龙眼成花逆转花芽α-tubulin基因的克隆与原核表达

运用蛋白质组学方法比较龙眼(Dimocarpus longanLour.)正常成花和成花逆转花芽的差异蛋白质组,并应用RACE方法克隆其中上调表达的α-微管蛋白基因α-tubulin,获得一段长度为1641 bp的cDNA,其中包括1个1350 bp的开放阅读框[GenBank登录号:FJ479617(GI:218202929)]。将α-tubulin全长cDNA在大肠杆菌中表达,获得1个约49.6 kD的外源蛋白,经Western blotting验证为α-微管蛋白。RT-PCR和Western blotting分别检测了α-tubulin在转录和翻译水平上的表达,结果表明,α-微管蛋白在成花逆转的龙眼花芽中上调表达,可能是逆转花芽形态差异表现的原因之一。

茶树α-tubulin基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

根据茶树α-微管蛋白(α-tubulin)的mRNA全长序列(GenBank登录号DQ340766)设计引物,以RT-PCR方法扩增茶树α-tubulin基因,将扩增产物克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,并转化至大肠杆菌BL21trxB(DE3)中,经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后以包涵体形式表达。以纯化后的α-tubulin融合蛋白制备兔多克隆抗体,用Westernblot方法检测抗体特异性。结果显示α-tubulin蛋白以包涵体形式大量表达,以融合蛋白制备的抗体对茶树体内的α-tubulin具有良好的特异性。

CK、Tubulin-β和PCNA在鼻咽癌放疗后复发组织中的表达及意义

目的研究鼻咽癌中CK、Tubulin-β及PCNA的表达,探讨其与鼻咽癌放疗后复发和转移的可能机制。方法裸鼠体内移植瘤实验观察鼻咽癌细胞F1、S1放射治疗前后的细胞形态、体内增殖和转移能力,采用免疫组织化学SP法检测裸鼠移植瘤组织、鼻咽癌及放疗后复发组织中CK、Tubulin-β及PCNA的表达。结果放射后F1、S1裸鼠移植瘤瘤体质量分别较未放射组的F1、S1裸鼠移植瘤瘤体质量低(P<0.05)。各组均无肺转移,放射治疗后S1裸鼠移植瘤淋巴结转移率高于F1组,但差异无统计学意义(P>0.05)。未放射组F1裸鼠移植瘤组织中PCNA表达高于未放射S1裸鼠移植瘤(P<0.05);放射治疗后S1裸鼠移植瘤中CK和PCNA表达均高于放射后的F1裸鼠移植瘤(P<0.05/0.01)。鼻咽癌放疗后复发组织中PCNA表达高于鼻咽癌组(P<0.05)。Spearman相关分析显示,鼻咽癌组织中CK与Tubulin-β、Tubulin-β与PCNA表达呈正相关关系,放疗后复发组织中CK与Tubulin-β和PCNA表达呈正相关(P<0.05)。鼻咽癌及放疗后复发组织中CK、Tubulin-β及PCNA的表达与患者年龄、性别、颈部淋巴结转移和临床分期无关。结论 CK和Tubulin-β参与鼻咽癌放疗后复发的过程,并与细胞增殖关系密切,但不能独立作为鼻咽癌放疗后复发的预测指标。

卵巢浆液性肿瘤中Pax8和Tubulin的表达及意义

目的探讨Pax8和Tubulin在卵巢浆液性肿瘤中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测28例正常卵巢组织、38例卵巢良性浆液性囊腺瘤、34例卵巢交界性浆液性肿瘤和38例卵巢浆液性癌中Pax8、Tubulin的表达,并复习相关文献。结果正常卵巢上皮中Pax8、Tubulin均呈阴性,卵巢良性浆液性囊腺瘤、交界性浆液性肿瘤、浆液性癌中Pax8、Tubulin阳性率分别为78.9%和78.9%、100%和100%、94.7%和89.5%,Pax8在卵巢交界性浆液性肿瘤及浆液性癌组织中表达明显高于良性浆液性囊腺瘤组织(P<0.05),Tubulin在3种卵巢肿瘤中的表达差异无显著性(P>0.05),但存在表达部位的改变;Pax8表达与卵巢浆液性癌患者年龄、FIGO分期、病理学分级、淋巴结转移无关(P>0.05),Tubulin表达与浆液性癌病理学分级有关(P<0.05),Pax8、Tubulin的免疫组化评分比值大小与淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论 Pax8可能作为卵巢浆液性癌的标志分子,并为其临床靶向分子治疗提供实验依据;综合分析Pax8、Tubulin及二者免疫组化评分比值,对评估卵巢浆液性癌患者的病理学分级、淋巴结转移情况具有参考意义。

