β-受体激动剂类药物人工抗原合成方法研究进展

开展动物性食品中β-受体激动剂监测,对保障食品安全具有重要意义。免疫分析技术操作快速、灵敏度高、检测成本低,被广泛用于大批量畜禽产品的快速筛查。抗体特性是免疫检测的核心,而人工抗原合成的质量直接影响特异性抗体性能。本文主要综述了碳二亚胺法、活泼酯法、混合酸酐法、重氮化法、戊二醛法等β-受体激动剂类药物人工抗原合成方法,以及紫外光谱法、核磁共振法等人工抗原鉴定方法,以期为免疫分析等相关工作研究提供参考。

青少年体内35种抗生素和4种β-受体激动剂的测定及暴露现状分析

为了解我国青少年体内抗生素和β-受体激动剂的暴露水平,本研究采用同位素稀释-高通量全自动固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定某中学442名青少年(11~15岁)尿液中的7类共35种抗生素(5种大环内酯类、4种四环素类、10种喹诺酮类、3种β-内酰胺类、11种磺胺类、1种喹噁啉类和1种林可酰胺类)和4种β-受体激动剂的水平。尿样测定结果采用尿肌酐进行校正,所得到的样品检出率用于统计分析。采用皮尔森卡方检验对目标物检出率与性别、年龄和体重等级间的相关性进行分析。在调整了混杂因素后,采用Logistic回归模型来评估目标物检出率与不同组别间的相关性。分析结果发现,442名青少年中有397名青少年的尿液中检出抗生素或β-受体激动剂,总体检出率为89.8%。除喹噁啉类抗生素未被检出外,实验中共有6类27种抗生素和2种β-受体激动剂被检出,检出率为0.2%~59.0%;其中强力霉素、土霉素和阿奇霉素的检出率最高,检出率分别为59.0%、56.1%和34.6%;四环素类和大环内酯类抗生素是主要检出的两类抗生素,检出率分别为81.9%和42.3%;优先作为兽用的抗生素检出率最高(85.1%),其次为人用抗生素(41.0%),β-受体激动剂的总体检出率为2.7%。统计分析发现,四环素类抗生素在男性青少年尿液中的检出率高于女性,男性检出风险是女性的2.17倍。大环内酯类抗生素在不同年龄组间的检出率存在差异,与11岁青少年组相比,12、13岁青少年组的检出风险更高。实验发现,大环内酯类抗生素的检出率与青少年的肥胖程度呈正相关;在调整了年龄和性别因素后,肥胖青少年尿液中大环内酯类抗生素的检出风险是正常体重者的2.35倍。研究结果表明,青少年普遍暴露于低剂量的抗生素,且食物和环境中的抗生素可能是青少年体内抗生素暴露的主要来源,大环内酯类抗生素的暴露可能与青少年的肥胖风险相关。

超高效液相色谱-串联质谱法检测卤肉中4种β-受体激动剂残留

建立了一种超高效液相色谱串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS)检测卤肉中4种β-受体激动剂(特布他林、克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇)的方法。样品经β-盐酸葡萄糖醛酸苷酶/芳基硫酸酯酶解后,经SLS固相萃取柱净化。以0.1%甲酸水和乙腈为流动相梯度洗脱,用Thermo Hypersil Gold C_(18)色谱柱分离,ESI+进行多反应监测(MRM),内标法定量。4种β-受体激动剂在浓度为0.5~9.5μg/L范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.9988,检出限(LOD)为0.1μg/kg,定量限(LOQ)为0.3μg/kg。3个加标水平下(1、5、9μg/kg)的回收率在87.9%~113.7%之间,RSD为1.48%~9.32%。162批次卤肉样品,有一份卤猪蹄样品检出克伦特罗含量为1.51μg/kg,莱克多巴胺为3.65μg/kg;另外一份卤羊肉样品检出克伦特罗含量11.5μg/kg。本方法快速准确,可用于卤肉中4种β-受体激动剂(特布他林、克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇)的定性、定量检测。

