气相色谱-电子捕获检测法测定人尿中α-羟基三唑仑及α-羟基阿普唑仑

建立了尿中三唑仑的代谢物α－羟基三唑仑和阿普唑仑的代谢物α－羟基阿普唑仑的气相色谱－电子捕获检测法。代谢物用Ｎ，Ｏ－双三甲基硅烷基－三氟乙酰胺（ＢＳＴＦＡ）进行三甲基硅烷衍生化后进行检测。尿中代谢物的检出限约为１μｇ／Ｌ（Ｓ／Ｎ＝３），至少可检出口服治疗量药物人体２４ｈ之内排泄尿中的代谢物，满足麻醉后犯罪案件中药物检验的要求。

血、尿中三唑仑和α-羟基三唑仑的检验

三唑仑是当前国内最常用的苯二氮卓类药物之一,常被犯罪分子用于麻醉抢劫和麻醉凶杀.

三唑仑及α-羟基三唑仑检验

使用内部质量控制的酶水解、液一液萃取法提取，ＧＣ—ＥＣＤ及ＧＣ—ＭＳ／ＭＳ检测 法对体内组织、体液的三唑仑及α－羟基三唑仑进行检测，能够同时定量检测出其他方法 难于检测的。一羟基三哇仑和三哇仑成份。该法具有方法简便、灵敏度高、重现性好、线 性范围广、回收率高的特点，经办案实践，证实能够满足实际办案工作的需要。

GC/MS/scan法检验人体尿样中的α-羟基三唑仑

笔者在实际办案中发现,在人体尿样中三唑仑及其代谢物的量低于300ng/mL时,一步法金标苯并二氮卓检测试剂条测试结果呈阴性,但通过提取α-羟基三唑仑并进行TMS衍生化处理,然后进行GC/MS/scan(全扫描)分析,可大大提高α-羟基三唑仑的检出率,其绝对检测限为04ng。

酶水解-HPLC法同时测定尿中三唑仑及其代谢物

目的 :用酶水解 HPLC方法同时测定尿中三唑仑及其主要代谢物α 羟基三唑仑。方法 :尿样 2mL ,加 β 葡萄糖醛酸苷酶 0 2 5mL ,5 5℃酶解 2h ,用正己烷 二氯甲烷 (5∶3,v/v) 5mL提取 ,挥干提取溶剂后用 5 0 μL甲醇溶解 ,10 μL进样 ,HPLC检测。结果 :本法对三唑仑和α 羟基三唑仑的最低检测限均为 4ng·mL-1;绝对回收率分别为 93 12 %和 6 7 70 % ;日内、日间RSD分别在 6 0 8%和 11 0 5 %以下 ;线性范围均为 12 5～ 375 0ng·mL-1。结论 :酶水解提高了α 羟基三唑仑的检出率 ,从而使本法能同时测定尿中三唑仑及α 羟基三唑仑 ,此法重现性好、灵敏、可靠 。

体内三唑仑及其主要代谢物检验方法研究

使用内部质量控制的酶水解、液-液萃取法提取,GC-ECD及GC-MS/MS检测法对体内组织、体液的三唑仑及α-羟基三唑仑进行检测,能够同时定量检测出其他方法难于检测的α-羟基三唑仑和三唑仑成分.同时,通过对人体及动物进行实验,初步确定了三唑仑及α-羟基三唑仑在人体中反动物体内的代谢和动物体内的分布情况.该法具有方法简便、灵敏度高、重现性好、线性范围广、回收率高的特点,经办案实践,证实能够满足实际办案工作的需要.

兔体内三唑仑及其代谢物的检测

目的不同方法检测三唑仑及代谢物α-羟基三唑仑,为其及时、准确的检测提供科学证据和最优方法。方法用GC/NPD、GC/MS、MS/MS、GC/ECD对兔体内三唑仑及代谢物α-羟基三唑仑进行检测。结果GC/ECD法最易检测出三唑仑及其代谢物。结论兔胃及内容物、尿液中容易检测到三唑仑及其代谢物;运用酶水解后,检测率最高;GC/ECD检测三唑仑及其代谢物的灵敏度最高。

HPLC法检测尿中α—羟基三唑仑

本文建立了尿中α-羟基三唑仑的 HPLC 法定量测定的方法。α-羟基三唑仑是近年来在麻醉抢劫中常被犯罪分子使用的三唑仑主要体内代谢物。用乙醚作萃取剂,回收率达83.3%±3.4%,使用 ODS2C_(18)反相柱,甲醇—水(60:40)为流动相,检测波长230nm,检出限7.0ng/ml,是一简单、快速、灵敏度高的方法。

GC/ECD法检测尿中α—羟基三唑仑

本文报道了尿中三唑仑的代谢物α-羟基三唑仑的 GC/ECD 检测法。该法灵敏度高,尿中检出限为1.5ng/ml。人口服三唑仑后,尿中α—羟基三唑仑含量较高,本文检测了人口服治疗量三唑仑0.25mg 后17～20小时的尿含量为61.5ng/ml,表明本文方法适合麻醉后犯罪检验的需要。

高特异性三唑仑代谢物单克隆抗体的制备

目的建立分泌抗三唑仑代谢物α-羟基三唑仑单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备高特异性的三唑仑代谢物单克隆抗体,为三唑仑及其代谢物免疫分析方法的开发奠定基础。方法在三唑仑分子的6位苯环对位上引入活性氨基基团,然后通过缩合反应分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)相偶联形成完全抗原。以三唑仑-KLH免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,筛选等杂交瘤技术建立稳定的分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。纯化后的单克隆抗体,分别用SDS-PAGE电泳法、间接ELISA法和胶体金免疫层析法对其纯度、效价及灵敏度和特异性进行测定。结果获得3株能稳定分泌三唑仑代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2G4,4B2和5H6。2G4和4B2抗体只与三唑仑代谢物α-羟基三唑仑有反应,灵敏度分别为500ng/mL和750ng/mL。与其他参试物无交叉反应。因5H6抗体为IgM,考虑到纯化难度和实际应用的限制,暂未做深入研究。结论本研究制备的2G4和4B2单克隆抗体仅识别三唑仑代谢物α-羟基三唑仑,具有高度特异性和灵敏度。