五行音乐干预中风后抑郁的潜在机制:内啡肽/μ阿片受体系统(综述)

中风后抑郁作为中风后常见的情志障碍,会对中风患者预后产生不良影响。五行音乐是临床治疗中风后抑郁的传统康复疗法,具有疗效确切、成本低廉、副作用少的特点,其临床疗效大多通过单胺类神经递质、氨基酸类神经递质、免疫反应、脑肠菌群等客观指标及相关量表判断,但具体作用机制尚未完全明确。研究发现,内啡肽/μ阿片受体系统参与调控中风后抑郁的发生,并与情绪调控脑区相互重合,且内啡肽/μ阿片受体系统与神经递质相互调节,从而发挥对中风后抑郁的调控作用。本文通过综述内啡肽/μ阿片受体系统与中风后抑郁密切相关的脑区及与5-羟色胺、谷氨酸、白细胞介素、肠道生物菌群的关系,探讨五行音乐干预中风后抑郁的潜在机制,为中医康复现代化提供科学的研究示范。

μ阿片受体在大鼠结肠平滑肌细胞中的表达

目的通过培养大鼠结肠原代平滑肌细胞,探索μ阿片受体(MOR)在结肠平滑肌细胞中的表达特性。方法分离、培养和鉴定结肠平滑肌细胞;运用免疫荧光组织化学双重标记法观察MOR、内吗啡肽2(EM2)、钙调蛋白(CaM)在结肠平滑肌细胞的分布特性;施加乙酰胆碱(ACh)(1×10^(-3)mol/L)或EM2(2μmol/L)后,Western blot技术检测CaM蛋白表达变化;单独或依次施加ACh(1×10^(-3)mol/L)和EM2(2μmol/L)后,钙离子成像法观察平滑肌细胞内钙离子浓度的变化。结果鉴定结肠平滑肌细胞:α-肌动蛋白(α-SMA)标记的阳性细胞占细胞总数的95%以上;免疫荧光组织化学双重标记显示,在结肠平滑肌细胞有MOR和EM2的分布,且所有MOR和EM2阳性细胞均与α-SMA有共存;Western blot检测发现,施加ACh 10 min后,CaM表达升高(P<0.05);施加EM210 min后,CaM表达降低(P<0.05);钙离子成像结果显示,单独施加ACh,平滑肌细胞内钙离子浓度明显升高(P<0.05);单独施加EM2,结肠平滑肌细胞内钙离子浓度下调(P<0.05),依次施加ACh和EM2后,EM2显著抑制了ACh诱发的钙离子浓度升高(P<0.05)。结论MOR和EM2在结肠平滑肌细胞有表达,且EM2可通过MOR抑制CaM的表达与降低钙离子浓度。

共表达人μ阿片受体与Gq蛋白的稳定细胞株的建立及功能鉴定

建立共表达人μ阿片受体(humanμ-opiatereceptor,hMOR,OPRM)与Gq蛋白的CHO-Flp In稳定细胞模型,并鉴定其药理学功能,可为体外高通量筛选靶向OPRM的药物奠定基础。该研究首先构建重组表达质粒OPRM-pcDNA5/FRT,并进行鉴定;然后通过脂质体转染法将OPRM-pcDNA5/FRT、GqG66Di5-pIRES/puro3和FLP重组酶质粒POG44共转染CHO-Flp In细胞,经抗性加压和有限稀释法挑取耐药单克隆,采用FLIPR钙信号检测方法筛选阳性克隆株;最后,通过RT-q PCR对细胞中的OPRM和GqG66Di5m RNA表达水平进行检测,并选用OPRM激动剂DAMGO和抑制剂Naloxone对稳定细胞株的药理学功能进行鉴定。结果显示:经酶切确定了重组质粒的正确构建;通过重组质粒转染、抗生素加压筛选以及钙信号测定获得22个具有活性的克隆细胞株,其中15号细胞株的荧光信号值最高,命名为Gq-OPRM1-CHO;与对照组相比,Gq-OPRM1-CHO细胞组中OPRM与GqG66Di5基因m RNA水平分别升高约400倍和120倍;在Gq-OPRM1-CHO细胞中,FLIPR钙信号检测激动剂DAMGO的EC_(50)为0.02±0.002μmol/L,抑制剂Naloxone的IC_(50)为0.04±0.003μmol/L。该研究成功建立了OPRM与GqG66Di5蛋白稳定共表达的细胞模型Gq-OPRM1-CHO,该细胞株具有对OPRM激动剂和拮抗剂特异性反应的药理学功能。

