广东海风藤提取物对痴呆鼠脑内β淀粉样前体蛋白基因表达的影响

目的 研究老年痴呆鼠脑内 β淀粉样前体蛋白基因 (β APP)表达的改变 ;及广东海风藤提取物 (HS2 )对老年痴呆鼠学习记忆及脑内 β APP基因表达的影响。方法 选用昆明种小鼠 ,腹腔注射D 半乳糖和灌胃三氯化铝制备老年痴呆小鼠模型 ,三个治疗组在造模的同时分别灌胃低、中、高剂量的HS2 。通过Morris水迷宫和半定量反转录聚合酶链反应 (RT PCR)来测定HS2 对老年痴呆模型小鼠学习记忆和脑内 β APPmRNA含量的影响。结果 老年痴呆模型小鼠学习记忆成绩下降 ,脑内 β APP基因表达增强。模型小鼠口服低、中、高剂量HS2 能提高其学习记忆成绩 ,降低脑内β APPmRNA含量并呈现一定的量效关系。 结论 HS2 能改善老年痴呆鼠学习记忆能力并下调β APP基因的表达。

二苯乙烯苷对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠脑内β淀粉样前体蛋白及分拣蛋白相关受体1 mRNA表达的影响

目的研究二苯乙烯苷(TSG)对APP/PS1双转基因小鼠脑内β淀粉样前体蛋白(APP)及分拣蛋白相关受体(SORL)1表达的影响。方法 3月龄APP/PS1双转基因鼠50只,随机分为模型组、阳性药石杉碱甲组、TSG高、中及低(0.3,0.1,0.033 g/kg)剂量组,另取同龄C5B7L/6J鼠10只为正常对照组。各组给予相应药物60 d后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠海马神经元的一般结构;免疫组化SABC法检测各组小鼠脑组织APP蛋白的表达。FQ-PCR法检测SORL1 mRNA表达情况。结果与模型组比较,各组小鼠大脑皮层及海马区形态均有不同程度恢复;APP表达量均下降(P<0.01,P<0.05);SORL1 mRNA表达均有所上调(P<0.05)。结论 TSG治疗阿尔茨海默病(AD)的机制可能与促进SORL1 mRNA生成、抑制APP异常代谢、减少老年斑的生成等机制有关。

阿尔茨海默病中β淀粉样前体蛋白基因外显子9、10的mRNA表达及突变研究

于上海地区汉人群中,探讨阿尔茨海默病(AD)患者外周血中β淀粉样前体蛋白基因外显子9、10(APP9～10)的mRNA表达水平,并作cDNA的点突变检测。采用半定量竞争性反转录聚合酶链反应(semi quantitivecompetitiveRT PCR)技术测定APP9～10的mRNA表达水平;以聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态(RFLP)方法检测基因组DNA中载脂蛋白E基因(APOE)和早老素1基因(PS1)多态;APP9～10cDNA的点突变检测采用变性梯度凝胶电泳法。结果表明(1)AD患者中APP9～10的mRNA表达水平显著高于健康老人(P<0.05);(2)作为AD的主要风险因子,APOE ε4等位基因并不影响AD患者中APP9～10的mRNA表达水平,而另一可疑风险因子PS1基因1等位基因的存在却可显著增加AD患者中APP9～10的mRNA表达;(3)AD患者中不存在APP9～10cDNA的点突变。提示上海汉人群中,AD患者外周血中APP基因外显子9、10的mRNA表达水平显著升高,也许这一生物学改变可作为一种生物学辅助诊断指标应用于AD的临床研究。

