家族性肥厚型心肌病β-肌球蛋白重链基因筛查分析

目的探讨中国汉族人群家族性肥厚型心肌病β-肌球蛋白重链基因(MYH7)的突变位点,分析基因型与表型的相关性。方法对11例家族性肥厚型心肌病家系先证者进行MYH7基因扫描,聚合酶链反应扩增其功能区的外显子片段,双脱氧末端终止法测序。对阳性结果患者进行家系调查,收集临床资料,分析其临床表型特点。结果在1个家系中发现MYH7基因c.428G>A突变,该突变使MYH7基因第143位氨基酸由精氨酸变为谷氨酰胺,该家系中2例患者心肌肥厚程度偏重,症状少,病程进展缓慢。结论家族性肥厚型心肌病MYH7基因突变位点为c.428G>A,患者临床症状不明显,预后相对较好。

肥厚型心肌病心肌β-肌球蛋白重链基因Gln893Lys突变

目的:研究中国人肥厚型心肌病致病基因-β-肌球蛋白重链基因(β-MHC),分析基因型与临床表型的关系.方法:在96例肥厚型心肌病患者及100例正常对照中进行β-肌球蛋白重链(β-MHC)基因扫描,聚合酶链反应(PCR)扩增其功能区的外显子片段,双脱氧末端终止法测序.对阳性结果者进行家系调查,收集临床资料,分析其临床表型.结果:在4个家系及2例散发患者中,β-MHC基因第23号外显子的Gln893Lys错义突变,而正常对照组同一位置未见异常.4个家系临床表型不同.结论:β-MHC基因Gln893Lys突变是中国人肥厚型心肌病的致病突变之一,其临床表型的异质性,提示多因素参与了肥厚型心肌病的发生和发展.

β-肌球蛋白重链基因与心肌肥厚

心肌肥厚是多种心血管病的一种病理改变。近年研究表明心肌肥厚是一种复杂的多种因素参与调节的动态过程。笔者就β-肌球蛋白重链基因与心肌肥厚的关系在分子遗传学水平做一综述。

β-肌球蛋白重链基因Ala26Val突变——中国人肥厚型心肌病热点突变

目的 研究中国人肥厚型心肌病致病基因 ,分析基因型与临床表型的关系。方法 在86例肥厚型心肌病患者及 12 0例正常对照中进行 β 肌球蛋白重链 (β MHC)基因扫描 ,聚合酶链反应(PCR)扩增其功能区的外显子片段 ,双脱氧末段终止法测序。对阳性结果者进行家系调查 ,收集临床资料 ,分析其临床表型。结果 在 3个家系及 1例散发患者中发现 β MHC基因第 3号外显子的Ala2 6Val错义突变 ,正常对照组同一位置未见异常。 3个家系临床表型不同。结论 β MHC基因Ala2 6Val突变是中国人肥厚型心肌病的热点突变 ,其临床表型的异质性 ,提示多因素参与了肥厚型心肌病的发生和发展。

替米沙坦对肾性高血压大鼠心肌β-肌球蛋白重链表达的影响

目的观察替米沙坦对肾性高血压大鼠心肌β-肌球蛋白重链(β-MHC)的影响。方法雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组和替米沙坦组,每组10只。模型组及替米沙坦组采用两肾一夹法,制备肾血管性高血压模型,替米沙坦组用替米沙坦(10 mg.kg-1.d-1)灌胃干预。术后8周,经动脉插管测血压,经超声心动图评估心脏结构及功能,HE染色观察心肌病理改变;RT-PCR法检测心肌β-MHC mRNA水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠血压显著升高,心肌肥厚(均P<0.01),细胞直径增大,排列不整齐。与模型组相比,替米沙坦组大鼠血压明显下降,心肌无明显肥厚(均P<0.01),其心肌β-MHC mRNA表达水平较模型组明显降低(P<0.05)。结论替米沙坦可下调肥厚心肌β-MHC基因表达水平,可能与其逆转心肌肥厚相关。

