ΔNP63/TAP63在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及其与临床病理关系

目的研究ΔNP63/TAP63在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法运用荧光定量聚合酶链反应方法检测2002年-2004年54例卵巢上皮性肿瘤中ΔNP63/TAP63的基因水平。结果 33例卵巢上皮细胞癌组织中ΔNP63的表达高于21例良性上皮性肿瘤中组织。卵巢上皮细胞癌中的表达强度与肿瘤组织病理学分期相关(P<0.05),良性肿瘤的表达低于恶性肿瘤(P<0.05)。ΔNP63的表达高于TAP63(P<0.05);各组间TAP63的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论ΔNP63在上皮性卵巢癌中高表达,可能成为上皮性卵巢癌诊断及预后的分子标志物。

ΔNp63阳性乳腺癌患者临床病理学特点回顾分析

探讨ΔNp63阳性乳腺癌患者的临床病理学特点。收集2016年1月至2020年12月扬州大学附属医院甲乳外科经手术治疗并经病理组织学证实的255例女性原发乳腺癌患者的临床资料。根据免疫组化测定的ΔNp63蛋白表达情况,分为阳性组和阴性组。比较两组患者年龄、BMI、肿块直径、淋巴结受累情况、TNM分期、Ki-67等。ΔNp63阳性乳腺癌患者占比13.33%。与阴性组相比,阳性组发病年龄低、肿瘤组织学分级和淋巴结转移率高(P<0.05)。两组肿块大小、BMI及Ki-67表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。多元回归Logistic分析结果显示,ΔNp63阳性与乳腺癌患者年龄、淋巴结转移、组织学分级相关(P<0.05)。ΔNp63阳性乳腺癌患者发病年龄较轻,肿瘤组织学分级高,易发生淋巴结转移。

P16、△NP63在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及相关性研究

目的探讨P16、△NP63蛋白在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达、意义及其相关性。方法采用免疫组化SP法检测42例宫颈鳞癌,90例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN),25例慢性宫颈炎组织石蜡切片中P16、△NP63蛋白的表达。结果(1)从慢性宫颈炎组织、CIN到宫颈鳞癌,P16、△NP63的表达均递增,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)P16蛋白表达与宫颈癌患者的年龄、临床分期及癌细胞分化程度无关,△NP63蛋白表达与宫颈癌患者年龄、临床分期无关,与癌细胞分化程度呈负相关,在分化程度差的肿瘤组织中表达增高(P<0.05)。(3)在CIN和宫颈鳞癌中,P16与△NP63蛋白表达呈正相关(rs=0.6226,P<0.01)。结论P16、△NP63参与了CIN、宫颈鳞癌的发生、发展,其免疫组化检测对宫颈癌的早期诊断有参考价值。

ΔNp63 mRNA在膀胱癌组织中的表达及意义

目的探讨ΔNp63 mRNA在膀胱移行细胞癌(TCCB)中的表达及意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测48例TCCB患者肿瘤组织、10例对照膀胱组织ΔNp63 mRNA的表达,并分析ΔNp63 mRNA表达与TCCB临床分期、病理分级等的关系。结果48例TCCB组织中ΔNp63 mRNA表达阳性率为75.0%(36/48),对照组膀胱组织中ΔNp63蛋白表达阳性率为0.0%(0/10),TCCB组ΔNp63 mRNA表达阳性率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同临床分期肿瘤组织中ΔNp63 mRNA表达阳性率、各组间ΔNp63 mRNA表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。不同病理分级肿瘤组织中ΔNp63 mRNA表达阳性率、各组间ΔNp63mRNA表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论TCCB组ΔNp63mRNA表达水平均明显高于对照组,提示ΔNp63与TCCB的发生密切相关,其可能为TCCB发生的重要促进因素,ΔNp63 mR-NA表达水平和TCCB的临床分期、病理分级没有相关性,故ΔNp63在TCCB进展中的作用有待进一步研究。

