维生素E对半滑舌鳎垂体α-生育酚转移蛋白基因表达的影响

生育酚转移蛋白(α-tocopherol transfer protein,α-TTP)是一种可以结合维生素E的蛋白,在协助机体转运和调控维生素E含量等方面起到重要作用。维生素E能够影响鱼类垂体中生长和繁殖相关激素的分泌,这是否与α-TTP有关,值得进一步探讨。本实验旨在探究维生素E对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)垂体α-TTP基因表达的影响。在基础饲料中分别添加维生素E(DL-α-生育酚乙酸酯)0、200、400、800和1600 mg/kg,对半滑舌鳎成鱼(464.0±2.6)g进行持续60 d的养殖实验;另外,在L-15培养基中添加0、18和54μmol/L的维生素E,对半滑舌鳎垂体细胞进行为期3 d的体外原代培养实验。分别取垂体组织和垂体原代细胞,克隆α-TTP基因,并通过实时荧光定量PCR分析α-TTP基因相对表达量。结果显示,α-TTP基因全长3964 bp,编码293个氨基酸;α-TTP基因在半滑舌鳎各组织均有表达,其中,在脾脏中表达最高,其次是肾脏,在胃中表达量最低;α-TTP基因表达量随着饲料中维生素E含量的增加而呈先升高后下降的变化趋势,400 mg/kg组显著高于其他各组(P<0.05);随着细胞培养液中维生素E浓度的升高,α-TTP基因相对表达量显著增加。综上所述,本研究首次报道维生素E能够影响垂体中α-TTP基因的表达,饲料中添加400 mg/kg的维生素E能够显著促进半滑舌鳎垂体α-TTP基因的表达。本研究为探讨α-TTP在介导维生素E影响鱼类生长与繁殖方面的潜在机制提供新思路。

香茅醛-α-生育酚/明胶-葡聚糖复合膜对扇贝冷藏保鲜效果的影响

以明胶、葡聚糖和不同浓度(0%、0.5%、1.0%和1.5%,质量分数)活性物质(香茅醛和α-生育酚)制备复合膜,采用扫描电子显微镜、热重分析和红外光谱表征复合膜,探究不同添加量活性物质对复合膜理化、抗菌、抗氧化及扇贝保鲜性能的影响。结果表明,明胶和葡聚糖兼容性好,添加活性物质导致复合膜的表面粗糙、横截面多孔、疏水性增强,但未影响其热稳定性。复合膜活性物质含量的升高增加了其厚度、不透明度、抗菌和抗氧化能力,但降低了其水蒸气透过率和机械强度。含1.5%活性物质的复合膜显著增强扇贝贝柱冷藏期间的化学和微生物稳定性,延长其货架期至少6d(依据菌落总数结果)。因此,香茅醛-α-生育酚/明胶-葡聚糖复合膜在水产品保鲜领域具有良好的应用前景。

正相高效液相色谱法检测婴幼儿乳粉中的α-生育酚、α-生育酚醋酸酯

开发了一种快速测定婴幼儿乳粉中α-生育酚以及α-生育酚醋酸酯的正相高效液相色谱法。使用乙醇、正己烷提取,40℃下等度洗脱;流动相是体积比为97.2:2.8的正己烷-乙酸乙酯混合溶剂,流速为0.5 mL/min;α-生育酚和α-生育酚醋酸酯的检测波长分别为284 nm和296 nm。结果表明:α-生育酚和α-生育酚醋酸酯的回收率分别为99.41%,102.17%;多次测定相对标准偏差分别为3.45%和3.27%。检出限分别为5.5ng,6.9ng。本方法操作简单、精密度、回收率和灵敏度高,适用于快速检测婴幼儿奶粉中α-生育酚以及α-生育酚醋酸酯。