橙皮素对心肌梗死小鼠心室重塑及心肌组织心房钠尿肽和β-肌球蛋白重链表达的影响

目的研究橙皮素对心肌梗死小鼠心室重塑及心肌组织心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)表达的影响。方法用左冠状动脉前降支近端结扎法构建心肌梗死小鼠模型。将成功建立的60只心肌梗死小鼠随机分为模型组及低、高剂量实验组,各20只;另选择20只正常小鼠作为对照组。低、高剂量实验组小鼠分别给予10,20 mg·kg^-1·d^-1橙皮素,灌胃,对照组与模型组灌胃等量生理盐水,连续干预8周。用心脏多普勒超声检测左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)及左心室短轴缩短分数(LVFS)评价心功能;用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色观察心肌细胞凋亡指数;用Masson染色观察小鼠心肌纤维化情况;用蛋白质印迹(WB)法检测心肌组织ANP、β-MHC蛋白表达。结果对照组、模型组和低、高剂量实验组小鼠LVEDD分别为(3.18±0.12),(5.46±0.06),(4.87±1.14),(3.93±1.36)mm;LVESD分别为(1.93±0.14),(4.63±1.26),(3.52±1.61),(2.46±0.97)mm;LVEF分别为(82.87±3.15)%,(39.54±2.13)%,(56.22±2.95)%,(71.46±3.08)%;LVFS分别为(46.84±1.56)%,(18.43±1.15)%,(27.63±1.27)%,(40.22±1.39)%;各组小鼠心肌组织ANP蛋白相对表达量分别为0.07±0.02,0.76±0.13,0.48±0.11,0.25±0.08;β-MHC蛋白相对表达量分别为0.27±0.06,0.85±0.12,0.45±0.06,0.40±0.09。与对照组相比,模型组小鼠LVEDD、LVESD与心肌细胞凋亡指数及心肌组织ANP、β-MHC蛋白相对表达量均升高,且低、高剂量实验组低于模型组;LVEF与LVFS降低,且低、高剂量实验组高于模型组,均呈剂量依赖性(均P<0.05)。结论橙皮素可改善心肌梗死小鼠心肌纤维化程度,改善心功能指标,抑制心肌细胞凋亡,同时降低心肌肥厚标记物的表达,进而抑制小鼠心肌梗死后心室重塑并改善心脏功能。

原发性心肌病β肌球蛋白重链基因突变研究

目的探讨β-肌球蛋白重链(βMHC)基因点突变与肥厚型心肌病(HCM)及扩张型心肌病(DCM)发病的关系。方法选择56例原发性心肌病病人(HCM13例,DCM43例)及53例健康对照,应用聚合酶链反应(PCR)限制性扩增心脏β-肌球蛋白重链基因第13、14外显子,用DdeⅠ、NⅠaⅢ限制性内切酶酶解其扩增产物,分析有无8848位及9124位点突变。结果 1例扩张型心肌病病人出现8848位点突变应产生的394bp片段,提示该病人可能存在8848位点突变。HCM病人未发现突变。结论β-肌球蛋白重链基因可能是DCM遗传易感性的基因标志之一。

丹参多酚酸盐对心力衰竭大鼠心肌肌球蛋白重链的影响

目的探讨丹参多酚酸盐对心力衰竭(心衰)大鼠心肌肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)的影响。方法采用随机数字表法将60只雄性SD大鼠分成6组:正常对照组、模型组、卡托普利组、丹参多酚酸盐低剂量组、丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利和丹参多酚酸盐高剂量联合组(下称中西药联合组),每组10只。除正常对照组外,其余大鼠均采用阿霉素腹腔注射法制备心衰模型,正常对照组大鼠给予等体积生理盐水腹腔注射,每周1次,共6周。从注射阿霉素第5周开始,各用药组给药干预,卡托普利组予100 mg/(kg·d)的卡托普利水溶液灌胃;丹参多酚酸盐低、高剂量组分别以24.219 mg/(kg·d)及48.438 mg/(kg·d)的丹参多酚酸盐溶于2 m L 5%葡萄糖溶液中腹腔注射。中西药联合组予高剂量的丹参多酚酸盐腹腔注射,同时予卡托普利水溶液灌胃,模型组予腹腔注射生理盐水2 m L,每日1次,均连续干预8周。采用生物信号采集处理系统检测心功能、心肌肥厚指数;荧光定量PCR法检测心肌α-MHC及β-MHC mRNA表达;Western blot法检测心肌蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的表达。结果与正常对照组比较,模型组心脏质量指数(heart mass index,HMI)及左室质量指数(left ventricular mass index,LVMI)明显增高(P<0.01);与模型组比较,丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组、中西药联合组HMI及LVMI均下降(P<0.05,P<0.01),中西药联合组较卡托普利组下降更明显(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组心肌组织α-MHC mRNA水平降低,β-MHC mRNA水平及心肌组织PKC表达升高(P<0.01);与模型组比较,丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组及中西药联合组心肌组织α-MHC mRNA水平升高,β-MHC mRNA水平及心肌组织PKC表达水平均降低(P<0.05,P<0.01),且中西药联合组与卡托普利组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论丹参多酚酸盐能上调α-MHC并下调β-MHC mRNA水平,其机制可能降低PKC的表达有关。