CCK-8及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠额叶皮质、尾壳核、海马μ阿片受体的影响

目的通过观察CCK-8及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠额叶皮质、尾壳核、海马μ阿片受体的影响,初步探讨CCK-8对吗啡戒断症状的影响及其受体机制。方法建立大鼠吗啡慢性依赖及纳络酮催促戒断模型,观察CCK-8及CCK1受体拮抗剂L-364,718、CCK2受体拮抗剂LY-288,513慢性干预对戒断症状的影响,并采用放射配基结合法测定额叶皮质、尾壳核、海马μ阿片受体的结合活性,即受体数量(Bmax)及结合力(Kd)。结果①给予吗啡前腹腔注射CCK-8及CCK受体拮抗剂慢性干预均可减轻吗啡戒断症状;②慢性吗啡作用后,额叶皮质和海马μ阿片受体数量及结合力下降,而尾壳核μ阿片受体数量无变化,仅结合力降低;戒断后,额叶皮质、尾壳核μ阿片受体数量及结合力升高,而海马μ阿片受体数量无变化,仅结合力升高;③CCK-8及其受体拮抗剂慢性干预后,使吗啡戒断大鼠尾壳核μ阿片受体结合力降低、海马μ阿片受体数量增加,但是对额叶皮质μ阿片受体的结合活性无影响。结论 CCK-8及其受体拮抗剂可通过调节μ阿片受体减轻吗啡戒断症状,并具有脑区特异性。

海洛因依赖临床特征与μ阿片受体基因多态的关联

目的 :探讨 μ阿片受体 (OPRM1)基因多态与海洛因依赖及其临床特征的相关性。 方法 :采用病例对照设计 ,分别检测2 0 2名海洛因依赖患者和 187名正常对照OPRM1基因A118G位点和C17T位点多态 ,分析该多态性与海洛因依赖及其临床特征的相关性。结果 :未发现C17T位点的多态性 ;A118G位点多态在病例组和对照组间的差异无显著性 ;A118G位点多态与海洛因依赖患者的临床特征无显著性相关。结论 :OPRM1基因A118G位点多态与海洛因依赖无显著性相关。

吗啡成瘾大鼠四个脑区μ阿片受体的变化

目的 :观察吗啡成瘾大鼠下丘脑、额叶皮质、海马和纹状体内μ阿片受体数量和基因表达的变化。方法 :剂量递增腹腔注射吗啡建立大鼠成瘾模型 ,断头处死大鼠后分离四个脑区 ,以 3H - DAGO为标记配体进行放射配体测定 ;以β- actin为内参照进行 RT- PCR。结果 :腹腔注射吗啡 9d后成功建立成瘾大鼠模型。在放射配体实验中 ,对照组下丘脑、额叶皮质、海马、纹状体的μ受体数量 (fm ol/ mg)分别为 12 6 .5± 2 7.9、12 2 .6± 2 1.2、135 .3± 12 .6、178.7± 2 6 .7;在成瘾组分别为 76 .9± 2 7.3、95 .9± 2 0 .1、6 7.8± 15 .6、138.9± 19.8,较对照组显著下降 (P<0 .0 5 )。 RT- PCR结果显示 ,对照组下丘脑、额叶皮质、海马、纹状体内μ受体 m RNA表达量分别为 9.3± 1.2、3.2± 0 .8、3.7± 0 .3、5 .0± 1.7;成瘾组分别为 1.0± 0 .7、2 .5± 1.1、1.3± 0 .5、1.7± 0 .8,除额叶皮质外均较对照组显著降低 (P<0 .0 5 )。结论 :大鼠在吗啡成瘾过程中脑内出现 μ受体基因表达的下降和 μ受体的下调。推测 μ受体的下调可能是引起吗啡成瘾的原因之一 。

