^3H-TdR掺入法检测镉致鲫外周血单个核细胞的增殖抑制

以Cd2+浓度1.25、2.503、.75 mg.kg-1腹腔注射染鲫后,用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法研究镉对鲫外周血单个核细胞(PBMC)增殖的影响.检测鲫PBMC的增殖.结果显示:1.25 mg.kg-1组与对照组在不同时间放射性活度(dpm)的差异均无显著性;0d和3d时各染镉组与对照组dpm的差异均无显著性;5d时2.50 mg.kg-1及3.75 mg.kg-1组与对照组及1.25 mg.kg-1组dpm的差异有显著性且呈剂量效应,7d和10d时dpm与5d时基本相同;14d时3.75 mg.kg-1组与其余组dpm的差异有显著性,但已出现缩小的趋势.因此低浓度Cd2+对鲫PBMC增殖的影响不大,高浓度Cd2+则能诱导鲫PBMC增殖抑制.

流式细胞术法与^3H—TdR掺入法观察细胞增殖的相关性研究

目的:研究3H TdR掺入法和流式细胞术法研究指标的相关性, 探讨用流式细胞术法来替代3H-TdR掺入法的数据依据。方法: 用3H -TdR掺入法和流式细胞术法对细胞DNA合成和有丝分裂进行检测。结果: 流式细胞仪指标与3H-TdR掺入实验指标呈高度的正相关关系, 相关系数分别为: PI与cpm相关系数为r=0. 964;SPF与3H TdR,掺入的相关悉数r=0. 876,且经检验有统计学意义 (P<0. 01 )。结论:主动脉平滑肌细胞增殖指数、S期细胞分数与3H TdR掺入值密切相关。

集落刺激因子对3H—TdR掺入骨髓细胞的刺激作用

应用３Ｈ—ＴｄＲ掺入试验，证明集落刺激因子（ＣＳＦ）具有刺激骨髓细胞增殖分化的能力，ＣＳＦ在２～１０ｍｇ／Ｌ之间，随浓度的增高，人胚骨髓细胞的放射性计数亦增高，并呈良好的线性关系。小鼠骨髓细胞的３Ｈ—ＴｄＲ掺入计数值，明显低于人骨髓细胞，表明ＣＳＦ具有种属差异性。

^3H—TdR参入DNA技术在组织培养中的应用

目的探讨３Ｈ－ＴｄＲ参入ＤＮＡ技术在组织培养中的合理应用。方法测定１６周龄ＳＨＲ和ＷＫＹ大鼠培养的胸主动脉血管平滑肌细胞（ＡＭＳＣ）的自然增长曲线以及接种后６０ｈ期间，每隔４～６ｈ３Ｈ－ＴｄＲ参入的变化。结果ＳＨＲ大鼠ＡＳＭＣ分裂增殖能力比ＷＫＹ强，在１５％ＦＢＳ－１６４０培养基作用下，１～６０ｈ期间，ＳＨＲＡＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ高峰参入率在２０～２４、５０～５５ｈ之间，ＷＫＹ的高峰参入率在４５～５０ｈ之间。结论要使３Ｈ－ＴｄＲ参入能真实反映培养细胞的ＤＮＡ合成和增殖水平，需根据特定细胞株在某种特定药物干预下的细胞周期，选择适当的３Ｈ－ＴｄＲ标记期，使实验设计更合理。

^3H-TdR涂层支架转移细胞内照射预防兔骼动脉支架后再狭窄的实验研究

目的:探讨3H-TdR探讨涂层支架置入对涂层支架预防兔骼动脉支架后再狭窄的预防作用。方法:12只新西兰大白兔,按支架放射性活度分为三组,每组4只,能量分别为:2.12、6.21、8.22MBq,于每只动物一侧骼动脉内置入不同活度的3H-TdR.支架,对侧骼动脉内置入非放射性支架作对照。高脂饲养28 d后进行骼动脉血管造影和组织病理学分析,放射性自显影检测,观察治疗效果,同时检测外周血及组织中放射量。结果:组织病理学分析显示不同剂量3H-TdR支架组新生内膜狭窄百分比均明显低于对照组,支架内细胞增生厚度明显低于对照组,内膜光滑,少血栓形成。放射性自显影显示大量平滑肌细胞核内有显像颗粒,内层到外逐渐递减,中层以外很少。血液及外周组织检测未见放射性物质。结论:3H-TdR支架能明显抑制支架置入后兔骼动脉新生内膜增生和支架后再狭窄的发生,外周血及组织中无明显放射性物质检出。