扩张型心肌病与血管紧张素转换酶基因多态性及β肌球蛋白重链基因关系的研究

目的研究扩张型心肌病(DCM)与血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性及β肌球蛋白重链(βMHC)基因的关系。方法选择中国医科大学附属第二医院2000-01-2002-1043例DCM病人及53例健康对照者,用PCR法检测ACE基因型,并扩增心脏βMHC基因第13、14外显子,用DdeⅠ、NIAⅢ限制性内切酶酶解βMHC基因扩增产物,分析有无8848位及9124位点突变。结果DCM组ACE基因DD型及D等位基因频率显著高于正常对照组(P<0.01),比值比分别为4.16,2.65。1例DCM病人出现βMHC基因8848位点突变应产生的394bp片段。结论ACE基因I/D多态性可能与扩张型心肌病有关,DD基N型可能是DCM发病的危险因子。βMHC基因可能是DCM遗传易感性的基因标志之一。

牵张激活心肌细胞NF-κB及其调控β-MHC基因表达的研究

目的 探讨牵张刺激引起心肌细胞 β- MHC基因重新表达的机制。方法 在硅橡胶模上培养心肌细胞并施加牵张刺激 ,用免疫组织化学方法观测 NF- κB的激活情况 ,并用图像分析法检测 NF- κB在激活与未激活状态下 β- MHC蛋白的含量。结果 1心肌细胞受到应变为 2 0 %的牵张刺激 5小时后 ,NF- κB被显著激活 ,从胞浆移位入胞核。 2牵张组心肌细胞与对照组、NAC(N-乙酰半胱氨酸 )组和牵张 + NAC组心肌细胞相比 ,β- MHC含量明显增加 ,其它 3组 β- MHC含量无明显差异。结论 NF- κB信号传导系统参与了牵张诱导的 β- MHC基因表达的调控。

替米沙坦对肾性高血压大鼠心肌重构的影响

目的探讨替米沙坦对肾性高血压大鼠心肌重构的影响。方法通过左肾动脉缩窄法建立大鼠肾性高血压心肌肥厚模型,45只雄性斯泼累格·多雷(SD)大鼠随机分为假手术组、模型对照组和替米沙坦组,每组15只。替米沙坦组灌胃替米沙坦10 mg·kg-1·d-1,假手术组、模型对照组灌胃等量纯化水。灌胃8周后,心脏超声诊断仪观察心脏结构和功能,测定血压,计算左心室质量指数,并检测血清中钙调神经磷酸酶(Ca N)含量以及心肌β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA的表达。结果模型对照组和替米沙坦组左心室射血分数分别为(69.23±1.09)%和(73.77±3.00)%(P<0.05);缩短分数分别为(30.21±2.02)%和(35.29±0.90)%(P<0.05);左心室质量指数分别为(2.83±0.14)和(2.32±0.11)mg·g-1(P<0.05)。与模型对照组比较,替米沙坦组外周循环血液中Ca N以及心肌组织中β-MHC mRNA的表达均下降(均P<0.05)。结论替米沙坦可有效逆转由肾性高血压引起的心肌肥厚,并可能通过抑制起始信号Ca N的活化,作用于下游信号通路,下调心肌蛋白相关基因β-MHC的表达。

潜阳合剂对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞MYH7、ACTA1、BNP mRNA及蛋白表达的影响

