亚低温干预对颅脑创伤大鼠β-淀粉样蛋白前体蛋白表达的影响

目的观察颅脑创伤（TBI）大鼠脑海马组织β-淀粉样蛋白前体蛋白（APP）的表达以及亚低温干预对APP表达的影响。方法30只Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组、TBI常温组[（37．0±0．5）℃]和TBI亚低温组[（32．0±O．5）℃]，每组10只。用液压冲击致伤法建立中度TBI动物模型，常温或亚低温干预6h后，观察大鼠神经功能行为学变化，苏木素-伊红（HE）染色观察海马组织病理学改变，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测海马区APPmRNA表达，组织免疫荧光和蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测APP、β-淀粉样蛋白（Aβ）蛋白表达。结果与对照组比较，TBI常温组神经功能行为评分（分）明显降低（26．08±1．23比35．00±0．00），脑海马组织存活的神经元数量减少，APP阳性神经元数量明显增加，APPmRNA及相关蛋白表达均明显升高（APPmRNA：1．491±0．122比0．711±0．082，APP蛋白：1．782±0．034比0．763±0．023，Aβ蛋白：1．321±0．240比0．092±0．002，均P〈0．05）。与TBI常温组比较，TBI亚低温干预能显著提高大鼠TBI后神经功能行为评分（32．29±1．31比26．08±1．23），增加脑海马区存活的神经元数量，减少APP阳性神经元细胞数，APPmRNA及其相关蛋白表达均显著降低（APPmRNA：0．733±0．084比1．491±0．122，APP蛋白：0．653±0．026比1．782±0．034，Aβ蛋白：0．123±0．003比1．321±0．240，均P〈0．05）。结论大鼠TBI后的APP蓄积可能是发生继发性脑损伤（SBI）的机制之一，亚低温可通过减少APP的生成来减轻SBI的程度，起到神经保护作用。

三七总皂苷对快速老化小鼠SAMP8大脑β-淀粉样蛋白前体蛋白表达的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)对快速老化小鼠SAMP8β-淀粉样蛋白前体蛋白(APP)表达的影响。方法采用免疫组织化学方法,在高倍显微镜下随机选取小鼠大脑顶叶皮层和海马周围白质连续五个视野,并计数五个视野APP免疫阳性细胞平均个数。结果PNS能明显减少快速老化小鼠大脑APP阳性细胞数量。结论PNS对SAMP8 APP的表达有明显抑制作用。

β-淀粉样蛋白前体蛋白胞内结构域(AICD)与阿尔茨海默病

阿尔茨海默病的(Alzheimer's disease,AD)一个重要的病理学特征之一是脑内出现β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)组成的淀粉样斑。β-淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)经β-分泌酶和γ-分泌酶依次水解后产生Aβ和APP胞内结构域(APPintracellular do-main,AICD)。现在已经知道Aβ在AD的发病机制中起着关键作用,但是关于AICD的生理及病理功能还不清楚。近年来研究发现AICD可以与细胞内多种蛋白相互作用,而且AICD在基因转录、细胞凋亡,突触可塑性,神经发生以及APP的加工和运输过程中均有调节功能。本文针对AICD的生理及病理功能进行探讨。

β-淀粉样蛋白前体蛋白胞内结构域(AICD)研究进展

老年性痴呆症(Alzheimer's disease,AD)一个重要的病理学特征,是在神经细胞外形成由β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)组成的淀粉样斑(amyloid plaques)。β-淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid procursor protein,APP)经β-分泌酶和γ-分泌酶依次水解后产生Aβ和APP胞内结构域(APP intracellular domain,AICD)。现在已经知道Aβ在AD的发病机制中起着关键作用,但是关于AICD的生理及病理功能还不清楚。近年来研究发现AICD可以与细胞内多种蛋白相互作用,而且AICD在基因转录、细胞凋亡以及APP的加工和运输过程中均有调节功能。本文针对这一领域的研究进展,对AICD的生理及病理功能进行探讨。