大鼠呼吸道上皮细胞~3H-TdR标记指数

本文利用~3H-TdR 掺入技术研究大鼠呼吸道上皮细胞的标记类型和数量。大鼠腹腔注射7.4×10~4Bq/g(体重)~3H-TdR6小时后,制片计数气管和支气管上皮标记及非标记的基底细胞和粘液细胞,计算出标记指数。结果表明,气管及支气管基底细胞标记指数分别为0.0052和0.0198,粘液细胞标记指数分别为0.0014和0.0047,说明两类细胞都是具有分裂能力的癌形成相关细胞。

^3H-TdR与^125Ⅰ-UdR掺入淋巴细胞增殖的比较

目的 比较3H-TdR与125Ⅰ-UdR掺入淋巴细胞的增殖效应.方法 用3H-TdR与125Ⅰ-UdR掺入法测定淋巴细胞和Daudi淋巴瘤细胞的增殖效应.结果 3H-TdR和125Ⅰ-UdR在正常淋巴细胞中的掺入率分别为20.95%±1.06%和1.00%±0.04%,在Daudi淋巴瘤细胞中的掺入率分别为29.94%±4.10%和6.02%±0.73%.3H-TdR在细胞中的掺入率明显高于125Ⅰ-UdR;且3H-TdR和125Ⅰ-UdR在淋巴瘤细胞中的掺入率高于正常淋巴细胞.结论 就淋巴细胞而言,作为示踪剂125Ⅰ-UdR不能替代3H-TdR;但对于淋巴瘤细胞,能否代替3H-TdR有待于进一步研究.

上海市大气中可吸入颗粒物PM_(10)对人体外周血淋巴细胞的毒性研究

采用ICP -MS分析了采自上海市桃浦工业区中PM10 的生理盐水提取液中 15种元素的含量 ,并通过对人离体血淋巴细胞的3 H -TDR掺入率、微核率和白细胞介素 2 (IL - 2 )的测试 ,研究了PM10 的遗传毒性和对免疫功能的影响。结果表明 :随着用于染毒的PM10 提取液浓度的增加 ,所诱发的淋巴细胞的微核率显著上升 ,而3 H -TDR掺入率则随PM10 浓度的增加而下降 ,两者均呈明显的剂量效应关系。同时 ,IL - 2水平在PM10 浓度增加到一定值后呈下降趋势。在离体血中加入一定量的PM10 提取液并经13 7Csγ射线照射 ,未观察到淋巴细胞的微核率和3 H -TDR掺入率有明显变化 ,说明两者无明显的协同加强效应。

17β-雌二醇对人成骨样细胞OS-732增殖和分化的影响

采用绘制生长曲线３Ｈ－ＴＤＲ掺入、ＡＬＰ、ＢＧＰ的定量测定、免疫组化、原位杂交等和光镜等方法，探讨了１７β－雌二醇对ＯＳ－７３２细胞增殖和分化的影响及对骨粘连蛋白（ＯＮ）ｍＲＮＡ表达的影响。结果显示：１７β－雌二醇以剂量依赖性促进ＯＳ－７３２细胞的增殖，其中以１０－８ｍｏｌ／Ｌ浓度作用最强；１７β－雌二醇可以轻度降低ＡＬＰ的活性和ＢＧＰ的分泌，对ＯＳ－７３２细胞分化有轻微抑制作用。免疫组化实验结果表明ＯＳ－７３２细胞上存在ＥＲ受体，且给药后核内ＥＲ增多，为雌激素直接作用于成骨样细胞提供了一个例证。原位杂交结果表明ＯＳ－７３２上存在（ＯＮ）ｍＲＮＡ的表达，而给药后无明显变化。