大鼠脊髓后角浅层初级传入C纤维内μ阿片受体的免疫组织化学定位——光镜与电镜研究

目的在光镜及电镜下观察大鼠脊髓后角内μ阿片受体（ＭＯＲ）与Ｃ纤维的关系，为进一步揭示阿片镇痛的突触机制提供形态学证据。方法根据辣椒素对初级传入神经中Ｃ纤维的特异性神经毒性，在大鼠蛛网膜下腔注射辣椒素以毁损Ｃ纤维，用免疫组织化学ＡＢＣ法比较脊髓后角内ＭＯＲ免疫反应性的变化；根据西非单叶豆同工凝集素Ｉ－Ｂ４（ｇｒｉｆｏｎｉａｓｉｍｐｌｉｃｉｆｏｌｉａｉｓｏｌｅｃｔｉｎＩ－Ｂ４，Ｉ－Ｂ４）与初级传入Ｃ纤维选择性结合的特性，应用双标（免疫）组织化学电镜技术（ＡＢＣ－纳金法）分别标记脊髓后角内Ｉ－Ｂ４结合位点和ＭＯＲ。结果大鼠蛛网膜下腔注射辣椒素３～７ｄ后，其脊髓后角Ⅰ～Ⅱ层内的ＭＯＲ免疫反应性较对照动物明显减弱；电镜下在大鼠脊髓后角浅层内观察到，ＭＯＲ不仅定位于树突内，也分布在含Ｉ－Ｂ４结合位点的Ｃ纤维终末内。无论在树突内还是在轴突终末内，ＭＯＲ主要分布在非突触部位，仅少量ＭＯＲ与突触前膜和／或突触后膜有关。结论脊髓后角中部分ＭＯＲ来源于辣椒素敏感的Ｃ纤维，外源性吗啡或内源性吗啡样物质如内吗啡肽等ＭＯＲ激动剂在脊髓后角内既可通过突触后（树突内）的ＭＯＲ发挥作用，也可通过突触前（轴突终末内）的ＭＯＲ对Ｃ纤维产生突触前?

电针对佐剂性关节炎大鼠炎症局部μ阿片受体mRNA表达的影响

目的:从阿片受体角度观察电针(EA)对佐剂性关节炎(AA)大鼠镇痛作用的外周机制。方法:以Freunds完全佐剂造成AA大鼠模型,在EA治疗后观测大鼠痛阈、炎症局部μ阿片受体(MOR)mRNA的表达。结果:EA治疗后,大鼠的痛阈提高,炎症局部的MORmRNA表达增强。结论:EA对AA大鼠的镇痛作用与EA加强大鼠炎症局部MORmRNA表达增强有关。

μ阿片受体基因内含子2多态性与美沙酮维持治疗剂量的关联分析

目的:探讨μ阿片受体基因内含子2的两个单核苷酸多态性位点(Single nucleotide polymorphism,SNP)rs9479757和rs2075572与海洛因成瘾者美沙酮维持治疗剂量的相关性。方法:应用TaqMan荧光技术检测68例美沙酮维持治疗病例的rs9479757和rs2075572的基因型并进行与美沙酮维持剂量高低的关联分析。结果:rs9479757和rs2075572在美沙酮维持治疗高、低剂量组间的分布差异无统计学意义;rs9479757和rs2075572各基因型与美沙酮维持治疗剂量差异无统计学意义。结论:μ阿片受体基因内含子2的两个SNP(rs9479757和rs2075572)多态性与海洛因成瘾者美沙酮维持剂量的高低无明显相关性。