目的观察潜阳合剂对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞β-肌球蛋白重链(MYH7)、骨骼肌肌动蛋白α1(ACTA1)、脑钠肽(BNP)mRNA及蛋白表达的影响,探讨潜阳合剂改善心肌纤维化的机制。方法建立AngⅡ诱导的心肌细胞异常增殖的细胞模型,并采用潜阳合剂干预。用CCK-8法测定潜阳合剂对心肌细胞的细胞毒性和拮抗AngⅡ作用的最佳浓度,并分成空白组、AngⅡ组(800 nmol/L)、AngⅡ+潜阳合剂组(稀释4000倍),应用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测MYH7、ACTA1及BNP蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)检测加入潜阳合剂后MYH7、ACTA1、BNP mRNA表达。结果与空白组比较,AngⅡ组MYH7、ACTA1及BNP mRNA及蛋白表达明显上升(P<0.05或P<0.01);与AngⅡ组比较,AngⅡ+潜阳合剂组MYH7、ACTA1、BNP mRNA及蛋白表达明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论潜阳合剂可以通过降低MYH7、ACTA1、BNP mRNA及蛋白的表达起到改善心肌纤维化的作用。

miR-208a在大鼠心肌缺血再灌注损伤及缺血后处理中的表达及其作用

目的:探讨mi R-208a及α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,a-MHC)、β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)在大鼠心肌缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IR)及缺血后处理(ischemic postconditioning,IPO)中的表达变化及其作用。方法:取SD大鼠,使用改良垫扎球囊法建立IR模型,随机分为3组(每组6只),Sham组、IR组、IPO组。检测各组血流动力学指标;real-time PCR检测mi R-208a、α-MHC、β-MHC基因表达;Western blot检测α-MHC、β-MHC蛋白含量。结果:与IR组相比,IPO能明显降低左室舒张末期容积(left ventricular end diastolic volume,LVEDV)和左室收缩末期容积(left ventricular end systolic volume,LVESV),增加左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)和左室短轴缩短率(left ventricular fraction shorting,LVFS),改善心功能。mi R-208a表达水平在IR组明显增加,IPO组明显降低。β-MHC表达在IR组明显上调,IPO组明显下调,且基因和蛋白表达水平一致。α-MHC基因和蛋白表达水平在3组无明显差异。结论:mi R-208a和β-MHC在缺血再灌注组明显增加,缺血后处理能使mi R-208a和β-MHC表达下降,并在一定程度上改善心功能。

G蛋白偶联胆汁酸受体1激活对高糖诱导小鼠心肌细胞肥大的影响

目的探讨G蛋白偶联胆汁酸受体1(TGR5)激活对高糖诱导小鼠心肌细胞肥大的影响。方法原代培养小鼠心肌细胞,将细胞分为对照组、高糖组、高糖+INT-777(TGR5受体激动剂)组、高糖+INT-777+TGR5shRNA(以TGR5干扰慢病毒包装)组。采用图像分析系统测定各组细胞表面积,通过RT-PCR及Western blotting方法检测TGR5干扰慢病毒效率,RT-PCR检测各组促肥大因子(心房钠尿因子、β-肌球蛋白重链)mRNA表达变化。结果成功培养小鼠心肌细胞。与对照组比较,高糖组心肌细胞表面积及促肥大因子mRNA表达增加(P均<0.05)。激活TGR5后,由高糖导致的心肌细胞表面积及促肥大因子mRNA表达的增加受到抑制(P均<0.05)。与激活TGR5组比较,干扰TGR5基因后,心肌细胞表面积及促肥大因子mRNA表达明显增加(P均<0.05)。结论激活TGR5受体可以抑制高糖诱导的心肌细胞肥大及促肥大因子mRNA表达,可能是糖尿病性心肌病重要的药物治疗靶点。

蛋白酶体抑制剂MG132抑制体外培养心肌细胞肥大的实验研究

目的研究蛋白酶体抑制剂MG132对体外培养的大鼠心肌细胞肥大的影响。方法采用[3H]-亮氨酸参入率测定心肌细胞蛋白质合成代谢,采用IPP 6.0图像分析软件分析心肌细胞表面积,以及用RT-PCR检测β-肌球蛋白重链(β-MHC)表达。结果 MG132预处理逆转了苯肾上腺素诱导的心肌细胞[3H]-亮氨酸参入率增加(P<0.01)、表面积增大(P<0.01)和β-MHC mRNA表达上调(P<0.05)。结论 MG132能够抑制心肌细胞肥大,具有心肌保护作用。

