^3H-TdR掺入法检测镉致鲫外周血单个核细胞的增殖抑制

以Cd2+浓度1.25、2.503、.75 mg.kg-1腹腔注射染鲫后,用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法研究镉对鲫外周血单个核细胞(PBMC)增殖的影响.检测鲫PBMC的增殖.结果显示:1.25 mg.kg-1组与对照组在不同时间放射性活度(dpm)的差异均无显著性;0d和3d时各染镉组与对照组dpm的差异均无显著性;5d时2.50 mg.kg-1及3.75 mg.kg-1组与对照组及1.25 mg.kg-1组dpm的差异有显著性且呈剂量效应,7d和10d时dpm与5d时基本相同;14d时3.75 mg.kg-1组与其余组dpm的差异有显著性,但已出现缩小的趋势.因此低浓度Cd2+对鲫PBMC增殖的影响不大,高浓度Cd2+则能诱导鲫PBMC增殖抑制.

流式细胞术法与^3H—TdR掺入法观察细胞增殖的相关性研究

目的:研究3H TdR掺入法和流式细胞术法研究指标的相关性, 探讨用流式细胞术法来替代3H-TdR掺入法的数据依据。方法: 用3H -TdR掺入法和流式细胞术法对细胞DNA合成和有丝分裂进行检测。结果: 流式细胞仪指标与3H-TdR掺入实验指标呈高度的正相关关系, 相关系数分别为: PI与cpm相关系数为r=0. 964;SPF与3H TdR,掺入的相关悉数r=0. 876,且经检验有统计学意义 (P<0. 01 )。结论:主动脉平滑肌细胞增殖指数、S期细胞分数与3H TdR掺入值密切相关。

^3H—TdR掺入法检测鸡不同组织淋巴细胞增殖反应的条件优化

为了检测感染免疫抑制病毒后鸡群的细胞免疫变化，以建立的^3H—TdR掺入法观察了外周血、脾脏、胸腺、法氏囊中淋巴细胞的增殖反应，对影响该方法的细胞密度、丝裂原浓度（ConA或LPS）、犊牛血清（FCS）浓度等条件进行优化。结果表明，外周血淋巴细胞增殖试验的最佳条件：细胞10^5～10^6／mL，ConA5mg／L，FCS10％；脾脏中淋巴细胞最佳条件：细胞5×10^6／mL，ConA10mg／L，FCS10％；胸腺中淋巴细胞最佳条件：细胞10^6／mL，ConA40mg／L，FCS10％；法氏囊中淋巴细胞最佳条件：细胞5×10^6／mL，LPS40mg／L，FCS10％。

^3H—SAM掺入法检测胃癌DNA甲基化水平

目的：探讨人胃癌ＤＮＡ甲基化情况及检测方法。方法：以甲基化酶温育与３Ｈ－ＳＡＭ掺入法检测２１例人胃癌癌旁和外周正常区域的总基因组ＤＮＡ甲基化水平，并与相同标本的ＨｐａⅡ／ＭｓｐⅠ酶解、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｏｌｔ分析癌基因甲基化的结果相比较。结果：发现前者检测癌细胞甲基化的敏感性高于后者；而对于癌前病变区，前者的阳性率又低于后者；两种方法都显示癌细胞总基因组ＤＮＡ甲基化和ｃ－ｍｙｃ，ｃ－Ｈａ－ｒａｓ癌基因甲基化水平降低。结论：在人胃癌发生中有ＤＮＡ甲基化的改变，两种检测ＤＮＡ甲基化方法的结果有所不同，可相互借鉴和补充。

应用^3H—TdR掺入法对SMMC-7721细胞株药敏试验条件的探讨与应用

目的探讨3H-TdR掺入法在进行SMMC-7721系细胞肿瘤药敏试验实验时的最佳实验条件。方法确定出3H-TdR掺入法药敏实验时的最适细胞浓度、最适实验药物浓度3、H-TdR掺入最适时间;在最适条件下采用3H-TdR掺入法测定肝癌SMMC-7721细胞株对临床常用的9种抗癌药物的敏感性。结果应用3H-TdR掺入法检测肝癌SMMC-7721细胞株药敏试验的最适实验细胞浓度为1×104个/孔,最适试验药物浓度为1×PPC,3H-TdR最适掺入时间为收集细胞前8 h;肝癌SMMC-7721细胞株对DDP、ADM、5-FU、CPT高度敏感,对MTX、VP-16、MMC、NVB低度敏感,对PYM不敏感。结论3H-TdR掺入法可用于肿瘤药物敏感性测定并确定出它的最适实验条件。

