 Bq/L,明显低于阴性多肽的93.45×10^7 Bq/L和^188ReO4-的99.60×10^7 Bq/L(P<0.01)。【结论】使用双功能螯合剂EC建立了标记率高、体外稳定的^188Re标记小分子肽的方法,体外实验证实^188Re-cNGQGEQc能有效地抑制肺腺癌A549细胞的增殖,研究结果为后续开展小分子多肽的放射靶向治疗肺癌的体内应用提供实验基础。

^188Re标记生物分子研究进展

188Re半衰期只有16.9h,最大β射线能量为2.11MeV,同时伴随有适于显像能量为155keV的γ射线。因此是一种理想的治疗用放射性核素,本文综述了188Re生物标记的各种方法及研究进展,188Re标记放射性药物用于肿瘤核医学治疗的前景十分令人鼓舞。

[^188Re(CO)3L]^n新型配合物的小鼠体内生物分布

选择了3种三齿配体(二(2-吡啶甲基)-胺基)-乙胺(L1NH2)、(二(2-吡啶甲基)-氨基)-乙酸(L2H)和((6-胺基-N-叔丁氧基羰基-己基)-吡啶-2-甲基氨基)-乙酸(L3NH2),用于设计合成新的以fac-[188Re(CO)3]+为核心的放射性药物。3种配体在低浓度(10-5mol/L)的条件下,反应时间小于60 min,标记率可达90%以上,放射化学纯度大于92%;3种标记物的体外稳定性均很高,标记后24 h内基本不分解。生物分布结果表明,配合物均能较快地从血液和多数的组织器官中清除,主要通过排泄系统代谢,并初步探讨了这3个配合物在小鼠体内的生物分布行为可能与它们的脂水分配系数lgP有关。lgP值(-0.36)高的配合物[188Re(CO)3L3NH2],24h时在各个器官中放射性保留均高于其它2个配合物,但可能不是唯一的影响因素。总的来说,3个配基是用fac-[188Re(H2O)3(CO)3]+标记的比较理想的双功能螯合剂。

^188Re标记锡硫混悬液对荷人结肠癌裸鼠模型的治疗研究

以荷人结肠癌裸鼠为动物模型．研究了^188Re标记的锡硫混悬液对荷人结肠癌的治疗效果、在裸鼠体内的稳定性及经瘤内注射后的体内器官分布．并用电镜观察了治疗后肿瘤的组织学变化。结果表明，^188Re标记的锡硫混悬液有较好的抑瘤率，且在瘤内能长时间稳定存在。经^188Re标记的锡硫混悬液治疗后，肿瘤细胞多为变性坏死。

^188Re食管支架辐射生物物理特点

探讨^188Re食管支架辐射生物物理效应机制。采用热释光法和细胞存活分数法分析^188Re食管支架放射生物物理特点。^188Re支架初始放射性活度128MBq，体模驻留1h，2、6、11mm诸深度点吸收剂量分别为1．28、0．115、0．011Gy。另外，经2、6、11mm厚度体模作用于ECA109细胞24h测定吸收剂量分别为31．25、3．21、0．123Gy，细胞存活分数分别为0．02％、35．18％、91．22％。^188Re核素支架β射<6mm超近距离治疗其辐射生物效应明显，而11mm超出^188Re最大射程外依然存在较弱放射生物效应。^188Re核素支架具备超近距离治疗肿瘤的辐射生物效能，并且辐射微观粒子波粒二重性的能量逐层传递而产生射程外生物物理效应。

