TO901317对海马神经元β-分泌酶表达及β-淀粉样肽生成的影响

目的研究肝X受体(LXR)配体TO901317对海马神经元淀粉样前体蛋白(APP)、α-分泌酶(ADAM10)和β-分泌酶(BACE1)mRNA表达的影响及与β-淀粉样肽(Aβ)生成的关系。方法大鼠海马神经元培养至第7天,在饲养液中加入2.0μmol/LTO901317,继续培养48h。应用RT-PCR方法研究海马神经元APP、ADAM10和BACE1等基因的mRNA的表达,放免法检测培养液Aβ含量的变化。结果TO901317降低海马神经元APP和BACE1 mRNA表达(P<0.01),减少培养液Aβ含量(P<0.01),但不影响ADAM10 mRNA表达(P>0.05)。结论TO901317激活LXR,能通过降低APP和BACE1的表达来减少海马神经元Aβ分泌。

肉苁蓉总苷对β-淀粉样肽所致阿尔采末病小鼠模型学习记忆的影响及其机制

目的研究肉苁蓉总苷(G lycosides of c istanche,GCs)对β-淀粉样肽(β-AP)所致阿尔采末病(AD)模型小鼠的保护作用,并探讨其作用机制。方法采用小鼠脑室内一次性微量注射β-AP25-35诱发β-AP在脑内的沉积,造成AD小鼠模型。10 d后,一次性训练被动回避跳台实验测定AD小鼠学习记忆能力;检测脑组织SOD活性、MDA含量及GSH-Px活性;电子显微镜检测脑组织神经细胞的病理变化;TUNEL法检测脑细胞凋亡;免疫组化SABC法检测Bax/Bc l-2的表达。结果GCs可提高β-AP所致AD小鼠学习记忆水平;降低脑组织MDA含量,提高SOD及GSH-Px活性;使脑组织中某些病理改变得到改善;降低脑细胞凋亡率;使Bax的表达减弱,Bc l-2的表达增强。结论GCs对β-淀粉样肽所致AD小鼠学习记忆能力提高,其作用机制可能与其增强自由基清除酶活性,防止脂质过氧化作用,抑制β-AP在脑内的沉积及抑制脑细胞凋亡有关。

二苯乙烯苷对高胆固醇血症致β-淀粉样肽增高大鼠模型的影响

目的 观察何首乌提取物二苯乙烯苷 (2, 3, 5, 4′ tetrhydroxystilbene 2 O β D glucoside,TSG)对高胆固醇血症致β 淀粉样肽(β amyloid,Aβ)增高大鼠模型脑海马区Aβ、血脂及血液流变学的影响,分析二苯乙烯苷抗老年性痴呆(AlzheimersDisease,AD)的作用机制。方法 以高胆固醇饲料(含 1%胆固醇, 0 3%胆酸盐 )喂饲大鼠 10wk,建立高胆固醇血症大鼠模型。用TSG连续灌胃 10wk,以免疫组织化学和放射免疫分析法测定脑海马区Aβ水平;以全自动生化分析法测定血清胆固醇 (CHO)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL C)含量;而且测定了全血粘度及红细胞聚集性。结果高胆固醇饲料喂饲 10wk后,模型大鼠脑海马区可见Aβ蛋白表达及Aβ含量明显增加;血清CHO、LDL C明显升高;全血粘度及红细胞聚集性升高。TSG能降低脑海马区Aβ含量,抑制Aβ蛋白表达,减少血清CHO和LDL C含量,降低全血粘度及红细胞聚集性。结论 TSG能够减少脑Aβ的生成,降低血清胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平,改善血液流变学;具有治疗AD的应用前景。