α-生育酚及其衍生物对动物生长发育的调控

本文简述了α-生育酚(α-TOH)及其衍生物的分子结构、生物学效价、吸收与代谢,着重综述其在免疫调节、细胞保护、抗肿瘤等方面的独特生物学作用及相关机制。

α-生育酚醋酸酯的制备

以95%α-生育酚和醋酸酐为原料,对甲苯磺酸为催化剂制备α-生育酚醋酸酯。通过实验确定的最佳工艺条件为:反应原料比n(α-生育酚)∶n(对甲苯磺酸)∶n(醋酸酐)=1∶0.007∶2,反应时间为1h,反应温度为100℃,α-生育酚醋酸酯收率为95%。

[Bmim]Cl/FeCl_3离子液体催化α-生育酚与β-D-五乙酰葡萄糖的糖基化反应

以[Bmim]Cl/FeCl3(三氯化铁/氯化丁基甲基咪唑)离子液体作为反应介质和催化剂,考察了离子液体的酸度、反应温度及反应时间对α-生育酚与β-D-五乙酰吡喃型葡萄糖糖基化反应的影响.结果表明,离子液体的催化活性与其酸强度密切相关,离子液体的酸性越强,其对此糖基化反应催化活性越高.在FeCl3与[Bmim]Cl物质的量比为2的[Bmim]Cl/FeCl3离子液中,α-生育酚与β-D-五乙酰吡喃型葡萄糖在45℃下反应3h,可以得到较高的转化率,α-生育酚的转化率最高可达70.2%.同有机溶剂作为反应介质相比,反应条件温和,反应时间短,室温离子液体具有更好的催化活性,所得产物与离子液体不溶,便于分离,催化体系可循环使用,且对环境友好.

温度和添加剂对象草青贮发酵品质、α-生育酚和β-胡萝卜素的影响

为提高青贮饲料的发酵品质,降低α-生育酚和β-胡萝卜素的损失,研究了温度(45,30和15℃)和添加剂(无添加:CK;纤维素酶:E;植物乳杆菌:LP)对象草青贮饲料的影响。试验结果表明,在所有温度水平,象草青贮饲料的发酵品质良好,但30℃时产生了少量丁酸,发酵品质略有下降;添加LP和E降低了pH(P<0.05),增加了乳酸含量和乳酸乙酸比(P<0.05),提高了发酵品质。象草青贮饲料贮藏在45和15℃时的α-生育酚含量显著高于30℃(P<0.05),β-胡萝卜素含量显著低于30℃(P<0.05)。LP和E添加组在所有温度水平的α-生育酚和β-胡萝卜素含量均较低(P<0.05)。E组在45℃的α-生育酚含量显著高于LP组,E组在30和15℃的β-胡萝卜素含量显著高于LP组。

α-生育酚在花生油、芝麻油和菜籽油中的抗氧化效能

为揭示油脂自身氧化特点及其对α-生育酚抗氧化效能的影响,添加不同浓度的α-生育酚到菜籽油、花生油和芝麻油中并进行氧化,测定POV值、茴香胺值和总氧化值的变化。3种油脂的双键相对值的关系是芝麻油>菜籽油>花生油,所以推测芝麻油最易氧化。而结果表明菜籽油最易氧化,其次是花生油,芝麻油最稳定,因此油脂氧化及α-生育酚的抗氧化不仅与脂肪酸组成的双键数有关,还可能与非甘油酯成分如维生素、多酚类化合物等不皂化物有关。不同油脂α-生育酚的抗氧化效能不同,如α-生育酚的最佳抗氧化浓度在菜籽油、花生油和芝麻油中分别为200、100和25 mg/kg,即越稳定的油脂需要添加的α-生育酚越低,反之亦然;然而若添加的α-生育酚高于其最佳抗氧化浓度则促进油脂氧化。

α-生育酚与自由基DPPH^.的反应机理研究

通过NMR产物分析方法确认α-生育酚与DPPH·在DMSO中的反应最终产物结构为醌式.此外,对该反应过程的ESR实验证实α-生育酚与DPPH·反应的计量比为1∶2.由此可以进一步推断:α-生育酚与DPPH·反应的分子机制为两步过程.