β-淀粉样蛋白前体N端神经节苷脂GM1结合位点定位分析

目的 :确定 β 淀粉样蛋白前体 (amyloidβ proteinprecursor ,APP)分子N端的神经节苷脂GM1结合位点。 方法 :利用重组DNA技术获得不同长度Mty4 APP融合蛋白以及合成APP多肽 ,用于分析和确定APP N端GM1的活性区 ;用免疫沉淀Western印迹方法探讨不同神经节苷脂与APP N端融合蛋白的结合能力。结果 :Western印迹法证实APP18 81、APP18 65和APP18 58片段可与GM1分子结合 ,而APP18 51片段不与GM1分子相互作用。多肽抑制实验证明 ,多肽APP52～ 81明显阻断了融合蛋白APP18 81与GM1的结合。不同神经节苷脂与APP N端融合蛋白的结合能力实验表明 ,融合蛋白APP18 81与GM1特异性结合 ,而不与GD1a ,GT1b ,GALCER相互作用。结论 :APP分子N端存在着一个GM1的活性区域 ,位于 5 2～ 81氨基酸残基区间。此区域与GM1存在着特异性相互作用 ,有赖于GM1糖链的特殊构象 ,而与神经节苷脂上唾液酸的数目无关 ,也与神经酰胺母链无关。GM1在APP N端活性区域的发现和定位 ,对探讨GM1代谢异常与 β

分泌型β-淀粉样蛋白前体蛋白的神经保护作用及其分子机制

β-淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)是体内广泛表达的跨膜蛋白质,已知APP经β-分泌酶切割产生的β-淀粉样蛋白(Aβ)是阿尔茨海默病(AD)的标志性病理分子之一,但对APP生理功能的认识比较有限。近年的研究却发现,APP经分泌酶切割的可溶性胞外片段sAPP对于兴奋性神经毒性、脑缺血、脑创伤等病理状况具有与β-淀粉样蛋白相反的神经保护作用。离体和在体研究证明,APP的α-分泌酶切割片段sAPPα可促进神经元的增殖、分化以及促进突触的发育,并改善突触传递和突触可塑性,进而提升学习与认知功能;APP基因缺失则造成不良后果。已报道的sAPPα神经保护作用机制包括激活高电导钾通道,抑制电压依赖性钙通道和NMDA受体通道介导的钙内流,调节神经细胞的离子稳态,平衡神经元和突触的兴奋性。值得注意的是,最新的研究鉴定出sAPP在细胞表面的特异性受体GABA_BR1a,sAPP通过与该受体结合调节突触传递,协同降低神经元的异常兴奋性。可以预见,深入研究与发掘sAPP神经保护作用的机制与替代方法,恢复退行性病变脑组织已经降低的sAPPα水平与下游效应分子功能,将可能为相关脑疾病的发病机制与防治提供新思路或新策略。

补肾益智方对Alzheimer病模型大鼠脑内β-淀粉样前体蛋白的影响

目的 :观察补肾益智方对Alzheimer病 (AD)模型大鼠脑内 β 淀粉样前体蛋白 (β APP)的影响。方法 :以D 半乳糖致亚急性衰老合并Meynert核损毁作为AD大鼠模型 ,用免疫组织化学检测及体视学分析方法观察大鼠脑内β APP的变化。 结果 :补肾益智方能显著降低AD模型大鼠脑内顶叶皮质、海马CA1区、齿状回β APP免疫阳性神经元的细胞数、积分光密度值 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。 结论 :补肾益智方能减少或抑制β APP的过度产生 ,这可能是其减少β淀粉样蛋白 (β AP)沉积 ,改善AD模型大鼠学习记忆的作用机制之一。

跑台运动对D-半乳糖阿尔茨海默病大鼠海马β-淀粉样前体蛋白和Tau蛋白基因表达的影响

目的:探讨8周的有氧跑台运动对D-半乳糖模型阿尔茨海默病(AD)大鼠海马β-淀粉样前体蛋白(APP)和Tau蛋白及其激酶糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)m RNA表达的影响。方法:选用健康雄性8周龄SD大鼠16只,随机分为对照组(C组,n=8),运动组(T组,n=8)。两组大鼠连续8周经腹腔按120mg/kg·d的浓度注射D-半乳糖造模AD大鼠,同时对T组大鼠进行连续8周,每周5次的有氧跑台运动。运用实时荧光定量RT-PCR的方法检测两组大鼠海马APP、Tau蛋白和GSK-3β的m RNA表达水平。结果:8周的有氧跑台运动显著下调了T组大鼠海马APP、Tau蛋白和GSK-3β的m RNA表达水平;其中,APP的下调幅度为42%(P<0.05),Tau蛋白的下调幅度为45%(P<0.01),GSK-3β的下调幅度为38%(P<0.05)。结论:8周的有氧跑台运动有效抑制了APP和Tau蛋白的基因表达水平,其机制可能是与运动抑制了GSK-3β的基因表达水平有关。