小干扰RNA抑制ΔNp63α表达对人食管鳞癌细胞生物学特性的影响

目的通过腺相关病毒介导的小干扰RNA(siRNA)抑制人食管鳞癌细胞Eca109中ΔNp63α的表达,观察其对食管鳞癌细胞生物学特性的影响。方法构建H1启动子驱动的表达针对ΔNp63α的siRNA重组腺相关病毒AAV-ΔNp63αshRNA并感染Eca109细胞。同时以感染空腺相关病毒AAV-Null的细胞及不加腺相关病毒的细胞分别作为对照组和空白对照组,观察siRNA干扰ΔNp63α表达在体外及体内对Eca109细胞生长、增殖、致瘤及凋亡的影响。结果与对照组和空白对照组比较,Eca109细胞感染AAV-ΔNp63αshRNA后ΔNp63α蛋白表达下降(P均<0.05),细胞生长速度减慢(P均<0.05),细胞增殖指数(proliferation index,PI)降低(P均<0.01),裸鼠瘤体质量减轻(P均<0.05),细胞凋亡增加(P均<0.05)。结论腺相关病毒介导的siRNA干扰能显著抑制Eca109细胞ΔNp63α的表达,减慢肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长。

联合检测ΔNp63、Ki-67和VEGF与膀胱移行细胞癌预后的相关性研究

目的探讨ΔNp63、Ki-67和血管内皮生长因子(VEGF)在膀胱移行细胞癌(TCCB)中的免疫组化表达及与膀胱癌病理分级、临床病理分期和预后的相关性。方法用SP法对56例膀胱移行上皮癌病理切片行ΔNp63、Ki-67和VEGF免疫组化染色,将免疫组化染色结果与病理分级、分期和预后进行分析。结果 TCCB中ΔNp63、Ki-67和VEGF阳性表达率明显高于正常膀胱黏膜,在高级别、浸润性癌组织中的阳性表达率明显高于低级别、浅表性癌组织,在复发患者中的阳性表达率显著高于初发组,在膀胱癌的病理分级、临床分期和预后之间表达差异有统计学意义(P<0.05)。采用Spearman等级相关性分析,ΔNp63与Ki-67、VEGF呈正相关,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ΔNp63可能通过促进细胞增殖和肿瘤血管生成发挥促癌作用,联合检测ΔNp63、Ki-67和VEGF多项肿瘤标记物可以更好地判断TCCB的预后。

△NP63和HSP27在宫颈癌的表达及意义

目的 探讨宫颈癌中△NP63和HSP27的表达及意义。方法 应用免疫组化SP法检测20例慢性宫颈炎上皮、30例宫颈上皮不典型增生和50例宫颈癌中△NP63和HSP27蛋白的表达。同时对35例宫颈鳞状上皮细胞癌进行mRNA杂交。结果 宫颈癌中△NF63蛋白表达率76％;HSP27蛋白表达率74％;表达率及强度明显高于慢性宫颈炎及轻、中度不典型增生上皮(P<0.05),与重度不典型增生差异不显著(P>0.05)。宫颈腺癌中△NP63无表达。HSP27表达率低(1/3)。在宫颈鳞状细胞中△NP63蛋白和mRNA的表达率及强度,低分化高于中、高分化,与临床分期密切相关;HSP27蛋白和mRNA的表达率及强度,中、高分化高于低分化,与临床分期无相关性。结论△NP63、HSP27可能与宫颈鳞状细胞癌的发生及预后有关。

ΔNp63和napsinA在肺鳞状细胞癌和肺腺癌鉴别诊断中的应用

纤维支气管镜活检是诊断肺癌较常用的检查方法,但所取活检标本通常体积较小,仅凭HE切片难以对肺癌的分型作出明确诊断,常常需要借助免疫组化进行标记分类。本研究对260例肺癌进行ΔNp63和napsin A检测以探讨这些抗体在肺鳞状细胞癌和腺癌鉴别诊断中的价值。

宫颈癌前病变中ΔNP63与HPV16 E7表达的研究

目的:研究宫颈上皮内瘤变中ANP63和HPV16 E7 mRNA的表达情况,寻找用于临床评估CIN病变进展趋势的生物学标志物。方法:收集临床71例薄层液基细胞标本,采用SP免疫组化法检测细胞中ANP63的蛋白表达,RT-PCR法检测残留标本中HPV16 E7的mRNA转录情况。结果:1．ANP63定位于异常鳞状上皮细胞和腺细胞,在CIN中表达高于炎症组(P< 0．05);2．HPV16 E7在CIN中表达明显高于炎症组(P<0．05);3．CIN中ANP63与HPV16 E7的检测结果具有较好的一致性。结论:ANP63可作为CIN的生物学标志物辅助细胞学筛查;ANP63可间接反映HPV16 E7的转录情况,有利于临床评估高危型病毒HPV16的致瘤能力。