远志皂苷对β-淀粉样肽和鹅膏蕈氨酸引起胆碱能系统功能降低的影响

目的 观察远志皂苷对拟痴呆模型大鼠胆碱能系统功能的作用。方法 在大鼠脑内右侧基底核内联合注射 β 淀粉样肽 1～ 40片段 (β AP1～ 40 )和鹅膏蕈氨酸建立大鼠拟痴呆模型 ,用避暗法测定模型动物的学习记忆能力 ,用放射配体结合分析法测定胆碱乙酰转移酶活性和M受体密度 ,用改良Ellman法测定脑组织乙酰胆碱酯酶活性。结果 给模型大鼠连续ig远志皂苷 6 0d后 ,远志皂苷能明显提高拟痴呆大鼠的学习记忆能力 ,显著升高脑内M受体密度和增强胆碱乙酰转移酶活性 ,能有效地抑制脑胆碱酯酶活性。结论 远志皂苷对老年性痴呆的胆碱能系统功能减退有一定的改善和治疗作用。

人参皂苷Rg_1对β-淀粉样肽(25-35)侧脑室注射所致小鼠学习记忆障碍的改善作用及其机制

目的 观察人参皂苷Rg1对 β 淀粉样肽 [β AP ,(2 5 - 35 ) ]所致小鼠拟阿尔茨海默 (AD)学习记忆功能障碍的改善作用及其作用机制。方法 小鼠侧脑室注射凝聚态 β AP 4nmol,次日 ,ipRg15和 10mg·kg-1,10d后 ,测试各组被动回避、空间学习记忆能力 ,及皮层、海马组织胆碱乙酰转移酶 (ChAT)和乙酰胆碱酯酶 (AchE)活性变化。结果人参皂苷Rg1可明显改善 β AP所致小鼠被动回避、空间学习记忆能力及皮层海马组织ChAT活性的下降。β AP对小鼠AchE活性无显著性影响 ,但与对照、模型组相比 ,Rg1明显抑制AchE活性。结论 Rg1对 β AP(2 5 - 35 )所致的小鼠学习记忆障碍有显著改善作用 ,其对胆碱能系统的影响是Rg1重要作用机制之一。

葛根素对β-淀粉样肽所致痴呆模型小鼠学习记忆的影响

目的 :研究葛根素对 β 淀粉样肽所致痴呆模型小鼠学习记忆障碍的影响。方法 :以 β 淀粉样肽3μl(1mmol·L-1)icv制备小鼠学习记忆障碍模型 ,用Morris水迷宫法检测小鼠学习记忆能力。同时检测脑中及血中超氧化歧化酶 (SOD)、丙二酰醛(MDA)含量。结果 :葛根素 2 5和 5 0mg·kg-1均能改善模型小鼠的学习记忆 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。生化指标测定显示葛根素能使模型小鼠脑及血中的SOD增多、MDA减少 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 :葛根素可对抗 β 淀粉样肽的神经毒性 。

知母皂苷元对拟痴呆大鼠β-淀粉样肽沉积及胆碱能系统功能的影响

目的 观察知母皂苷元 (ZMS)对拟痴呆大鼠模型脑内 β 淀粉样肽沉积及胆碱能系统功能的作用。 方法 单侧基底核内联合注射 β 淀粉样肽2 5-3 5片段 (β AP2 5-3 5)和兴奋性氨基酸建立大鼠拟痴呆模型 ,然后将模型动物分为假手术组 37、模型组和ZMS组 ,采用免疫组织化学方法和图像分析法测定β AP2 5-3 5沉积斑块的面积。用避暗法及跳台法测定动物的学习记忆功能 ,用放射配基结合分析法分别测定脑胆碱乙酰转移酶 (ChAT)活性和M受体密度。结果 一次性脑内联合注射 β AP +IBO后 ,模型大鼠脑内有明显的 β AP斑块沉积 ,而模型大鼠喂服ZMS 6 0d后 ,能有效地减少β AP沉积的面积 ,同时ZMS能明显改善模型动物的学习记忆功能 ,并提高模型动物脑内ChAT活性和M受体密度。结论 ZMS可能对脑内 β AP的沉积有一定的清除作用 。