补阳还五汤对Aβ_(1-40)所致老年性痴呆大鼠海马区β淀粉样前体蛋白及相关基因表达的影响

目的探讨补阳还五汤对老年性痴呆(AD)大鼠海马区β淀粉样前体蛋白(β-APP)及相关基因:环氧合酶2(COX-2)、核转录因子抑制蛋白α(IкB-α)、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的影响及可能的作用机制。方法采用Aβ1-40海马区注射,建立AD大鼠模型,免疫组化法观察中药补阳还五汤对AD大鼠海马区β-APP,COX-2,IкB-α及nNOS的影响。结果补阳还五汤能明显降低AD模型大鼠海马区β-APP,COX-2,IкB-α表达,使nNOS表达升高。结论补阳还五汤可能通过COX-2,NF-кB/IкB-α,增加模型大鼠海马区nNOS表达,影响β-APP生成,延缓神经元细胞的早期损伤和迟发性损伤,从而起到治疗AD的作用。

耳穴埋针对血管性痴呆大鼠记忆障碍及β淀粉样前体蛋白表达的影响

目的探讨耳针对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆障碍的改善及其与β淀粉样前体蛋白(APP)表达的关系。方法采用4血-管阻断(4-VO)全脑缺血再灌注制备VD大鼠模型,针刺脑、肾耳穴后,作行为学检测、免疫组化、图像分析。结果迷宫学习记忆能力测试表明,耳针组大鼠成绩优于VD模型组(P<0.05)。耳针组大鼠脑内APP免疫阳性神经细胞数低于VD模型组,其平均光密度值高于VD模型组(P<0.05)。结论耳针改善了VD模型大鼠学习记忆,这可能是耳针抑制了VD大鼠APP的过量表达,从而对VD模型大鼠海马神经元起到保护作用。

真核表达载体pcDNA3.1-β淀粉样前体蛋白裂解酶的构建及其在COS-7细胞中瞬时表达

目的构建β淀粉样前体蛋白裂解酶(β-siteamyloidprecursorproteincleavingenzyme,BACE)基因的真核表达载体,为修复阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)损伤神经元奠定基础。方法采用RT-PCR方法,从人的成神经细胞瘤的总cDNA中,扩增出1.5kb的BACEcDNA片段,再用BamHI和XhoI双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒;以免疫细胞化学法检测BACE基因的表达情况。结果人BACE基因的cDNA已克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1质粒中;经脂质体转染COS-7细胞后,并由潮霉素进行筛选,可见转染细胞胞浆中和胞膜上有较高量的BACE蛋白表达。结论成功构建了pcDNA3.1-BACE的真核表达载体,为研究BACE基因在AD发病机制中的作用及抑制BACE,为治疗AD奠定一定的实验基础。

1,6-二磷酸果糖对脑白质损害新生大鼠脑内β淀粉样前体蛋白表达的影响

【目的】 探讨 1,6 二磷酸果糖 (fructose 1,6 diphosphate ,FDP)对脑白质损害 (whitematterdamage ,WMD)大鼠脑内 β淀粉样前体蛋白 (β amyloidprecursorprotein ,β APP)表达的影响。 【方法】 2日龄新生大鼠随机分为 :正常对照组、WMD组、FDP干预组及盐水干预组 ,后三组在建立新生大鼠脑白质损害模型后 ,应用相应干预方法进行干预。采用HE染色及免疫组织化学方法 ,观察损伤 2 4h后脑组织病理学结构和 β淀粉样前体蛋白表达的情况。 【结果】 实验各组HE染色未见明显差异 ,仅FDP干预组水肿稍减轻。WMD组及盐水干预组结扎侧β APP免疫反应较正常对照组明显增强 (P <0 .0 1) ,并且两组之间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。FDP干预组结扎侧β APP免疫反应较WMD组盐水干预组明显减轻 (P <0 .0 5 )。 【结论】 β APP是未成熟脑白质损伤的敏感指标。FDP可减少 β APP的表达水平 ,从而减轻缺血性脑损伤 ,对脑白质具有保护性作用。

