β-伴大豆球蛋白α'亚基和β亚基基因双价RNAi表达载体抑制大豆抗原蛋白的表达

为幼龄动物提供优质的大豆饲料,同时有效抑制α＇亚基和β亚基基因表达量,根据dsRNAi原理,以α＇亚基基因RNAi重组植物表达载体pCAMBIA3301-PFNZ-BADH为基础,构建以BADH安全标记为筛选标记的α＇亚基和β亚基基因双价RNAi植物表达载体。用根癌农杆菌介导法转化大豆子叶节,并对再生植株进行分子生物学检测。结果表明：成功构建β-伴大豆球蛋白α＇亚基和β亚基基因双价RNAi表达载体,并获得大豆转基因植株。T1转基因大豆植株经PCR检测得到11株阳性转化株,经Southern杂交检测证明构建的双价植物表达载体已经以1-2个拷贝整合到大豆基因组中,实时荧光定量PCR检测表明β-伴大豆球蛋白α＇亚基和β亚基基因的表达被明显抑制。

蛋白磷酸酶2A-Aα亚基基因5'侧翼区多态性在广东汉族人群中的分布

目的:探讨蛋白磷酸酶2A-Aα亚基基因PPP2RIA启动子区的遗传多态性在中国南方汉族人群中的分布特征。方法:随机选取部分广东汉族人群,获取全血基因组DNA。PCR扩增获得PPP2RIA基因5′-侧翼区的目的片段产物直接再测序,筛查并确证潜在的基因多态性位点,采用HaploView软件进行该人群多态性等位基因分布频率的分析、并与HapMap结果进行分布特征比较。结果:PCR扩增和成功测序63例健康人(126条染色体)PPP2RIA基因-1 844～+201nt的目的片段,序列比对发现该人群中6个已知多态性位点及其人群最小等位基因频率分别为-1 039 G>T(+Ins)(rs10414793,但其中T等位基因型含有29个碱基片段的插入)(8.73%)、-568 G>A(rs1864007)(25.40%)、-241 -/G(rsl 1453459)(26.90%)、+87 T>C(rs13344984)(7.94%)、+107 -/C(rs3833207)(30.16%)和+108 A>G(rs1 7554825)(7.94%);且其中2个位点在该人群中的分布与HapMap公布的国外人群数据存在不同(P<0.05);同时,该人群中还发现-512 G>A(2.38%)的潜在新多态性位点。结论:筛查PPP2RIA基因5′-侧翼区在中国广东汉族人群中多态性位点的等位基因分布,为进一步开展多态性功能性分析提供基础。

环羟基化双加氧酶α亚基保守序列的克隆及基因定位

利用PCR法成功地克隆了不动杆菌(Acinetobacter)L2菌株的环羟基化双加氧酶α亚基保守序列310 bp片段,并对其进行测序。序列分析结果表明该片段与3苯-基丙酸盐双加氧酶α亚基、苯1,2双-加氧酶α亚基、甲苯2,3双-加氧酶α亚基的氨基酸序列同源性分别为72%、75%和78%。Southern杂交将菌株L2的环羟基化双加氧酶α亚基基因定位在L2质粒的不同酶切片段上。

鼠白细胞介素-12双亚基共表达质粒的构建及在体内外的表达

目的 :构建双亚基共表达鼠白细胞介素 - 12 (m IL- 12 )真核表达质粒 ,并观察其在体内外的表达。方法 :将m IL - 12 p35和 p4 0全长编码 c DNA构建在 pc DN A 3.1载体上 ,然后把 p35表达单元 (CMV- p35 - BGH PA)插入pc DNA 3.1/ p4 0载体 ,使两个目的基因均受各自的启动子 CMV控制 ,构建成 m IL - 12双亚基共表达质粒 p Cm IL -12 ,并进行体内外表达。结果 :p Cm IL - 12在体外转染 COS- 7细胞后 ,经 EL ISA证实有 m IL- 12表达 ,其表达上清能在体外明显增强小鼠 NK细胞活性。小鼠皮内注射 p Cm IL - 12亦能增强小鼠 NK细胞活性。结论 :所构建的质粒在体内外均能表达有生物学活性的 m IL-

