流式细胞术法与^3H—TdR掺入法观察细胞增殖的相关性研究

目的:研究3H TdR掺入法和流式细胞术法研究指标的相关性, 探讨用流式细胞术法来替代3H-TdR掺入法的数据依据。方法: 用3H -TdR掺入法和流式细胞术法对细胞DNA合成和有丝分裂进行检测。结果: 流式细胞仪指标与3H-TdR掺入实验指标呈高度的正相关关系, 相关系数分别为: PI与cpm相关系数为r=0. 964;SPF与3H TdR,掺入的相关悉数r=0. 876,且经检验有统计学意义 (P<0. 01 )。结论:主动脉平滑肌细胞增殖指数、S期细胞分数与3H TdR掺入值密切相关。

用原子示踪法研究Raji癌细胞在氩离子激光照射下对~3H-TdR掺入量的影响

原子示踪技术是核医学的一个组成部分。近年来,由于示踪技术的不断发展,使生物化学由细胞水平进入分子水平。如细胞膜受体,遗传密码,RNA-DNA逆转录等,使人类对基本生命现象的认识开辟了新的途径。在医学上,示踪技术对肿瘤、针麻原理、中药药理等的深入研究,已从多方面显示广阔的前景。

以淋巴母细胞为靶细胞的~3H-TdR后标法细胞毒试验检测EHF病毒诱生的细胞毒因子

流行性出血热(Epidemic Hemorrha-gic Fever,EHF)患者的细胞免疫功能普遍受抑制,其原因尚未明了。我们在 EHF的发病机理研究中发现,EHF 病毒感染的小鼠脾脏匀浆液(Spleen homog(?)atefrom EHFV infected mice(?) VISH)中存在一种具有细胞毒活性的细胞因子,它至少可通过三条途径抑制细胞介导的免疫反应:1.杀伤正常小鼠的免疫细胞;2.体内外对淋巴母细胞转化能力均有明显的抑制作用;3.对 ConA 转化的淋巴母细胞有强烈的杀伤作用。因此 EHF

硒酸钠对人前列腺癌细胞PC-3细胞株活力和增殖的影响

目的:研究硒酸钠(一种主要的无机含硒化合物)对人前列腺癌细胞系PC3生长和增殖的影响。方法:用硒酸钠对体外培养的人前列腺癌细胞PC3进行药物处理,然后用MTT法测定细胞的活力,用3HTdR掺入法测定细胞的增殖情况。结果:24小时作用时,硒酸钠中剂量组A值显著低于对照组,高剂量组A值与对照组有极显著差异。48小时作用时,硒酸钠低剂量组A值显著低于对照组,中剂量和高剂量组A值与对照组有极显著差异;48小时的硒酸钠处理抑制PC3细胞的增殖,中剂量组与对照组相比有显著差异,高剂量组与对照组有极显著差异。结论:硒酸钠可抑制PC3细胞的活力,抑制细胞增殖,并且这两种作用都呈剂量依赖效应。

促肝细胞生长因子活性检测方法比较

目的比较3种可用于促肝细胞生长因子(HGF)活性检测方法的优劣,以确定HGF活性的常规检测方法。方法以人肝癌细胞HepG2为材料,分别用3H-TdR掺入法、四甲基偶氮唑蓝比色法和XTT-PMS法检测HGF的生物活性,比较线性相关系数(r)和最大刺激指数(SI)及3种方法操作的简便性。结果MTT法的灵敏度(SI=3.65)与准确度(r=0.91)均较差;XTT-PMS法虽然灵敏度(SI=7.72)不如3H-TdR掺入法(SI=23.19),但准确度(r=0.98)最佳,操作最为简便。结论3种方法中,XTT-PMS法如以标准品校正,可作为HGF活性常规检测的首选方法。

胃癌手术前后T细胞亚群、Ts功能变化及意义

目的 研究胃癌切除前后 T细胞亚群数量和功能两方面的变化 ,并就其变化与术后感染的关系进行探讨。方法 分别用3H- Td R渗入法和单个核细胞直接免疫荧光法检测 38例胃癌患者 Ts功能和 T细胞亚群水平 ,并对手术切除后不同时间点进行了对比。结果 胃癌患者无论手术前后 Ts功能明显高于正常人 (P<0 .0 1) ,而其本身在肿瘤切除前后差异无显著意义 (P>0 .0 5 ) ;胃癌术前 CD4 / CD8明显降低 (P<0 .0 0 1) ;术后 CD4 先降后升 ,CD8则轻度增高 ,CD4 / CD8在术后 9～ 12 d恢复到术前水平 ;术后 2～ 3d,CD4 下降的感染率为 4 3.5 % ,CD4 增高的感染率为 13.3%。结论 胃癌患者的细胞免疫功能明显低下 ,手术切除肿瘤有利于其功能的恢复 ,但同时手术创伤亦可引起一定程度的免疫抑制 。

