人参皂甙20（S）-protopanaxadiol的^2H、^3H标记及其在A549细胞内的浓度

分别用钠硼氘、钠硼氚还原人参皂甙Rh1的活性形式20(S)-protopanaxadiol(aPPD)的氧化前体aPPD=O,制备2H3、H标记的aPPD。标记物经薄层层析(TLC)、质谱(MS)、核磁共振(1HNMR)分析鉴定,结果与标准品的测量数据一致;氚标记的aPPD放化纯度为98%,放射性比活度为7.64×1011Bq/g。将3H-aP-PD作用于人肺腺癌A549细胞,检测不同时间细胞浆及细胞核中3H的活度,结果提示aPPD在A549细胞浆、核内均于24 h达到最高浓度,表明aPPD作为一个与甾体类激素结构相类似的药物,可以进入细胞甚至细胞核发挥药理作用。

研究乙炔催化二聚反应机理的~3H方法

本工作提出了用~3H标记研究乙炔催化二聚反应机理的方法,陈荣悌等提出的乙炔催化二聚反应机理表述如下: 实验结果给出催化反应体系的放射性计数高于没有催化剂的反应体系两个数量级,证明有~3H^+存在。因此证实了上述机理的可能性。

肿瘤细胞^3H-葡萄糖代谢测量方法的建立

目的检测肿瘤细胞在单位时间内的葡萄糖利用率。方法将数量为2.5×10^5的HCT116结肠癌细胞培养至贴壁,在培养基中加入^3H定位标记（5位碳原子）的葡萄糖,30 min后终止反应,采用阴离子交换树脂滤去大分子代谢产物,通过液体闪烁计数法测量流出液中氚水的每分放射性计数,计算得到单位数目的 HCT116细胞在30min内的葡萄糖代谢率。结果当层析柱内的层析液体积大于5.0 ml时,层析柱对^3H-葡萄糖标准液内葡萄糖的吸附率几乎达到100%（99%）;30 min内3.7×10^5的HCT116细胞的葡萄糖代谢率约为1.23%。结论该方法通过在细胞培养液中加入同位素^3H定位标记的葡萄糖,可以准确定量测定肿瘤细胞的葡萄糖代谢率,从而为研究不同种类肿瘤细胞糖代谢及能量供给提供可靠的实验方法。

转基因细胞移植对损伤脊髓天门冬氨酸受体的影响

[目的]研究腺病毒介导的脑源性神经生长因子(brainderivedneurotrophinfactor,AxCABDNF)转基因细胞移植和大剂量甲基强的松龙对大鼠损伤脊髓组织N甲基D天门冬氨酸(NMDA)受体的影响。将成年大鼠分为4组,A组单纯脊髓损伤组;B组脊髓损伤+AxCABDNF基因转染的成肌细胞移植组;C组脊髓损伤+甲基强的松龙组;D组脊髓损伤+细胞移植+甲基强的松龙组。应用后1、3、7、14d,采用[3H]标记的地卓西平马来酸盐([3H]MK801)放射性配基分析法检测大鼠损伤后脊髓NMDA受体的变化。[结果]发现各组[3H]MK801放射性配基分析最大结合容量都有不同程度的减少,其减少程度顺序是A组>B组>C组>D组。表明应用甲基强的松龙(MP)和BDNF转基因细胞移植可以通过影响脊髓NMDA受体减轻脊髓继发性损伤。

17β-雌二醇对培养的乳鼠心肌细胞肥大的影响

目的观测17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)对肾上腺素(PE)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的影响并探讨其机制。方法以培养的乳鼠心肌细胞为模型并分组给药,用计算机图像分析软件测量心肌细胞表面积,[3H]标记亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率,免疫细胞化学方法检测心肌细胞原癌基因c-fos蛋白表达,半定量RT-PCR检测心肌细胞肥大特征性胚胎型基因β-肌球蛋白重链(β-MHC)、α-骨骼肌肌动蛋白(α-skA)和心房肽(ANP)的mRNA表达。结果17β-雌二醇明显抑制肾上腺素诱导的心肌细胞表面积和蛋白质合成速率的增加;17β-雌二醇减弱肥大心肌细胞c-fos蛋白表达;17β-雌二醇降低β-MHC、α-skA的mRNA表达,但增加ANP mRNA表达。结论17β-雌二醇可抑制心肌细胞肥大,其作用机制可能与抑制原癌基因c-fos的蛋白表达,逆转收缩蛋白基因(β-MHC和α-skA)向胚胎型转化及促进ANP mRNA表达有关。

ABCG5和ABCG8在肝细胞胆固醇转运中的作用

目的验证ABCG5和ABCG8在胆固醇转运中的作用。方法通过脂质体介导将含ABCG5或ABCG5和ABCG8的质粒导入7721细胞系,通过抗生素G418、zeocin筛选获得新的细胞系7721-G5与7721-DG。用RT-PCR及Western blot等方法证明细胞系7721-G5与7721-DG中分别含有ABCG5,ABCG5和ABCG8。7721、7721-G5、7721-DG细胞系分别用[3H]标记的胆固醇、游离胆固醇、卵磷脂、无脂血清作用使细胞内胆固醇饱和,随后用牛磺胆酸钠/卵磷脂受体系统进行胆固醇外运实验。每60 min测定培养液中[3H]标记的胆固醇含量,计算外运的胆固醇数量。结果研究发现转染后含有ABCG5和ABCG8的7721-DG细胞系胆固醇转运能力明显高于其余两株细胞系,而仅含有ABCG5的7721-G5细胞系胆固醇转运能力无明显变化。结论ABCG5与ABCG8具有促进胆固醇外运的作用,两者必须形成异二聚体才能行使这种作用。此外,用myc和HA标记后并不影响ABCG5和ABCG8发挥功能。