miRNA-570调控ATP合成酶G亚基的表达促进血小板凋亡

目的探讨微小RNA(miRNA)-570对腺苷三磷酸(ATP)合成酶G亚基因(ATP5L)基因表达的影响及miRNA调控血小板凋亡的分子机制。方法依据NCBI数据库中NM006476.5人的序列分别合成ATP5L 3′端非翻译区(UTR)的野生型(WT)序列和突变型(MT)序列(488 bp),通过在序列两端增加限制酶酶切位点,与双荧光素酶报告基因载体(psiCHECKTM-2)质粒连接,分别构建含有ATP5L 3′UTR的WT和MT的双荧光素酶报告基因载体。依据miRNA数据库中MI0003577人的序列分别合成miRNA-570序列和其阴性序列,分别与构建的双荧光素酶报告基因载体共转染293T细胞,依据转染物的不同将实验分为6组,实验组1:miRNA-570序列和psiCHECK-ATP5L-3′UTR-WT质粒;实验组2:miRNA-570序列和psiCHECK-ATP5L-3′UTR-MT质粒;阴性对照组1:miRNA-570阴性对照序列和psiCHECK-ATP5L-3′UTR-WT质粒;阴性对照组2:miRNA-570阴性对照序列和psiCHECK-ATP5L-3′UTR-MT质粒;空白对照组1:miRNA-570序列和psiCHECK-2质粒;空白对照组2:miRNA-570阴性对照序列和psiCHECK-2质粒。转染48 h后利用生物发光检测仪检测转染细胞的相对荧光强度。收集单采血小板60 mL,利用脂质体方法转染血小板,依据转染物的不同,将实验分为4组,实验组A:miRNA-570序列;阴性对照组B:miRNA-570阴性对照序列;空白对照组C:脂质体2000;空白对照组D:空白(无转染物);分别转染转染血小板,24 h后收集血小板,流式细胞仪检测血小板膜磷脂酰丝氨酸(PS)外翻表达,Western blot检测血小板半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3的表达,ELISA方法检测血小板Caspase-3活性。结果分别成功构建了psiCHECK-ATP5L-3′UTR-WT和-MT的双荧光素酶报告基因质粒载体。转染293T细胞测定的相对荧光强度:实验组1、实验组2、阴性对照组1、阴性对照组2、空白对照组1、空白对照组2分别为0.673±0.080、0.967±0.059、0.97±0.076、0.96±0.075、0.97±0.067、1.0±0.1(P<0.05)。实验组A、阴性对照序列组B、空白对照组C、空白对照组D转染血小板24 h时PS表达阳性率(%):分别为5.43±0.61、3.27±0.64、3.25±0.68、3.20±0.36(P<0.05);血小板中Caspase-3活性形式(%):分别为12.24±2.74、6.06±1.08、6.00±1.73、5.67±1.53(P<0.05);光密度(OD)值(%):分别为0.21±0.029、0.096±0.04、0.09±0.04、0.087±0.025(P<0.05)。结论ATP5L-3′UTR有可与miRNA-570结合的靶位点,miRNA-570调控ATP5L基因的表达,提示miRNA-570可对ATP合成造成影响;miRNA-570可增加PS表达阳性率和Caspase-3活性,提示miRNA-570可对血小板凋亡产生影响。

中国热带农业科学院成功绘制香蕉B基因组精细图谱

中国热带农业科学院联合11家单位,绘制了双单倍体香蕉野生种Pisang Klutuk Wulung(BB基因组)的精细基因组图谱,揭示了香蕉A、B基因组的分化,二倍化进程中A、B基因组的特点、多倍体香蕉A、B亚基因组之间同源交换与重组规律等重要科学问题,为香蕉遗传改良奠定了重要基础。

基于COI序列的翡翠股贻贝Perna viridis线粒体遗传特性分析及其近缘种间的系统关系探讨

应用通用引物COIL 1490和COIH 2198对翡翠股贻贝Perna viridis的性腺和体细胞线粒体DNA进行PCR扩增,获得661bp长度的COI基因片段,经过比对性腺与体细胞的COI片段,发现雄性性腺与体细胞COI基因均为一个单倍型,即体内只有一种线粒体DNA类型,没有发现双单性遗传现象,雌、雄性腺的COI基因片段变异率很低(0.31%)。应用PAUP构建NJ树、MP树以及贝叶斯法构建了贝叶斯树,对股贻贝属3种间的系统关系进行了分析,结果表明,翡翠股贻贝P.viridis、P.canaliculus和P.perna之间的分化与分歧年代的估算是相吻合的。