^(35)S标记重组人GAD_(65)抗原检测糖尿病患者GAD-Ab指数

目的 建立一种新的谷氨酸脱羧酶抗体 (GAD Ab)检测方法。方法 采用重组人GAD6 5质粒 ,经试管内转录与翻译 ,获得35S GAD6 5抗原 ,35S GAD6 5与血清在自制旋转孵育器上旋转保温 ,以蛋白质A 琼脂糖作为沉淀剂 ,用计数仪测沉淀物放射性计数 ,以GAD Ab指数 >0 .0 5作为阳性标准 ,并检测 4 3例 1型和 2 2 6例 2型糖尿病患者 ,以及 10 9例正常对照者的GAD Ab水平。结果 检测条件优化 :采用SJ15 15型35S 蛋氨酸进行试管内转录与翻译 ,自制旋转孵育器转速控制在 2 0～ 30r min ,操作环境温度为 4～ 2 5℃ ,缓冲液最佳pH值为 7.2～ 7.4 ,且新配制使用不宜超过 2周 ,以及采用水平转头离心机等。该方法批内变异系数 (CV)为 4 .9%～ 8.3% ,批间CV为 7.1%～ 10 .8% ,特异性为 98.2 % ,结果与国际标准化实验室GAD Ab检测一致率 98.3% ,Kappa值 0 .971,优于原放射配位体法。该方法检测 1型糖尿病患者阳性率为 5 8.1% (2 5 4 3例 ) ,2型糖尿病患者为 10 .2 % (2 3 2 2 6例 ) ,对照组为1.8% (2 10 9例 ) ,差异均有显著性 (P <0 .0 0 1)。结论 该方法检测GAD Ab灵敏、特异性强、重复性好 ,可望得到广泛应用。

^(35)S标记重组植物钙调素的制备方法

利用3 5S标记的氨基酸混合物喂养工程菌 ,成功地制备了3 5S标记的拟南芥钙调素亚型 2 (3 5S ACaM2 ) ,对其纯度、放射活度、电泳行为及其灵敏性等进行了检测 .结果表明从工程菌中制备的3 5S ACaM 2纯度高、放射活度高、Ca2 + 与EGTA存在时的电泳行为与未标记的ACaM2相同 。

[^(35)S]-甲硫氨酸掺入法测定某些补益药活性成分对Aβ分泌速率的影响

[^(35)S]-甲硫氨酸掺入法测定细胞Aβ分泌速率,观察知母活性成分ZMS和黄芪活性成分AST和HT,及两药合用对Aβ生成速率的影响。用[35S]-甲硫氨酸标记转染APP695基因的细胞,所获细胞上清以Aβ22-35单克隆抗体进行免疫共沉淀,结合Western印迹法,以配对对照(加载体)的Aβ条带灰度值为1,计算各用药组灰度的相对强度。本方法能稳定地测到细胞在24—72h内分泌的Aβ量,同一受试样品在不同批实验中的变异(CV)在17%—32%之间。在培养液中中药活性成分的浓度为1×10?5mol/L时,受试物质中AST及ZMS+AST合用对Aβ的分泌速率有明显抑制作用(P<0.01)。另两种受试物则无作用。黄芪活性成分AST有抑制Aβ分泌的作用,ZMS与AST两药合用作用更为显著。

玉米幼苗根系对硫酸盐(Na_2^(35)SO_4)亲和性配合力的研究

本文以来源不同的９个玉米自交系及其按双列杂交组合的３６个杂交种为材料，研究了玉米幼苗根系对硫酸盐（Ｎａ２３５ＳＯ４）亲和性（Ｋｍ）的配合力。结果表明：Ｋｍ以非加性基因效应较重要，Ｋｍ与产量间有密切关系。鉴定出可供玉米育种利用的２个自交系合二和２９２及其有更广泛适应性和高产特性的３个杂交组合：５００５、５０２２、５０３０。

^(35)S标记法研究土壤中SO_4^(2-)的吸附-解吸行为

本文比较了~35S同位素标记法和两种常规化学分析、一种电化学分析法测定环境样品中SO_4~2-的优劣.用本法和BaCrO_4分光光度法研究土壤对SO_4~2-的吸附-解吸特征,表明两者测定结果接近,且所得规律一致.酸雨研究中,在样品数量多、SO_4~2-分析任务重且仪器、设备条件具备时,本法为便捷、准确、较理想的SO_4~2-测定技术.