α-生育酚壳聚糖纳米粒的制备、表征及体外缓释抗氧化性能

α-生育酚作为天然抗氧化剂和营养强化剂被广泛应用于食品领域,但由于其对氧气、光照、金属离子等环境敏感,易快速失活,且不溶于水,极大地限制了其应用范围。本研究采用乳化-离子凝胶两步法制备α-生育酚壳聚糖纳米粒,将α-生育酚进行包埋。以颗粒平均粒径、多分散系数、表面电位为参考指标,通过单因素及正交试验考察壳聚糖(chitosan,CS)质量浓度、α-生育酚质量浓度、CS与三聚磷酸钠(sodium tripolyphosphate,TPP)质量比、p H值、搅拌速率等因素对纳米颗粒平均粒径和包封率的影响,确定最优制备工艺。采用动态光散射仪、扫描电镜、傅里叶红外光谱对纳米颗粒进一步表征,并考察其体外释放性能和抗氧化效果,以期为α-生育酚在腌腊肉制品后期贮藏过中的脂质抗氧化应用提供理论基础。结果表明,α-生育酚壳聚糖纳米粒最优制备工艺条件为CS质量浓度1 mg/mL、α-生育酚质量浓度1 mg/mL、CS与TPP质量比7∶1、CS初始p H值为4.5、搅拌速率900 r/min。所得纳米颗粒平均粒径214 nm,包封率51.65%。红外光谱表明CS与三聚磷酸钠静电吸附,生育酚被包封。扫描电镜下形态学结构大小均匀,呈规则球形。体外释放实验和抗氧化实验表明α-生育酚壳聚糖纳米粒具有缓释抗氧化作用。

超临界色谱法测定化妆品中生育酚及α-生育酚乙酸酯

建立了化妆品中4种生育酚异构体及α-生育酚乙酸酯的超临界色谱分析方法.不同基质类型的化妆品经乙腈水溶液-正己烷溶剂体系按不同的添加顺序进行分散、提取、液液分配后,以二氧化碳为流动相,异丙醇-正己烷（1∶1）为改性剂,利用亚乙基桥杂化颗粒色谱柱（Viridis@BEH,250 mm＆#215;4.6 mm,5μm）对目标物和样品杂质进行有效分离,用光电二极管矩阵检测器（SFC-PDA）进行测定.系统考察了提取条件和色谱条件对实验结果的影响.结果表明：4种生育酚和α-生育酚乙酸酯的定量下限（S/N=10）分别为50 mg/kg和25 mg/kg,空白基质加标回收率为81.3％～ 109.5％,相对标准偏差（RSD）不大于12.8％.该方法前处理简单、快速、准确,可用于各类化妆品中4种生育酚异构体及α-生育酚乙酸酯含量的检测.

维生素E对冷应激下蛋种鸡生产性能、蛋品质及蛋黄和组织中α-生育酚含量的影响

本试验旨在探讨冷应激条件下饲粮中添加维生素E对海兰褐蛋种鸡的生产性能、蛋品质及蛋黄和组织中α-生育酚含量的影响。试验选用39周龄海兰褐蛋种鸡288只,随机分成6组,每组4个重复。维生素E以维生素E醋酸酯的形式添加,其添加水平分别是0(对照组)、20、40、80、160和320 mg/kg,预试期2周,试验期8周。结果表明:与对照组相比,80、160和320mg/kg组产蛋率极显著提高(P<0.01),其中160 mg/kg组最高,而320 mg/kg组相对160 mg/kg组有下降趋势(P>0.05);添加不同水平维生素E对种蛋品质未见影响(P>0.05);随维生素E添加水平的增加,蛋黄、肝脏、心脏中α-生育酚含量呈线性增加,而肾脏沉积增加不明显。试验结果提示,海兰褐蛋种鸡饲粮中增加维生素E的添加水平可以缓解冷应激造成的生产性能的下降,提高蛋黄、肝脏和心脏的α-生育酚含量。