地黄饮子含药脑脊液对受损PC12细胞β-淀粉样前体蛋白mRNA表达的干预

目的:探讨地黄饮子含药脑脊液对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致PC12细胞损伤的β-淀粉样前体蛋白(APP)mRNA的表达及地黄饮子对其的干预作用。方法:运用中药脑脊液药理学方法把PC12细胞分为空白组,模型组,西药对照组,地黄饮子脑脊液低,中,高剂量组6组,分别加入正常培养液,正常脑脊液及含药脑脊液,应用实时定量PCR法检测受损PC12细胞β-淀粉样前体蛋白mRNA表达(用2-ΔΔC t表示,Ct为阈循环值,ΔΔCt=ΔCt各干预组-ΔCt空白组,ΔCt=CtAPP-CtGAPDH)。结果:地黄饮子能明显降低PC12细胞受β-淀粉样蛋白刺激时APP的过度反应,降低APP mRNA的表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:地黄饮子脑脊液可以抑制β-淀粉样蛋白损伤对PC12细胞的损伤。

长期口服雌激素对去卵巢大鼠海马结构内β-淀粉样前体蛋白及其mRNA表达的影响

目的观察长期口服复方尼尔雌醇和小剂量17β-雌二醇补充治疗对去卵巢大鼠海马结构内β-淀粉样前体蛋白(β-APP)及其mRNA表达的影响。方法7月龄SD大鼠按体重随机分成5组正常对照组、假手术组(SHAM)、去卵巢组(OVX)、17β-雌二醇预防干预组(OVX/ERT)和复方尼尔雌醇预防干预组(OVX/NL)连续观察。5组均在去卵巢后35w处死。用免疫组织化学方法(SABC法)显示大鼠海马结构内β-APP,原位杂交方法显示β-APPmRNA。细胞计数及图像分析观察β-APP及其mRNA的变化。结果OVX组海马结构内各亚区β-APP阳性神经元数量和平均光密度均高于正常组、SHAM组、OVX/ERT组、OVX/NL组(P<0.05),而β-APPmRNA阳性神经元数量和平均光密度在5组之间均无显著性差异。结论长期雌激素缺乏导致了大鼠海马结构内β-APP含量的增加,长期口服复方尼尔雌醇和小剂量17β-雌二醇补充治疗可减少β-APP的含量,且二者效果相当。促进β-APP分解、减少β-APP的含量,进而减少Aβ的沉着可能是雌激素神经保护的重要机制之一。

β-淀粉样前体蛋白转基因小鼠发育过程中海马CA1区神经细胞凋亡变化

目的:探讨瑞典家系β-淀粉样前体蛋白(APPSWE)转基因小鼠发育过程中海马CA1区神经细胞凋亡规律。方法:取不同发育时间(P0、P7、P14、P30、P90、P180)APPSWE转基因模型鼠与同时间点对照鼠,Nissl染色观察海马结构和锥体细胞形态,免疫组织化学方法观察海马细胞内Caspase-3表达变化,RT-PCR检测Caspase-3 mRNA表达变化。结果:随着小鼠的生长发育,P14时间点以后,模型组CA1区神经元Caspase-3阳性细胞密度比对照组高;RT-PCR检测结果与Caspase-3免疫组织化学结果基本一致。结论:APPSWE转基因小鼠发育中的海马神经细胞过度凋亡可能与阿尔茨海默病的发生、发展具有联系。

呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β-淀粉样前体蛋白基因表达的影响

目的探讨呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β-淀粉样前体蛋白(β-APP)基因表达的影响。方法22月龄SD大鼠采用海人酸破坏脑基底核法造成学习和记忆功能障碍的痴呆动物模型。造模后的大鼠随机分为痴呆模型组、呆聪液(低、中、高剂量)组,同时设正常对照组,每组10只。呆聪液低、中、高剂量组每日呆聪液灌胃(低5g/kg、中10g/kg、高20g/kg),痴呆模型组和正常对照组每天用生理盐水(10ml/kg)灌胃,共1个月。通过水迷宫法和反转录聚合酶链反应观察呆聪液对痴呆模型大鼠学习记忆能力和脑内β-APP基因表达的影响。结果老龄痴呆模型大鼠学习记忆能力下降,脑内β-APP基因表达增强。呆聪液高、中、低剂量组能明显提高学习记忆能力,降低脑内β-APPmRNA含量,并有一定的量效关系,与痴呆模型组比较差异有显著性(P<0.05)。结论呆聪液能改善老龄痴呆大鼠的学习和记忆功能,下调β-APP基因的表达。