卡铂、威猛、甲氨蝶呤、尼莫地平联用对脑胶质瘤的抑制作用

目的观察卡铂(CBP)、威猛(Vm-26)、甲氨蝶呤(MTX)及尼莫地平(NIM)联用对脑胶质瘤的抑制作用,探讨其与脑胶质瘤细胞敏感性的关系,为临床提供有效的化疗依据。方法采用MTT比色法及3H-TdR渗入法测定脑胶质瘤细胞增殖抑制作用,比较脑胶质瘤细胞对CBP、Vm-26、MTX及NIM单用、联用的敏感性。结果CBP、Vm-26、MTX、NIM联用对肿瘤细胞的抑制率达96.64%,明显高于CBP+NIM(69.03%)、Vm-26+NIM(71.35%)、MTX+NIM(62.75%)及CBP+Vm-26+MTX(84.59%)的抑制效果(P均<0.01),同时CBP、Vm-26、MTX浓度降低至单用的1/10～1/100。结论CBP、Vm-26、MTX及NIM联用对肿瘤细胞的疗效明显优于单用,且具有抑制率高、用药浓度低的特点。

ET-1促进人血管平滑肌细胞的表型变化和增殖

目的：研究ET-1与VSMC表型变化和增殖的关系。方法：用MTT法研究ET-1对平滑肌细胞增殖的影响，3~H-TdR法测定ET-1对平滑肌细胞DNA合成的作用，流式细胞仪法观察对平滑肌细胞增殖周期的影响，逆转录聚合酶链法观察对平滑肌细胞表型变化的影响。结果：与对照组比较，ET-1明显促进平滑肌细胞增殖；促进平滑肌细胞DNA合成；促进平滑肌细胞从G_0期向S期的转变，G_0/G_1期细胞百分比明显降低，而S期细胞百分比增加；促进平滑肌细胞的表型转化，从第2d到第7d随时间延长1-Caldesmon表达逐渐增高。结论：ET-1促进平滑肌细胞表型转化，同时对平滑肌细胞增殖亦有明显的促进作用。

萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2的分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响

目的 :探讨萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL 2分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响。方法 :实验小鼠随机分成实验组 (低剂量组 4 g/kg/d :高剂量组 :8g/kg/d)和对照组 (与实验组用同体积的生理盐水 ) ,连续用药 1 0天。用3H—TdR掺入法进行检测。结果 :与对照组相比萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL 2分泌有明显促进作用并能明显提高小鼠脾淋巴细胞转化增殖 ,并有一定的量效关系。结论 :萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠免疫功能有明显的促进作用 ,这可能与其促进细胞因子的分泌和淋巴细胞转化增殖有关。

抑癌基因p27对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及DNA合成的影响

目的 探讨抑癌基因 p2 7对增生性瘢痕的作用 .方法 取体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞 (HTs Fb) ,将构建的 pc DNA3- p2 7真核表达质粒体外转染 HTs Fb,经 G418筛选获得稳定表达的细胞克隆 ,用 MTT和 3 H- Td R掺入法观察抑癌基因 p2 7对 HTs Fb增殖及 DNA合成的影响 .结果 抑癌基因 p2 7对 HTs Fb增殖及 DNA合成均有明显抑制作用 .结论 抑癌基因 p2 7可能通过抑制成纤维细胞增殖及DNA合成抑制瘢痕增生 .

高强度聚焦超声对荷瘤小鼠淋巴细胞杀伤功能的影响

目的 :探讨高强度聚焦超声 (highintensityfocusedultrasound ,HIFU)治疗对机体抗肿瘤免疫功能的影响。方法 :用HIFU治疗荷肝癌 (H2 2 )小鼠 ,9d后处死动物 ,分离脾脏淋巴细胞 ,以3 H TdR释放法检测淋巴细胞对H2 2 肝癌细胞的细胞毒作用。结果 :和对照组相比 ,治疗组肿瘤体积明显缩小 ,抑瘤率达 82 % ;经HIFU治疗的肿瘤细胞呈大片凝固性坏死 ;治疗组脾脏组淋巴细胞对H2 2 肝癌细胞的杀伤作用明显增强 ,特异性 (杀伤细胞 )释放率为 (6 2 .5± 10 .6 9) % ,对照组为 (39.2 5± 14 .9) % (P <0 .0 1)。结论 :肿瘤的HIFU治疗能增强机体的抗肿瘤免疫功能。

超氧化物歧化酶(SOD)对免疫功能的抑制

目的 观察SOD对正常小鼠及佐剂性关节炎大鼠免疫功能的影响。方法 体外或体内给于不同浓度的SOD ,用3 H -TdR掺入法测量细胞的增殖能力。结果 SOD对脾脏T、B淋巴细胞的增殖反应呈剂量依赖性抑制 ,并抑制巨噬细胞产生IL - 1。