喉鳞癌中ΔNp63和ΔNp73的表达及临床意义

目的通过研究喉鳞癌中ΔNp63和ΔNp73的表达及与患者各临床病理参数的关系,探讨其在喉鳞癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化二步法,检测40例喉鳞癌及相应癌旁组织中ΔNp63和ΔNp73的表达情况。结果ΔNp63和ΔNp73在喉鳞癌组织中的阳性表达率分别为85%(34/40)和82.5%(33/40)。喉癌组织中ΔNp63和ΔNp73的表达显著高于相应癌旁组织(P<0.001)。ΔNp63在喉癌组织中的表达与肿瘤分化程度有关(P<0.05);而与患者性别、临床分期、有无淋巴结转移等无关。ΔNp73在喉癌组织中的表达与患者性别、肿瘤分化程度、临床分期、有无淋巴结转移等无关(P>0.05)。喉癌组织中ΔNp63和ΔNp73的表达无显著相关性(r=0.16,P>0.05)。结论ΔNp63和ΔNp73可能作为癌基因维持肿瘤细胞干细胞样的增殖特性,在喉鳞癌的发生、发展中发挥重要作用,并可能成为喉癌成瘤机制研究中的重要靶点。

△Np63基因沉默对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的探讨癌基因△Np63对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法通过将△Np63特异性短发夹RNA(△Np63-shRNA)和非特异性短发夹RNA(Control-shRNA)转染膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinom a of bladder,TCCB)5637细胞,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot分别检测△Np63、p27kip1、p57kip2mRNA和蛋白的表达水平,WST-1法检测细胞增殖活性,利用流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果特异性的△Np63-shRNA能够有效地沉默△Np63并上调p27kip1和p57kip2的基因和蛋白水平,转染△Np63-shRNA的5637细胞的增殖能力明显受到抑制(P<0.05),且明显促进了细胞的凋亡(P<0.05)。结论靶向△Np63基因的shRNA片段可以有效的抑制人膀胱癌5637细胞的增殖并促进其凋亡,其可能的机制是通过上调p27kip1和p57kip2的表达实现的。

子宫颈鳞状细胞癌中△Np63α、DPC4/Smad4和P21的表达及其临床意义

目的研究△Np63α、DPC4/Smad4和P21在子宫颈鳞状细胞癌中的表达情况。方法采用免疫组织化学ElivisionTMPlus法检测100例子宫颈鳞状细胞癌组织、40例子宫颈上皮内瘤变(CIN)和40例正常子宫颈组织中△Np63α、DPC4/Smad4和P21蛋白的表达情况。分析三者在子宫颈鳞状细胞癌的发生发展中的相互作用,及其与子宫颈鳞状细胞癌发生、发展和预后的关系。结果从正常子宫颈组织到子宫颈上皮内瘤变及子宫颈鳞状细胞癌,△Np63α和DPC4/Smad4的表达逐渐下降,P21的表达逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01);同时,三者的表达均与肿瘤的分化程度、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.01)。另外,△Np63α与DPC4/Smad4的表达呈正相关关系(r=0.581,P<0.05);而DPC4/Smad4和△Np63α的表达与P21的表达均成负相关(r=-0.449,r=-0.254,P均<0.05)。同时,生存分析显示:△Np63α和DPC4/Smad4阳性表达组5年生存率显著高于其阴性表达组,差异有显著性(P<0.001);而P21阳性表达组则显著低于阴性表达组,差异有显著性(P<0.05)。结论△Np63α、DPC4/Smad4和P21的表达与子宫颈癌组织的发生发展、转移和预后等均有关;联合检测三者的表达情况,对子宫颈鳞状细胞癌的进展及预后判断有重要意义。