血小板β-淀粉样肽前体蛋白免疫强度及异构体比率对Alzheimer病的诊断价值

目的探讨血小板β-淀粉样肽前体蛋白(APP)免疫强度及异构体比率对Alzheimer病(AD)的诊断价值。方法应用流式细胞术和Western Blot方法分别检测31例AD患者、22例血管性痴呆(VD)患者、28例神经变性病患者及30名健康老年人血小板APP免疫强度和APP异构体比率。结果APP免疫活性各组间差异无统计学意义;APP130/APP106比率AD组明显低于VD组、神经变性病组和健康老年组(均P<0.05);AD组APP130/APP106比率与其简易智力状态量表(MMSE)评分呈正相关(r=0.607,P<0.01)。结论血小板APP异构体比率降低可用于临床对AD的诊断。

大鼠弥漫性轴索损伤后β-淀粉样前体蛋白表达的动态变化

目的:观察大鼠弥漫性轴索损伤(DAI)后β-淀粉样前体蛋白(-βAPP)表达的变化规律。方法:实验组75只SD大鼠按照打击负荷伤模型致伤,于伤后4 h、8 h、24 h、72 h和1周时分批处死,取大鼠脑组织切片行β-APP免疫组织化学染色,计算并比较大鼠外伤后各时间点脑组织-βAPP免疫组化阳性染色面积百分比、平均光密度值及阳性细胞数。另取8只大鼠作为对照组,处死后采用同样方法观察脑组织-βAPP的表达,并与实验组作比较。结果:与对照组比较,实验组各时间点脑组织-βAPP阳性免疫反应明显增强且范围明显增大,半定量分析显示差异有统计学意义(P<0.05),并于外伤后72 h最强,1周时开始减弱。结论:大鼠DAI后脑组织-βAPP的表达持续增强,于72 h达顶峰,1周时开始减弱。

不同浓度十二烷基磺酸钠在提取甲醛固定石蜡包埋组织β-淀粉样前体蛋白剪切酶-1中的作用

目的:探索从甲醛固定、石蜡包埋(formaldehyde-fixed,paraffin-embedded,FFPE)的脑组织中提取β-淀粉样前体蛋白剪切酶-1(BACE-1)的有效方法。方法:将大鼠FFPE脑组织分别加入不同浓度十二烷基磺酸钠(SDS,0%,0.5%,1%,2%和4%)提取BACE-1,新鲜大鼠脑组织作为对照组。提取的BACE-1蛋白量采用Western blot进行检测。结果:未用SDS处理的固定组织提取不到BACE-1,随着SDS浓度的逐渐升高,固定组织中提取的BACE-1蛋白也逐渐增加,4%SDS处理的FFPE组织与新鲜组织提取的BACE-1蛋白量没有明显差别。结论:SDS处理是FFPE组织提取BACE-1的必需条件,高浓度(4%)SDS处理是FFPE组织提取BACE-1的一种有效方法。

EAE大鼠不同时间β-淀粉样前体蛋白与Nogo蛋白受体表达的相关性

目的探讨β-淀粉样前体蛋白(β-APP)及Nogo蛋白受体(NgR)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠病程中的表达变化及相互关系。方法建立EAE动物模型,于致敏第8天、致敏第21天、致敏第35天利用免疫组织化学方法观察脑组织中β-APP及NgR表达,并进行相关性分析。结果 EAE致敏第8天、第21天及第35天组及空白对照组脑组织中β-APP表达灰度值分别为67.94±7.23、29.86±4.02、74.94±8.16和117.25±10.11,四组间比较差异有统计学意义(F=76.1,P<0.05),各实验组β-APP表达灰度值均低于对照组(均P<0.05),致敏第21天组低于致敏第8天组(P=0.008),致敏第35天组高于致敏第21天组(P=0.005),与致敏第8天组差异无统计学意义(P=0.379);相应时间点脑组织中NgR表达灰度值分别为90.28±8.74、76.75±6.59、77.64±9.58及45.33±5.26,四组间比较差异有统计学意义(F=11.56,P<0.05),各实验组NgR表达灰度值均高于对照组(均P<0.05),致敏第35天组低于致敏第8天组(P=0.049),致敏第8天组、致敏第35天组与致敏第21天组比较差异均无统计学意义(P=0.055,P=0.975)。β-APP及NgR表达水平呈负相关(r=-0.207,P<0.05)。结论轴索损伤可能在EAE早期即已出现,并呈动态变化。β-APP与NgR表达在EAE的病理进展过程中呈负相关。

血小板β-淀粉样肽前体蛋白免疫强度及异构体比率对Alzheimer病的诊断价值

目的探讨血小板β-淀粉样肽前体蛋白(APP)异构体比率对Alzheimer病(AD)的诊断价值。方法应用流式细胞术和Western Blot分别检测31例AD患者、22例血管性痴呆(VD)患者、28例神经变性病患者及30例健康老年人血小板APP免疫强度和APP130/APP106比率。结果APP免疫活性各组间差异无显著性;AD组APP130/APP106比率明显低于VD组、神经变性疾病组和健康老年组(均P<0.05),AD组APP130/APP106比率与其MMSE评分呈显著正相关(r=0.607,P<0.01)。结论AD患者血小板APP异构体比率降低可用于临床对AD鉴别。