经前平颗粒对PMS肝气逆证模型大鼠顶区和额区皮质中μ阿片受体表达的影响

目的探讨PMS肝气逆证与μ阿片受体表达量的关系以及经前平颗粒的微观作用机制。方法以脉冲电刺激法制备PMS肝气逆证大鼠模型,运用半定量RT-PCR和Western blot技术检测PMS肝气逆证模型大鼠顶区和额区皮质中μ阿片受体的表达量。结果 PMS肝气逆证模型大鼠顶区和额区皮质中μ阿片受体的表达量均显著降低,给予经前平颗粒后能显著提高该基因表达。结论 PMS肝气逆证的发生可能与脑中枢顶区和额区皮质中μ阿片受体表达量下降有关,调节该基因表达异常可能是经前平颗粒的部分药理作用靶点。

经前平颗粒对经前期综合征肝气逆证大鼠脑μ阿片受体mRNA及蛋白表达的影响

目的观察经前平颗粒对经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)肝气逆证大鼠脑顶区皮质、额区皮质、下丘脑、海马μ阿片受体(μ opioid receptor,MOR)mRNA及蛋白的表达的影响。方法取20只大鼠制备PMS肝气逆证大鼠模型。造模后大鼠分为模型组、中药组,每组10只。另选取10只大鼠作为正常对照组(正常组)。造模同时,中药组大鼠给予经前平颗粒(1.6g/kg)灌胃,正常组和模型组大鼠给予等体积生理盐水(1mL/100g)灌胃,每天1次,连续5天。采用RT-PCR和Western blot法分别检测大鼠顶区皮质、额区皮质、下丘脑和海马MOR mRNA及蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠顶区皮质、额区皮质MOR mRNA及蛋白扩增产物电泳条带相对较弱,光密度值降低,顶区皮质、额区皮质MOR mRNA及蛋白相对表达降低;下丘脑、海马MOR mRNA及蛋白电泳条带相对较强,光密度值升高;下丘脑、海马MORmR-NA及蛋白相对表达升高,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,中药组大鼠顶区皮质、额区皮质MOR mRNA及蛋白扩增产物电泳条带增强,顶区皮质MOR mRNA表达升高,顶区皮质和额区皮质MOR蛋白相对表达升高;下丘脑和海马MOR mRNA及蛋白电泳条带亮度减弱,下丘脑和海马MOR mRNA相对表达降低,海马MOR蛋白相对表达降低,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论 MOR在PMS肝气逆证大鼠不同脑区呈现特异性表达,经前平颗粒表现出相应调节作用。

μ阿片受体基因A118G多态性对患者电刺激痛觉敏感性的影响

目的探讨μ阿片受体基因A118G(OPRM1A118G)多态性对手术患者电刺激痛觉敏感性的影响。方法择期拟行腹部手术患者162例,ASAⅠ或Ⅱ级,男72例,女90例。采用电刺激测定患者痛阈和耐痛阈。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)进行OPRM1A118G多态性位点的检测。结果共三种基因型:野生型纯合子(A/A)79例(男31例,女48例),突变型杂合子(A/G)64例(男34例,女30例),突变型纯合子(G/G)19例(男7例,女12例)。G等位基因频率为31.5%(男性33.3%,女性30.0%)。不同基因型患者年龄、BMI、痛阈和耐痛阈差异无统计学意义。不同基因型男性患者痛阈和耐痛阈均明显高于女性(P<0.05或P<0.01)。结论 OPRM1A118G等位基因突变对患者电刺激的痛阈和耐痛阈无明显影响。

