124例HbH患者α珠蛋白基因的分析

目的分析１２４例ＨｂＨ患者的α珠蛋白基因的分子缺陷状况及其分布，为ＨｂＨ的基因诊断和产前诊断提供科学依据。方法应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交、限制性内切酶分析ＰＣＲ产物、血红蛋白电泳和ＬｏｎｇＰＣＲ等技术，对受检ＨｂＨ病患者的α珠蛋白基因组织进行了鉴定。结果在１２４例ＨｂＨ病患者中，缺失型患者有８３例，占６６．９％；其中右侧缺失型（α－３．７）４５例，占缺失型患者总数的５４．２％，主要分布于广东、湖北、云南等省区，左侧缺失型（α－４．２）３８例，占缺失型患者总数的４５．８％，主要分布在广西和江西；非缺失型患者４１例，占３３．１％；其中ＨｂＣｏｎｓｔｎｔＳｐｒｉｎｇ（ＨｂＣＳ）患者９例，占非缺失型患者总数的２２．０％，Ｈｂ广西（ＨｂＱＳ）患者３例，占非缺失型患者总数的７．３％，其他α＋地贫突变类型２９例，占非缺失型总数的７０．７％。结论不同地区ＨｂＨ患者的α珠蛋白基因的突变类型有明显的差异，该项研究为ＨｂＨ病的分子遗传学和ＨｂＨ病的基因诊断提供了依据。

脂质体转染反义脱氧寡核苷酸对K562细胞α珠蛋白基因表达及细胞增殖的影响

本研究查明脂质体转染反义脱氧寡核苷酸(ASON)对K562细胞α珠蛋白基因表达的抑制作用及对细胞增殖的影响,探讨基因调控治疗β地中海贫血的新思路。设计合成靶向α珠蛋白基因的ASON,并与正义寡核苷酸(SON)和空白对照进行比较。采用脂质体转染技术将ASON、SON与K562细胞共同培养,用荧光显微术、流式细胞术检测脂质体转染效率,用实时荧光定量RT-PCR法检测K562细胞中α珠蛋白基因表达情况,并通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法观察脂质体转染ASON技术对细胞增殖的影响。结果表明:脂质体转染效率在ASON作用24h达到最高,脂质体转染ASON组的α珠蛋白基因表达水平显著低于SON和空白对照组(p<0.01),并对细胞的增殖有明显的抑制作用,上述效应呈浓度依赖性。结论:脂质体转染ASON能特异性的抑制K562细胞中α珠蛋白基因表达,可能会成为β地中海贫血基因治疗的一个新靶点。

中国人α珠蛋白基因-α^(3.7)缺失亚型的研究

- α3.7是中国人常见的缺失型α 地中海贫血 2。根据重组位点的不同, α3.7可分为 -α3.7Ⅰ型、 -α3.7Ⅱ型和 α3.7Ⅲ型,并且亚型的种类和频率具有种族差异性。本研究在中国人群中用PCR基因分析方法检出具有α珠蛋白基因 -α3.7缺失的患者56例,然后用ApalⅠ和BalⅠ限制性内切酶进行分型。结果表明,在这56例具有 -α3.7缺失的患者中,有54例是 -α3.7Ⅰ型,有2例是 -α3.7Ⅱ型,尚未发现 -α3.7Ⅲ型。此结果丰富了我国α地贫基因型谱的资料。

中国人α珠蛋白基因3′HVR多态分布的研究

本文以3’HVR为探针，对来自全国17省市的51名无血缘关系的健康人进行PvuⅡ限制性片段长度的多态分析，发现3’HVR在片段大小的变异范围及基因频率的分布上均有中国人的特点．结果表明，纯合子占15.7％，杂合子占84.3％，102个等位基因共有34个长度不同的等位片段，大小从2．0－70kb之间里连续分布，主要分布在2．0－25kb及4.0－6．0kb，频率分别为0．43和0．34．并与刘国仰、余裕炉等的资料进行综合比较，初步揭示了中国人群中3’HVR的多态特点．

