^(3)H─TdR体内滞留诱发生殖毒性研究

研究了摄入氚标记胸腺嘧啶核苷（^(３)Ｈ－ＴｄＲ）在机体滞留过程诱发的生殖毒性效应。拟合了^(３)Ｈ－ＴｄＲ在睾丸、肝、脾、肾、股骨和血活中的滞留方程通式为：Ｒ（ｔ）＝Ａｅ－λａｔ＋Ｂｅ－λβｔ。比较了在不同组织的快组份和慢组份的有效半减期，估算了在不同脏器部位的累积吸收剂量。^(３)Ｈ－ＴｄＲ可诱发雄性生殖细胞的生殖毒性，表现为显性致死突变和显性骨骼畸形。关于显性致死突变与摄入了^(３)Ｈ－ＴｄＲ放射性活度之间呈正相关。Ｙ＝８０ . ２０Ｉ＋７４．１３；而显性骨骼畸形享与摄入^(３)Ｈ－ＴｄＲ放射性活度间的关系式为：Ｂ＝０．０７９１＋０．１６。

两种方法测定羊外周血淋巴细胞增殖的研究

本试验比较3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法和BrdU-ELISA方法测定羊外周血淋巴细胞增殖.分离健康羊外周血淋巴细胞,与不同浓度的非特异刺激因子刀豆素A(concanavalinA,1.0,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0313,0.0156,0.0078,0.0039 μg/孔)培养,分别用3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)和5-溴-2′-脱氧尿苷(BrdU)标记细胞,测定刺激细胞和对照细胞的每分钟脉冲数cpm或光吸收值OD,计算刺激指数SI和光吸收值差ΔOD,统计学方法分析SI和ΔOD的相关程度.同样的方法测定羊试验感染肝片吸虫(Fasciola hepatica)后,在感染早期阶段(PIW0-PIW4)其外周血淋巴细胞在特异性抗原-片形吸虫分泌排泄产物(ESP,5 μg/孔)刺激下的增殖.结果表明,刺激指数SI和光吸收值差ΔOD在两个试验中的相关系数分别为0.946和0.924,SI和*OD均呈强正线性相关.BrdU-ELISA方法无同位素放射物,且敏感、快速、方便,和3H-TdR渗入法一样可以用于测定淋巴细胞增殖.

大亚湾细菌生产力研究

采用~3H-胸腺嘧啶核苷示踪法测定了大亚湾的细菌生产力,结果表明,该海区的细菌生产力(C)的变化范围为0.50×10^(-3)～30.2×10^(-3)mg/(dm^3·h),和其他海区的比较说明,在采样期间,大亚湾海域的细菌生产力是较高的,并对细菌生产力的空间分布以及相关生物、化学要素之间的相互关系进行了讨论。

体外研究银屑病患者T淋巴细胞对表皮通过时间的影响

目的 揭示T细胞在银屑病表皮动力学紊乱中的作用。方法 应用T细胞与皮肤组织体外共培养的方法检测银屑病T细胞对表皮通过时间产生的影响 ;采用3 H胸腺嘧啶核苷 ( 3 H TdR)标记体外培养的皮肤组织基底层有丝分裂S期细胞 ,放射自显影法追踪标记细胞从基底层到颗粒层的表皮通过时间。结果 未受T细胞作用的银屑病皮损表皮通过时间为 ( 4 .5± 2 .1)天 ,较正常人皮肤 ( 11.5± 3 .8)天显著缩短 (P <0 .0 1) ;银屑病外观正常皮肤 ( 8.7± 3 .2 )天与正常人皮肤比较差异无显著性 (P >0 .0 1)。银屑病外观正常皮肤及正常人皮肤分别与银屑病T细胞共培养后 ,表皮通过时间均显著缩短。结论 表皮通过时间缩短 ,表皮周转速率加快是银屑病皮损重要的表皮动力学改变 ,与银屑病皮损形态学改变密切相关 ;银屑病T细胞可以影响正常皮肤的表皮通过时间 ,表明T细胞在银屑病表皮动力学紊乱中发挥重要作用。

南极高纬度沿岸海域的细菌生产力

中国第18次南极科学考察期间,采用3H 胸腺嘧啶核苷示踪法测定了普里兹湾及邻近海区的细菌生产力,并对细菌生产力的水平、垂直分布及细菌生产力与相关要素之间的相互关系进行了研究和讨论.结果表明:该研究海域细菌生产力的变化范围为1.51~21.7 ngC·dm-3·h-1,平均为7.77 ngC·dm-3·h-1.细菌生产力空间分布特征:水平呈非均匀分布,东、南、西3面较高,北、中部较低,而垂直分布则有3种类型,即次表层极大值型、随深度递增型和极大极小叠加型.细菌生产力随培养时间的延长而增大,到一定时间后趋于最大值;细菌生产力昼夜变化的结果表明光照强度和水温对细菌生产力的测值有重要的影响.