α-tubulin基因的克隆、生物信息学分析及其在仿刺参肠道再生过程中的表达模式

为了明确仿刺参α-微管蛋白(α-tubulin)基因的序列及结构信息,初步研究该基因在仿刺参肠道再生过程中的生物学功能,本研究利用转录组数据挖掘和c DNA末端快速扩增技术(RACE)首次克隆得到仿刺参α-tubulin基因的全长c DNA序列。结果表明,仿刺参α-tubulin基因c DNA全长为1641 bp,共编码453个氨基酸,经生物信息学分析发现,该基因的5'端非编码区为153 bp,3'端非编码区为126 bp,推算该基因所编码的蛋白质分子量为50.33 ku,等电点为4.89,属于亲水性非跨膜蛋白质,且氨基酸序列中含有微管蛋白特有的信号序列GGGTGSG。通过与13种已公布物种的α-tubulin氨基酸序列进行多重序列比对及系统进化分析,发现仿刺参α-tubulin蛋白的氨基酸序列与其他真核生物的α-tubulin蛋白序列具有非常高的保守性,与南极岩斑鳕α-tubulin相似性高达90%。采用实时定量PCR技术对α-tubulin基因在仿刺参肠组织再生不同时期的表达情况进行检测,结果显示α-tubulin基因在仿刺参肠组织再生不同时期均有表达,其相对表达量在肠组织再生17 d时最高,5 d时最低。本研究在获得仿刺参α-tubulin基因结构信息的同时,进一步印证了真核生物α-tubulin基因的高度保守性,同时表明α-tubulin基因参与仿刺参肠道再生过程。

弓形虫不同分离株α-Tubulin和β-Tubulin基因PCR-RFLP分析及其探针制备

目的不同分离株弓形虫α-Tubulin和β-Tubulin基因的PCR-RFLP分析及其杂交探针制备。方法PCR体外扩增α-Tubulin和β-Tubulin基因片段并进行RFLP分析;采用随机引物法用地高辛(DIG-11-dUTP)标记探针并同基因组DNA进行Southern杂交分析。结果从5株弓形虫分离株的基因组DNA中均扩增出α-Tubulin基因的818bp片段和β-Tubulin基因的959bp片段,RFLP分析弓形虫各分离株间酶切图谱未见差异。探针的特异性和敏感性较好。结论α-Tubulin和β-Tubulin基因在弓形虫中高度保守;α-Tubulin和β-Tubulin基因杂交探针可用于Southern杂交。

SHH的激活对永久性脑缺血大鼠细胞骨架蛋白α-tubulin、MAP-2表达的影响

目的探讨应用purmorphamine激活SHH信号通路后对大鼠脑缺血区细胞骨架蛋白α-tubulin、MAP-2的影响。方法采用线栓法制备大鼠急性大脑中动脉脑缺血模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组和给药组,其中给药组给予purmorphamine腹腔注射。于术后1d、3d、7d、14d用免疫组化法测定脑缺血后不同时相α-tubulin、MAP-2的表达,用RT-PCR测定Gli-1的表达。结果假手术组各时间点α-tubulin、MAP-2、Gli-1的表达差异无统计学意义;与之相比,模型组α-tubulin、MAP-2各时间点含量明显低于假手术组(P<0.05);给药组与模型组比较在1d、3d、7d各时间点α-tubulin、MAP-2的表达明显增多,差异有统计学意义(P<0.05),第14天时趋于稳定;而给药组Gli-1各时间点的表达明显高于假手术组和模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论激活SHH信号通路可促进缺血区α-tubulin、MAP-2表达增加,这可能是其减轻脑缺血后神经损伤的机制之一。