^188Re血管内照射对新西兰白兔损伤血管内膜增生的影响

目的研究^188Re血管内照射对新西兰白兔损伤血管内膜增生的影响，探讨^188Re血管内照射对预防再狭窄的可行性及作用。方法60只新西兰白兔随机分为对照组（n=30）和照射组（n=30），均行腹主动脉球囊内皮拉伤术。照射组球囊损伤内膜后行^188Re照射治疗。管腔下0．5mm处累计吸收剂量为15Gy；对照组则不行血管内照射。分别于术后1、3、6周处死动物，取病理组织学标本进行分析。结果与对照组对比，照射组第3、6周的新生内膜面积明显减小（2．11±0．17mm^2VS3．02±0．71mm^2，P=0．003；2．63±0．84mm^2 vs 3．80±0．99mm^2，P=0．023），管腔面积明显增加（5．87±0．57mm^2 vs 4．96±0．64mm^2，P=0．009；4．74±0．59mm^2 vs 4．16±0．40mm^2，P=0．037），管腔周径明显增大（4．61±0．78mmVS3．64±0．93mm，P=0，040；3．85±0．65mm vs 3．12±0．56mm，P=0．031），管腔狭窄程度明显降低（23．04±4．85mm^2 vs 33．44±6．47mm^2，P=0．003；30．82±7．18mm2 vs 41．46±10．95mm^2，P=0．038）。结论^188Re血管腔内照射能有效抑制损伤血管的新生内膜增生，改善血管重构，为预防临床PTCA术后再狭窄提供了有力的实验依据。

叶酸修饰PAMAM树状大分子的合成及^188Re标记

叶酸受体在多种肿瘤细胞中过表达是癌症治疗中一种可能的靶向药物结合位点。我们将五代PAMAM树状大分子用叶酸和1B4M-DTPA修饰,然后用^(188)Re进行放射性标记。化合物的标记产率为67.5%,分离后的放射化学纯度大于95%,并表现出良好的体外稳定性,为该化合物在叶酸受体靶向肿瘤治疗应用中奠定了基础。

^188ReN-NEMPTDD的合成和初步性质

近年来，研究人员一直致力于开发新型的可能成为治疗核药物的^188Re标记化合物。在Re的同族元素Tc的研究中，TcN核配合物的研究是一个热点。这两个同族元素具有相似的化学行为，因此可以借鉴^99mTc放射性药物的制备方法来制备^188Re放射性药物。考虑到^188ReO4-比^99mTcO4^-还原困难，以及^188Re的低价配合物稳定性差，拟在通用的制备TeN配合物两步法的基础上，改变促进剂和氮给予体，

Na^(188)ReO_4、^(188)Re-DTPA和^(188)Re-MAG_3的生物分布及排泄比较

为比较Na188ReO41、88Re-DTPA和188Re-MAG3在冠状动脉再狭窄防治中的优劣,将这三种放射性药物注入到ICR小鼠和SD大鼠体内,观察其在小鼠体内的分布及在大鼠体内的排泄动力学。结果显示,188Re-MAG3在小鼠体内的血液清除明显快于188Re-DTPA和Na188ReO4,并且在各主要组织脏器的吸收也明显低于188Re-DTPA和Na188ReO4。注射后2 h,77.28%的188Re-MAG3经尿液排出体外,而此时188Re-DT-PA和Na188ReO4的尿液排出量不到注射剂量的50%1。88Re-MAG3在动物体内的行为明显优于188Re-DTPA和Na188ReO4,更适于冠状动脉再狭窄的防治。

放射性药物^(188)Re标记DTPA的制备和在大鼠体内的分布

球囊导管内充盈β放射性核素防治经皮冠状动脉成形术(PTCA)后再狭窄是一种崭新的技术, 其中,188Re是一种常用的放射性核素。为了尽可能降低在万一球囊破裂的情况下高剂量放射性对人体的损害,利用二乙三胺五醋酸(DTPA)迅速从泌尿系统排出的特点,通过探索188Re标记DTPA的方法和条件,成功地制备了188Re-DTPA化合物,并研究出最佳的标记条件从而使标记产率达到90%以上。188Re-DTPA和188ReO4-在大鼠体内分布的研究结果显示,甲状腺和胃肠道的放射性水平188Re-DTPA组明显低于188ReO4-组,188Re-DTPA经肾脏排泄明显快于188ReO4-,用MIRDOSE 3.0软件估算体内重要脏器的吸收剂量同样也显示了这一结果。188Re-DTPA组和188ReO4-组甲状腺的吸收剂量分别为0.041 nGy/Bq和0.563 nGy/Bq,胃的吸收剂量分别为0.043 nGy/Bq和0.118 nGy/Bq。因此,实验结果认为在血管内照射治疗中188Re-DTPA明显优于188ReO4-。