高糖对牛视网膜微血管内皮细胞损伤的实验研究

目的 利用体外培养的牛视网膜微血管内皮细胞来观测高浓度葡萄糖在细胞的损伤中所起的作用。方法体外培养牛视网膜微血管内皮细胞。通过MTT (四唑氮盐 )法及3 H -TDR掺入法研究高糖对牛视网膜微血管内皮细胞的损伤作用。结果 内皮细胞在含高糖 (2 8、 4 0mmol/L)DMEM培养基及不同培养时间 (2d、 7d)下MTT测定结果与对照组 (生理浓度葡萄糖 ,5 5mmol/L)比较有显著性差异P <0 0 5 ,3 H -TDR掺入法研究结果显示高糖对视网膜微血管内皮细胞的增殖有明显抑制作用 ,亦呈剂量及时间依赖性损伤细胞。

人白血病细胞系筛选抗癌药物的可行性

目的 :探讨以人白血病细胞系筛选抗癌药物的可行性。方法 :应用活细胞计数法 ,3 H -TdR及3 H -UR掺入 ,克隆分析法判断抗癌药物对肿瘤细胞的杀伤能力。结果 :用人白血病细胞系K5 62和HL -60来检测对三种已知抗肿瘤药物 (阿糖胞苷、柔红霉素、三尖杉酯碱 )和一种新的药物MTB。在实验条件完全相同的条件下 ,同时用 4种方法在不同药物浓度下存活分数曲线十分接近 ,其敏感范围 10 -2 以内 ,克隆分析法检测敏感度可达 10 -7水平。K5 62细胞存活分数高于HL -60细胞。结论 :采用人白血病细胞系为靶细胞进行抗癌药物的选择具有一定的优越性 ,不仅实验操作简便 ,而且与临床有较好的相关性。

放创复合伤大鼠伤口液对真皮多能干细胞的趋化作用

目的观察放创复合伤大鼠伤口液对真皮多能干细胞(dMSCs)的趋化作用以及dMSCs对创面愈合的作用。方法采用Transwell培养体系,观察伤口提取液对dMSCs的趋化作用。用3HTdR标记dMSCs,经尾静脉输入大鼠体内,液闪法测量各组织内dMSCs的含量。用生物医学图像分析仪测量伤后创面残留面积。结果在伤口液的作用下,复合伤组Transwell培养小室内上层细胞迁移到下层的明显多于正常组织液组和生理盐水组(P<001)。伤后1周,复合伤组创面皮肤dMSCs含量明显高于正常对照组(P<001);伤后3和4周,复合伤组单位重量创面组织dMSCs含量明显高于同组的肺脏、肝脏等组织。伤后15d开始,dMSCs输注组创面残留面积明显小于复合伤对照组(P<005)。结论放创复合伤大鼠伤口提取液对dMSCs有很强的趋化作用,进而促进静脉输注的dMSCs偏向分布于创面,并促进其愈合。

CIK细胞的诱导及其对肝癌细胞毒作用的体外研究

目的体外诱导细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK),并研究其生物学活性。方法从外周血和脐血分离单个核细胞(PBMC),经过细胞因子诱导、培养并扩增CIK细胞,以LAK作比较,流式细胞仪检测CIK细胞表面标志CD3、CD56。3H-TdR释放法检测CIK的增殖能力,MTT法检测对肝癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402,正常胎肝细胞L-02的杀伤活性。结果CIK细胞第二周进入快速增殖期,到第31d扩增倍数超过60倍,CD3+CD56+细胞扩增倍数达800倍以上;CIK对肝癌细胞的杀伤能力明显优于LAK细胞(65%～81%);对正常胎肝细胞的细胞毒作用(<5%)。结论CIK细胞是一种具有很强杀瘤活性的免疫活性细胞,具有临床应用前景。

人红细胞对LAK细胞DNA合成和IL-2受体表达影响的研究

本文用3H-TdR掺入法、APAAP免疫染色法和MTT法研究人红细胞(RBC)对LAK细胞DNA合成、IL-2受体(IL-2R)表达及杀伤活性的影响.人RBC对LAK细胞DNA合成有抑制作用,对LAK细胞IL-2R表达和杀伤活性有促进作用.随RBC浓度增加,抑制作用和促进作用均明显加强.

外源性转化生长因子β_1对口腔鳞癌细胞系恶性表型的影响

目的 探讨转化生长因子 (TGF β1)和口腔鳞癌侵袭转移的关系。方法 采用3 H TdR掺入法和免疫组化法观察不同浓度的TGF β1作用于口腔鳞癌TSCCa细胞系及颈淋巴转移癌GNM细胞系后细胞增殖能力和C myc蛋白表达的变化。结果 相同浓度的TGF β1对两细胞系作用不同 ;TGF β1可促进GNM细胞3 H TdR掺入率 ,同时GNM细胞中C myc蛋白表达明显上调 ;而TGF β1可抑制TSCCa细胞的增殖 ,TGF β1作用于TSCCa细胞后C myc蛋白表达水平开始下降 ,并与TGF β1有剂量依赖关系。结论 TGF