硒酸钠对人前列腺癌细胞PC-3细胞株活力和增殖的影响

目的:研究硒酸钠(一种主要的无机含硒化合物)对人前列腺癌细胞系PC3生长和增殖的影响。方法:用硒酸钠对体外培养的人前列腺癌细胞PC3进行药物处理,然后用MTT法测定细胞的活力,用3HTdR掺入法测定细胞的增殖情况。结果:24小时作用时,硒酸钠中剂量组A值显著低于对照组,高剂量组A值与对照组有极显著差异。48小时作用时,硒酸钠低剂量组A值显著低于对照组,中剂量和高剂量组A值与对照组有极显著差异;48小时的硒酸钠处理抑制PC3细胞的增殖,中剂量组与对照组相比有显著差异,高剂量组与对照组有极显著差异。结论:硒酸钠可抑制PC3细胞的活力,抑制细胞增殖,并且这两种作用都呈剂量依赖效应。

汉防己甲素对人单核细胞样细胞系U937的影响

本文报导中药汉防己甲素（ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ，Ｔｅｔ）对人单核细胞样细胞系Ｕ９３７的形态、细胞化学特性以及增殖分化的影响。经浓度为５×１０－３ｍｇ／ｍｌ的Ｔｅｔ作用５天后，Ｕ９３７细胞的形态、细胞化学特性接近于单核／巨噬细胞。３Ｈ－ＴｄＲ掺入证明Ｔｅｔ对Ｕ９３７细胞的ＤＮＡ合成有抑制作用。银染核仁组织者区（Ａｇ－ＮＯＲ）显示细胞核内Ａｇ－ＮＯＲ计数亦明显下降。

^(60)Coγ射线对原代培养神经细胞增殖的影响

目的 研究发育期神经细胞在辐照后损伤效应及其机理。方法 以不同剂量γ射线辐照原代培养神经细胞 ,通过3H -TdR掺入及MTT比色试验等观察辐照对神经细胞增殖、存活能力的影响。结果 0 .2 5Gyγ射线即可引起神经细胞增殖及生存活性的抑制 ,并在一定剂量内具有剂量依赖关系 (0 .2 5～ 2 .0Gy) ;且抑制效应随着时间变化而改变。结论 低剂量γ射线对神经细胞的增殖和存活具有明显抑制作用 。

人参皂甙对U_(937)细胞株抑制作用的研究

本研究用噻唑兰（MTT）比色分折法测定了人参皂甙对 U937细胞生长的抑制作用;并与3H—TdR 掺入法进行了对比,发现在实验的4种人参皂甙中,以二醇组皂甙的抑制作用最强。人参皂甙可以减少3H—TdR 掺入 U937细胞的数量。两种方法的测定结果相同。但人参皂甙的作用强度与药物剂量之间并不成直线关系。

碘-131对小鼠体外胸腺细胞自发掺入~3H-TdR的影响

目的在检测不同剂量碘-131对小鼠胸腺细胞自发掺入3H-TdR的基础上,观察碘-131对小鼠体外胸腺细胞自发掺入3H-TdR的影响。方法给予不同剂量碘-131组的小鼠胸腺细胞同体积的3H-TdR,采用3H-TdR自发掺入法检测各组胸腺细胞每分钟计数率(CPM)。结果终浓度为5 Bq/ml的碘-131组小鼠胸腺细胞自发掺入3H-TdR的CPM值显著高于正常胸腺细胞,终浓度为5×105Bq/ml和5×106Bq/ml组小鼠胸腺细胞自发掺入3H-TdR的CPM值明显低于正常胸腺细胞。结论低剂量的碘-131对小鼠胸腺细胞自发掺入3H-TdR具有显著的刺激作用,高剂量的碘-131对小鼠胸腺细胞自发掺入3H-TdR有明显的抑制作用。