α-生育酚琥珀酸酯对肉鸡抗氧化功能与肌肉品质的影响

旨在研究并比较DL-α-生育酚醋酸酯（DL-α-TOA）及不同水平D-α-生育酚琥珀酸酯（D-α-TOS）日粮对肉鸡的生长、抗氧化功能与肉品质的影响。选用1日龄Arbor Acres（AA）肉鸡320只，随机分为4个处理，分别在基础日粮中添加30mg·kg-1 DL-α-TOA（对照组）及D-α-TOS10mg·kg-1（α-TOS1组）、30mg·kg-1（α-TOS2组）和50mg·kg-1（α-TOS3组），试验期42d。结果表明：对照组及各α-TOS组间肉鸡的生长均无显著差异（P〉0．05）；相关性分析结果表明，肉鸡日粮中D-α-TOS的添加水平与血清（R2=0．9831，P〈0．01）和肝脏（R2=0．9336，P〈0．05）中α-生育酚（α-TOH）的含量呈显著正相关，与血清（R2=-0．9487，P〈0．05）和肝脏（R2=-0．9901，P=0．0518）丙二醛（MDA）呈负相关；与对照组和a—TOSl组相比，日粮中添加30～50mg·kg α-TOS能够使血清总超氧化物歧化酶（T—SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）、总抗氧化能力（T—AOC）和肝脏的T—SOD活性及T-AOC均有不同程度地提高（P〈0．05或P〈0．01），同时肝脏活性氧（ROS）水平也显著降低（P〈0．05）；在肉品方面，日粮中添加30～50mg·kg-1 α-TOS显著降低了肉鸡胸腿肌的滴水损失（48h）和剪切力，及腿肌的烹饪损失，但对pH45min、pH24h、24h滴水损失和肉色无显著影响（P〉0．05）。结果提示，日粮中添加30～50mg·kg-1 D-α-TOS能够在一定程度上提高肉鸡机体的抗氧化功能，提高了肌肉的系水力和嫩度，其原因主要是α-TOS的添加导致rTOH在血清和肝脏中含量的提高，及肝脏MDA和ROS水平的降低。

α-生育酚在玉米油、大豆油和茶油中的抗氧化动力学研究

进行了α-生育酚在玉米油、大豆油和茶油中的抗氧化动力学研究。添加不同量的α-生育酚到纯化玉米油、大豆油和茶油中,进行Schaal烘箱氧化实验,定期测定过氧化值和茴香胺值,并计算总氧化值。根据一阶动力学反应或零阶动力学反应所得回归系数可以得出,过氧化值、茴香胺值、总氧化值与氧化时间的拟合方程是成立的,且生成氢过氧化物的速率常数可代替油脂的氧化速率常数,从而得到在不同α-生育酚添加量下的油脂氧化速率常数。结果表明:当α-生育酚添加量低于最适添加量时,随着α-生育酚添加量升高,氧化速率常数会逐渐变小,表明α-生育酚的抗氧化效能不断增强。当α-生育酚添加量高于最适添加量后,随着α-生育酚添加量升高,氧化速率常数会逐渐增大直至大于空白样的氧化速率常数,表明α-生育酚的抗氧化效能不断减弱直至出现促氧化现象。因此,通过油脂氧化速率常数探究不同添加量的α-生育酚在玉米油、大豆油和茶油中的抗氧化效能是可行的。

分散液液微萃取-高效液相色谱法测定枸杞中α-生育酚

建立基于分散液液微萃取样品前处理法,并结合高效液相色谱紫外检测技术测定枸杞中α-生育酚的含量,考察影响分散液液微萃取的因素包括萃取剂和分散剂类型及用量、p H值、离子强度、萃取时间和萃取温度。方法的线性范围为100~50 000μg/L,r=0.999 7。在最优条件下,日内和日间重复性分别为2.9%和6.5%,检出限为3.1μg/L,定量限为10.2μg/L。并将该法成功应用于3种市售枸杞中α-生育酚含量的测定,加标回收率为85.7%~106.3%,相对标准偏差为0.68%~4.62%。方法具有有机溶剂用量少、操作简单快捷、准确度和灵敏度高、重复性好等优点。