广东人群中α珠蛋白基因多拷贝频率分布研究

目的调查广东人群中α珠蛋白基因多拷贝的变异类型及分布频率。方法采用靶向二代测序方法(next⁃generation sequencing,NGS)对广东六个城市的2310对夫妇(4620例样本)的珠蛋白基因型进行分析,采用多重连接探针扩增技术(multiplex ligation⁃dependent probe amplification,MLPA)对NGS分析提示有α珠蛋白基因多拷贝的样本进行验证。结果经NGS和MLPA双重分析发现92例样本携带α珠蛋白基因多拷贝,基因型为αααanti3.7/αα的45例,αααanti4.2/αα的47例。结论在4620例样本中发现92例携带珠蛋白基因多拷贝,广东人群中的携带率约为1.99%。

β地中海贫血合并α珠蛋白基因三联体2例临床分析

目的探讨β地中海贫血(地贫)合并α珠蛋白基因三联体致中间型地贫的诊断。方法回顾分析2例β杂合子患儿的临床资料,以及患儿外周血β珠蛋白基因测序及α珠蛋白基因三联体检测结果。结果例1,女,4岁,为β^(CD41-42)杂合子;例2,男,13岁,为β^(CD17)杂合子。2例患儿的临床表现均为中重度贫血、肝脾肿大,β珠蛋白基因测序未发现罕见变异点。例1的Gap-PCR特异性引物检测ααα^(anti4.2)片段阳性,例2荧光定量PCR相对定量检测ααα^(anti3.7)片段阳性。结论β杂合子且未见罕见变异,但临床表现为中重度贫血时,应考虑存在α珠蛋白基因三联体。

单管多重聚合酶链反应对缺失型HbH患者α珠蛋白基因的分析

目的 探讨聚合酶链反应快速诊断缺失型HbH患者α珠蛋白基因的方法。为HbH的基因诊断和产前诊断提供科学依据。方法 采用单管多重聚合酶链反应 (PCR)技术 ,对 2 0例正常对照组及 4 0例HbH病患者的α珠蛋白基因进行了鉴定。结果 在 4 0例缺失型HbH病患者中 ,- -SEA合并右侧缺失型 (α - 3 7) 2 5例 ,占缺失型患者总数的 6 2 5 % ;- -SEA合并左侧缺失型 (α- 4 2 ) 15例 ,占缺失型患者总数的 37 5 %。结论 单管多重聚合酶链反应可用于快速筛查缺失型HbH ,对开展分子诊断及产前诊断具有重要意义。

β-地贫合并α珠蛋白基因三联体导致中间型地贫的家系分析与产前诊断

目的探讨分析β-地贫合并α珠蛋白基因三联体导致中间型地贫的家系分析和诊断流程,总结中间型地贫的诊断策略及产前诊断临床实践。方法通过家系成员血液学表型、常规地贫基因检测和PCR电泳法及珠蛋白基因测序技术分析β-地贫合并α珠蛋白基因三联体的临床表现;利用羊水细胞DNA对该家系1例地贫高风险胎儿进行产前诊断。结果先证者检出β-地贫CD41-42杂合突变合并αααanti4.2三联体,父亲检出αααanti4.2三联体,母亲检出β-地贫CD41-42杂合突变,胎儿结果未见异常。结论临床表现为中重度贫血的β-地贫杂合突变且未见罕见型变异,应结合临床表现与基因型是否一致,考虑可能合并α珠蛋白基因三联体导致的中间型地贫。

应用长片段PCR技术检测α珠蛋白基因组织的异常

目的：应用长片段多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测α珠蛋白基因组织的异常。方法：设计一组引物分别互补于α２珠蛋白基因上游和α１珠蛋白基因下游的特异序列，应用长片段ＰＣＲ技术对７例具有正常和异常α珠蛋白基因组织个体进行分析。结果：正常的α珠蛋白基因组织（αα）扩增片段的长度为６．４ｋｂ；右侧缺失型的α珠蛋白基因组织（α－３．７）为２．６ｋｂ；而东南亚缺失型的α珠蛋白基因组织（－－ＳＥＡ）则无任何扩增片段；右侧增多型的α珠蛋白基因组织（αααａｎｔｉ３．７）的扩增片段为１０．２ｋｂ。结论：长片段ＰＣＲ技术为α珠蛋白基因组织异常的快速检测提供了一个新的方法。

