TGF_α-PE40对胶质瘤细胞生长抑制的实验研究

目的观察基因重组转化生长因子α┐绿脓杆菌外毒素融合蛋白（ＴＧＦα┐ＰＥ４０）对表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）表达水平高的胶质瘤细胞生长的导向抑制作用。方法通过结晶紫染色和３Ｈ┐亮氨酸掺入量的测定，观察基因重组ＴＧＦα┐ＰＥ４０对培养脑胶质瘤Ｕ２５１细胞生长及其蛋白质合成的影响。结果ＴＧＦα┐ＰＥ４０浓度为１～１００ｎｇ／ｍｌ时，对脑胶质瘤Ｕ２５１细胞生长及其蛋白质的合成是呈剂量依赖性抑制。结论这表明ＴＧＦα┐ＰＥ４０对脑胶质瘤Ｕ２５１细胞的生长具有较强的抑制作用。

P-VEGFR-3、P-AKT、P-PDGFR-α及D2-40在子宫内膜癌中的表达及意义

目的分析磷酸化的血管内皮生长因子受体3(P-VEGFR-3)、磷酸化的蛋白激酶(P-AKT)、磷酸化的血小板源性生长因子α受体(P-PDGFR-α)及淋巴内皮标记物D2-40在子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生及子宫内膜炎症性疾病中的蛋白表达差异,以探讨其临床检测价值。方法对有淋巴结转移的子宫内膜癌、无淋巴结转移的子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生及子宫内膜炎症性疾病患者的石蜡组织标本各25例进行免疫组织化学染色,显微镜下观察P-VEGFR-3、P-AKT、P-PDGFR-α及D2-40的阳性表达情况。应用SPSS16.0统计学软件分析各组之间的差异性,等级资料和率的比较分别采用Riddit分析及Fisher检验。结果有淋巴结转移的子宫内膜癌组织P-VEGFR-3、P-AKT、P-PDGFR-α及D2-40的阳性表达率和阳性表达程度均明显高于无淋巴转移的子宫内膜癌组织,且无淋巴转移的子宫内膜癌组织P-VEGFR-3、P-AKT、P-PDGFR-α及D2-40的阳性表达率和阳性表达程度均明显高于子宫内膜不典型增生组织,各指标的组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),但子宫内膜不典型增生和炎症性疾病组织之间各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 P-VEGFR-3、P-AKT、P-PDGFR-α及D2-40与子宫内膜癌的发生及淋巴结转移密切相关,临床上可作为其发病和预后的评估指标。

杂多酸盐TiSiW_(12)O_(40)/TiO_2催化合成α-萘乙酸甲酯

以自制的固体杂多酸盐催化剂TiSiW12 O40 /TiO2 催化酯化合成α 萘乙酸甲酯 ,产品酯含量≥ 99.0 % ,收率 98.6% .发现该杂多酸盐催化剂对催化酯化合成α 萘乙酸甲酯具有较高的催化活性 ,并具有合成工艺简单、催化剂容易回收且可多次重复使用等特点 .适宜的反应条件为 :醇酸摩尔比为 1 0∶1 ,催化剂用量为 6% (以α 萘乙酸质量计 ) ,反应温度为 64 .5～ 68.5℃ ,反应时间 3h .

血中可溶性白细胞分化抗原40配体对内皮细胞损伤的影响

目的研究血中可溶性白细胞分化抗原40配体(s CD40L)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的损伤并探讨其发生机制。方法应用不同浓度人重组CD40L(r-CD40L)刺激HUVEC 24 h,建立单核细胞(THP-1)渗出模型,评价内皮细胞通透性。应用不同浓度r-CD40L刺激HUVEC 24 h,逆转录PCR技术检测HUVEC中TNF-αm RNA水平,观察不同浓度r-CD40L对内皮细胞功能的影响(以TNF-αm RNA水平表示)。采用ELISA法测定不同浓度r-CD40L刺激HUVEC后上清液中TNF-α蛋白水平。应用25μg/L r-CD40L刺激HUVEC不同时间,流式细胞技术检测HUVEC凋亡情况。结果随着r-CD40L刺激浓度的增加,单核细胞透膜数逐渐升高,HUVEC中TNF-αm RNA表达水平逐渐升高,HUVEC上清液中TNF-α的浓度逐渐增加。应用25μg/L r-CD40L刺激HUVEC不同时间,未诱导出细胞凋亡。结论 s CD40L对脐静脉内皮细胞通透性的影响呈浓度依赖性,其机制可能是通过上调内皮细胞核内TNF-αm RNA表达并促进其分泌TNF-α实现的。s CD40L对HUVEC功能的影响明显早于细胞的凋亡。