β-tubulin-Ⅲ基因的表达与长春瑞滨治疗非小细胞肺癌疗效关系的研究

目的:研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织中β-微管蛋白-Ⅲ(β-tubulin-Ⅲ)基因的表达与患者对长春碱类药物化疗敏感性的关系,为患者选择适当的药物治疗提供依据。方法:共入选35例NSCLC患者,随机分入长春瑞滨(NVB)联合顺铂(PDD)或卡铂(CBP)组成NP方案化疗组和吉西他滨(GEM)联合PDD或CBP组成GP方案组,观察两组对化疗的反应;同时以RT-PCR法检测患者病理组织中β-tubulin-ⅢmRNA的表达,以Westernblot检测β-tubulin-Ⅲ蛋白的含量。结果:NP组19例,GP组16例,两组患者临床特点无明显差别,对化疗总的有效率相似,在NP组内,有效10例,无效9例,有效患者的肿瘤组织中β-tubulin-Ⅲ mRNA测量值为4.8±1.9,而无效患者为15.8±8.0,两者有显著性差异(P<0.01);有效患者β-tubulin-Ⅲ蛋白的测量值为3.7±1.5,无效患者为13.5±6.2(P<0.01)。GP组7例无效,9例有效,有效与无效患者肿瘤组织中β-tubulin-Ⅲ mRNA和β-tubulin-Ⅲ蛋白表达均无显著性差异(P>0.05)。结论:NSCLC患者肿瘤组织中β-tubulin-Ⅲ基因的表达与患者对长春碱类药物的敏感性有关,β-tubulin-Ⅲ基因高表达,提示对长春碱类药物的敏感性低,宜换用其他药物治疗。

β-tubulin-Ⅲ和Stathmin与晚期非小细胞肺癌化疗敏感性的关系

背景与目的长春瑞滨+顺铂/卡铂(NP)方案是晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的标准化疗方案之一。本课题通过研究NSCLC患者肿瘤组织中3型β微管蛋白(β-tubulin-Ⅲ)和Stathmin蛋白的表达与患者对NP方案敏感性的关系,为个体化治疗方案的制定提供择药依据。方法以Western blot法测定患者肿瘤组织中β-tubulin-Ⅲ和Stathmin蛋白的表达,依据表达高低分为4组:二者均低表达的L组,仅β-tubulin-Ⅲ低表达的B组,仅Stathmin低表达的S组,及二者皆高表达的H组;同时所有患者接受2或4周期的长春瑞滨+顺铂/卡铂(NP)方案化疗,观察各组患者的有效率(response rate,RR)、中位生存期(media survival time,MST)、疾病进展时间(timetoprogress,TTP)。结果共90例ⅢB-Ⅳ期的NSCLC患者入组,L组22例,B组、S组均23例,H组22例,各组RR分别为68.2%、26.1%、30.4%、22.7%,L组优于其它3组(P<0.05);各组MST分别为377天、305天、321天、271天,TTP分别为240天、182天、190天、166天,均显示出L组优于其它3组(P<0.05)。结论NSCLC患者肿瘤组织中β-tubulin-Ⅲ和Stathmin蛋白的表达,与患者对NP方案的敏感性有关,可作为选择合适化疗药物的参考。

