α-松油醇对大肠杆菌的抑菌作用及其机理研究

为探究α-松油醇的抑菌作用及其抑菌机理,采用肉汤培养基倍比稀释和沙氏琼脂平板稀释培养计数法测定α-松油醇对大肠杆菌标准菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(mini-mum bactericidal concentration,MBC);通过细胞壁和细胞膜通透性变化试验、核酸合成抑制试验、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验和内毒素活性抑制试验研究α-松油醇的抑菌机理。结果显示:α-松油醇对大肠杆菌有明显的抑制效果,MIC和MBC均为0.78μL.mL-1。α-松油醇可引起大肠杆菌胞外碱性磷酸酶和β-半乳糖苷酶活性明显增强;大肠杆菌DNA荧光强度明显减弱、可溶性蛋白谱带变浅。当α-松油醇浓度在2MIC以上时,内毒素分解率超过50%,家兔不呈现典型的热原反应。α-松油醇的抑菌机理是通过细菌细胞壁和细胞膜通透性的变化,抑制细菌核酸的合成和可溶性蛋白的表达以及药物与内毒素的拮抗作用实现的。

松节油合成高纯度α-松油醇的研究

研究了以大孔阳离子交换树脂作为催化剂的松节油一步法水合反应。通过控制松节油、有机溶剂(乙酸乙酯或异丙醇)和水的配比,调节反应体系始终处于均匀的液相状态,这样即可以达到选择性抑制副产物γ-松油醇的生成,从而实现合成高纯度α-松油醇的目的。催化剂的质量为松节油质量的5%~10%,反应时间为6~10 h,所得α-松油醇反应液中γ-松油醇质量分数不大于1.5%,精制后α-松油醇质量分数可达92.0%以上。

气相色谱-质谱联用法检测乙烯-乙烯醇活性食品包装膜中的香叶醇和α-松油醇

建立乙烯-乙烯醇包装膜中活性物质香叶醇和α-松油醇的气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)联用检测方法。实验首先讨论了样品前处理条件和GC-MS测定条件,对迁移至模拟液中的活性物质采用所建方法检测,外标法定量分析。结果表明香叶醇和α-松油醇在0.02~2.0 mg/L范围内均线性关系良好,相关系数分别为0.999 2和0.999 0。该方法的检出限分别为0.003 mg/kg和0.007 mg/kg,定量限分别为0.010 mg/kg和0.020 mg/kg。以0.1、0.2 mg/kg和1.0 mg/kg添加水平进行方法学验证,回收率为82.5%~98.5%,相对标准偏差为3.6%~10.4%。本方法快速、简便、灵敏度高,可为进一步研究活性物质在食品包装材料中的释放机理及活性食品包装膜的应用安全性方面提供有效的检测方法。

从桉叶油副产品中间歇精馏纯化α-松油醇

研究了从桉叶油副品——松油醇馏分中纯化α-松油醇的间歇减压精馏工艺,GC-MS分析了原料组成。通过绘制目标组分α-松油醇及γ-松油烯、4-松油醇、trans-松香芹醇3个主要杂质组分的馏出曲线,探讨了水和4种有机溶剂进行塔预处理对分离α-松油醇的影响,并在此基础上优化回流比,确定较佳工艺条件为:以水进行塔预处理,变回流比操作,在回流比为6的条件下收集α-松油醇,绝对压力5.0 kPa左右,沸程129～132℃,GC分析α-松油醇质量分数>90%,回收率50%。

α-松油醇的提取纯化与稳定性实验

目的建立从油松节挥发油中提取分离高纯度α-松油醇的方法,考察α-松油醇的稳定性。方法采用水蒸气蒸馏法提取油松节中的挥发油成分,利用硅胶柱色谱法,纯化挥发油,用石油醚∶乙酸乙酯(20∶1)进行等度洗脱,得较高纯度的α-松油醇。利用高温、强光照处理方法,考察α-松油醇的稳定性。结果分离提纯得α-松油醇纯度>95.0%,α-松油醇应该避光低温储存。结论该方法可靠,操作简便,可以用于油松节药材中α-松油醇的提取。

超临界二氧化碳介入的α-松油醇催化合成1,8-桉叶素

提出超临界二氧化碳介入α-松油醇异构合成1,8-桉叶素的方法,并采用二极管阵列检测器测量超临界二氧化碳下α-松油醇/环己烷体系的最大吸收波长研究二氧化碳加入量与极性的关系。考察了溶剂体系极性、溶剂量和二氧化碳压力对磷钨酸/聚离子液体(PW/PIL)催化剂催化α-松油醇异构合成1,8-桉叶素的影响,并探讨了超临界二氧化碳介质中,PW/PIL催化剂催化α-松油醇异构合成1,8-桉叶素可能的反应机理。开发了一种绿色高效的1,8-桉叶素合成工艺,当环己烷/α-松油醇的质量比10∶1,PW/PIL催化剂/α-松油醇的摩尔比0.0163∶1,CO2压力19.0 MPa,50℃反应8 h时,α-松油醇的转化率为89.3%,1,8-桉叶素的选择性为54.6%。研究表明,超临界二氧化碳起到共溶剂、膨胀溶剂、降低溶剂体系极性的三重作用,从而改善了催化剂的团聚现象,提高了1,8-桉叶素的选择性。