杏仁中央核μ阿片受体参与蔗糖溶液摄入的调节

目的探讨杏仁中央核内μ阿片受体是否参与大鼠蔗糖溶液摄入的调节及其可能的机制。方法杏仁中央核内注入μ阿片受体激动剂DAMGO或生理盐水,测量大鼠在双瓶选择试验中对蔗糖溶液及蒸馏水的摄入量;利用荧光免疫组织化学方法,在大鼠摄入蔗糖溶液或蒸馏水后,观察杏仁中央核内μ阿片受体/Fos免疫阳性双标记神经元的数量。结果与生理盐水注射组相比,杏仁中央核内注入DAMGO增加了大鼠3 h内的蔗糖溶液摄入量;与蒸馏水摄入组相比,大鼠摄入蔗糖溶液后,杏仁中央核内c-Fos阳性神经元及μ阿片受体/Fos共表达神经元均显著增加(P<0.05)。结论杏仁中央核参与大鼠蔗糖溶液摄入的调节,该调节作用可能部分是由μ阿片受体介导的。

μ阿片受体激动剂PL017对内脏痛和胃肠功能的调节作用

目的探究μ阿片受体激动剂[MePhe3,D-Pro4]morphiceptin (PL017)在外周水平对小鼠内脏痛和末端结肠的调节。方法用醋酸扭体模型评价药物对外周内脏痛的调节。排珠实验评价末端结肠的运动能力。排便实验综合反映药物对大肠、小肠和胃的调节效果。结果(1)皮下注射PL017在扭体模型中表现出显著的剂量依赖性的强效镇痛(ED50=9.76±1.36μg·kg^(-1));(2)拮抗剂组结果表明,PL017的外周镇痛由μ阿片受体介导;(3)抑制排珠和排便的有效剂量远高于其外周镇痛剂量。结论探究了PL017在醋酸扭体模型中的外周镇痛活性;相较于胃肠调节,PL017对内脏痛的镇痛活性更高,提示PL017可能具有一定治疗外周内脏痛的潜力。

吗啡对μ阿片受体介导的ERK磷酸化的影响

目的利用表达μ阿片受体的中国仓鼠卵巢细胞,研究吗啡急慢性处理下对细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的影响。方法免疫印迹检测磷酸化ERK水平,获取1 h急性处理的ERK磷酸化变化时程和36 h慢性处理以及纳洛酮催促下的ERK磷酸化变化。结果 1μmol·L-1吗啡可以快速诱导ERK磷酸化水平短暂升高,5 min时达峰(P<0.01),吗啡诱导的ERK磷酸化水平升高具有显著的浓度依赖性。10μmol·L-1吗啡慢性处理36 h后ERK磷酸化水平与对照组比较,差异无统计学意义,但纳洛酮急性催促5或10 min均导致ERK磷酸化显著下降(与对照比较,P<0.01)。结论吗啡急慢性刺激下以及纳洛酮催促下ERK磷酸化表现出不同的变化形式,提示μ阿片受体介导下ERK相关的信号通路发生了代偿。

内降钙素基因相关肽和μ阿片受体在腰椎间盘突出模型大鼠脊髓后角内的表达

目的利用椎间孔内置管模拟椎间盘突出压迫脊神经根,观察模型鼠脊髓后角内降钙素基因相关肽(CGRP)和μ阿片受体(MOR)的表达,探讨腰椎间盘突出后致腰腿疼发生的可能机制。方法将18只SD大鼠随机分为模型组和对照组,模型组在大鼠椎间孔内置管,模拟腰椎间盘突出压迫脊神经根;对照组在大鼠椎间孔插管后旋即拔出。于术前、术后分别观察大鼠行为;采用足底力学感觉测量仪测定大鼠后肢机械痛阈,热板测痛仪测定大鼠左后足底的热刺激感受阈值;免疫荧光组织化学法观察CGRP和MOR在脊髓后角的形态学特点;Western blot检测CGRP和MOR在脊髓内的表达。结果模型组大鼠后肢运动受限,对照组于术后第7天基本恢复正常;术后第1、3和7天模型组的机械痛阈值和热痛阈值均小于同时间点对照组(P均<0.05);免疫荧光发现CGRP和MOR蛋白均表达于脊髓后角,且经Western blot检测发现CGRP含量模型组较对照组升高,而MOR蛋白含量模型组较对照组降低。结论腰椎间盘突出模型大鼠脊髓背角内CGRP和MOR蛋白表达改变,可能为腰椎间盘突出症腰腿痛的机制之一。