大鼠呼吸道上皮细胞~3H-TdR标记指数

本文利用~3H-TdR 掺入技术研究大鼠呼吸道上皮细胞的标记类型和数量。大鼠腹腔注射7.4×10~4Bq/g(体重)~3H-TdR6小时后,制片计数气管和支气管上皮标记及非标记的基底细胞和粘液细胞,计算出标记指数。结果表明,气管及支气管基底细胞标记指数分别为0.0052和0.0198,粘液细胞标记指数分别为0.0014和0.0047,说明两类细胞都是具有分裂能力的癌形成相关细胞。

硒酸钠对人前列腺癌细胞PC-3细胞株活力和增殖的影响

目的:研究硒酸钠(一种主要的无机含硒化合物)对人前列腺癌细胞系PC3生长和增殖的影响。方法:用硒酸钠对体外培养的人前列腺癌细胞PC3进行药物处理,然后用MTT法测定细胞的活力,用3HTdR掺入法测定细胞的增殖情况。结果:24小时作用时,硒酸钠中剂量组A值显著低于对照组,高剂量组A值与对照组有极显著差异。48小时作用时,硒酸钠低剂量组A值显著低于对照组,中剂量和高剂量组A值与对照组有极显著差异;48小时的硒酸钠处理抑制PC3细胞的增殖,中剂量组与对照组相比有显著差异,高剂量组与对照组有极显著差异。结论:硒酸钠可抑制PC3细胞的活力,抑制细胞增殖,并且这两种作用都呈剂量依赖效应。

人参单体皂甙Rh_2对前列腺癌细胞株PC-3M细胞移行周期的影响

目的 :探讨Rh2 对体外培养的PC - 3M细胞移行周期的影响。方法 :应用 [3 H]-TdR掺入法和流式细胞仪测定DNA含量及进行细胞周期的分析。结果 :PC - 3M细胞的 [3 H]-TdR掺入量明显少于对照组 (P <0 0 1) ;流式细胞仪测定G1期细胞数百分比明显高于对照组。结论 :Rh2 可使PC - 3M细胞增殖周期阻滞在G1期 ,肿瘤细胞增殖减慢。

17β-雌二醇对人成骨样细胞OS-732增殖和分化的影响

采用绘制生长曲线３Ｈ－ＴＤＲ掺入、ＡＬＰ、ＢＧＰ的定量测定、免疫组化、原位杂交等和光镜等方法，探讨了１７β－雌二醇对ＯＳ－７３２细胞增殖和分化的影响及对骨粘连蛋白（ＯＮ）ｍＲＮＡ表达的影响。结果显示：１７β－雌二醇以剂量依赖性促进ＯＳ－７３２细胞的增殖，其中以１０－８ｍｏｌ／Ｌ浓度作用最强；１７β－雌二醇可以轻度降低ＡＬＰ的活性和ＢＧＰ的分泌，对ＯＳ－７３２细胞分化有轻微抑制作用。免疫组化实验结果表明ＯＳ－７３２细胞上存在ＥＲ受体，且给药后核内ＥＲ增多，为雌激素直接作用于成骨样细胞提供了一个例证。原位杂交结果表明ＯＳ－７３２上存在（ＯＮ）ｍＲＮＡ的表达，而给药后无明显变化。

黄芪总提物的免疫调节作用

目的:研究黄芪总提物(TAE)的免疫调节作用。方法:以DNFB诱导小鼠迟发超敏(DTH)反应作为模型,用耳肿胀度作为主要的检测指标。以3H-TdR掺入法研究TAE体外对ConA或LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应;以活化脾细胞法检测IL-2。结果:TAE3个剂量对Cy降低或升高的小鼠DTH反应均能恢复或接近正常水平;TAE对亚适浓度ConA或LPS诱导小鼠脾淋巴细胞的增殖反应与产生IL-2均有明显的促进作用,量效曲线均呈典型的钟罩型。结论:TAE具有机能和浓度依赖性的双向免疫调节作用。