α珠蛋白基因3~1HVR多态性研究及其在成年型多囊肾病基因诊断中的初步应用

作者采用Southern杂交方法,通过对58名无血缘关系的健康成人3'HVB/PvuⅡ限制性片段的研究,初步揭示了我国人群中3'HVR的多态性。结果表明,3'HVR的大小变异在1.4～8.0kb之间,各等位片段的频率呈正偏态分布。其中2.0～2.6kb的等位片段约占39%,95%的片段大小在1.6～7.4 kb范围。此外,还以3'HVR为探针,对两个成年型多囊肾病家系的有关成员进行了基因诊断,表明这一方法在我国是可行的。

建立α与β珠蛋白基因簇转基因鼠模型及β基因族反式因子研究

随着人类功能基因组研究的广泛开展,理解基因组中的遗传信息如何协调、有序地调控细胞分化与个体发育的时空过程成为研究的基本问题,阐明这一机制是真核基因表达调控研究的根本任务.

珠蛋白生成障碍性贫血异常-α^3.7缺失条带的基因型研究

目的·探讨珠蛋白生成障碍性贫血常用商品化试剂盒检测异常-α^(3.7)缺失条带样本的罕见变异类型并分析其血液型表型,为临床咨询提供参考。方法·抽取2016年6月—2019年9月于上海交通大学医学院附属瑞金医院就诊的4 238例患者的外周血,行血常规分析。提取全血DNA,采用跨越断裂点聚合酶链反应(gap-polymerase chain reaction,Gap-PCR)和反向斑点杂交法(reverse dot blot,RDB)进行珠蛋白生成障碍性贫血的常见突变基因检测。采用Gap-PCR及Sanger测序法进行罕见型α珠蛋白生成障碍性贫血的基因检测。结果·常规珠蛋白生成障碍性贫血基因检测共检出-α^(3.7)缺失条带109例,其中15例样本出现了异常的-α^(3.7)缺失条带。Gap-PCR及Sanger测序法分析发现,14例为香港型α珠蛋白生成障碍性贫血基因(Hong Kong αα,HKαα),1例为NG_000006.1:g.34569_38382 del 3 812bp罕见缺失,Gap-PCR法异常-α^(3.7)缺失条带的误检率为13.76%。结论·对于存在异常-α^(3.7)缺失条带的患者,需进一步行罕见型α珠蛋白生成障碍性贫血的检测,以提供更准确的基因诊断结果及遗传咨询。

α2珠蛋白基因突变IVS-Ⅱ-55(T→G)的临床表型分析

目的鉴定一种α2-珠蛋白基因突变类型,分析携带者的表型特征。方法收集5个携带α2-珠蛋白基因IVS-Ⅱ-55(T→G)杂合突变的婴幼儿先证者的家系和3例散发成人携带者的外周血样本进行血常规和血红蛋白电泳分析,并采用跨越断裂点聚合酶链反应(Gap-PCR)方法、PCR结合反向点杂交(PCR-RDB)法以及DNA测序方法进行珠蛋白基因缺失和突变的鉴定。结果 13例α2-珠蛋白基因IVS-Ⅱ-55(T→G)杂合突变携带者中,5例婴幼儿先证者的MCV和MCH均低于正常参考区间,表现为小细胞低色素轻中度贫血;成人(包括3例散发成人和5例家系中的成人携带者)中1例表现为小细胞低色素中度贫血,1例复合βCD27-28杂合突变表现为MCV 65 fL、MCH 20.3 pg,1例复合SEA-HPFH表现为MCV 81.9 fL、MCH 26.5 pg,其余MCV和MCH均正常; IVS-Ⅱ-55复合βCD27-28杂合突变的HbA_2为5.8%。IVS-Ⅱ-55复合SEA-HPFH的HbA_2为3.0%,Hb F为29.0%。单纯IVS-Ⅱ-55杂合子的HbA_2均正常。所有携带者均未见异常血红蛋白条带。结论单纯IVS-Ⅱ-55(T→G)杂合子的血液学表型正常,复合β地贫时表型与单纯β地贫类似。