一种新型催化合成α-松油醇的固体催化剂研究

通过用固体超强酸Zr02/SO4-为催化剂催化松节油水合反应的实验,从中考察了此固体催化剂的催化性能,研究了合成α-松油醇的最佳工艺条件。实验结果表明,在反应温度80℃,催化剂用量为松节油质量的5%,反应时间10 h,松节油∶溶剂∶助剂∶水为1∶1∶1∶2(质量比)时,其α-蒎烯的转化率为90%,生成α-松油醇的选择性为64.96%。并对α-蒎烯和松油醇理想气体的△Hfφ,g、Sgφ进行了估算,为今后的理论研究提供了数据支持。

合成α-松油醇中的催化剂研究

文章讨论了六类酸催化剂对α－蒎烯水合制备α－松油醇的催化效应。筛选出硫酸／乙酸混合物是比较优良的催化体系，其原料易得、活性高、选择性好，而且容易再生。同时对硫酸／乙酸混酸催化体系作了较详细的探讨，为改进传统硫酸法生产α－松油醇工艺提供了新的依据。

α-松油醇对意大利青霉的抑制作用

测定α-松油醇对意大利青霉菌丝体形态及菌丝体生长的影响,并对其抑菌机制进行初步探讨。结果表明:α-松油醇能明显抑制意大利青霉菌丝体生长,最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal fungicidal concentration,MFC)分别为2.00μL/mL和8.00μL/mL;经MIC和MFCα-松油醇处理后,意大利青霉菌丝体胞外pH值、胞外电导率及260 nm条件下吸光度显著增加,总脂质含量有显著下降。提示α-松油醇能改变细胞膜的通透性、破坏细胞膜结构的完整性,导致胞内成分泄露,从而抑制意大利青霉菌丝体生长。

油樟内生细菌分离及α-松油醇高产菌株的筛选与诱变

该研究以5株油樟产油率和1,8-桉叶油素成分相对含量存在差异的油樟植株叶片为研究材料,采用组织块法、研磨法、中和剂辅助法结合LB培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基(tryptose soya agar,TSA)、卵磷脂吐温-80琼脂培养基分离油樟叶内生细菌,并采用气相色谱-质谱联用定量分析筛选α-松油醇高产菌株,对其进行紫外诱变选育。按照菌落形态特征排重后获得176株油樟叶内生细菌,经鉴定分属于4个门13个属34个种,芽孢杆菌属(Bacillus)为油樟叶内生细菌第一优势属。34株不同油樟叶内生细菌中,高产α-松油醇菌株T3-M-39于30 W紫外灯30 cm照射2 min时,致死率达74.07%,为最佳诱变条件。该条件下,与出发菌株T3-M-39相比,诱变菌株产α-松油醇能力提高了34.85%,并能保持稳定的遗传特性,为生物技术生产天然α-松油醇提供基础。

α-松油醇对指状青霉抑霉唑抗性菌株Pdw03的抑制作用

本研究探讨了α-松油醇对指状青霉抑霉唑抗性菌株Pdw03的抑制作用及其抑菌机理。体外实验结果表明α-松油醇抑制Pdw03生长的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal fungicidal concentration,MFC)均为4.00μL/mL;体内实验研究发现MFC和5 MFCα-松油醇可明显降低接种Pdw03椪柑果实的绿霉病发病率和发病直径;碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色实验发现,经1/2 MICα-松油醇处理后,Pdw03的细胞膜完整性降低,麦角固醇含量显著降低(P<0.05),麦角固醇合成相关基因ERG9表达量显著下调(P<0.05)。综上,α-松油醇通过抑制ERG9基因的表达影响菌株Pdw03的生长,可作为采后柑橘病害防治的有效替代品。

利用RNAi技术研究基因PDIDSM_85260和PDIDSM_08010表达对柠檬烯转化生成α-松油醇的影响

前期工作通过组学数据分析、蛋白分离纯化以及质谱鉴定,发现一些基因可能参与调控柠檬烯微生物转化生成α-松油醇的过程,比如PDIDSM_85260和PDIDSM_08010等。为进一步验证这些基因的功能,利用RNAi技术构建了基因PDIDSM_85260和PDIDSM_08010的干涉载体,并通过农杆菌介导转化到指状青霉DSM62840的菌丝中,经过一系列实验的验证,得到干涉菌株,并对这两个基因的功能进行研究。结果表明,与野生型菌株相比,基因PDIDSM_85260和PDIDSM_08010的干涉菌株通过微生物转化得到的α-松油醇含量均有不同程度的下降,说明基因PDIDSM_85260和PDIDSM_08010可能参与调控柠檬烯的生物转化过程。