补肾方药对去卵巢大鼠端脑、海马晚期糖化终末产物及β-淀粉样肽含量的影响

目的 探讨补肾方药对去卵巢大鼠端脑、海马晚期糖化终末产物(AGEPs)及β-淀粉样肽(AβP)含量的影响。方法 将30只9月龄SD雌性大鼠随机分为假手术组、去卵巢组和补肾方药组。于卵巢切除4周后灌胃给药,连续治疗16周,分别用竞争性ELISA法、放免法检测端脑、海马AGEPs及AβP的含量;荧光法检测血清、尿可溶性AGE-肽的含量;并观察大鼠行为学及海马形态学变化。结果 与假手术组比较,去卵巢组逃避正确率明显降低(P<0.01),端脑AβP、血清可溶性AGE-肽的含量明显升高(P<0.05);端脑、海马AGEPs含量有升高的趋势,但无统计学意义;嗜银染色可见神经纤维增粗,大脑皮质颞叶出现老年斑。补肾方药组端脑AGEPs、AβP含量及海马AβP含量明显减少(P<0.05),尿中可溶性AGE-肽明显增加(P<0.05),学习记忆以及神经元变性得到明显改善。结论 补肾方药能降低端脑AGEPs的积累及端脑、海马组织的AβP含量,改善由雌激素缺乏所致的学习记忆下降,其机理可能是通过肾脏对AGE-肽排泄增加实现的。

β-淀粉样肽氧化应激损伤在大鼠Alzheimer病中的作用

目的 探讨氧化应激在阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease,AD)发病中的作用 .方法 参照Nabeshima方法 ,用立体定向方法将β 淀粉样肽 (β AP1 4 0 ,10 μg)注入大鼠侧脑室建立大鼠AD模型 ,分别于 1,2和 3wk时测定血液和脑组织中过氧化氢酶 (CAT)、总抗氧化能力 (T AOC)、胆碱酯酶(ChE)的含量及其学习记忆能力 ,并进行相关分析 .结果 β AP注射后 1wk ,脑组织中ChE ,CAT ,T AOC较对照组明显降低 (10 .1± 4.1) ,(6 .8± 0 .8)和 (3.4± 1.0 )kU·g-1(P <0 .0 1) .随时间延长 ,3wk时CAT和T AOC下降越显著 ,机体的抗氧化能力越低 (6 .5± 4.4) ,(2 .0± 1.2 )和 (2 .4± 1.2 )kU·g-1,同时ChE的减少 (6 .5± 4.4)kU·g-1,动物的学习记忆能力亦明显降低 ,且两者间呈正相关 .而在外周血中ChE和CAT下降不明显 (P >0 .0 5 ) ,T AOC自 1wk始较对照组呈下降趋势 ,至 3wk时明显降低 (6 .8± 1.2 ,P <0 .0 1) .结论 β AP能诱发氧化应激反应 ,在AD的形成过程中起着非常重要的作用 。

丹参酮对海马内注射β-淀粉样肽后大鼠学习记忆障碍的影响

目的 观察丹参酮对 β-淀粉样肽 1～ 40片段 (Aβ1～ 40 )诱导大鼠学习记忆功能障碍的改善作用。方法 应用凝聚态 Aβ1～ 40在大鼠海马内注射以建立动物模型 ;采用明暗箱被动回避法、穿梭法测试学习记忆功能 ;采用 HE染色、结晶紫染色和 Nissel染色观察病理组织。结果 大鼠双侧海马内注射 Aβ1～ 40 (2 0 μg)后 ,经行为学测试 ,其学习记忆功能明显障碍 ;HE染色、Nissel染色发现海马受损区内神经细胞数量明显减少 ,胶质细胞呈反应性增多 ;结晶紫染色显示海马内大量淀粉样蛋白沉积。丹参酮 (1 0 0、50、2 5 mg/kg)连续灌胃 1 4 d,处理后分别对上述改变有不同程度的抑制作用 ,其中尤以 50 mg/kg剂量组效果最好。结论 丹参酮对 Aβ1～ 40诱导大鼠的学习记忆功能障碍具有显著改善作用。