手术创伤对大鼠海马中β淀粉样前体蛋白和β淀粉样蛋白表达的影响

目的探讨手术创伤对大鼠海马中β淀粉样前体蛋白（App）、β淀粉样蛋白（Aβ）表达的影响。方法49只SD大鼠随机分成对照组（A组,n=7）、假手术组（B组,n=21）、肝部分切除术组（C组,n=21）,B、C组大鼠分别在术后24 h、3 d、7 d三个时间点取左侧海马（n=7）,放射免疫法测Aβ,取右侧海马热启动荧光定量PCR测AppmRNA。结果（1）肝部分切除术后24 h大鼠海马中App770（Ct）/GAPDH（Ct）为（1.39±0.05）,低于对照组和假手术组（P〈0.05）,说明此时App770mRNA的表达增加。但是手术对于App695mRNA、App751mRNA以及App770mRNA在其他时间的表达没有影响。假手术组App695 mRNA、App751mRNA、App770mRNA的表达与对照组差异无显著性（P〉0.05）。（2）肝部分切除术组大鼠海马中Aβ的表达在术后24 h、3 d、7 d分别为（58.3±2.6）pg/ml、（48.0±3.7）pg/ml、（27.2±3.6）pg/ml,明显高于对照组和假手术组,（P〈0.05）。在相应的时间点中,假手术组与对照组没有差异（P〉0.05）。结论肝部分切除术后大鼠海马中App770mRNA的表达增加,Aβ表达水平上调。

β淀粉样前体蛋白与弥漫性轴索损伤

弥漫性轴索损伤 (diffuseaxonalinjury,DAI)后 ,β淀粉样前体蛋白 (β amyloidprecursorprotein ,β APP)在轴索内积聚 ,是轴索损伤的一个重要病理标志。许多研究通过 β APP的检测 ,对轴索损伤的程度进行评估。β APP在病理状况下分解生成 β淀粉样蛋白 (amyloidbetaprotein ,Aβ) ,后者具有多方面的神经毒性作用。笔者现对 β -APP的结构、功能、代谢和它在DAI后的表达、作用及其机制进行如下综述。

β淀粉样前体蛋白在弥漫性轴索损伤后早期的变化

目的探讨β淀粉样前体蛋白(β-APP)在弥漫性轴索损伤(DAI)后早期的变化规律及其临床价值。方法按组织学改进的Marmarou等的自由落体法建立弥漫性脑轴索损伤模型,将SD大鼠21只分为损伤组和对照组,损伤组大鼠于伤后不同时间点灌注、取材,随后行常规HE染色法观察神经细胞损伤情况,免疫组化检测β淀粉样前体蛋白在神经元的表达。对照组仅行头皮切开。结果大鼠伤后主要临床表现为意识障碍、呼吸抑制和抽搐。损伤大鼠脑组织大体病理学检查见皮层、胼胝体、脑干等部位的脑挫伤灶。在DAI后半小时始,脑组织内各结构逐渐出现β-APP阳性表达,在伤后24h达高峰,伤后24h轴索断裂征象最为常见。结论成功复制了自由落体致大鼠弥漫性轴索损伤模型。DAI形成是一个渐进过程。轴索损伤常见部位在脑干、胼胝体和大脑皮层。β-APP在弥漫性轴索损伤早期即有增加,增加趋势呈波动性,β-APP作为反应蛋白有望用于检测早期弥漫性轴索损伤。

兔脑创伤后早期血清β淀粉样前体蛋白动态变化的实验研究

目的探讨兔脑创伤后血清β淀粉样前体蛋白(β-APP)含量与损伤程度及其时间动态变化相关性。方法将24只大白兔随机分为对照组和轻、中、重度脑损伤组,各组于不同时间点(0.5h、2h、6h、24h)采集标本,检测血清β-APP的含量。结果采用完全随机设计多因素重复测量方差分析和组间两两比较的LSD检验进行统计学分析。结果脑损伤后血清β-APP均升高。中、重度损伤组各时间点血清β-APP含量较对照组和轻度损伤组升高(P<0.05),重度损伤组血清β-APP含量各时间点均高于同时间点的中度损伤组,但差异无统计学意义(P>0.05);轻度损伤组血清β-APP含量与对照组相比在统计学上无显著性差异(P>0.05)。结论脑损伤后血清β-APP含量升高,且损伤越重血清β-APP含量越高。血清β-APP含量可作为早期判断颅脑损伤程度指标之一。