磁性纳米微粒的^(188)Re标记

将组氨酸固载到氨基化磁性纳米微粒表面。以188Re的面式结构三羰基配合物fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+为放射性标记前体,对磁性纳米微粒进行了标记。固载有组氨酸的磁性纳米微粒在70℃、pH6.6下反应40min,标记率为(91.4±0.3)%,并且标记物在37℃的小牛血清中有良好的体外稳定性,72h后放射性仍保留80%以上。

羰基铼[^(188)Re]标记含RGD多肽

以fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+为前体标记了2个含RGD的多肽:HGRGD(D)F(组氨酸-甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-苯丙氨酸)和H CRGD(D)FC(组氨酸-半胱氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-苯丙氨酸-半胱氨酸)。75℃反应30 min即得到了标记产物188Re-HGRGD(D)F和H CRGD(D)FC,标记率和放化纯度均>90%。体外稳定性实验结果表明,两个标记产物在小牛血清中稳定性都差于磷酸缓冲溶液;相比之下H CRGD(D)FC稳定性稍好于188Re-HGRGD(D)F。标记产物不会引起红细胞的溶血和凝聚现象,表明这两种标记物均可用作注射用药。

^(188)Re-DTPA的制备及生物分布研究

以SnCl2·2H2O为还原剂,还原188ReO-4并与DTPA直接配合获得188Re DTPA,优化了标记反应条件;对188Re DTPA和Na188ReO4在正常小鼠体内分布进行了比较。实验结果表明,在最佳标记条件下,188Re DT PA的标记率大于95%;标记物体外稳定,经生理盐水稀释后,其稳定性下降。188Re DTPA在小鼠体内血液清除快,在甲状腺、胃及其它组织中的摄取率明显低于Na188ReO4,主要经肾脏通过尿液排出体外。

^(188)Re-CEA人鼠嵌合抗体在裸鼠人结肠癌模型中的定位研究

目的 :评价1 88Re标记抗CEA人 鼠嵌合抗体在人结肠癌裸鼠模型中的肿瘤靶向性。方法 :于裸鼠尾静脉注入1 88Re CEA人 鼠嵌合抗体后 2 4、4 8、72、96h分别测定荷瘤小鼠体内组织放射性分布 ,于不同时相分别对尾静脉注射1 88Re CEA嵌合抗体及1 88Re C5 0鼠单抗的裸鼠行放免显像。结果 :1 88Re CEA嵌合抗体注射后 9 5h ,肿瘤部位开始有放射性浓聚。以后随时间的增加 ,肿瘤部位放射性持续存在并维持较高水平 ,而周围组织放射性逐渐清除。1 88Re CEA人 鼠嵌合抗体与1 88Re C5 0抗体一样在肿瘤中有很高的摄取。肿瘤组织在注射1 88Re CEA人 鼠嵌合抗体 2 4h后 ,摄取放射性占总注入量的百分比为11 0 5 % ,随时间的延长稍有增加。 96h时所有脏器T NT比均大于 2 0。结论 :1 88Re CEA人 鼠嵌合抗体可特异地浓聚于结肠癌组织 ,有望用于临床诊断和治疗。

^(188)Re-BAC_5对鼻咽癌细胞影响的实验研究

采用直接标记法制备188Re-BAC5,并测定标记物的免疫活性,应用噻唑蓝(MTT)法观察188Re-BAC5对体外单层培养的鼻咽癌细胞(CNE-2)的抑制作用。建立鼻咽癌(NPC)肿瘤多细胞微球模型,观察188Re-BAC5对微球生长的抑制和破坏作用。对照组为188Re-BSA、188ReO4。结果显示:188Re-BAC5的标记率在80%以上,标记后的免疫活性分数为61%±15%。MTT法结果表明,188Re-BAC5组的抑瘤率比对照组明显提高(P<0.05);在肿瘤多细胞微球的抑制实验中,188Re-BAC5对微球生长有强烈的抑制和破坏作用,疗效明显优于对照组。本实验提示,188Re-BAC5有可能在对人鼻咽癌的放射免疫治疗中起到良好的作用。