四环素对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用

目的 探讨四环素对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的生物学作用。方法 将不同浓度的四环素(1、5、20、100、500、2 500 μg/ml)加入体外培养的HPDLFs中,孵育2 d后,在倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并用MTT法、考马司亮蓝法及3H-TdR掺入法,分别检测四环素对细胞的增殖活性、蛋白合成及DNA合成的影响。结果在1-100μg／ml的浓度范围内,细胞形态呈正常的梭形或纺锤形。在20-100μg/ml的浓度范围内,四环素可促进HPDLFs的增殖及生物合成(P<0.01)。当四环素的浓度增至2 500μg／ml,不仅使细胞的镜下形态发生了明显改变,而且严重抑制了细胞的生物学活性。结论 在合适的浓度范围内,四环素能促进HPDLFs的增殖及生物合成,而浓度过高则具有细胞毒性。

拆方益肝康的两种药物血清对HSC活化增殖的影响

目的:探讨中药复方益肝康抗肝纤维化的作用机制及药效学配伍意义.方法:分别给正常大鼠及CCl4造模肝纤维化大鼠灌服益肝康及其拆方—丹参小复方(丹参、黄芪、归尾),提取药物血清,温育体外培养的肝星状细胞.3H-TdR掺入法测定细胞增殖,免疫细胞化学法检测α-SMA表达.结果:两种方法制备的益肝康及丹参小复方药物血清对HSC的3H-TdR掺入及α-SMA表达均有抑制作用.A组(正常大鼠药物血清)中,益肝康及丹参小复方药物血清50mL/L浓度组对3H-TdR掺入抑制作用与对照组相比无显著性差异(P>0.05),而100、200mL/L浓度组均具有显著性差异(拆方:14.48%,25.95%vs0,全方:16.66%,23.77%vs0,P<0.01);全方与拆方各浓度组对α-SMA表达的抑制作用与对照组相比均有显著性差异(吸光度:0.042±0.002,0.048±0.001vs0.061±0.004,P<0.01).B组(肝纤维化大鼠药物血清)中:50、100、200mL/L益肝康及丹参小复方药物血清组对3H-TdR掺入(全方:8.02%,18.36%,29.53%vs0,拆方:7.44%,16.80%,30.01%vs0,均/9<0.01).及α-SMA表达抑制作用与对照组相比均具有显著性差异(吸光度:0.038±0.001,0.044±O.002vs0.065±0.002,均P<0.01).相应浓度的全方与拆方药物血清之间对3H-TdR掺入抑制率无显著性差异(P>0.05),对α-SMA表达的抑制作用全方优于拆方(P<0.05).肝纤维化大鼠药物血清对3H-TdR掺入及α-SMA表达抑制作用优于正常大鼠药物血清(P<0.05).结论:益肝康及丹参小复方可抑制肝星状细胞活化增殖,全方作用优于拆方,肝纤维化大鼠药物血清作用优于正常大鼠药物血清.

碘-131对小鼠体外胸腺细胞自发掺入~3H-TdR的影响

目的在检测不同剂量碘-131对小鼠胸腺细胞自发掺入3H-TdR的基础上,观察碘-131对小鼠体外胸腺细胞自发掺入3H-TdR的影响。方法给予不同剂量碘-131组的小鼠胸腺细胞同体积的3H-TdR,采用3H-TdR自发掺入法检测各组胸腺细胞每分钟计数率(CPM)。结果终浓度为5 Bq/ml的碘-131组小鼠胸腺细胞自发掺入3H-TdR的CPM值显著高于正常胸腺细胞,终浓度为5×105Bq/ml和5×106Bq/ml组小鼠胸腺细胞自发掺入3H-TdR的CPM值明显低于正常胸腺细胞。结论低剂量的碘-131对小鼠胸腺细胞自发掺入3H-TdR具有显著的刺激作用,高剂量的碘-131对小鼠胸腺细胞自发掺入3H-TdR有明显的抑制作用。

