SF1a-PRLR和ΔS2 SF1a-PRLR对乳腺癌MCF-7细胞增殖和microRNA表达的影响

目的:探讨过表达SF1a-PRLR及其变体ΔS2 SF1a-PRLR基因对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和micro RNA表达的影响。方法:利用同源重组技术将SF1a-PRLR和ΔS2 SF1a-PRLR c DNA分别重组至慢病毒,再将携带不同基因的重组病毒,即空病毒、携带SF1a-PRLR c DNA和ΔS2 SF1a-PRLR c DNA的慢病毒分别转染MCF-7细胞,经嘌呤霉素多次筛选得到稳定转染细胞株MCF7-con(对照组)、MCF7-SF1a-PRLR(SF1a组)、MCF7-ΔS2 SF1a-PRLR(ΔS2 SF1a组),将3组稳定转染细胞株培养后进行细胞增殖实验,提取总RNA进行小分子RNA高通量测序。结果:增殖实验结果显示,培养48 h时,对照组、SF1a组和ΔS2 SF1a组的D(492)值分别为1.85±0.29、2.24±0.26、2.57±0.23,3组之间两两比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。测序结果显示,各组间micro RNA表达均有显著差异,SF1a组与对照组比较,差异表达的micro RNAs共有176个(32个表达上调,144个表达下调);ΔS2SF1a组与对照组相比,差异表达的micro RNAs共206个(52个表达上调,154个表达下调);ΔS2 SF1a组与SF1a组比较,差异表达的micro RNA共5个(mi R-4454、mi R-215-5p、mi R-797、mi R-622表达上调,mi R-210-5p表达下调),其中,mi R-210-5p在对照组、SF1a组、ΔS2 SF1a组中的相对表达水平分别为66.18、31.67、13.07,两两比较均具有显著差异(P均<0.05)。结论:过表达SF1a-PRLR或ΔS2 SF1a-PRLR均能促进人乳腺癌MCF-7细胞的体外增殖且显著影响人乳腺癌MCF-7细胞的micro RNA表达,两者对大部分microRNA表达的影响作用相似,仅对miR-4454等5个microRNAs的表达具有显著影响。

△S2 SF1a-PRLR对人类乳腺癌细胞转录组的影响

目的探讨SF1a-PRLR和ΔS2 SF1a-PRLR对人类乳腺癌细胞转录组的影响,分析两者在乳腺癌细胞中的基因表达差异。方法构建携带ΔS2 SF1a-PRLR与SF1a-PRLR的慢病毒载体,将稳转细胞总RNA分离纯化,然后进行RNA测序,整理数据并进行生物信息学统计和分析。将人乳腺癌MCF-7细胞分为空白对照组(con组)(空载体)、过表达SF1a-PRLR基因组(过表达SF1a-PRLR基因)、过表达ΔS2 SF1a-PRLR基因组(过表达ΔS2SF1a-PRLR基因)。结果 G8-3(将ΔS2 SF1a简称为G8)、Con-1、1a-3(将SF1a简称为1a)与G8-1的相似度均偏低,G8-3与1a-1的相似度最高。主成分分析(PCA)结果显示,G8-1、Con-2为离群样本,G8-3、G8-2、1a-3、1a-2、1a-1为相似性高的样本。高通量测序结果显示,过表达SF1a-PRLR基因组、过表达ΔS2 SF1a-PRLR基因组和con组的转录组表达情况存在差异。con组和过表达SF1a-PRLR基因组的差异基因进行京都基因和基因组数据库(KEGG)通路富集分析,发现涉及调节肿瘤生长和维持肿瘤细胞多能性的多条信号通路获得富集,如丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)、肿瘤坏死因子(TNF)、转化生长因子-β(TGF-β)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB,又称AKT)、环腺苷一磷酸(cAMP)、Hedgehog、Hippo信号通路。对con组和过表达ΔS2 SF1a-PRLR基因组的差异基因进行KEGG通路富集分析,发现涉及调节肿瘤生长的多条信号通路获得富集,如MAPK、TNF、TGF-β、PI3K/AKT、ErbB、Hedgehog、Hippo信号通路。通过可变剪切分析发现,3组样本中主要发现了6种不同的剪切模式。单核苷酸多态性(SNP)分析结果显示,过表达SF1a-PRLR基因组的MCF-7细胞中有42 885个SNP位点,过表达ΔS2 SF1a-PRLR基因组MCF-7细胞中有37 305个SNP位点,con组的MCF-7细胞中有31 583个SNP位点。结论过表达SF1a-PRLR基因和过表达ΔS2 SF1a-PRLR基因能够影响MCF-7乳腺癌细胞的多种基因的表达,且可通过MAPK、TGF-β、PI3K/AKT、Hedgehog等信号通路影响乳腺癌的生长。