人参总皂苷对β-淀粉样肽致小鼠记忆障碍的影响

目的 研究人参总皂苷对 β 淀粉样肽 (β AP)所致学习记忆障碍的影响。方法 给小鼠一次性icv凝聚态 β AP活性片段 (2 5～ 35 ) 3μl (1 0mmol·L-1)造成早老性痴呆动物模型 ,采用避暗试验及Morris水迷宫试验 ,观察人参总皂苷对 β AP(2 5～ 35 )神经毒性的对抗作用。 结果 一次性icv凝聚态 β AP(2 5～ 35 )能导致学习记忆障碍。人参总皂苷(10 0 ,5 0 ,2 5mg·kg-1,ig)可明显改善 β AP(2 5～ 35 )所致被动回避性记忆障碍和空间记忆障碍。结论 人参总皂苷可对抗 β AP(2 5～ 35 )的神经毒性 ,改善 β AP(2 5～ 35 )

β-淀粉样肽致大鼠Alzheimer病模型的研究

目的 建立β－淀粉样肽（β－ＡＰ）致大鼠Ａｌｚｈｅｉｍ ｅｒ病（ＡＤ）模型。并对大鼠海马内单胺类神经递质变化进行研究。方法 分别在两组大鼠海马内注射β－ＡＰ和生理盐水，然后用三等分迷宫测定大鼠的学习、记忆功能。迷宫实验结束后迅速处死大鼠，取出海马测定其中单胺类递质代谢产物的含量。结果 海马内注射β－ＡＰ的大鼠的学习、记忆功能出现明显障碍，其海马内的３－甲基－４－羟基苯乙二醇（ＭＨＰＧ）和５－羟吲哚乙酸（５－ＨＩＡＡ）水平明显下降，高香草酸（ＨＶＡ）水平无显著改变。结论 β－ＡＰ致大鼠ＡＤ模型是一种新的成功的ＡＤ动物模型。

参乌胶囊抑制阿尔茨海默病模型小鼠脑内β-淀粉样肽生成的机制研究

目的 观察中药新复方参乌胶囊对β-淀粉样肽前体蛋白（APP）转基因小鼠脑内β-淀粉样肽（A11）代谢及β-和γ-分泌酶的影响。方法 APP转基因小鼠从4～10月龄灌胃给予参乌胶囊。用免疫组织化学法观察APP、Aβ、β位点剪切酶（BACE）和早老蛋白1（PS-1）的表达，并进行图像分析。结果 10月龄APP转基因小鼠模型组与同月龄正常对照组相比，脑内海马区APP、Aβ和PS-1（为γ-分泌酶的催化部位）的表达明显增多，而BACE（即β-分泌酶）的变化不明显。参乌胶囊能明显减少APP转基因小鼠脑内海马区APP的表达，减少脑内All的产生，抑制BACE和PS-1的表达。结论 参乌胶囊抑制脑内All的产生可能是通过减少APP含量及抑制β-和1-分泌酶而起作用的。

知母皂甙元对脑内注射β-淀粉样肽痴呆模型大鼠的影响

目的制造一种新的大鼠痴呆模型 ,考察模型大鼠学习、记忆和M受体密度的变化 ,以及知母有效成分知母皂甙元 (ZMS)的影响。 方法单侧基底核内联合注射 β -淀粉样肽 1- 40片段 (Aβ1-4 0 )和兴奋性氨基酸建立大鼠痴呆模型 ,然后将模型动物分为假手术组、模型组、阳性对照组和ZMS三个剂量组。用避暗法及跳台法测定动物的学习、记忆功能 ,用放射配基结合分析法测定脑M受体密度。 结果 模型动物造型 45d后 ,避暗法及跳台法实验错误次数增加 ,潜伏期缩短 ,脑内M受体密度降低。平行的模型动物喂服知母皂甙元 45d后 ,上述指标明显改善。结论用单侧脑内定位注射Aβ和兴奋性氨基酸成功地制造了一种新的痴呆模型 ,ZMS能明显改善其学习、记忆功能并提高其M受体密度。