肝宝对小鼠血脂水平和T、B细胞增殖的影响

目的 :观察肝宝胶囊对正常小鼠脂肪代谢及免疫功能的影响。方法 :3剂量肝宝胶囊组分别灌胃肝宝胶囊 0 5g/ml、1g/ml、2g/ml2 1d后 ,检测血清TG、TC和HDL水平 ,并用3 H -TdR掺入法检测T、B淋巴细胞增殖情况。结果 :肝宝可不同程度地降低正常小鼠血脂水平 ,统计学处理未见显著差异 ,对T、B淋巴细胞增殖有明显促进作用 ,且存在量—效依赖关系。结论 :肝宝有一定降血脂作用 。

高糖对牛视网膜微血管内皮细胞损伤的实验研究

目的 利用体外培养的牛视网膜微血管内皮细胞来观测高浓度葡萄糖在细胞的损伤中所起的作用。方法体外培养牛视网膜微血管内皮细胞。通过MTT (四唑氮盐 )法及3 H -TDR掺入法研究高糖对牛视网膜微血管内皮细胞的损伤作用。结果 内皮细胞在含高糖 (2 8、 4 0mmol/L)DMEM培养基及不同培养时间 (2d、 7d)下MTT测定结果与对照组 (生理浓度葡萄糖 ,5 5mmol/L)比较有显著性差异P <0 0 5 ,3 H -TDR掺入法研究结果显示高糖对视网膜微血管内皮细胞的增殖有明显抑制作用 ,亦呈剂量及时间依赖性损伤细胞。

抗辐射菌形态及敏感性研究

目的 研究抗辐射菌 (Deinococcusradiodurans,Dr)KD830 1和KH3111的抗辐射特性 ,分离纯化DNA质粒 ,分析其抗辐射基因蛋白产物对哺乳动物细胞放射敏感性的影响。方法 用集落形成法及3 H TdR掺入法绘制剂量 -效应曲线 ,分析其辐射耐受性 ,并与对照菌比较 ,用聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测DNA含量。结果 Dr菌是红色微球菌 ,多呈二联体和四迭体生长 ,平均致死剂量 (D0 )、准阈剂量 (Dq)、6 3%细胞的死亡剂量 (D3 7)、n值为最大 ,D0 =2 9kGy ,Dq =3 1kGy ,D3 7=6 0kGy ,n =5 ,以KD830 1的辐射抗性最强。结论 用集落形成法测定剂量存活效应曲线显示 ,经过 8kGy照射后 ,该辐射菌仍具有很强的集落形成能力。

两种鹿茸多肽生物学活性检测方法的比较

目的 采用两种方法检测鹿茸多肽生物活性 ,并进行两种方法优劣比较。方法 分别采用MTT比色法及3 H TdR掺入法检测多肽对NIH 3T3细胞增殖的影响。结果 这两种方法均能检出多肽促进NH3T3细胞增殖的作用 ,且具有相关性 ,与对照组相比 ,差异有显著意义。结论 MTT比色法简便、迅速 ,重复性较差。3 H TdR掺入法灵敏度高 。

REV和ALV-J感染对肉用型鸡细胞免疫反应的影响

以网状内皮增生症病毒(REV)和禽白血病病毒J亚群(ALV-J)单一感染和共感染1日龄商品代AA肉鸡后不同时间,采用3H-TdR掺入法测定血液和脾脏的淋巴细胞对ConA的增殖反应能力。结果表明,血液淋巴细胞对ConA增殖反应能力在REV和ALV-J共感染后7 d均下降,REV单一感染组在感染后17、37 d均极显著低于对照组(P<0.01),ALV-J单一感染组也呈现下降趋势。在脾淋巴细胞反应中,REV感染组在感染后37 d极显著降低(P<0.01),ALV-J组显著降低(P<0.05)。REV和ALV-J共感染抑制淋巴细胞对ConA增殖反应较单一感染强,效应期也较长,在感染后37 d,共感染对血液和脾淋巴细胞反应的抑制作用均大于REV和ALV-J的单一感染(P<0.05)。在感染后273、7 d检测NDV抗体,单一感染组降低显著(P<0.05),而共感染组下降极显著(P<0.01),且显著低于单一感染组(P<0.05)。本研究表明REV、ALV-J感染不仅能抑制体液免疫反应,也能抑制细胞免疫反应,且共感染比单一感染的抑制作用更强。