胍丁胺-I1咪唑啉受体对μ阿片受体下调的影响及可能机制

目的:观察胍丁胺通过激活I1咪唑啉受体(I1R)对阿片预处理引起的μ阿片受体(MOR)下调的影响及可能的分子基础。方法:以CHO-μ和CHO-μ/IRAS(imidazoline receptor antisera-selected protein)细胞作为研究对象,用[3H]diprenorphine结合实验方法,确定胍丁胺-I1R作用系统对MOR下调的影响以及可能产生的分子基础。结果:在正常CHO-μ和CHO-μ/IRAS细胞中,DAMGO([D-Ala2,N-Me-Phe4,Gly5-ol]-enkephalin,1μmol·L-1)处理两细胞12h后均可出现MOR的下调,胍丁胺(1-100nmol·L-1)浓度依赖性地抑制CHO-μ/IRAS细胞中MOR的下调,而相同浓度胍丁胺在CHO-μ细胞中无此作用。胍丁胺这一作用能被I1R阻断剂依法克生(efaroxan,Efa)所阻断。DAMGO(1μmol·L-1)预处理两细胞30min后,MOR均发生内吞。胍丁胺(1nmol.L-1-1μmol·L-1)和DAMGO共同预处理两细胞30min,胍丁胺能浓度依赖性地抑制由DAMGO预处理引起的CHO-μ/IRAS细胞中MOR的内吞,而相同浓度胍丁胺对CHO-μ细胞中由DAMGO预处理引起的MOR的内吞无显著影响,且这一作用同样能被依法克生所阻断,提示胍丁胺通过激活I1R对DAMGO预处理引起的MOR内吞具有显著的抑制作用,这可能是胍丁胺-I1R作用系统抑制MOR下调的分子基础。结论:胍丁胺通过激活I1R抑制阿片激动剂诱导的MOR的内吞,进而进一步抑制MOR下调。

海洛因依赖与μ阿片受体基因多态性的关联研究

目的探讨海洛因依赖和μ阿片受体基因多态性的关系.方法应用聚合酶链反应技术检测313例海洛因依赖者和214名正常对照μ阿片受体基因.结果海洛因依赖者和对照组之间的上述的基因型和等位基因频率的差异无显著性(P>0.05).结论μ阿片受体基因多态性与海洛因依赖无关联.

μ阿片受体基因敲出(Knockout)小鼠模型的建立和阿片受体镇痛及成瘾机理的阐明

1992年克隆出阿片δ受体后，已从不同种属的动物克隆出了阿片受体的三个亚型μ、δ和k受体。最近法国Kieffer实验室的Matthes等利用小鼠胚胎干细胞基因敲出技术繁育成功了一个μ阿片受体缺陷的种系小鼠。这种小鼠除无出阿片受体外，生长、发育、生殖和活动周期等与正常小鼠无异，且小鼠的δ和k受体的数量和分布、内源性阿片肽的表达和对热刺激的敏感性都与正常小鼠无异。给予该小鼠吗啡，无镇痛、位置偏爱和身体依赖性作用，给予纳洛酮也不出现撤药综合征。给予δ受体的选择性激动剂也无镇痛作用。说明吗啡的镇痛、位置偏爱和身体依赖性作用由μ受体介导，而与δ和k受体无关。