褪黑素对小鼠淋巴细胞电离辐射损伤的防护作用

目的探讨褪黑素(MLT)对小鼠淋巴细胞电离辐射损伤的防护作用及其机制。方法采用流式细胞术和荧光分光光度法在离体和整体条件下分别检测小鼠淋巴细胞凋亡小体百分率和DNA裂解率。在此基础上,腹腔注射MLT,观察2GyX射线全身照射后24h小鼠胸腺、脾脏淋巴细胞数量及胸腺细胞3H-TdR掺入率和ConA、LPS诱导的脾T、B淋巴细胞转化率的变化。结果离体研究中,小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞体外接受0.5～6.0Gy照射后,凋亡小体百分率、DNA裂解率均呈剂量依赖性增加,而照射前预先加入2mmol/LMLT,细胞凋亡小体百分率、DNA裂解率与单纯照射组比较均显著降低。整体研究中,2Gy全身照射前腹腔注射MLT,小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡小体百分率和DNA裂解率显著低于单纯照射组,接近或低于假照水平,MLT剂量在0.1～2.5mg/kg范围内均有作用,但无明显剂量依赖性。小鼠胸腺、脾脏淋巴细胞数量、胸腺细胞3H-TdR掺入率及有丝分裂原诱导的脾脏T、B淋巴细胞转化率在2Gy全身照射后均显著低于假照组(P<0.001)。0.5～10mg/kgMLT预先腹腔注射,胸腺、脾脏淋巴细胞数显著高于0mg/kg体重组(单纯照射),其中0.5mg/kg体重组增高最显著;胸腺细胞3H-TdR掺入率显著增高(P<0.01或P<0.001),以0.5mg/kg体重组增高最显著;ConA诱导的T细胞转化率显著增高,也以0.5mg/kg体重组为著;LPS诱导的B细胞转化率增高,以10mg/kg体重组最显著。结论MLT在体内和体外均可减轻电离辐射诱导的小鼠淋巴细胞损伤,对免疫功能具有保护作用。

F68及其联合DMSO对脐血造血细胞的低温保护作用

目的研究普鲁兰尼克(F68)及其联合DMSO在-80℃条件下对脐血造血干细胞的低温保护作用,为临床应用提供依据.方法脐血造血细胞冻存30、60、90 d后复苏,应用台盼蓝拒染率、集落形成试验、3H-TdR掺入率等,测定经F68保护体系冻存的脐血活力,并与目前通用的冷冻保护剂二甲亚砜及CP-1进行了对比研究.结果在-80℃条件下,F68对脐血造血细胞具有明显的冷冻保护作用,并与DMSO具有协同保护效果,联合F68及DMSO的保护体系可使MNC、CFU-GM的平均回收率及台盼蓝拒染率在第90天时分别达到(83.4±6.3)%,(68.8±7.9)%, (92.5±5.1)%,优于目前通用的细胞冻害保护液CP-1及DMSO.90 d的冻存期内,脐血细胞活力无明显下降.结论 F68及其与DMSO组成的冻存方案对脐血造血干细胞具有良好的冻存保护效果.

Canstatin基因表达载体的构建及其生物学效应研究

目的 构建可表达人血管生成抑制素 (canstatin)蛋白的真核表达载体 ,探索canstatin对人脐静脉内皮细胞系(HUVEC)和人肺腺癌A5 49细胞株的生物学效应。方法 RT PCR法从胎儿肝组织中获取canstatincDNA全长 ,并将其克隆到真核蛋白表达载体pCMV Script上。阳离子脂质体介导该重组载体转染HUVE细胞系、A5 49细胞株。RT PCR法检测其对canstatinmRNA的表达。台盼蓝拒染法活细胞记数 ,3 H TdR掺入法检测细胞增殖 ,TUNEL法检测细胞凋亡 ,流式细胞术检测细胞周期。结果 成功构建pCMV Script Cans真核表达重组载体 ,并在转染该表达载体的A5 49及HUV EC C细胞株中均检测到canstatinmRNA的表达。HUV EC C细胞株pCMV Script Cans载体转染组比空载体组 3 H TdR掺入量明显减低(P <0 0 1) ,细胞凋亡率明显增加 (P <0 0 1) ,A5 49细胞株转染组与空载体组 3 H TdR掺入量无显著差异 (P >0 0 5 ) ,细胞凋亡率无显著差别 (P >0 0 5 )。结论 pCMV Script Cans重组载体能在转染的哺乳动物细胞中表达canstatin ,并抑制内皮细胞增殖 ,诱导内皮细胞凋亡 ,但对肿瘤细胞没有直接抑制作用。

黄芪总提物的免疫调节作用

目的:研究黄芪总提物(TAE)的免疫调节作用。方法:以DNFB诱导小鼠迟发超敏(DTH)反应作为模型,用耳肿胀度作为主要的检测指标。以3H-TdR掺入法研究TAE体外对ConA或LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应;以活化脾细胞法检测IL-2。结果:TAE3个剂量对Cy降低或升高的小鼠DTH反应均能恢复或接近正常水平;TAE对亚适浓度ConA或LPS诱导小鼠脾淋巴细胞的增殖反应与产生IL-2均有明显的促进作用,量效曲线均呈典型的钟罩型。结论:TAE具有机能和浓度依赖性的双向免疫调节作用。