β淀粉样前体蛋白分泌酶的研究进展

β淀粉样蛋白(βAP)在Alzheimer型老年痴呆的脑的病理改变机制中起着重要的作用。βAP不仅是老年斑的主要结构物质,而且还具有对神经元细胞毒性作用,因此它被认为是AD早期发生的触发因素。βAP是由β淀粉样蛋白前体蛋白(APP)上酶切下来的4kD的小肽片段。APP可通过不同的途径裂解,形成βAP的裂解途径是其中之一。因此寻找参与APP裂解酶,α、β、γ分泌酶成为AD研究领域的一个热点。近期这方面的研究有了较重要的进展,克隆了这些酶的基因。APP相关分泌酶的研究不仅有利于开发抑制βAP形成的药物,而且对进一步研究AD的病理机制也将产生影响。

循环间歇性低氧对大鼠肾上腺β淀粉样前体蛋白裂解酶1表达的影响

目的观察β淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)在大鼠肾上腺的表达和定位,检测循环间歇性低氧(CIH)对BACE1表达的影响。方法采用Western blotting和免疫组织化学法检测BACE1在大鼠肾上腺的表达及定位;16只雄性SD大鼠随机分为2组,常氧对照组(control组)和CIH模型组,每组8只。模型制作2周,Western blotting检测各组大鼠肾上腺髓质BACE1和酪氨酸羟化酶(TH)蛋白的表达量。结果BACE1主要定位于大鼠肾上腺髓质神经纤维;与control组相比,CIH组大鼠肾上腺髓质BACE1蛋白水平下降,TH蛋白水平升高(P<0.05)。结论BACE1定位于大鼠肾上腺髓质神经纤维;BACE1水平下调可能参与减缓CIH引起的交感神经活性过度增强。

β淀粉样前体蛋白在难治性癫痫患者脑组织中的表达及其临床意义

目的探讨β淀粉样前体蛋白在难治性癫痫患者脑组织病灶中的表达及临床意义。方法将32例难治性癫痫患者设为研究组，另选取因意外死亡需开颅的32例患者设为对照组，采用免疫组化检测脑组织中β淀粉样前体蛋白的表达。结果研究组可见病变处神经元丢失、变性、胶质细胞增生和轴突走向紊乱，可见大量棕黄色β淀粉样前体蛋白阳性细胞，在细胞胞浆和神经元轴突处均有沉积，阳性表达率为78．1％，对照组为15．6％，研究组阳性率显著高于对照组（P〈0．01）。结论β淀粉样前体蛋白在难治性癫痫脑组织中表达增高，导致癫痫反复发作，可能是难治性癫痫发病的重要原因之一。

β淀粉样前体蛋白裂解酶1在大鼠颈上神经节组织中的表达

目的 观察β淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)在大鼠颈上神经节的表达和定位,及慢性间歇性低氧(CIH)对BACE1表达水平的影响。方法 采用RT-PCR、Western blotting和免疫组织化学法检测颈上神经节BACE1的表达及分布。16只雄性SD大鼠随机分为对照(control)组和CIH组,每组8只,模型制作2周,RT-PCR检测CIH对BACE1、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)mRNA水平的影响。结果 BACE1表达于大鼠颈上神经节,主要分布于卫星胶质细胞和神经纤维,而在血管、神经元和小强荧光(SIF)细胞不表达。CIH下调BACE1 mRNA水平,上调PGC-1αmRNA水平(P<0.01)。结论 BACE1定位于大鼠颈上神经节卫星胶质细胞和神经纤维;BACE1水平降低可能参与调节CIH诱导的颈上神经节突触的可塑性。