脑室灌注β-淀粉样肽致痴呆动物模型

目的 建立脑室灌注 β 淀粉样肽 (Aβ)致痴呆动物模型及观测指标。方法 微泵渗透对动物脑室进行灌注可溶性大片段Aβ ,侧脑室一次性注射聚集态小片段Aβ,侧脑室一次性注射可溶性大片段Aβ片段 ,侧脑室注射Aβ联用转化生长因子β(TGFβ)。 结果 上述方法处理后动物水迷宫和被动回避操作能力受损 ,学习和记忆功能损害 ,皮层和海马中胆碱乙酰转移酶 (ChAT)活性明显降低 ,抗氧化能力下降 ,海马神经元坏死或缺失 ,凋亡相关蛋白酶Bal 2、Bax和p5 3增加等。结论 上述方法均可选用来作为模拟AD病理特征的动物模型。

蒺藜皂苷对β-淀粉样肽(25-35)所致衰老小鼠学习记忆障碍的改善作用及机制

目的研究蒺藜皂苷对凝聚态β-淀粉样肽(25～35)(Aβ25～35)致小鼠学习记忆障碍的改善作用及探讨其可能的作用机制。方法采用一次性小鼠右侧脑室注射Aβ25～353μl造成AD小鼠模型,应用避暗实验、Morris水迷宫实验观察腹腔注射蒺藜皂苷(50,150,450 mg/kg)对Aβ25～35模型小鼠记忆障碍的改善作用,并于侧脑室注射后14 d测定各组小鼠脑组织中一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性。结果单侧侧脑室一次注射Aβ25～353μl可引起小鼠学习记忆障碍,同时使小鼠脑组织内NO含量增加,NOS和iNOS活性显著升高,而连续注射蒺藜皂苷14 d治疗后,可不同程度改善Aβ25～35造成的学习记忆障碍,同时蒺藜皂苷50 mg/kg治疗组可显著降低NO含量和NOS、iNOS的活性(P<0.05),而蒺藜皂苷150 mg/kg和450 mg/kg治疗组均可显著降低NO含量和NOS、iNOS的活性(P<0.01)。结论侧脑室注射Aβ25～35可引起小鼠学习记忆障碍,而蒺藜皂苷可能通过抑制iNOS/NO参与的在体条件下对Aβ25～35神经毒性的介导,改善Aβ25～35致小鼠学习记忆障碍。

寡聚态β-淀粉样肽_(1～42)可通过胶质-炎症反应损伤神经元

目的观察寡聚态β-淀粉样肽1～42(Oligo-Aβ1～42)诱导的小胶质细胞条件培养液对Neuro-2A神经元细胞的影响,探讨炎症介质在胶质介导的神经元损伤中的作用。方法以Oligo-Aβ1～42诱导BV-2细胞,制备小胶质细胞条件培养液,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定Neuro-2A神经细胞的活力,AO-EB染色荧光显微镜观察计数细胞凋亡和坏死率;酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定小胶质细胞培养上清中的肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)及前列腺素E2(PGE2)水平;Griess法检测上清NO水平;免疫印迹法测定小胶质细胞胞质环氧合酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达水平。结果Oligo-Aβ1～42诱导的小胶质细胞条件培养液(Aβ-CM)明显引起Neuro-2A神经细胞损伤,MTT法显示神经元活力随Aβ诱导剂量的增加而逐渐下降(P<0.01),并且浓度为1.0μmol/L和5.0μmol/L的Aβ-CM组比同浓度Aβ单纯组神经细胞的存活率更低,分别为(53.75±3.95)和(34.61±2.72)(Aβ-CM组与Aβ单纯组相比P<0.05,P<0.01);联合作用组(Aβ-CM+Aβ)神经细胞存活率下降更明显,两因素方差分析显示,Aβ诱导的小胶质细胞条件培养液与单纯Aβ(1.0μmol/L)有协同作用[F(3,39)=53.16,P<0.001]。AO-EB荧光观察计数显示,低浓度(0.2μmol/L)Oligo-Aβ1～42诱导的小胶质细胞条件培养液可引起神经细胞发生凋亡性损伤,较高浓度(1.0～5.0μmol/L)Oligo-Aβ1～42诱导不仅引起神经细胞凋亡,还引起细胞发生坏死性改变。进一步研究显示,低浓度(0.2～5.0μmol/L)的Oligo-Aβ1～42明显增加小胶质细胞培养上清中TNF-α、PGE2、NO的产量及胞质COX-2和iNOS蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),呈现一定的量效关系。结论低浓度Oligo-Aβ1～42可通过胶质-炎症反应加剧神经元损伤,其作用可能与Oligo-Aβ1～42诱导小胶质细胞产生炎症介质及胞质内COX-2、iNOS蛋白表达水平增高有关。