心室成纤维细胞条件培养液促进成纤维细胞胶原合成和增殖

采用心室成纤维细胞条件培养液培养心室成纤维细胞 ,通过测定 [3H] 脯氨酸 ([3H] proline)的掺入率来了解心室成纤维细胞总胶原合成速率 ,通过测定 [3H] 胸腺嘧啶核苷 ([3H] TdR)的掺入率以及c fos基因的表达丰度来了解心室成纤维细胞的增殖速率。结果显示 :心室成纤维细胞条件培养液 (FCGM)能明显增加细胞自身的[3H] proline的掺入率和 [3H] TdR的掺入率 ,并具有剂量依赖性 ;FCGM也能促进细胞自身c fos基因的表达 ,刺激后 1h达高峰。ETA 受体拮抗剂BQ12 3能部分阻断FCGM增加成纤维细胞胶原合成和增殖作用 ,而AT1受体拮抗剂CV11974和α 肾上腺素受体拮抗剂regitin无此效果。结果提示 :心室成纤维细胞具有自分泌功能 ,能分泌内皮素等生物活性物质 。

环孢素A对晶状体上皮细胞的影响

目的 观察环孢素A(CsA)对体外培养的牛晶状体上皮细胞 (BLEC)增殖的影响。方法 对培养牛晶状体上皮细胞采用3 H TdR掺入法及MTT法 ,研究不同质量浓度CsA( 1～ 16 μg/ml)对体外培养的牛晶状体上皮细胞增殖的影响 ,并在光镜、电镜下进行观察。结果 CsA( 1～ 16 μg/ml)作用 2 4h和 72h对牛晶状体上皮细胞增殖有抑制作用 ,且呈剂量依赖性。 2 4h 5 0 %抑制质量浓度 (IC50 )为 10 37μg/ml,72hIC50 为 6 6 1μg/ml。CsA引起细胞形态学改变的主要特点是细胞胞浆内大量空泡形成 ,且随药物剂量增大 ,细胞形态改变越明显。结论 一定剂量的CsA可抑制体外培养的牛晶状体上皮细胞的增殖 ,为预防后囊混浊提供了新途径。

南极普里兹湾及其邻近海域细菌生产力的研究

本文阐述了在中国第 1 6次南极科学考察期间 ( 1 999/ 2 0 0 0南半球夏季 )运用3H 胸腺嘧啶核苷示踪法研究南极普里兹湾及其邻近海域细菌生产力的分布特征。结果表明 :该海区细菌生产力比较低 ,变化范围在 4.5— 1 91ngC·dm- 3·h- 1 ,平均为 5 0 .4ngC·dm- 3·h- 1 ,其水平与Ross海相当。细菌生产力的变化较好地反映了浮游植物变化的特性 ,BP与PP的比值为 0 .41。表层水体中BP与DOC的分布特征呈反相关关系。普里兹湾及邻近海域细菌生产力、初级生产力及溶解有机碳之间的关系表明 。

雷帕霉素阻断血管紧张素Ⅱ刺激血管内皮细胞增生的信号传导机制

目的:研究Rapamycin(Rapa)阻断血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激血管内皮细胞增生信号传导机制。方法:不同浓度AngⅡ刺激人脐静脉内皮细胞(ECV304),并用Rapa进行干预,采用3H胸腺嘧啶核苷掺入法和3H亮氨酸掺入法测定细胞DNA和蛋白质合成,流式细胞术检测细胞周期变化,免疫印迹(Westernblot)检测细胞信号蛋白P70s6k,ERK2及细胞周期蛋白CyclinD1、CyclinA、和CyclinB1表达的变化。结果:AngⅡ刺激细胞24h。细胞DNA和蛋白质合成均增加,并呈剂量依赖效应。AngⅡ10-6M组与对照组比较P70s6k,ERK2表达分别上调108.7%,54.7%,Rapa完全阻断P70s6k和CyclinD1的活化,而不影响ERK2的表达。结论:Rapa通过阻断PI3Kp70S6K信号通路抑制AngⅡ诱导的血管内皮细胞增生,抑制细胞周期蛋白CyclinD1的表达,阻止细胞G0/G1→S期。