^(35)S同位素交换法制备二种含硫农药中间体

一、引言马拉硫磷和杀螟松是含硫的高效低毒有机农药,可防治棉花、果树等多种虫害,在我国已使用多年,现发现按不同配比将它们与其它农药混合使用,可提高药效。为进一步研究它在植物中的代谢过程及其产物,研究它在农作物上的残留动态。

抗抑郁剂对大白鼠脑内激活剂刺激的5-HT_(1A)与[^(35)S]GTPγS结合的影响(英文)

电生理研究证明 ,焦虑与忧郁剂治疗的神经生物学机制取决于影响特异性的解剖区域对 5 -HT1A受体敏感的适应性。此外 ,临床上用相应的抗焦虑 /抗忧郁药剂重复处理 ,在前脑的作用表现为增进 5 -HT的神经传导 ,尤以海马最显著。药物处理 2～ 3周后 ,可减少抑制性体树突自动受体的敏感性 ,增加突触后的受体敏感性 ,或两者兼备。使用对氮 ,氮 -二丙基 -5 -氨基色胺刺激的鸟苷 -5 '-氧-( 3-硫代 )三磷酸盐 ( [35S]GTPγS)结合体进行放射自显影照相的方法评估 ,测定了该假设。将大白鼠用生理盐水或药剂处理 2 1d ,每天处理 1次 (mg/kg :fluoxetine ,1 0 ;imipramine ,1 0 ;clorgyline ,1 )或每天处理 2次 (ipsapirone,2 0mg/kg)。检测了 3个富含 5 -HT1A受体的脑区 :背中缝核 (DR ;体树突 ) ,背侧海马 (DH)和外侧隔区 (LS) (突触后 )。只有imipramine( +1 7% )和fluoxetine( +5 4 % )显著地增加了背侧海马上激活剂结合在背侧海马。除了imipramine ,所有药剂均减少在背侧中缝核的结合 ( -1 9到-4 1 % )。尽管总的说来结果支持增进海马 5 -HT的神经传导的概念 ,但受体敏感性变化的模式与电生理的研究结果仍稍有不同。然而 ,最一致和最显著的结果是四种药剂处理均在外侧隔区 (LS)降低 [35S]GTPγS结合 ( -1 4到

^(35)S-多噻烷的制备

(35)~S-多噻烷,即(35)~S-7-二甲氨基-1,2,3,4,5-五硫环辛烷,是由Na_2^(35)SO_4制备Na_2^(35)S,进而制备Na_2^(35)SS_x,再与氯化物缩合而成,放化收率33.6％,放化纯度97％。

福美双-^(35)S的制备

我们采用硫酸钠-^(35)S作为放射性起始原料,其中经过硫化氢-^(35)S和二硫化碳-^(35)S二个中间产品,然后制得福美双-^(35)S成品。化学和放化产率都达到85％以上(按二硫化碳计算),化学和放化纯度均为99％左右,比活度为0.16GBq/mmol。

~3H和^(35)S双标记抗癌药物环硫铂(SHP)

1969年Rosenberg等人,首次报道了顺铂络合物具有广谱性的抗癌活性,得到医学界的关注。由于药代动力学研究的需要,因此对铂络合物进行了氚标记,同时也开展了~3H和^(85)S双标记环硫铂的研究工作。环己二胺二氯铂(简称:环氯铂,DDP)为黄色结晶粉末;环已二胺硫酸铂(Sulfato-1,2-diaminocyclohexane-platinum,简称环硫铂SHP)为白色结晶粉末,易溶于水。化学反应式示于图1。

Saponin对不同趋化因子受体的活化的影响研究

通过在稳定表达趋化因子受体的细胞系CHO/CXCR1、CHO/CXCR2、CHO/CXCR3、CHO/CXCR4和CHO/CCR5上进行[35S]GTPγS结合实验,研究了Saponin对不同趋化因子受体活化的影响。实验结果表明:(1)对于CHO/CXCR1和CHO/CXCR4,在反应体系中添加10μg/mlSaponin能提高受体G蛋白与[35S]GTPγS的特异性结合,使刺激比率(CPMAgonist/CPMBasal)分别从125%和184%扩大到481%和415%;(2)对于CHO/CCR5,10μg/mlSaponin对受体G蛋白与[35S]GTPγS的特异性结合无影响,刺激比率大小未变;(3)对于CHO/CXCR2和CHO/CXCR3,10μg/mlSaponin降低了受体G蛋白与[35S]GTPγS的特异性结合,使刺激比率分别从171%和168%减小到130%和114%。实验结果表明Saponin是与受体发生作用,对于不同的趋化因子受体,Saponin对受体的活化的影响不同。

糖皮质激素与炎症因子对应急时相反应蛋白SIP24/24p3的协同调控作用及其意义(英文)

小鼠应急时相反应蛋白SIP24/24p3有抗炎症和特异性诱导白细胞凋亡的功能,其在体内的表达是高度特异性的。为研究 SIP24/24p3的调控因子及机制,我们在小鼠 Balb/cT3和 BNL细胞培养中通过灵敏的^(35)S代谢标记方法检测SIP24/24p3蛋白的表达水平,定量观测分析了糖皮质激素化合物dexamethasone对SIP24/24p3的诱导作用及其与炎症因子白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的协同调控作用。结果显示:(1)在Balb/c 3T3和BNL细胞中,dexamethasone对SIP24/24p3都有明显诱导作用,这种诱导作用在BNL细胞中尤其显著;(2)在Balb/c3T3和BNL细胞中dexamethasone与IL-6协同诱导SIP24/24p3;(3)在Balb/c 3T3细胞中dexamethasone与TNF-α对SIP24/24p3有协同诱导效应,而在 BNL细胞中 dexamethasone与 TNF-α对 SIP24/24p3的诱导表现为相加效应;(4)在 Balb/c 3T3和BNL细胞中 dexamethasone与IL-6/TNF-α对SIP24/24p3的诱导分别表现出协同和相加效应。多种因子对SIP24/24p3的协同诱导调控有助于阐明其在体内的高度特异表达及机制,SIP24/24p3在不同细胞中的不同表达格局也对体内应急时相反应蛋白在肝脏外和肝脏内的表达方式及诱导机制有提示作用。SIP24/24p3能同时被 炎症因子和抗炎症因子诱导的事实显示了其在炎症全过程中的重?