Alzheimer病患者脑tau、β-tubulin的表达

目的 观察 Alzheimer病 (AD)患者脑 tau、β- tubulin的表达、分布与神经元骨架改变的关系。方法 采用免疫组织化学方法观察 tau、β- tubulin,在 8例 AD、5例非痴呆老人 (ND)脑海马、嗅球、脑室周围皮质等部位的表达并进行半定量分析。结果 (1) AD组 tau蛋白与 ND组相比表达明显增加 (P <0 .0 0 1) ,主要在额叶、颞叶、海马、脑室周及嗅球的表达增高 (P <0 .0 5 ) ;顶叶、枕叶无明显差异。大脑新皮层、海马神经元树突、胞膜均有表达 ,细胞核膜部分着色 ,部分神经元呈典型 NFT样结构 ;星形胶质细胞也有表达。此外 ,神经毡细丝、老年斑亦有广泛表达。ND组 tau散在表达 ,无 NFT样神经元。 (2 ) AD组的 β- tubulin明显减少 (P <0 .0 0 1) ,额叶、颞叶、顶叶、海马及脑室周表达明显下降 (P <0 .0 5 ) ;而枕叶与嗅球无差异。β- tubulin在 ND组 ,主要是海马及皮质神经元树突上广泛表达 ,白质区轴索结构也有阳性表达。结论 AD患者脑内 tau表达增高且存在区域分布差异 ;而 tau的过度产生与 β- tubulin的表达减少和晚期 AD脑内广泛的神经元丢失、结构破坏相一致 ,提示

抗苯并咪唑的小麦赤霉病菌β-tubulin基因序列分析与特性研究

本研究用真菌 β-微管蛋白基因的通用寡聚核苷酸引物 B1和 B3,扩增并克隆了一段 82 1bp的小麦赤霉病菌 Fusarium graminearum的 β-微管蛋白基因片段 ,并进行了序列测定。根据该序列设计了 F.graminearumβ-微管蛋白基因的特异性测序引物 ,测定了赤霉病菌对多菌灵不同抗感菌株的β-微管蛋白基因核苷酸序列 ,结果表明不同 F.graminearum菌株的 β-微管蛋白的 16 5,198,2 0 0和 2 57位氨基酸未发生突变 ,在克隆的片段内也未发现核苷酸突变引起的氨基酸改变。表明该菌对多菌灵产生抗性的分子机制与目前已知的其它真菌有所不同 ,有待进一步研究。

β-tubulin Ⅲ在结肠腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测结肠腺癌患者癌组织中β-tubulinⅢ的表达,探讨其临床意义。方法:收集结肠腺癌组织标本111例,根据β-tubulinⅢ的阳性细胞分布部位分为浸润前沿组(n=72例)和非浸润前沿组(n=39例),采用免疫组织化学法检测结肠腺癌患者癌组织中β-tubulinⅢ的阳性表达率,分析β-tubulinⅢ的表达与患者性别、年龄、肿瘤分化、临床分期、淋巴结转移、复发和死亡等临床病理特征之间的关系。结果:不同性别、淋巴结转移、临床分期、死亡和复发结肠腺癌患者间β-tubulinⅢ的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。浸润前沿组和非浸润前沿组患者癌组织中β-tubulinⅢ阳性表达率比较差异有统计学意义(χ~2=8.76,P=0.01)。低中分化病例多见于浸润前沿组,而高分化病例多见于非浸润前沿组(χ~2=6.88,P=0.03)。不同分化程度癌组织中β-tubulinⅢ的阳性表达率比较差异有统计学意义(χ~2=5.74,P=0.04)。非前沿组中有无淋巴结转移的患者癌组织中β-tubulinⅢ阳性表达率比较差异有统计学意义(χ~2=6.02,P=0.05)。免疫组织化学法染色,β-tubulinⅢ阳性表达细胞胞质呈黄色颗粒;与低分化组比较,高分化癌组织中β-tubulinⅢ阳性表达细胞明显增多。结论:结肠腺癌组织中β-tubulinⅢ表达与肿瘤的分化程度有关,高分化结肠腺癌组织多见于非浸润前沿组。非浸润前沿组患者β-tubulinⅢ表达与淋巴结转移有关。