添加剂对象草青贮发酵品质、α-生育酚和β-胡萝卜素的影响

为提高青贮饲料的发酵品质,降低α-生育酚和β-胡萝卜素的损失,研究了添加剂(无添加,CK;邻叔丁基对苯二酚,T;植物乳杆菌,L;植物乳杆菌和邻叔丁基对苯二酚组合添加,TL)和贮藏时间(35d和70d)对象草(Pennisetum purpureum Schumach.)青贮品质的影响。结果表明:在两个贮藏时间,象草青贮饲料发酵品质都良好;L和TL组降低了饲料pH(P<0.05),增加了乳酸含量和乳酸乙酸比(P<0.05);T组在两个贮藏时间的所有发酵品质参数与CK组无显著差异。L和TL组在两个贮藏时间的α-生育酚显著低于CK组和T组(P<0.05),T和TL组在贮藏70天的β-胡萝卜素含量显著低于CK组(P<0.05)。综上所述,无添加剂的象草低温15℃贮藏70d后的青贮发酵品质良好,α-生育酚和β-胡萝卜素的损失较小。

α-生育酚、VC硬脂酸酯和槲皮素在含松籽油酸结构脂中抗氧化作用的研究

通过Schaal烘箱(60℃)氧化法,比较α-生育酚(TOH)、抗坏血酸棕榈酸酯(AP)和槲皮素(Qu)对含有松籽油酸的软质黄油基料油(SL)的抗氧化作用。结果表明:经过30d的烘箱氧化后,SL中多不饱和脂肪酸的含量减少,其中功能性松籽油酸由7.10%降低到4.60%。AP和Qu能够有效降低多不饱和脂肪酸的氧化分解,并且显著抑制结构脂的过氧化值(POV)、酸值(AV)和硫代巴比妥酸值(TBARS)。AP和Qu的抗氧化作用随着添加量增加而增强。与低添加量(100mg/kg)TOH相比,高添加量(500 mg/kg)TOH有促进氧化作用,表现为增加酸值和硫代巴比妥酸值。另外,油脂氧化不仅改变了化学性质如脂肪酸组成、酸值、过氧化值和硫代巴比妥值等,而且改变了溶解和结晶曲线,添加抗氧化剂也对油脂氧化后的溶解结晶图谱有一定影响。

氧化油脂日粮中添加RRR-α-生育酚琥珀酸酯对鸡肉品质的影响

探讨RRR-α-生育酚琥珀酸酯(TOS)对饲喂氧化油脂日粮鸡肉品质的影响,选用600只1 d AA肉鸡,随机分为10个处理,每处理6个重复,采用2×5因子设计,即2种油脂类型(新鲜和氧化油脂)和5种α-生育酚的处理,30 mg/kg all-rac-α-生育酚醋酸酯(TOA1)、30 mg/kgRRR-α-生育酚醋酸酯(TOA2)及15、30、60 mg/kgRRR-α-生育酚琥珀酸酯(TOS1、TOS2和TOS3),试验期42 d。结果表明:(1)氧化油脂日粮增加了机体脂质过氧化反应,胸腿肌肉色变差,滴水损失增加,MDA含量升高,SOD活性下降(P>0.05);(2)不同的油脂日粮处理中,TOS3组均能降低胸肌48 h滴水损失和烹饪损失(P<0.05),腿肌亮度、红色度及滴水损失在TOS2或TOS3组得到改善(P<0.05);TOS2和TOS3组胸腿肌MDA含量降低(P<0.05或P<0.01),胸肌TOS3组SOD活性提高(P<0.05);与TOS1相比,TOS2和TOS3组血清及肝脏中α-生育酚含量提高(P<0.05)。日粮中油脂氧化导致鸡肉品质降低,添加TOS可通过增加机体α-生育酚含量,提高机体抗氧化能力,改善肌肉品质。