P53蛋白与SV40大T抗原之间相互作用的研究

为确定一种定量研究酵母体内蛋白质 -蛋白质之间相互作用的简便、快捷的方法 ,为抗癌小分子化合物药物筛选提供一条可行性途径。本文选择P5 3蛋白与SV4 0大T抗原为靶蛋白对 ,首先用酵母双杂交系统 (LiAc法质粒共转化酵母细胞 )方法定性证明了两者之间存在相互作用 ,然后通过α -半乳糖苷酶活力定量测定了相互作用力的大小 ,并确定了最佳酶活测定时间 ,并与 β-半乳糖苷酶活力测定进行了比较 ,认为α-半乳糖苷酶活力定量测定是研究蛋白质 -蛋白质间相互作用的一种更加简便快捷的方法。

β淀粉样蛋白1-40、血脂及炎症因子在阿尔茨海默病中的临床意义

目的:分析阿尔茨海默病血浆中β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)、血脂指标及相关炎症因子的临床意义。方法:择取收治的85例阿尔茨海默病患者作为研究对象,按照阿尔茨海默病评定量表-认知量表(ADAS-Cog)分为两组,轻度组(ADAS-Cog总分<20分)48例;中重度组(ADAS-Cog总分≥20分)37例。同时随机选取同期40例健康体检者作为对照组,空腹抽取静脉血,全自动生化仪检测受试者血浆中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL);酶联免疫吸附试验检测血浆中IL-6、Aβ1-40、M-CSF、IL-1β、TNF-α水平,并进行比较。结果:AD两组患者的血脂水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但AD两组间血脂水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。AD两组血浆中Aβ1-40、IL-6、M-CSF、IL-1β、TNF-α水平均高于对照组,除M-CSF外,差异均有统计学意义;中重度组除M-CSF明显低于轻度组外,IL-6、IL-1β、TNF-α均明显高于轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05),AD两组间Aβ1-40差异无统计学意义(P>0.05)。结论:阿尔茨海默病患者的Aβ1-40、血脂水平及相关炎症因子水平均有所升高,其中相关炎症因子与疾病的发生发展呈正相关,这些指标或对临床诊断有一定意义。

杂多化合物九钨三钛硅酸盐致畸毒性研究

目的 :观察九钨三钛硅酸盐 ( α- K8H2 〔Si W9Ti3 O4 0 〕· 1 5H2 O,简称 α- Ti3 )孕期给药对大鼠胎仔的毒性影响。方法 :大鼠孕期以 57.0 9,1 71 .2 8和 51 3.83mg/ kg剂量经口给予α- Ti3 ,并以Vit A为阳性对照及蒸馏水为阴性对照 ,产前剖腹检测胎鼠生长发育指标、外观内脏骨骼形态等。结果 :三个剂量组均未见胎鼠外观、内脏及骨骼畸形。低剂量组与高剂量组的活胎率升高 ,吸收胎数下降 ,与阴性对照组比较有显著性差异 (均为 P<0 .0 5)。低、中、高剂量组的胎鼠体重和身长高于阴性对照组 (分别为 P<0 .0 5,P<0 .0 1 ,P<0 .0 1 ) ,且增长程度与剂量呈正相关 ( r=0 .840 8,0 .72 2 8,P<0 .0 0 5,0 .0 5)。低、中、高三个剂量组的上枕骨骨化程度及胸骨块数高于阴性对照组和阳性对照组 ( P<0 .0 5,0 .0 1 ,0 .0 1 ,0 .0 5和 P<0 .0 5,0 .0 1 ,0 .0 1 )。各剂量组的母鼠肝脏重量及肝体比值不同程度下降。其中 ,中、高剂量组及阳性对照组的肝重及肝体比值与阴性对照组比较差异显著 (肝重比较分别为 P<0 .0 5,P<0 .0 5和 P<0 .0 1 ,肝体比值比较均为 P<0 .0 5)。结论 :α- Ti3 致畸试验未见胎鼠畸形 ,但可提高胎鼠生长发育指标和骨骼骨化程度。