低温冷冻对皮肤α-tubulin、β-tubulin和cytoskeratin表达的影响

目的:探讨低温冷冻对皮肤骨架蛋白中α-微管蛋白(α-tubu lin)、β-微管蛋白(β-tubu lin)和高分子量角蛋白(cytoskeratin)表达的影响,从而进一步揭示皮肤低温损伤的机制。方法:用-αtubu lin、β-tubu lin、cytoskeratin抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色,采用计算机图像分析技术进行定量分析。并进一步采用透射电镜观察-αtubu lin、β-tubu lin、cytoskeratin的超微结构的变化。结果:α-tubu lin、β-tubu lin、cytoskeratin在4℃组、-20℃组、-80℃组均表达显著下降,且超微形态结构及分布改变明显。在-196℃组储存时三种成分含量下降较少,形态改变亦不显著。结论:皮肤的低温损伤与骨架蛋白-αtubu lin、β-tubu lin、cytoskeratin的破坏有关。

Ⅳ期非小细胞肺癌组织β_Ⅲ-tubulin表达与紫杉类化疗耐药相关

目的:探讨Ⅳ期非小细胞肺癌(NSCLC)βⅢ-tubulin表达与紫杉类化疗耐药性关系.方法:回顾性分析75例接受以紫杉类化疗的Ⅳ期NSCLC临床病理资料.免疫组织化学法检测肿瘤标本βⅢ-tubulin蛋白表达,并对化疗疗效及生存时间进行分析.结果:βⅢ-tubulin阳性表达率(≥50%阳性染色细胞)为58.7%(44/75),与性别、年龄及组织类型无关.化疗有效率(CR+PR)为34.7%,βⅢ-tubulin高表达患者紫杉类化疗有效率低(25.0%),进展率高(25.0%),而βⅢ-tubulin低表达患者化疗有效率高(48.9%),进展率低(6.4%),P值分别为0.036和0.037.βⅢ-tubulin高表达者有较短的中位OS(12 mo)和PFS(8 mo),而βⅢ-tubulin低表达患者有较长的中位总生存期(OS)(15 mo)和无进展生存期(PFS)(11 mo),P=0.018.结论:βⅢ-tubulin高表达NSCLC患者对紫杉类药物耐药且预后不良.

LRP及β-Tubulin在非小细胞肺癌组织中表达及其与肿瘤耐药的关系

目的探讨肺耐药蛋白(LRP)及β-微管蛋白(β-Tubulin)与肿瘤多药耐药的关系,为非小细胞肺癌(NSCLC)患者化疗方案的选择和改进提供理论依据。方法应用免疫组织化学技术(SP法),检测NSCLC组织中LRP及β-Tubulin表达情况。结果 LRP在NSCLC中阳性表达率为73.33%,其中鳞癌表达率(54.55%)低于腺癌(76.92%),但两者之间无显著性差异;LRP表达与肺癌分化程度有明显关系(P<0.05),高、中、低分化表达率分别为53.85%、66.67%、91.30%;分化程度越低,LRP表达越强;βⅢ-tubulin在NSCLC中阳性表达率为76.67%。LRP及βⅢ-tubulin阳性表达与患者性别、是否吸烟、病理类型、临床分期均无明显关系;LRP与βⅢ-tubulin表达间呈明显正相关关系(γ=0.293,P<0.05)。结论 LRP及βⅢ-Tubulin在NSCLC组织中呈高表达,LRP表达与肺癌分化程度有关。LRP及βⅢ-Tubulin表达与患者性别、是否吸烟、病理类型、临床分期均无明显关系;LRP与βⅢ-tubulin表达呈正相关,耐药相关蛋白表达规律可能有助于NSCLC化疗方案的选择,为临床化疗方案的制定及多药耐药机制的研究提供理论依据。

细胞骨架蛋白tubulin α、β在不同级别胶质瘤中的表达及其与预后的相关性

目的探讨不同病理学分级胶质瘤中细胞骨架蛋白tubu linα、β的表达,评估tubu linα、β表达水平与胶质瘤的恶性程度及其与预后的相关性。方法应用免疫组化方法检测57例不同病理级别人胶质瘤组织中tubu linα、β表达情况,并分析tubu linα、β表达水平与病理分级及患者术后生存时间的相关性。结果不同级别胶质瘤tubu linα、β表达水平不同,高级别(Ⅲ、Ⅳ级)与低级别(Ⅰ、Ⅱ级)胶质瘤tubu linα、β表达水平的差异有显著性(P<0.05),且tubu linα、β表达水平与患者术后生存时间呈正相关性。结论tubu linα、β在胶质瘤恶性进展方面可能具有重要意义,对指导胶质瘤的分期、组织学分级和判断患者的预后有一定参考价值。