神经生长因子对体外培养的大鼠颈上节神经突起生长及RNA和DNA合成的作用的放射自显影研究

神经生长因子(NGF)可促进靶神经节神经突起生长晕的生长。本文应用^(3)H-尿嘧啶核苷和^(3)H-胸腺嘧啶核苷放射自显影术,进一步研究该作用与神经元合成RNA和DNA的关系。用新生大鼠颈上节,按Maximow双盖片法进行培养。培养物分NGF组(培养液内添加NGF粗制剂)和对照组(不用NGF)。NGF组培养物被^(3)H-尿嘧啶核苷标记的神经元百分率及标记颗粒水平,均高于对照组,而且每当培养物神经突起生长晕生长速度即将出现高峰时,神经元^(3)H-尿嘧啶核苷标记颗粒水平都明显地增高,说明NGF可促进颈上节神经元的RNA合成,后者与神经突起的迅速生长有一定相互关系。在^(3)H-胸腺嘧啶核苷标记培养物神经元的实验中,观察到NGF可促进培养第3天的颈上节少量的神经元合成DNA。

甲醛对V79细胞DNA、RNA合成影响的体外实验研究

目的 研究甲醛对V79细胞DNA和RNA的损伤作用 ,探讨甲醛遗传毒性的分子机制。方法 中国仓鼠肺细胞 (V79)分别暴露于浓度为 75 ,15 0 ,30 0 ,6 0 0 μmol/L的甲醛中 ,1h、2h、4h ,采用3 H -胸腺嘧啶核苷 ( 3 H -TdR)、14 C -尿嘧啶核苷 ( 14 C UR)掺入技术检测甲醛致V79细胞DNA和RNA损伤情况。结果 所有 4个浓度组甲醛均明显影响细胞DNA和RNA的合成 ,3 H TdR和14 C UR掺入计数每分衰变数 (dpm值 )显著低于对照组 (P <0 .0 1) ,并有明显的剂量 -效应关系 (P <0 .0 1)。细胞暴露在甲醛中 4h ,各浓度组3 H TdR和14 C UR掺入dpm值显著低于暴露于 1h和 2h各浓度组的dpm值 (P <0 .0 1)。 结论 甲醛可以影响V79细胞DNA和RNA合成 。

表皮生长因子对猫角膜内皮细胞DNA合成的影响

目的 观察人表皮生长因子 (EGF)对体外培养的猫角膜内皮细胞损伤愈合速度及DNA合成的影响。方法 猫角膜内皮细胞体外培养传一代融合后 ,定量损伤直径 3mm范围内的细胞 ,培养液中加入 1、10、5 0和 10 0ng/mlEGF ,对照组不加EGF ,损伤后 1、3、5天倒置显微镜下照相转入计算机测量未愈合面积 ,作为判断不同浓度EGF影响角膜内皮细胞损伤愈合速度的指标。培养液中加入3 H 胸腺嘧啶核苷 ( 3 H -TdR) ,应用液体闪烁计数仪测量3 H TdR的掺入量 ,反映不同质量浓度EGF对角膜内皮细胞DNA合成的影响。结果 一定质量浓度的EGF加快猫角膜内皮细胞损伤愈合速度并促进DNA合成 ,显示剂量依赖性 ,10～ 5 0ng/ml时加快愈合速度作用达高峰 ,10ng/ml时促进DNA合成作用达高峰 ,浓度再增高时作用下降。结论 一定质量浓度的EGF能促进体外培养的猫角膜内皮细胞损伤愈合速度 ,并促进其DNA合成。

大鼠心室成纤维细胞培养液对自身细胞增殖的作用

利用成纤维细胞培养、同位素掺入测定和RT PCR方法 ,探讨心室成纤维细胞条件培养液促进成纤维细胞自身增殖作用。心室成纤维细胞条件培养液能明显增加细胞 [3H] 胸腺嘧啶核苷的掺入率 ,并具有剂量依赖性 ;促进细胞自身的c fos基因的表达 ,刺激后 1h达高峰。ETA 受体拮抗剂BQ12 3 能部分阻断条件培养液增加成纤维细胞增殖作用 ,而AT1受体拮抗剂CV11974和α 肾上腺素受体拮抗剂regitin无此效果。提示心室成纤维细胞具有自分泌功能 ,能分泌内皮素等生物活性物质 。