老年痴呆发病机制的研究:APP17肽对β-淀粉样肽导致神经元毒性作用的影响(英文)

背景:老年斑是老年性痴呆(Alzheimer'sDisease,AD)的主要病理特征之一,以β-淀粉样肽(β-Amyloid,Aβ)沉积为核心,Aβ的神经元毒性定位于Aβ25-35。Aβ前体蛋白(β-amyloidproteinprecursor,APP)中319-335肽段即APP17肽(APP17-merpeptide),具有神经营养和神经保护作用。目的:通过观察APP17肽对Aβ引起神经毒性作用的影响,进一步证实此肽的神经营养作用,并为阐明AD的发病机制和临床治疗提供理论依据。设计:标准对照实验研究。地点和材料:本研究的地点为首都医科大学宣武医院神经生化研究室。SY5Y细胞株由瑞典卡罗琳斯卡研究所赠送,APP17肽和Aβ25-35由本室用固相法合成,高效液相纯化。方法:固相法合成APP17肽、Aβ25-35,高效液相纯化,以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型,分为正常对照组、Aβ25-3510μmol/L损伤组和Aβ25-3510μmol/L加APP17肽10μmol/L保护组。以细胞计数、噻唑蓝代谢率、乳酸脱氢酶漏出率、细胞轴突长度、胞体面积和细胞内游离钙离子(Ca2+)浓度为观察指标。结果:与正常对照组相比,Aβ25-35损伤组轴突长度(35.74±16.25)和胞体面积(495.92±87.68)均缩小,细胞计数接种后第6天犤(8.39±1.31)×107L-1犦减少,噻唑蓝代谢率降低,乳酸脱氢酶漏出率升高,细胞内游离钙离子浓度升高。

β-淀粉样肽对AD大鼠脑NO、NOS和氧自由基的影响研究

目的 探讨一氧化氮 ( NO)、一氧化氮合酶 ( NOS)和氧自由基在阿尔茨海默病 ( AD)发病中的作用。方法参照 Nabeshima方法 ,将 1 μLβ-淀粉样肽 ( beta-amyloid peptide,Aβ) 1 -4 0 ( 1 0 μg/μL)在立体定仪下注入大鼠侧脑室建立大鼠 AD模型 ,分别于 1、2、3周时测定血液和脑组织中 NO、NOS、过氧化氢酶 ( CAT)、总抗氧化能力( T-AOC)、胆碱酯酶 ( Ch E)的含量及其学习记忆能力 ,并进行相关分析。结果 Aβ注射 1周后 ,Ch E、CAT、T-AOC明显下降 ( P <0 .0 5 ) ,而 NO和 NOS的含量较对照组显著升高 ( P<0 .0 5 )。随时间延长 ,在 2周、3周时Ch E仍呈下降趋势 ,而 NO、NOS较第 1周时无显著变化 ,CAT和 T-AOC下降越显著 ,动物的学习记忆能力亦明显降低 ,且两者间呈正相关。结论 Aβ能诱发机体的氧化应激反应 ,致机体抗氧化能力降低 ,NO和 NOS的增高与学习记忆的减退密切相关 ,提示 Aβ诱导的氧化应激损伤和 NO/NOS途径在 AD的形成过程中有一定作用 ,可能是 Aβ对 AD脑神经毒性作用的机制之一。