袋料香菇菌株ITS及β-tubulin序列分析

以香菇栽培袋分离菌株为研究材料,以香菇931-9为对照菌株,采用ITS及β-tubulin序列分析方法对研究材料进行鉴定。结果表明,香菇栽培袋是2种香菇菌株菌丝的混杂,与对照菌株931-9不是同一个菌株,证实青川县香菇栽培袋分离菌株与对照菌株931-9不是同一菌株。

β_Ⅲ-tubulin在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨βⅢ-tubulin在胃癌中的表达情况及其与临床病理特征及预后的关系。方法应用免疫组织化学法检测58例胃癌组织及其相应的53例癌旁组织中βⅢ-tubulin的表达,并对βⅢ-tubulin不同表达患者的临床病理特征及预后进行分析。结果胃癌组织中βⅢ-tubulin高表达率为70.69%(41/58),与年龄、性别、病理类型、临床分期、淋巴结转移及肿瘤浸润深度无关(P>0.05)。癌旁组织中βⅢ-tubulin高表达率为64.15%(34/53),与胃癌组织差异无统计学意义。在有完整随访资料的41例患者中,胃癌组织βⅢ-tubulin高表达组的2年生存率为52.0%,低表达组为43.8%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论βⅢ-tubulin的表达与胃癌患者的临床特征及预后无明显相关性。

非小细胞肺癌β-tubulinⅢ表达与微管蛋白结合类化疗药物敏感性的关系

目的探讨进展期非小细胞肺癌(NSCLC)组织β微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ)的表达情况及其与含微管蛋白结合类化疗药物敏感性之间的关系。方法收集2002年1月至2006年12月经病理组织学检查确诊的ⅢB、Ⅳ期NSCLC初治患者120例,采用免疫组化法检测活检癌组织中β-tubulinⅢ的表达。所有患者行4～6个周期异长春花碱或紫杉类联合顺铂化疗,评价治疗有效率(RR),随访总生存时间(OS)和肿瘤进展时间(TTP),分析上述指标以及临床特征与β-tubulinⅢ表达之间的关系。结果 53例患者均可评价疗效。β-tubulinⅢ高表达者(n=31)的RR、OS、TTP分别为9.4%、(277.26±112.82)天和(170.06±71.45)天,均显著低于β-tubulinⅢ低表达者(n=22)的45.5%、(457.32±207.12)天和(289.45±129.78)天(P<0.001)。β-tubulinⅢ表达与性别、年龄、病理类型、吸烟情况、TNM分期、基础疾病情况、合并症、癌症家族史、PS评分等临床病理特征均无关。结论进展期NSCLC的β-tubulinⅢ表达情况可能与接受微管蛋白结合类化疗药物的敏感性有关,低表达者疗效及预后均优于高表达者。β-tubulinⅢ表达与临床病理特征无关。

龙眼胚性愈伤组织微管蛋白基因β-tubulin克隆及序列分析

以龙眼松散型胚性愈伤组织为材料,利用RT-PCR法首次克隆2条含有完整开放阅读框的β-tubulin基因的cDNA序列,命名为dl-β-tubulin3和dl-β-tubulin6,长度分别为1350和1351 bp,均编码含有446个氨基酸残基的蛋白质.生物信息学分析表明,该蛋白属于亲水性蛋白,无跨膜结构域;与毛果杨、大豆、水稻、玉米和拟南芥具有较高的同源性;含有微管蛋白所特有的2个保守结构域NNWAKGH和RKAFLHWYTGEGMDEMEFTE,以及1个GTP结合位点GGGTGSG.推测β-tubulin通过不同的磷酸化方式改变酶活性及蛋白构象,参与龙眼体胚发生过程的调控.