槲皮素及异鼠李素对人血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的观察槲皮素(QUE)及异鼠李素(ISOR)对培养人血管平滑肌细胞增殖的影响。方法本实验利用培养的人主动脉平滑肌细胞(VSMC),采用细胞计数、3H-胸腺嘧啶核苷酸(3H-TdR)掺入法,观察QUE、ISOR、去甲肾上腺素(NE)对VSMC增殖、DNA合成的影响,以及QUE、ISOR、酚托拉明(Ph)对NE促VSMC增殖、DNA合成的的影响。结果①QUE有明显抑制VSMC增殖、DNA合成的作用,而ISOR作用较弱。在所观察的1～200(滋mol/L的浓度范围内,QUE和ISOR均在200滋mol/L浓度发挥了最大的抑制作用,其抑制作用有剂量依赖关系。②NE有促进VSMC增殖、DNA合成的作用,而这些促进作用能被Ph所阻滞。③QUE和ISOR均剂量依赖地抑制NE促VSMC增殖和DNA合成的作用,且QUE和ISOR有明显的协同作用。④QUE和ISOR对NE刺激作用的抑制明显强于Ph的作用。⑤QUE和ISOR对VSMC无细胞毒作用。结论QUE和ISOR是细胞毒性很低,对VSMC的增殖、DNA合成尤其是对NE刺激的VSMC增殖、DNA合成有很强的抑制作用的天然黄酮类物质。

老年前期正常人外周血淋巴细胞转化率实验室观察

目的:研究正常人老年前期免疫功能水平。方法:对所在社区及周边部分老年前期正常人用3H-TDR掺入法测定淋巴细胞转化率(以下简称淋转率)。结果:老年前期女子组淋转率平均值为246.17,老年前期男子组淋转率均值185.14,中青年对照组淋转率均值为455.31(P<0.01)。

鞘内泵入吗啡对大鼠细胞免疫功能的影响

目的观察镇痛剂量吗啡鞘内泵入对大鼠细胞免疫功能的影响。方法40只雄性SD大鼠随机分为5组(n=8):假手术组(F组)、生理盐水组(NS组)、M1、M2、M3组(吗啡泵入速率分别为25、5、10μg·h-1)。除F组外各组采用改良Yaksh法进行鞘内置管,置管后5d采用Alzet泵持续泵人生理盐水或吗啡,共7d。第7天各组大鼠进行福尔马林炎性疼痛实验,根据痛级(PIS)评分评价吗啡镇痛效应,处死大鼠后计算睥脏指数并分离脾脏单个核细胞进行培养,甲基-3H胸腺嘧啶核苷掺入法检测脾T淋巴细胞增殖水平,乳酸脱氢酶释放法检测自然杀伤细胞活性。结果与NS组比较,MI、M2、M3组在福尔马林炎性疼痛第一时相和第二时相的PIS评分值、脾脏指数、脾脏T淋巴细胞增殖转化水平和NK细胞活性降低(P<0.05或0.01);与M1组比较,M2、M3组脾脏T淋巴细胞增殖转化水平及NK细胞活性降低(P<0.05);与M2组比较,M3组脾脏NK细胞活性降低(P<0.05)。结论镇痛剂量吗啡鞘内泵入可抑制大鼠细胞免疫功能,且泵入速率越大,免疫抑制效应越明显。

携tPA和VEGF165基因共表达质粒生物学功能研究

目的 观察组织纤溶酶原激活物(tPA)和血管内皮生长因子16 5 (VEGF16 5 )基因在血管内皮细胞(VEC)中的表达产物对VEC增殖和纤溶的影响。方法 将含有tPA和VEGF16 5的共表达质粒pBudCE4 1/tPA VEGF16 5导入VEC中,RT PCR法和Westernblot法分别从mRNA水平和蛋白质水平检测被转染VEC中的tPA和VEGF16 5表达;纤溶蛋白板法检测转基因VEC培养液的纤溶活性;用3 H胸腺嘧啶核苷掺入法( 3 H TdR)和流式细胞技术观察转基因VEC培养液对VEC和VSMC增殖的影响。结果 pBudCE4 1/tPA VEGF16 5转染VEC后,tPA和VEGF16 5分别在mRNA和蛋白质水平均有表达;转基因培养液有纤溶活性,并对VEC增殖有显著作用,而对VSMC增殖无作用。结论 pBudCE4 1/tPA VEGF16 5能在VEC表达出有生物学活性的tPA和VEGF16 5。