固相萃取-液质联用法快速测定猪肉中β-受体激动剂残留

目的:建立同时测定猪肉中β-受体激动剂的快速分析方法。方法:选用自制检测试剂盒进行提取和净化,采用高效液相色谱串联质谱法,以0.1%甲酸水+0.1%甲酸/乙腈作为流动相,梯度洗脱。结果:加标水平为0.5、1、5μg/kg时,回收率均在70.8%~92.0%之间,相对偏差在8.9%~15.2%之间,相关系数均大于0.999。结论:本方法简便、快捷,可适用于同时测定猪肉中β-受体激动剂的残留量。

牛羊毛发中3种β-受体激动剂药物残留测定的EMR-Lipid方法研究

旨在建立一种以牛羊毛发为靶标结合强化基质去除技术(EMR-Lipid)对3种β-受体激动剂药物(克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇)残留量进行测定的方法。毛发样品经选取、清洗、干燥、研磨后,经酸水解和氨化乙腈提取后加入到Captiva EMR-Lipid净化柱,加入石墨化炭黑(GCB)进行净化,过滤后用高效液相色谱-串联质谱仪进行测定,采用正离子(ESI^(+))扫描,多反应监测(MRM)模式进行分析,内标法定量。结果显示:待测药物在0.1~100 ng/mL的浓度范围内具有良好的线性相关性,相关系数R2≥0.995;方法检测限(LOD)为0.2μg/kg,定量限(LOQ)为0.5μg/kg;药物在1、20、100μg/kg添加浓度下,平均回收率为70%~120%,相对标准偏差≤20%。该方法取样方便,前处理步骤少,灵敏度和精密度高,符合残留检测要求,为动物性产品中β-受体激动剂类药物残留量测定提供了参考。

液相色谱-质谱联用技术在肉制品中β-受体激动剂类药物残留检测中的应用

受体激动剂类药物在畜牧业中仍存在非法使用的风险,对消费者健康造成潜在威胁。本文采用液相色谱-质谱联用技术(Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS)建立了一种检测猪肉中β-受体激动剂类药物残留的方法。样品经酶解、净化、浓缩后,采用LC-MS/MS在多反应监测(Multiple Reaction Monitoring,MRM)模式下进行定性定量分析。优化后的前处理条件为甲醇-水(70∶30,v/v)作为提取溶剂,37℃β-葡萄糖醛酸苷酶水浴酶解12 h,固相萃取净化。优化后的仪器条件为采用C18色谱柱,0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相,梯度洗脱。4种β-受体激动剂在给定浓度范围内与响应值呈良好的线性关系,相关系数均大于0.99;日内和日间相对标准偏差均小于10%,回收率为87.9%~92.5%,基质效应值在90.4%~109.7%。该方法满足肉制品中β-受体激动剂类药物残留检测的要求。

一站式QuEChERS法结合UPLC-MS/MS测定动物性食品中18种β-受体激动剂残留

目的:建立一站式QuEChERS自动提取、净化前处理系统,结合超高效液相色谱-串联质谱同时测定动物性食品中18种β-受体激动剂残留的检测方法。方法:试样加入0.2 mol·L^(-1)乙酸铵缓冲液,以β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶酶解,经QuEChERS自动样品处理系统提取及净化,采用WATERS五氟苯基柱色谱柱(50 mm×3.0 mm,2.5 μm),甲酸水溶液(0.1%)和甲酸乙腈溶液(0.1%)作为液相色谱流动相梯度洗脱,串联质谱电喷雾ESI+模式,多反应监测模式测定,内标法定量。结果:18种β-受体激动剂在0.1~20.0 ng·mL^(-1)浓度范围内线性相关系数均大于0.995 5,检测限在0.025~0.100 μg·kg^(-1),阴性样品中3个水平的加标回收率为76.5%~106.8%,相对标准偏差在0.2%~3.8%(n=6)。结论:该方法安全、准确、高效,可用于大批量、快速检测动物性食品中18种β-受体激动剂残留,为建立QuEChERS法前处理方法提供依据。