盐酸多奈哌齐联合奥拉西坦治疗帕金森痴呆的疗效及对血小板β淀粉样前体蛋白表达的影响

目的探讨盐酸多奈哌齐联合奥拉西坦治疗帕金森痴呆的临床疗效及对外周血血小板β淀粉样前体蛋白表达的影响。方法选择2016年6月—2017年1月我院就诊的84例帕金森痴呆病人,按随机数字表法分为观察组和对照组,各42例。对照组采用奥拉西坦治疗,观察组在对照组治疗基础上加用盐酸多奈哌齐治疗。比较两组病人简易精神状态量表(MMSE)评分、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分、外周血血小板β淀粉样前体蛋白免疫反应片段之比(βAPPr)水平、C反应蛋白(CRP)、重组人帕金森病蛋白7(PARK7)、神经营养因子-3(NT-3)及日常生活能力满意度。结果治疗后,观察组MMSE评分明显高于对照组(P<0.01);观察组MoCA量表评分高于对照组(P<0.01)。治疗后观察组βAPPr高于对照组(P<0.01);观察组CRP、PARK7水平均低于对照组(P<0.01);观察组NT-3水平高于对照组(P<0.05)。观察组日常生活能力评估满意度高于对照组(P<0.05)。结论盐酸多奈哌齐联合奥拉西坦治疗帕金森痴呆能有效提高病人的MMSE评分和MoCA评分,改善病人的认知功能和日常生活能力,提高βAPPr,降低血清CRP和PARK7水平,提高NT-3表达,疗效安全可靠。

早期大剂量纳洛酮对弥漫性轴索损伤患者β淀粉样前体蛋白的影响

目的观察早期大剂量纳洛酮对弥漫性轴索损伤(DAI)患者血浆β淀粉样前体蛋白(β-APP)的影响。方法经头颅CT及MRI检查诊断为DAI的56例患者纳入本研究。将患者随机分为对照组、小剂量治疗组及大剂量治疗组,分别为18、19、19例。对照组给予常规治疗,小剂量、大剂量治疗组在常规治疗基础上,分别按0.1、0.4mg.kg-1.d-1的剂量给予纳洛酮治疗。采用Western blot检测3组患者治疗前后血浆β-APP浓度。结果治疗后1、3、7d,3组患者血清中β-APP含量较治疗前均有统计学意义(F=0.131,P=0.010)。治疗后1d,3组患者血清中β-APP含量间差异均无统计学意义(F=0.570,P=0.612);治疗后3、7d,3组患者血清中β-APP含量间差异均有统计学意义(F=1.820,1.460;P=0.012,0.000)。结论早期大剂量纳洛酮可有效降低DAI患者血清中β-APP的表达。

弥漫性轴索损伤后早期β淀粉样前体蛋白及其炎性因子变化规律研究

目的探讨弥漫性轴索损伤患者伤后早期β淀粉样前体蛋白及其多项炎性因子的变化规律。方法选取30例弥漫性轴索损伤患者为研究对象,检测其伤后1h、6h、12h、24h、48h及72h的脑脊液中β淀粉样前体蛋白水平及血清中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、CRP水平并进行比较。结果所有患者的脑脊液β淀粉样前体蛋白水平及血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、CRP水平均呈现升高趋势,血清IL-1β含量在伤后6h达到峰值,48h开始下降,脑脊液β淀粉样前体蛋白及血清CRP含量在伤后24h达到峰值,β淀粉样前体蛋白水平维持在峰值水平,血清CRP开始下降,血清IL-6、IL-8、TNF-α含量则于伤后48h达峰值,伤后72h血清TNF-α含量开始下降,IL-6、IL-8含量持续在较高的水平,且重度患者变化幅度要大于轻度及中度患者(P均<0.05),差异有统计学意义。结论弥漫性轴索损伤患者早期β淀粉样前体蛋白及血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、CRP水平均呈现一定的变化规律,对于了解疾病的严重程度及发展转归有着积极作用。