AT基因13387-9delG突变引起遗传性抗凝血酶缺陷症的分子病理机制研究

目的 研究AT基因 13387 9delG突变引起AT缺陷症的分子病理机制。方法 用大引物法构建 13387 9delG突变体AT重组表达质粒 (ATM) ,并将其和正常AT重组表达质粒 (ATN)分别用Superfect 试剂转染COS7细胞或CHO细胞 ,进行体外表达试验、脉冲追踪试验以及细胞免疫荧光染色。结果 ATM转染的COS7细胞培养上清液中检测不到AT抗原 ,而在细胞裂解液中 ,其AT抗原仅为转染ATN的 2 7 13%。脉冲追踪试验发现 ,在ATM转染的COS7细胞培养上清液中 ,检测不到3 5S标记的AT蛋白 ,在chase 0min时 ,ATM细胞内3 5S标记的AT蛋白只有ATN的 2 7 8% ;在chase 180min时 ,ATM细胞内3 5S标记的AT蛋白为 0min时的 5 0 %左右。细胞免疫荧光试验的结果表明 ,ATM转染的CHO细胞内荧光强度明显低于ATN转染的CHO细胞。结论 编码的突变AT蛋白分泌障碍和细胞内快速降解 ,是AT基因 13387

EB病毒基因在鼻咽癌组织转录表达的研究

本研究在转录水平上,利用转录载体PGEM-2与两种EB病毒基因片段(LMP和FBER-1)分别构建重组质粒,以SP^6和T^7RNA聚合酶合成含有~35标记的单链反义RNA(Anti-sense RNA或cRNA)和正义RNA(sense RNA),并分别与经病理确诊的鼻咽癌组织40例进行组织原位杂交,结果显示与40例鼻咽癌组织原位杂交后,LMP单链反义RNA有36例呈阳性,其阳性率为90％;EBER-1反义RNA40例均呈阳性,阳性率为100％;两种基因片段的单链正义RNA均为阴性。

γ线全身照射对小鼠血小板生成的影响

采用^(35)S体内掺入骨髓巨核细胞的方法,观察了小鼠经2、4、6、6、8和10 Gy^(60)Coγ线照射后2、4、6、8、10、14、18、24、30和40d血小板生成的动态变化。结果表明:照后2d除10Gy组外,各剂量组血小板生成有增强趋势;血小板生成量开始下降时间、下降程度和恢复速度与照射剂量有一定相关,但各剂量组下降斜率之间无显著差异,而且大约都在7-8d达到最低点;8Gy以下照射后小鼠血小板生成量可自行恢复到正常水平,在恢复期中,2、4和6Gy组可出现一过性血小板生成超常;外周血小板计数的变化模式与血小板生成量的变化模式大致相同,但前者变化的波动范围较小。

IL-6及TNF-α对小鼠急相蛋白SIP24/24p3的调节作用及其意义

SIP24/24p3为一小鼠分泌的应急时相反应蛋白,SIP24/24p3在体内的表达是高度组织特异的,其功能包括抗炎症及特异性诱导白细胞凋亡。为研究SIP24/24p3的调控因子及机制,我们在细胞培养中通过35S代谢标记方法定量检测了炎症因子IL-6和TNF-α对SIP24/24p3蛋白的诱导作用。结果显示:IL-6在BALB/c 3T3细胞中诱导SIP24/24p3.在BNL细胞中无诱导作用,而TNF-α在BMLB/c 3T3和BNL细胞中对SIP24/24p3都有诱导作用;IL-6对SIP24/24p3表达的剂量效应在BALB/c 3T3细胞中呈正相关,在BNL细胞中无相关性;TNF-α对SIP24/24p3表达的剂量效应在BALB/c 3T3和BNL细胞中都呈正相关,但在BNL细胞中高浓度的TNF-α导致SIP24/24p3表达量有所降低;在BALB/c 3T3细胞中IL-6和TNF-α对SIP24/24p3的表达有同等诱导作用;而在BNL细胞中FNF-α对SIP24/24p3的表达起主导作用,IL-6是一种起扩增作用的第二诱导信号。这有助于解释SIP24/24p3在体内的高度特异表达,也为阐明应急时相反应蛋白在不同组织中的调控机制提供了依据。