甲状腺功能亢进患者中β-受体阻滞剂的治疗效果与安全性评估

本研究旨在评价β-受体阻滞剂在甲状腺功能亢进中的作用及安全性。方法 近一年来(2022年6月至2023年6月)研究团队对80名来我院接受甲亢治疗的患者进行观察并等量分成2组,1组采用常规疗法,1组用β-受体阻滞剂。通过收集这类病人的基本情况,临床症状和实验室检查结果等资料,采用统计学手段对资料进行分析。结果:2组的年龄及性别分布无明显差异。治疗后,服用β-受体阻滞剂者甲状腺功能指标表现出明显改善,统计学上显着优于常规治疗组(P<0.05)。与此同时,服用β-受体阻滞剂者不良反应鲜有报道,甚至全部在可耐受范围之内,未出现严重的不良事件。结论所以我们认为β-受体阻滞剂能在短时间内对甲状腺功能亢进有很好的疗效并且安全性很高。但受研究周期所限,目前尚不能评价该治疗方案长期疗效及安全性。研究长期随访数据的匮乏也成为制约因素之一。今后的研究需重点关注这一方面,以提供更为综合的治疗效果评价。

固相萃取-气相色谱-串联质谱法测定熟肝制品中7种β-受体激动剂

建立了气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)法测定熟肝制品中7种β-受体激动剂的方法。样品经β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解,酸除蛋白,正己烷脱脂后,用SLW固相萃取柱净化。洗脱液氮气吹干,甲苯复溶后,用双(三甲基硅基)三氟乙酰胺+1%(φ)三甲基氯硅烷进行衍生,以GC-MS/MS法测定,同位素内标法定量,使用质控样品评价测定结果的准确性。7种β-受体激动剂的标准曲线相关系数均大于0.999 0。方法的检出限为0.03~0.2μg/kg,样品加标平均回收率为80.8%~110.0%,相对标准偏差为1.0%~8.5%(n=6)。该方法高效准确、灵敏度高、重现性好,适用于熟肝制品中7种β-受体激动剂的同时测定。

贝那普利联合β-受体阻滞剂对高血压合并心力衰竭患者同型半胱氨酸水平和血管内皮功能的影响

近年来,关于血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平异常表达以及内皮细胞功能障碍等与高血压、冠心病、脑卒中等心脑血管疾病的关系受到学者广泛关注[1,2]。高血压作为常见心血管疾病,可引起多种并发症。研究表明[3],心室重塑是导致心力衰竭(heart failure,HF)的主要病因,而高血压则是心力衰竭的常见病因。有文献报道[4,5],Hcy血浆浓度升高、血管内皮功能受损是高血压合并心衰病情加重、病死率增加的独立危险因素。

硝普钠联合β-受体阻滞剂治疗心力衰竭的临床疗效及对患者生命质量的影响

目的探究硝普钠联合β-受体阻滞剂治疗心力衰竭(心衰)的临床疗效及对患者生命质量的影响。方法选取2019年7月至2020年12月大连市第三人民医院收治的106例心衰患者作为研究对象,根据治疗方法不同分为研究组与对照组,每组53例。对照组采用硝普钠治疗,实验组采用硝普钠联合β-受体阻滞剂治疗,比较两组心功能、肾功能与生命质量。结果治疗后,两组收缩压、舒张压均高于治疗前,心率均低于治疗前,且实验组收缩压、舒张压均高于对照组,心率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组肾小球过滤率均高于治疗前,尿素氮与血肌酐水平均低于治疗前,且实验组肾小球过滤率均高于对照组,尿素氮与血肌酐水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组躯体功能、角色功能、认知功能、情绪功能、社会功能与整体功能评分均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论硝普钠联合β-受体阻滞剂治疗心衰效果显著,能有效改善患者心功能与肾功能,提高患者的生命质量,值得临床推广应用。