1例中间型β-地中海贫血的临床诊断和基因检测

目的通过回顾性分析1例中间型β-地中海贫血(地贫)的诊断及基因检测流程,总结中间型地贫的诊断策略。方法分析1例β-地贫合并α-地贫基因型患儿的临床表现,通过地贫基因多重PCR检测及DNA序列测定明确诊断,结合相关文献复习,探讨影响β-地贫表现型的基因因素。结果该地贫患儿基因型为β珠蛋白基因41/42突变的杂合子合并αααanti3.7基因杂合子。结论中间型地贫的诊断,需要临床表现与基因病变相一致,多重PCR结合DNA序列测定等方法可确诊罕见型基因突变。

HbH病的α基因分析与临床观察

本文应用限制性内切酶、α珠蛋白基因探针分析了24例HbH病,并进行了临床观察和血液学分析;结果9例为非缺失型与α地贫_1双重杂合子,5例为HbCS与α地贫_1双重杂合子;他们病情重,有11例作了牌切除。另10例是α地贫_2与α地贫_1双重杂合子,临床症状和贫血程度轻,脾切除的仅1例。

中国人血红蛋白 HbQ-Thailand 的研究

本文综合报道在中国大陆发现的十个HbQ-Thailand家系及其在中国大陆的地理分布,并对α~Q基因组织进行分析。

建立α与β珠蛋白基因簇转基因鼠模型及β基因簇反式因子的研究

1996年1月。由中国医学科学院基础医学研究所刘德培．梁植权．黄粤．冯东晓．纪新军等15人。在国家杰出青年科学基金及国家自然科学基金重大项口资助下进行了研究。

脐血移植治疗地中海贫血的研究现状

地中海贫血是一种基因缺陷所致珠蛋白生成障碍性贫血[1],我国平均患病率约2%[2],是影响社会和谐发展的公共卫生问题。α地中海贫血约60%为α珠蛋白基因缺失所致;β地中海贫血99%以上为β珠蛋白基因点突变所致[3]。该疾病的诊断需结合红细胞分析,血红蛋白电泳及DNA分析。就治疗方案而言,HSCT是当前根治地中海贫血的唯一方法。根据干细胞来源不同,分为骨髓移植(BMT)、外周血干细胞移植(PBSCT)和脐血移植(UCBT)。很多研究已指出,UCBT具有移植物抗宿主病(GVHD)发生率低、传染病感染率低、容易获得、人类白细胞抗原(HLA)匹配要求低等优点。

罕见α地中海贫血IVS1-116（A〉G）突变一例报告及文献复习

地中海贫血（地贫）是全球广为流行的遗传性溶血性疾病，是最常见的单基因遗传病之一。其中，α地贫主要由α珠蛋白基因发生缺陷导致α珠蛋白肽链合成减少或缺如，

中间型地中海贫血的诊断分析及文献复习

目的探讨中间型地中海贫血的临床诊治思路。方法选择2012年3月15日及2013年4月29日在中山大学孙逸仙纪念医院就诊并确诊为中间型地中海贫血的2例患儿为研究对象,结合相关文献复习其临床表现、治疗及转归。本研究遵循的程序符合中山大学孙逸仙纪念医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,并与受试对象监护人签署临床研究知情同意书。对2例患儿行入院检查,并对其珠蛋白基因变异类型进行检测。结果患儿1为3岁,女性,临床表现为面色苍白2+年,患儿腹部出现包块并逐渐增大1+年。采用PCR结合DNA序列测定等方法行罕见型突变检测,确诊为β地中海贫血基因(β珠蛋白CD41/42基因缺失突变型)杂合子合并α地中海贫血基因(αααanti3.7基因重排)杂合子。患儿2为5岁,男性,临床表现为面色苍白4年。通过毛细管电泳及基因突变检测,确诊为HbH-CS病。结论中间型地中海贫血的诊断需考虑多种基因变异因素对临床表现的影响,毛细管电泳与基因序列分析在诊断中间型地贫中结合使用具有重要的应用价值。