高糖引起H9C2心肌细胞增殖并高表达GATA4及β-MHC

目的:探讨不同高糖浓度培养H9C2细胞导致心肌细胞增殖改变及可能机制。方法:体外培养H9C2大鼠心肌细胞分为6组,A-C组分别为:5 mmol/L、25 mmol/L、50 mmol/L葡萄糖培养基,各培养48 h;D-F组分别为:5 mmol/L、25 mmol/L、50 mmol/L葡萄糖培养基,各培养72 h。MTT法检测H9C2细胞增殖;q PCR法及Western blot法检测β-重链肌球蛋白(β-MHC)、GATA4的mRNA及蛋白表达。结果:OD值分别在培养48 h的A、B、C组及72 h的D、E、F组呈阶梯上升,C、F组达到各自时段的最高点;同一葡萄糖浓度培养基培养48 h.和72 h后发现培养时长为72 h的OD值高于48 h。A、B、C组GATA4、β-MHC的mRNA及蛋白表达逐步升高,C组达最高;D、E、F组GATA4、β-MHC的mRNA及蛋白表达逐步升高,F组达最高。结论:高糖引起H9C2心肌细胞增殖并高表达GATA4、β-MHC。

淫羊藿苷对MSCs表达α-MHC和β-MHC的诱导条件研究

目的寻找淫羊藿苷(ICA)诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的最佳诱导时间和浓度。方法把MSCs随机分为6组,即正常对照组、4个浓度的ICA组(10-6,10-7,10-8,10-9mol/L)、5-氮胞苷(5-Aza)组,每组又分为4个诱导时间组,即24 h+1 d、24 h+1周、48 h+1 d、48 h+1周。利用RT-PCR方法检测各组的α-心肌肌球蛋白重链(α-MHC)和β-心肌肌球蛋白重链(β-MHC)表达量。结果与其他时间组相比,ICA(10-7mol/L)在培养24 h+1周时,α-MHC和β-MHC表达最高。结论 ICA(10-7mol/L)与MSCs共同培养24 h+1周时,能更好地促进α-MHC和β-MHC的表达。

心脏肌球蛋白结合蛋白C3基因突变致肥厚型心肌病的研究进展

肥厚型心肌病是一种常染色体显性遗传性疾病,是儿童和青少年尤其是运动员猝死的常见原因之一。心脏肌球蛋白结合蛋白C(myosin-binding protein C,MYBPC)3基因突变和β-肌球蛋白重链基因突变是肥厚型心肌病发病的主要原因。目前已发现的MYBPC3基因突变已超过200种。本文就MYBPC3基因突变致肥厚型心肌病的表型特点研究进展作一综述。

小鼠不同心肌肥厚模型标志性基因表达变化的比较

目的探索小鼠不同心肌肥厚模型间肥厚性标志基因心房利尿钠肽(ANP)、脑利尿钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)基因表达的差异。方法取C57BL/6小鼠,采用肾上腹主动脉缩窄(AAC)、动静脉瘘(AVF)和异丙肾上腺素(ISO)分别建立小鼠心肌肥厚模型。造模结束,称取各小鼠体重(BW)、心脏重量(HW)和左室重量(LVW),计算心脏重量指数(HW/BW)和左心室指数(LVW/BW);HE染色观察心肌病理组织形态学变化;免疫组织化学染色观察心肌组织ANP、BNP和β-MHC蛋白表达;采用Real-time PCR检测心肌ANP、BNP和β-MHC mRNA表达。结果与对照组比较,3种模型的HW/BW和LVW/BW升高,光镜下观察各模型小鼠心肌呈现不同程度的肥厚性变化,ANP、BNP和β-MHC在蛋白和mRNA表达水平均不同程度增加;与AAC组比较,AVF和ISO组心肌组织ANP、BNP和β-MHC在蛋白和mRNA表达水平均降低。结论 3种心肌肥厚模型造模成功,AAC模型心肌组织在同时表达肥厚性标志基因ANP、BNP和β-MHC时优于AVF和ISO。

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响

目的研究川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响。方法利用血管紧张素Ⅱ刺激心肌细胞造成细胞肥大,给予不同浓度的川芎嗪进行干预。检测心肌细胞大小、3H-亮氨酸掺入率和β-肌球蛋白重链mR-NA的表达。结果经血管紧张素Ⅱ刺激后在相差显微镜下可见心肌细胞面积变大,3H-亮氨酸掺入率和β-肌球蛋白重链mRNA水平增高。给予不同浓度的川芎嗪后,上述指标随着川芎嗪浓度增加而逐渐下降。结论血管紧张素Ⅱ能够诱导心肌细胞肥大;川芎嗪能够部分抑制血管紧张素Ⅱ所诱导的心肌细胞肥大。