基于高通量全自动固相萃取的超高效液相色谱-串联质谱法测定人尿中16种抗生素和4种β-受体激动剂

建立了基于高通量全自动固相萃取的人体尿液中大环内酯、四环素、喹诺酮、磺胺4类16种常见抗生素及特步他林、沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗4种β-受体激动剂的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法。尿液样本于室温解冻后,取1 mL,然后加入内标、200μL乙酸铵缓冲液和20μL β-葡萄糖醛酸酶,于37℃条件下酶解过夜。采用全自动固相萃取设备对尿液中的目标物进行提取,考察了固相萃取板、淋洗液、洗脱液种类及体积,结果显示采用Oasis Prime HLB 96孔固相萃取板,以1.5 mL 10%(v/v)甲醇水溶液作为淋洗液、2 mL甲醇作为洗脱液时,20种目标物的回收率最为理想。于45℃氮吹浓缩,比较了不同氮吹条件(完全吹干、氮吹近干、氮吹至1 mL和洗脱液中加水作为保护剂)下目标物的回收率。结果表明,在洗脱液中加入水作为保护剂时,绝对回收率最为理想。研究优化了色谱分离条件,结果显示,以HSS T3(100 mm×3.0 mm, 1.8μm)作为分析柱,0.1%(v/v)甲酸水溶液-0.1%甲酸(v/v)乙腈溶液作为流动相,以0.3 mL/min流速梯度洗脱时,分离效果最好。比较了不同比例甲醇水溶液及初始流动相作为进样溶剂时的出峰情况,发现在30%(v/v)甲醇水溶液里目标物的峰形和信噪比最为理想。该方法标准曲线拟合度良好(相关系数>0.997),方法检出限为0.02~0.12 ng/mL,定量限为0.06~0.41 ng/mL。在0.25、2.5和12.5 ng/mL加标水平下,回收率为81.7%~120.0%(除四环素外),日内精密度和日间精密度(n=6)分别为1.1%~11.0%和1.2%~13.0%。基质效应考察结果表明,采取同位素内标校正后所有目标物均为弱基质效应。为考察该方法的正确度,采用BCR-503(含沙丁胺醇和克伦特罗)及内部质控样进行实验,结果显示沙丁胺醇和克伦特罗的测定值均在参考范围内,20种目标物在两种浓度内部质控样的7次测定浓度平均值范围分别为0.44~0.59 ng/mL(0.5 ng/mL)和1.72~2.16 ng/mL(2.0 ng/mL)。该方法采用自动化样品前处理设备结合96孔固相萃取板,有效提高了检测效率,具有操作简单、灵敏度高、回收率好、基质效应弱等优点,可满足人体尿液中16种抗生素和4种β-受体激动剂的同时测定需求。该研究为人体尿液中抗生素和β-受体激动剂的监测、暴露特征及健康风险评估提供了方法支撑。

常规抗心衰药物联合β-受体阻滞剂治疗心力衰竭效果分析

分析常规抗心衰药物联合β-受体阻滞剂治疗心力衰竭患者的临床效果。方法 抽取来源于2019年6月-2022年11月时间段内的68例心力衰竭患者作为本研究观察对象,基于编号奇偶性进行分组,奇号30例患者设置为对照组,偶号30例患者设置观察组。对照组常规抗心衰药物治疗,观察组在常规抗心衰药物基础上,联合β-受体阻滞剂给药,对两组疗效比较。结果 与对照组用药效果比较,观察组总有效率、心功能改善情况及生活质量均优于对照组(P<0.05);两组不良反应率无显著差异(P>0.05)。结论 以抗心力衰竭常见药物为基础,配合对β-受体阻滞剂类药物的联合应用,可促进患者心功能好转,改善对心衰的治疗疗效,促进患者生活质量的提升与恢复,且联用方案下有较强安全性,不良反应少,值得于临床中采纳。

β-受体阻滞剂转复房颤射频消融术后早期复发1例

房颤射频消融术后的早期复发是指房颤经导管射频消融术后3个月内出现持续时间>30 s的快速性房性心律失常。早期复发并不一定意味着手术的失败。房颤射频消融术后早期复发药物转复,文献[1-2]报道多使用胺碘酮、普罗帕酮等抗心律失常药物,而应用β-受体阻滞剂控制房颤射频消融术后早期复发国内却鲜有报道。本文为1例射频消融术后早期复发患者,应用大剂量β-受体阻滞剂配合抗焦虑助眠药取得了良好的疗效。现报告如下。