杂多化合物九钨三钛硅酸盐的急性毒性和致突变性研究

目的 :对杂多化合物九钨三钛硅酸盐(α -K8H2[SiW9Ti3O40]·15H2O ,简称α -Ti3)进行急性毒性和致突变性研究 ,为临床应用提供科学依据。方法 :采用小鼠经口急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及CHO细胞染色体畸变试验等方法进行检测。结果 :①小鼠经口急性毒性试验 ,LD50 为2055.36mg/kg,属低毒物质 ;②α -Ti3 浓度在31.3～500μg/皿范围内 ,无论加S9 与否 ,每皿菌落回变数均未超过阴性对照组的两倍 ;③微核试验在25、50、125mg/kg3个剂量水平 ,各剂量组对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核千分率均未见明显增加 ,与阴性对照组比较无显著性差异(P>0.05) ;④α -Ti3 浓度在40～320μg/ml范围内 ,无论加S9 与否 ,CHO染色体畸变率与阴性对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论 :杂多化合物九钨三钛硅酸盐毒性较低 ,在本试验条件下 ,诱变性试验结果为阴性。

TGF-α与绿脓杆菌外毒素融合蛋白的表达、纯化及对肿瘤细胞的杀伤作用

目的:表达并纯化转化生长因子α与绿脓杆菌外毒素融合蛋白(TGFα-PE40),探讨其对EGF受体(EGFR)阳性肿 瘤细胞的靶向杀伤作用。方法:用pET28a表达载体构建表达TGFα-PE40蛋白的重组体pV28,IPTG诱导其表达后,提取包涵 体蛋白并用Ni柱纯化,MTT法观察复性融合蛋白对肿瘤细胞A431和SK-OV3的杀伤效用。结果:成功构建基因重组质粒 pV28,纯化后的包涵体蛋白中TGFα-PE40蛋白纯度达98％以上,这种活性毒素蛋白对EGFR高表达的A431癌细胞抑制率为 50％(IC50)时所需蛋白浓度为(0.86±0.07)μg／ml,低于EGFR低表达的SK-OV3癌细胞的IC50(6.37±2.18μg/ml),差异显 著(P<0.05)。结论:融合蛋白TGFα-PE40对肿瘤细胞的毒性与肿瘤细胞表面表达的EGFR数量成正相关,可选择性杀伤肿 瘤细胞。

利用不同磷石膏制备α型半水石膏的研究

在对磷石膏的化学组成、晶体形貌等分析比较的基础上,研究了不同磷石膏制备的α型半水石膏物化性能及晶体形貌的差异。结果表明,以云南、贵州磷石膏为原料,用水热法制备的α型半水石膏在晶体长径比和凝结时间、标稠、强度等性能上存在较大差异;用贵州磷石膏制备的α型半水石膏强度高,满足JC/T 2038-2010《α型高强石膏》中等级α40的性能要求;而云南磷石膏晶体较小、含杂多、颗粒级配差,所制备的α型半水石膏强度偏低。