胰岛素样生长因子-1减少胎羊缺血性脑白质损伤后淀粉样前体蛋白表达(英文)

目的 淀粉样前体蛋白 (β APP)是脑白质损伤早期敏感的指标 ,并参与缺氧缺血性脑损伤机制。本研究观察胎羊缺血性脑白质损伤及胰岛素样生长因子 1(IGF 1)治疗对淀粉样前体蛋白 (β APP)表达的影响。方法 胎羊于胎龄 117 12 4天 (足月为 14 7天 )时通过双侧颈动脉阻塞 30min造成双侧脑缺血损伤 ,损伤后胎羊随机分为损伤组 (n =8)和重组人IGF 1(rhIGF 1)治疗组 (n =9) ;另设正常对照组 (n =5 ) ,为假手术动物。治疗组缺血后 90min经侧脑室注射 3μgrhIGF 1;损伤组经侧脑室注射等量人工脑脊液。缺血损伤后 96h结束实验 ,处死动物 ,取出胎羊 ,固定脑组织。免疫组化法检测脑白质胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)、β APP阳性细胞及白质内髓鞘碱性蛋白 (MBP)密度。应用免疫荧光双标记观察APP表达阳性细胞。结果 与正常对照组 (2 7.8± 4 .8)比较 ,缺血损伤组MBP密度 (4.7± 7.1,P <0 .0 0 1)明显减少。正常对照组未见 β APP阳性细胞 ,损伤后阳性细胞数明显增加 (49.6± 2 3.7,P <0 .0 0 1) ,rhIGF 1治疗可减少 β APP阳性细胞数 (17.9± 16 .5 ,P <0 .0 1)。免疫荧光双标记显示部分细胞为 β APP GFAP双标阳性细胞。 结论 胎羊缺血性脑白质损伤可导致星形胶质细胞表达β APP ,β APP表达增加可能与脑损伤有关?

中药呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β-淀粉样前体蛋白基因表达的影响

目的探讨呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β-淀粉样前体蛋白(β-APP)基因表达的影响。方法选用22月龄的老龄大鼠,用海人酸破坏脑基底核法,造成学习和记忆功能障碍的痴呆动物模型,通过水迷宫法和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察了呆聪液对痴呆模型大鼠学习记忆能力和脑内β-APP基因表达的影响。结果老龄痴呆模型大鼠学习记忆能力下降,脑内β-APP基因表达增强。呆聪液的3个不同剂量组与痴呆模型组比较差异有显著性(P<0.05),都能明显提高学习记忆能力,降低脑内β-APP mRNA含量,并有一定的量效关系。结论呆聪液能改善老龄痴呆大鼠的学习和记忆功能并下调β-淀粉样前体蛋白基因的表达。

痴呆鼠脑中β-淀粉样前体蛋白的表达

为揭示 β -淀粉样前体蛋白 ( β -APP)、生长抑素 (SS)在铝盐所致大鼠行为学改变机制中的作用 ,采用免疫组织化学方法检测 β -APP、SS在大鼠脑内海马区的表达 ,并采用HE染色法分组观察大鼠海马区锥体细胞层神经元形态结构。结果 ,模型组大鼠学习成绩为 ( 67.9± 7.2 )次 ,显著低于制模前 ( 2 1 .90± 3.70 )次和两对照组 ( 2 2 .9± 4 .7)与 ( 2 5.8± 5.6)次 ( P <0 .0 1 ) ;记忆成绩为 ( 0 .53± 0 .0 9)次 ,亦显著低于制模前 ( 0 .82± 0 .0 9)次和两对照组 ( 0 .84± 0 .0 8)与 ( 0 .81± 0 .1 2 )次 (P <0 .0 1 )。模型组海马区 β -APP表达呈中度阳性 2只 ,强阳性 8只 ,比对照组明显增加 ( P <0 .0 1 ) ,SS免疫反应性神经元数为 ( 9.3± 1 .9)个 ,比对照组 ( 2 2 .9± 2 .8)个和 ( 2 1 .3± 2 .2 )个显著减少 (P <0 .0 1 ) ,且 β -APP阳性程度与SS等级呈负相关 (r =-0 .70 59,P <0 .0 5)。提示铝盐致学习记忆障碍的大鼠模型脑内 β-APP表达增强、而SS表达降低。