超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱快速测定保健食品中13种β-受体阻滞剂

建立了基于超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱快速测定保健食品中13种β-受体阻滞剂的分析方法,并对其质谱裂解规律进行了分析研究。实验对质谱条件、色谱条件、提取溶剂及基质效应等进行了详细探究,使用甲醇对样品进行稀释提取,高速离心、超声处理,用Acquity UPLC BEH C18柱(100 mm×21 mm,17μm)分离,以乙腈和01%(v/v)甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,采用正离子模式检测,数据采集使用一级母离子全扫描和数据依赖的二级离子扫描(Full MS/dd-MS2)模式,在10 min内实现了保健食品中13种β-受体阻滞剂的分离和高精度一级、二级扫描,得到准确的质量数和准确碎片离子信息。通过方法学验证,13种β-受体阻滞剂在05~100μg/L内线性关系良好,相关系数(r)均≥09912,检出限为1~10μg/kg。空白加标样品中13种β-受体阻滞剂的平均回收率为753%~1084%,相对标准偏差为09%~100%(n=6)。用本方法对市售的30批次保健食品进行筛查,均未检出13种β-受体阻滞剂。该方法检测速度快,准确性强,灵敏度高,可用于保健食品中β-受体阻滞剂的快速测定。

QuEChERS EMR Lipid净化结合同位素稀释-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定畜肉中17种β-受体激动剂

目的:建立了一种采用QuEChERS EMR Lipid净化结合同位素稀释-超高效液相色谱-串联质谱技术同时测定畜肉中17种β-受体激动剂药物残留的检测方法。方法:样品加入pH为5.2的乙酸铵缓冲溶液,以β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解,经5%甲酸乙腈提取,QuEChERS EMR Lipid净化,采用CORTECS^(™)UPLC®C_(18)柱(3.0 mm×100 mm,1.6μm),0.1%甲酸水和甲醇梯度洗脱,在分时段多反应监测(scheduled MRM,sMRM)模式下测定,内标法定量。结果:17种β-受体激动剂在0~20 ng/mL浓度范围内线性相关系数均大于0.99,方法检出限为0.01~0.09μg/kg,定量限为0.05~0.31μg/kg。在0.5、2.0、5.0μg/kg 3个加标浓度水平下的平均回收率为81.7%~111.8%,RSD为0.8%~10.3%(n=6)。100批市售生鲜畜肉中未检出β-受体激动剂。结论:该法前处理步骤简便,净化效果良好,缩短酶解时间,提高了样品检测效率,内标法定量精准可靠,适用于大批量畜肉样品中多种β-受体激动剂药物残留的同时检测。

全自动固相萃取-液相色谱-串联质谱法测定猪肉中11种β-受体激动剂

本研究建立了基于全自动固相萃取结合液相色谱-串联质谱法测定猪肉中11种β-受体激动剂的分析方法。试样绞碎后,用2 mol/L乙酸铵缓冲溶液(pH 5.2)提取,经β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶37℃酶解,提取液用全自动固相萃取仪经混合型阳离子交换萃取柱(MCX)净化,以0.1%甲酸水溶液-甲醇作为液相色谱流动相梯度洗脱,在串联质谱电喷雾离子源(ESI)正离子模式下,以多重反应监测(MRM)模式进行测定。结果显示,11种β-受体激动剂在1.0~10.0 ng/mL的浓度范围内线性关系良好,相关系数(r2)大于0.999,方法检出限为0.032~0.163μg/kg,得到的加标回收率在78.3%~115.2%之间,相对标准偏差(RSD)为4.0%~13.2%。该方法操作简便、定量准确,适用于猪肉等动物源性食品中多种β-受体激动剂的测定。