急性淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞TAp63基因的表达

背景:据作者查新检索,国内外有关急性白血病患者骨髓单个核细胞TAp63基因表达的报道罕见。目的:观察急性淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞TAp63基因的表达及其意义。方法:50例急性淋巴细胞白血病患者,其中32例急性B淋巴细胞白血病,18例急性T淋巴细胞白血病。同期选择27例非恶性血液病患者作为对照。取肝素抗凝的骨髓液2～4mL,用Ficoll液分离骨髓单个核细胞,半定量反转录聚合酶链反应法检测TAp63的表达。结果与结论:50例急性淋巴细胞白血病患者有49例表达TAp63,急性淋巴细胞白血病组明显高于非恶性血液病组(P<0.05),急性B淋巴细胞白血病表达水平显著高于急性T淋巴细胞白血病(P<0.05)。动态观察了5例初治急性淋巴细胞白血病化疗后不同阶段TAp63的表达变化,发现初治时TAp63表达,缓解后低表达或不表达,复发后又表达。结果表明TAp63在急性淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞的表达明显高于非恶性血液病患者,尤其在急性B淋巴细胞白血病患者中高表达。

ΔNp63基因对TCCB 5637细胞侵袭作用的影响

目的:研究ΔNp63基因对TCCB5637细胞侵袭功能的影响。方法:针对ΔNp63基因的不同靶点设计并化学合成具有阳性转染率的siRNA,用脂质体法转染TCCB 5637细胞,并根据转染的方式将实验分组为:空白对照组、空载体组、阴性质粒组和干扰质粒组;采用实时荧光定量PCR、Western blot检测各组中ΔNp63的mRNA、蛋白的表达;采用激光共聚焦显微镜对转染干扰质粒前后的ΔNp63蛋白进行定位;采用细胞计数法及MTT法来检测ΔNp63基因对TCCB 5637细胞侵袭能力和异质粘附能力的影响。结果:ΔNp63蛋白定位于TCCB 5637细胞的细胞核区域;与空白对照组比较,空载体组和阴性质粒组TCCB5637细胞中ΔNp63的mRNA、蛋白的表达水平无明显变化(P>0.05);平均细胞穿越数和异质粘附性无明显变化(P>0.05);而干扰质粒组TCCB5637细胞中ΔNp63的mRNA、蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),平均细胞穿越数明显增加(P<0.05),异质粘附性明显下降(P<0.05)。结论:ΔNp63基因能明显促进TCCB5637细胞的侵袭能力。

人膀胱癌荷瘤鼠中shRNA沉默ΔNp63基因对肿瘤的抑制和cyclin D_1表达的影响

目的利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默ΔNp63基因的表达,研究其对人膀胱癌裸鼠皮下移植模型的抑瘤作用,同时检测ΔNp63基因被抑制后对细胞周期素D1(cyclin D1)表达的影响。方法建立人膀胱癌裸鼠皮下移植模型,构建ΔNp63基因特异性shRNA(short hairpin)表达质粒,将表达质粒转染荷瘤鼠瘤体。将符合实验条件的15只裸鼠分为3组:ΔNp63-shRNA组、Control-shRNA组与生理盐水组,每组5只。观察各组肿瘤生长情况、瘤组织超微结构的改变,检测ΔNp63基因和蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)和cyclin D1蛋白表达的变化。结果转染质粒8周后,ΔNp63-shRNA组与生理盐水组瘤体积有显著性差异(P<0.01),抑瘤率为74.44%,Control-shRNA组与生理盐水组体积无显著性差异(P>0.05)。病理结果显示ΔNp63-shRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞核分裂象减少,可见大量肿瘤细胞坏死和凋亡、炎症细胞浸润。RT-PCR结果显示ΔNp63-shRNA组ΔNp63基因表达降低。免疫组化结果显示ΔNp63、PCNA、cyc-lin D1蛋白表达均降低。结论ΔNp63特异性shRNA质粒表达载体沉默ΔNp63基因后,可显著抑制人膀胱癌裸鼠肿瘤的生长,ΔNp63可能通过抑制cyclin D的表达而抑制肿瘤的细胞增殖。