大豆α-生育酚的遗传与QTL分析

【目的】通过对大豆α-生育酚进行遗传和QTL分析,研究其遗传机制,定位其主效QTL,为高α-生育酚含量的大豆品种选育奠定遗传学基础。【方法】以栽培大豆晋豆23为母本、山西农家品种大豆灰布支黑豆(ZDD02315)为父本杂交衍生的447个RIL作为供试群体构建遗传图谱,试验群体及亲本分别于2011年、2012年和2015年夏季在河南省农业科学院原阳试验基地种植,冬季在海南省三亚南繁基地种植。田间试验采取随机区组设计,2次重复。从6个环境中每个家系选取15.00 g籽粒饱满,大小一致的大豆种子,利用高效液相色谱法定性、定量测定样品中的α-生育酚含量。采用主基因+多基因混合遗传分离分析法和WinQTLCart 2.5复合区间作图法,对大豆α-生育酚含量进行主基因+多基因混合遗传分析和QTL定位。【结果】基于主基因+多基因混合遗传分离分析法,α-生育酚受4对主基因控制,遗传基因分布在双亲中。4对主基因间加性效应值中3对为正值,表明这些基因来源于母本晋豆23;1对为负值,表明该对基因来源于父本灰布支黑豆;4对主基因之间相互作用的上位性效应表现为正值和负值的各有3对,说明不同基因间上位性效应对α-TOC的影响方向并不完全一致。环境因素引起的变异为0.13%—4.05%。表明α-TOC主要受4对主基因影响,受环境因素影响较小。采用WinQTLCart 2.5复合区间作图(CIM)共检测到17个影响α-生育酚的QTL,分布于第1、2、5、6、8、14、16、17共8条染色体中,单个QTL的贡献率8.35%—35.78%,QTL主要表现为加性效应。qα-D1a-1同时在2011年原阳、2012年原阳和三亚、2015年原阳4个环境下检测到,且均定位在第1染色体Satt320—Satt254标记区间19.79 cM处,解释的表型变异分别为12.55%、12.01%和11.89%、12.61%,加性效应值0.119-0.132,增加α-TOC含量的等位基因来自母本晋豆23;qα-A2-1同时在2011年原阳和三亚、2015年原阳3个环境下检测到,且均定位在第8染色体Sat_129—Satt377标记区间44.53 cM处,解释的表型变异分别为23.18%和22.56%、23.01%,加性效应值-0.195—-0.180,增加α-TOC含量的等位基因来自父本灰布支黑豆。qα-D1a-1和qα-A2-1 2个QTL能够稳定遗传。【结论】α-生育酚最适遗传模型符合4MG-AI,即4对具有加性上位性效应的主基因遗传模型。其遗传主要受4对主基因影响,受环境因素影响较小。检测到α-生育酚的2个稳定主效QTL,Satt320—Satt254和Sat_129—Satt377是共位标记区间。

α-生育酚琥珀酸酯对肉鸡脂质过氧化及脂代谢的影响

[目的]研究不同油脂水平日粮中添加α-生育酚琥珀酸酯(α-tocopherol succinate,TOS)对肉鸡过氧化及脂代谢的影响。[方法]选用1日龄AA肉鸡480只,随机分为8组各6个重复,每个重复10只,采用2×4因子设计,即基础日粮(N)和高脂日粮(H),4个生育酚处理:50 mg·kg-1α-生育酚醋酸酯(α-tocopherol acetate,TOA),50 mg·kg-1(TOS1)、100 mg·kg-1(TOS2)和150 mg·kg-1(TOS3)TOS,试验分前后两期共42 d。[结果]与基础日粮对照组比,高脂日粮组油脂极显著降低料肉比(P<0.01),生育酚的添加极显著改善平均日采食量和日增体质量(P<0.01),同浓度TOS效果优于TOA;油脂极显著增加丙二醛(MDA)浓度(P<0.01),生育酚处理可显著降低MDA浓度、显著提高谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性(P<0.05);油脂能够显著增加后期血清中总甘油三酯(TG)浓度(P<0.05),血清总胆固醇(TC)、TG随着TOS的增加有降低的趋势(P>0.05)。[结论]肉鸡日粮中添加TOS和高油脂能够改善生产性能,添加TOS能够缓解因油脂添加所带来的脂质过度沉积及过氧化问题。