^(188)Re间接标记单克隆抗体的研究

采用先标记后偶联的方法 ,以NHS -MAG3 为双功能连接剂 ,研究了用188Re标记单克隆抗体的各种实验条件 ,得到了最佳标记方法和偶联方法。标记抗体188Re -NHS -MAG3 -IgG体外稳定性良好。完成了188Re -NHS -MAG3 -CL3在小鼠体内的生物分布实验 ,结果表明该配合物在体内稳定性良好。

肝癌^(188)Re放射免疫治疗的实验研究

目的：研究新型核素188Re标记的抗人肝癌单抗片段HAb18 F（ab′）2对荷肝癌移植瘤裸鼠的抑瘤效应。方法：建立荷人肝癌移植瘤裸鼠模型。选择肿瘤体积为（30～150）mm3的动物随机分5组，其中3组分别尾静脉注射188Re－HAb18 F（ab′）2 3．7、11．1和18．5MBq，给药2次，观察动物体重和肿瘤体积变化。处死动物，摘取瘤体，石蜡包埋，进行HE染色。结果：3组剂量均有不同程度的抑瘤作用，且随着剂量的增加，抑瘤效应增加。低剂量组和中剂量组动物平均体重和生理盐水对照组相比无显著性差异(P＞0．05)。组织学检查表明，随着剂量的增加，肿瘤细胞核形态发生明显的变化，从凝固、核碎裂直至溶解。结论：188Re－HAb18 F（ab′）2是一种新型核素的肝癌导向治疗剂，具有潜在的临床应用前景，本文的研究可为其过渡到临床研究提供参考依据。

^(188)Re-C50对结肠癌细胞的凋亡诱导作用

目的 观察1 88Re 抗癌胚抗原 (CEA)单克隆抗体 (简称单抗 )C5 0放射免疫治疗 (RIT)对结肠癌细胞的凋亡诱导作用。方法 BALB c小鼠结肠癌模型分为治疗与对照组 ,每组 8只。治疗组每只瘤内注射 18 5MBq1 88Re C5 0 ,对照组每只瘤体内局部注射 0 16mgC5 0。 6h后取新鲜肿瘤组织制备肿瘤单细胞悬液 ,采用流式细胞仪 (FCM)行倍体与S期细胞比例检测 ;取肿瘤组织固定后行透射电镜观察与原位末端标记法 (TUNEL)检测。结果 RIT治疗后 6hC2 6结肠癌细胞在用碘化丙啶 (PI)染色的FCM直方图上出现典型凋亡峰 ,C2 6细胞凋亡百分比为 (16 6 4± 0 12 ) % ,对照组为 0 %。肿瘤S期细胞占 (10 4 1± 1 31) % ,对照组为 (33 14± 2 0 1) %。肿瘤G0 G1 期细胞占 (6 8 6 0± 4 82 ) % ,对照组为 (35 12± 2 6 3) % ,治疗后G1 期细胞呈明显阻滞现象。TUNEL检测肿瘤细胞出现凋亡改变 ,凋亡指数 (AI)为 (2 6 4± 0 97) % ,对照组无凋亡改变发生。电镜下癌细胞出现典型的凋亡细胞形态学改变。结论 诱导结肠癌细胞凋亡是1 88Re C5 0抗肿瘤效应的重要作用机理。

^(188)Re标记多肽的研究进展

阐述了多肽放射性药物的优点 ,188Re -高铼酸钠的性质 ,188Re标记多肽的方法及其研究进展 。

^(188)Re-TCTMP的合成及在小鼠体内的分布

合成了氮杂环甲撑膦酸配体TCTMP(1,4,8,11 四氮杂环十四烷 1,4,8,11 四甲基膦酸),研究了亚锡还原下188Re TCTMP的制备条件,并探索了该配合物的体外稳定性及在正常小鼠体内分布。结果表明,pH=2,SnCl2量为0 8～1 6mg,配体量为50mg时,可以制得标记率大于95%的配合物188Re TCTMP;配合物具有很高的体外稳定性,室温下放置8d,标记率仍不低于95%。小鼠体内分布表明,配合物很快为小鼠骨骼摄取并保留较长时间;与188Re HEDP(1 羟基亚乙基二膦酸)相比,188Re TCTMP表现出更低的非靶组织摄取。因此,188Re TCTMP有望取代186,188Re HEDP,成为新型的缓解治疗骨肿瘤疼痛的放射性药物。