超高效液相色谱-串联质谱测定畜肉中14种β-受体激动剂

在动物饲养过程中使用β-受体激动剂类药物可以显著提高猪、牛、羊等动物的瘦肉率。但是残留β-受体激动剂的食物被消费者食用后会危害身体健康。该文建立了超高效液相色谱-串联质谱快速检测畜肉中14种β-受体激动剂(克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、氯丙那林、特布他林、妥布特罗、溴布特罗、班布特罗、齐帕特罗、马布特罗、非诺特罗、福莫特罗、西马特罗、西布特罗)的方法,并对样品前处理和色谱条件进行了优化。样品加入乙酸铵缓冲液(pH 5.2)和β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶,在(36±2)℃水浴中酶解16 h后,放置至室温。经0.5%甲酸乙腈提取,加入NaCl粉末使乙腈和水相分层,取5 mL上层乙腈,使用一步式净化固相萃取柱进行净化,50℃氮气吹干后用0.4 mL 0.2%甲酸水溶液复溶,过0.22μm微孔滤膜后上机分析。以乙腈和0.1%甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱分析,经过Phenomenex Kinetex F5色谱柱分离后采用正离子扫描,多反应监测(MRM)模式进行检测,使用内标法和外标法定量。讨论了前处理过程中提取液的pH值、固相萃取柱种类、净化方式和复溶液的种类对提取效率的影响。采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱仪验证了一步式净化固相萃取柱的净化效果,证明了此类固相萃取柱能除去样品提取液中大部分的磷脂、鞘脂和甘油酯类物质。考察了仪器分析过程中色谱柱、流动相等影响因素。采用质谱和废液切换模式,既保证了样品中的杂质能及时从色谱柱中流出,又避免过多的杂质进入质谱。结果表明,14种β-受体激动剂在1.0~50μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99,方法的检出限为0.1~0.2μg/kg,定量限为0.3~0.6μg/kg。在低、中、高3个加标水平下,14种β-受体激动剂的平均回收率为70.25%~117.48%,相对标准偏差为0.63%~14.29%。该方法稳定性好,准确度高,适用于畜肉中多种β-受体激动剂残留的检测。

超声辅助提取-LC-MS/MS法测定猪肉中9种β-受体激动剂

目的:建立LC-MS/MS法同时测定猪肉中9种β-受体激动剂残留量的方法。方法:样品经1%乙酸-乙腈溶解提取后,加入经乙腈饱和的正己烷,涡旋、超声、离心后,取乙腈层用氮气吹干,0.1%甲酸水溶解后,采用LC-MS/MS测定分析,内标法定量。结果:9种β-受体激动剂的线性范围均为0.5~20μg/kg,检出限均为0.2μg/kg,定量限均为0.5μg/kg,加标回收率为70.3%~100.7%。结论:该方法经济、简便、快速、准确,适用于猪肉中9种β-受体激动剂残留量的检测。

猪肉中三种β-受体激动剂残留物表面增强拉曼光谱检测技术研究

在畜牧生产过程中,β-受体激动剂作为一种生长促进剂,会被添加到家禽的饲料中,这些残留物含量极小,但会对人体健康造成危害。本研究基于胶体金表面等离子共振吸收性质,建立一种生鲜猪肉中β-受体激动剂的表面增强拉曼光谱检测方法。以浓度为1%的胶体金作为SERS增强基底,pH值为4的NaCl溶液作为活性剂,通过实验优化确定样品与胶体金的体积比为1∶3,使用便携式拉曼光谱仪检测猪肉中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的表面增强拉曼光谱,并对不同目标物的特征峰进行振动模式归属。采用液-液萃取前处理方法,建立了猪肉中β-受体激动剂的定性定量检测方法。结果显示,3种β-受体激动剂在一定浓度范围内各自特征峰有着良好的线性关系,加标样品回收率均在80%~110%,相对标准偏差(RSD)为2.6%~8.3%,检出限低至0.001μg/g。该方法对肉类中β-受体激动剂现场检测有着广阔的应用前景,操作简便、耗时短,满足现场快速检测的需求,有着多样化的发展方向。