指状青霉DSM62840生物转化柠檬烯生产α-松油醇过程中关键酶的分离纯化及质谱鉴定

以指状青霉DSM62840为研究对象,通过高压法破碎细胞,采用超高速离心、硫酸铵沉淀、羟基磷灰石层析和凝胶过滤层析等方法对指状青霉DSM62840生物转化柠檬烯生产α-松油醇过程中的关键酶进行分离纯化。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,结果显示在分子质量约为50 kDa处有一条明显的蛋白条带,并通过液相色谱-串联质谱分析初步确定该条带中的蛋白可能是二氢硫辛酰胺脱氢酶(PDIDSM;8010)。本研究为α-松油醇类香料的合成提供理论依据和参考。

浮选水中PPb级α-松油醇的热导气相色谱法

作者使用自行设计的V型浓缩器,以石油醚萃取浓缩浮选水中α-松油醇。整个分析操作中用正辛醇作内标物。在大量使用盐析剂的条件下,相比可达40,一次萃取收率达95％,实际富集比可达8000—20000倍。经浓缩富集的样品以热导气相色谱法定量。该方法的最低检测浓度为2ppb。在50ppb处的相对标准偏差为2—3％。

光学活性α-松油醇的合成新方法

本文报导在季铵盐存在下用氢型丝光沸石催化α-蒎烯的水合反应,该反应立体选择性地一步合成了光学活性α-松油醇。作者认为主产物α-松油醇的生成是通过离子对协助碳正离子重排进行的。

毛细管气相色谱法测定复方鲜竹沥液中α-松油醇的含量

目的:建立毛细管气相色谱法测定复方鲜竹沥液α-松油醇含有量。方法:以DB-WAX(30 m×0.32 mm×0.25μm)为色谱柱,以FID为检测器,进样口温度:250℃;程序升温:初始温度65℃,保留0.5 min,3℃/min升至120℃保留0.5 min,10℃/min升至210℃,280℃后运行5 min;N2为载气,柱流速:3.5 mL/min,进样1μL,分流比10∶1;FID检测器温度300℃。结果:α-松油醇在范围内线性关系良好(R2=0.9998),平均回收率为95.65%,RSD为1.26%;结论:该方法准确稳定,重复性好,可为复方鲜竹沥液的质量控制提供参考。

从桉叶油脚油提取纯化α-松油醇方法研究

研究了采用精馏、结晶、离心组合工艺技术从桉叶油脚油提取α-松油醇的方法,通过优化回流分布器结构和精馏条件,采用冷冻结晶、离心纯化工艺,解决了桉叶油脚油与α-松油醇形成难分离物系对α-松油醇提取的影响问题,构建了从脚油提取α-松油醇的技术体系,实现α-松油醇提取率80%以上,最终产品α-松油醇含量98%以上目标。该方法具有提取率高,产品质量优的特点,并实现规模化、产业化生产。

GC同时测定高良姜挥发油中α-蒎烯、β-蒎烯、桉油精和α-松油醇的含量

目的：建立同时测定高良姜挥发油中α-蒎烯、β-蒎烯、桉油精和α-松油醇4种成分含量的气相色谱方法。方法：采用水蒸气蒸馏法进行挥发油的提取，采用GC对挥发油中α-蒎烯、β-蒎烯、桉油精和α-松油醇4种成分进行含量测定。采用DB-1石英毛细管柱（0．25mm×30m，0．25μm）为分析柱；柱温以50℃为起始温度，保持2min，以8℃·min^-1升温至130℃，保持3min。检测器为FID；进样口温度230℃；检测器温度250℃；载气氮气，流速1．2mL·min^-1；进样方式为分流进样，分流比10：1；进样量1μL。结果：α-蒎烯、β-蒎烯、桉油精和α-松油醇的进样质量浓度分别在0．009～0．090（r=0．9998），0．009—0．091（r=0．9998），0．0604—0．604（r=0．9997），0．0374～0．374g·L^-1（r=0．9995）呈良好线性关系；平均回收率（n=9）分别为96．2％（RSD0．8％），96．7％（RSD1．1％），98．7％（RSD1．1％），96．7％（RSD2．2％）。结论：方法简便、快速、准确，可为高良姜药材质量控制提供依据。

α-松油醇杀菌效果的试验观察

目的研究α-松油醇的杀菌效果,为实际消毒应用提供依据。方法采用载体定量杀菌试验方法,进行实验室研究。结果以浓度为体积分数98%α-松油醇原液对载体上金黄色葡萄球菌作用15 min杀灭对数值>3.0,对载体上铜绿假单胞菌作用10 min杀灭对数值>3.0,对载体上白色念珠菌作用3 min杀灭对数值>3.0,对载体上大肠杆菌作用1 min达到完全杀灭,且α-松油醇的杀菌效果随着浓度的提高而增加。结论α-松油醇对细菌繁殖体和真菌具有一定杀灭作用,对本试验中不同细菌杀灭效果存在差异。