宫颈癌细胞中ΔNp63α对白血病抑制因子表达水平的影响及其机制

目的探讨ΔNp63α对白血病抑制因子表达水平的影响及其机制。方法通过稳定转染构建稳定过表达ΔNp63α的SiHa细胞株(SiHa/ΔNp63α);通过瞬时转染沉默ME-180细胞中ΔNp63α的表达水平;并通过Western blot检测两组细胞中ΔNp63α、LIF、STAT3的蛋白水平,通过qRT-PCR检测两组细胞中ΔNp63α、LIF、STAT3、LncRNA ENST00000447565的转录水平。结果 (1)ΔNp63α过表达的SiHa细胞中,LIF的mRNA及蛋白水平均明显下调,其调控的下游基因STAT3的mRNA表达水平也显著下降;(2)ΔNp63α过表达的SiHa细胞中,LncRNA ENST00000447565的转录水平显著下调,该LncRNA与LIF基因均在22号染色体q12.2,且基因组位置接近;(3)ΔNp63α沉默的ME-180细胞中,LIF的表达量明显上调。结论ΔNp63α可以抑制LIF及下游基因STAT3的表达水平,其机制可能与ΔNp63α对LncRNA ENST00000447565的表达抑制有关。

ΔNp63在早孕小鼠子宫内膜表达规律的研究

目的：初步探讨p53基因家族新成员——截断型 p63(ΔNp63)在小鼠生殖中的作用。方法：收集动情周期各期和早孕2 d、3 d、4 d、5 d小鼠子宫内膜,共8组,每组10只小鼠。运用RT-PCR技术检测ΔNp63 mRNA的表达规律；免疫组织化学SP法检测小鼠子宫内膜中ΔNp63蛋白的表达情况。结果：1)RT-PCR：动情前期ΔNp63 mRNA明显高表达；动情间期和动情期表达减弱；动情后期表达极低；早孕期间小鼠子宫内膜ΔNp63 mRNA表达较未孕组高,并逐渐增强,孕5 d达高峰。2)免疫组织化学：ΔNp63蛋白在间质细胞胞浆表达,表达规律基本上与mRNA水平的表达规律相似。结论：ΔNp63在动情前期高表达,可能与子宫内膜间质细胞增殖、生长有关；在早孕期间高表达,说明它很可能进一步促进间质细胞分裂,顺利转化成蜕膜细胞,进而有利于提高窗口期子宫的容受性。

ΔNp63蛋白在骨肉瘤中表达的意义

目的 :研究ΔNp6 3蛋白在骨肉瘤中的表达 ,探讨其在骨肉瘤发生、发展中的可能作用。方法 :应用免疫组化S P法检测 2 8例骨肉瘤石蜡标本中ΔNp6 3蛋白的表达情况。 结果 :在 2 8例骨肉瘤中仅有 1例高分化骨肉瘤出现弱阳性反应 ,还有 1例骨肉瘤ΔNp6 3表达为阴性 ,二者癌旁组织呈阳性反应 (+)。对照组的 15例骨软骨瘤中 ,共有 3例阳性 ,其中 2例为 (+) ,另 1例为强阳性 (+++)。结论 :ΔNp6 3在骨软骨瘤和骨肉瘤的癌旁正常组织中呈阳性或强阳性反应 ,推测 p6 3可能具有肿瘤抑制基因功能。

ΔNp63在胃癌组织中的表达及其与生物学行为的关系

采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测36例胃癌及36例正常胃组织中ΔNp63 mRNA的表达情况,分析其与胃癌患者各临床病理指标的关系。结果ΔNp63 mRNA在胃癌组织中的阳性表达率及表达水平均显著高于正常胃组织(P均<0.05)。在中、低分化胃癌组织中的阳性表达率和表达水平也显著高于高分化胃癌组织(P均<0.05)。认为在胃癌组织中存在ΔNp63的过表达,可能与胃癌的发生、发展有关。

△Np63在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的探讨p53基因家族新成员截短型p63(△Np63)在食管鳞癌组织中的表达及其意义。方法采用RT-PCR法检测50例食管鳞癌及50例正常食管组织中△Np63 mRNA的表达情况,分析其与食管鳞癌患者各临床病理指标的关系。结果△Np63 mRNA在食管鳞癌组织中的阳性表达率(74.0%)及表达水平(1.036±0.157)均显著高于正常食管组织(40.0%,0.954±0.110),并且其在食管鳞癌组织中的阳性表达率及表达水平与分化程度和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论在食管鳞癌组织中存在△Np63的过表达,并且这种表达可能与食管鳞癌的浸润、转移有关。