子宫内膜异位症患者血清中TNF-α、LXA4、YKL-40的表达及其与r-AFS分期和痛经程度的关系

目的:探讨子宫内膜异位症(EMs)患者血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、免疫脂氧素A4(LXA4)、甲壳质酶蛋白40(YKL-40)的表达及其与美国生育协会(r-AFS)分期和痛经程度的关系。方法:选取我院于2017年1月～2018年1月期间收治的EMs患者92例作为研究组。根据r-AFS分期将患者分为I期20例,II期28例,III期26例,IV期18例。根据不同痛经程度将患者分为无疼痛14例,轻度24例,中度32例,重度22例。另选取同期因卵巢良性囊肿、子宫腺肌瘤等行腹腔镜术治疗的患者30例为对照组。检测并比较两组血清TNF-α、LXA4、YKL-40水平;比较不同r-AFS分期和不同痛经程度患者血清TNF-α、LXA4、YKL-40水平;采用Pearson相关性分析方法分析血清TNF-α、LXA4、YKL-40水平与r-AFS分期和痛经程度的相关性。结果:研究组患者TNF-α、YKL-40水平均显著高于对照组,而LXA4水平显著低于对照组(P<0.05)。随着r-AFS分期的升高,EMs患者血清TNF-α、YKL-40水平逐渐升高,LXA4水平逐渐降低(P<0.05)。随着痛经程度的增加,EMs患者血清TNF-α、YKL-40水平逐渐升高,LXA4水平逐渐降低(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,EMs患者TNF-α、YKL-40水平与r-AFS分期和痛经程度呈正相关,LXA4与r-AFS分期和痛经程度呈负相关(P<0.05)。结论:EMs患者中血清TNF-α、YKL-40水平呈高表达,LXA4呈低表达。上述指标与EMs患者r-AFS分期和痛经程度关系密切,可考虑将其作为临床诊断EMs的生物学指标。

醒脑益智组分中药对β-淀粉样蛋白_(1-40)诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的:探讨醒脑益智组分中药对β-淀粉样蛋白(Aβ_(1-40))诱导SH-SY5Y细胞损伤的影响。方法:以SH-SY5Y细胞体外培养为研究对象,Aβ_(1-40)损伤细胞建立模型,石杉碱甲(6μg·mL^(-1))和不同浓度(70,35,17.5μg·mL^(-1))药物干预,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率;细胞膜损伤测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;酶联免疫吸附法检测脑源性神经营养因子(BDNF)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量;Hochest 33258染色观察药物对损伤细胞的作用;AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:醒脑益智组分中药能明显改善Aβ_(1-40)(15μmol·L^(-1))诱导的神经细胞存活率,降低LDH漏出率,改善细胞内BDNF含量,降低TNF-α水平,并抑制细胞的凋亡。结论:醒脑益智组分中药可以改善Aβ_(1-40)诱导的SH-SY5Y细胞损伤,并抑制其凋亡,其机制可能与改善BDNF水平,调节免疫及相关凋亡基因的表达有关。

肠炎康颗粒对溃疡性结肠炎患者血清TNF-α,25-(OH)D,YKL-40水平的影响

目的:探讨肠炎康颗粒治疗溃疡性结肠炎的疗效及其对患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、25-羟维生素D(25-(OH)D)、甲壳质酶蛋白40(YKL-40)水平的影响。方法:将98例溃疡结肠炎患者参照随机数表法分作对照组(n=49)与研究组(n=49),对照组予以常规治疗,研究组基于对照组加用肠炎康颗粒治疗,比较两组的临床疗效,治疗前后血清TNF-α、25-(OH)D、YKL-40,丙二醇(MDA)、超氧化物歧化醇(SOD),血小板计数(PLT)、D-二聚体(D-D),CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+的变化情况以及不良反应的发生情况。结果:治疗后,研究组总有效率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),,研究组血清TNF-α、YKL-40、MDA、PLT、D-D、CD^+水平均低于对照组(P<0.05),血清25-(OH)D、SOD、CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平均高于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:肠炎康颗粒治疗溃疡性结肠炎的疗效可靠,可调节血清TNF-α、25-(OH)D、YKL-40分泌,缓解氧化应激损伤,改善血液高凝、免疫功能紊乱状态。

硒、锌对老年性痴呆模型小鼠APP酶解通路的保护作用及机制研究

目的研究硒、锌对老年性痴呆(Alzheimer’s,AD)模型小鼠酶解通路的保护作用及机制。方法选用健康雄性2月龄昆明种小鼠60只,随机分为正常对照组(NC)、AD模型组、硒[Se,7.5μg/(kg bw)]+AD组、锌[Zn,5 mg/(kg bw)]+AD组、硒[Se,7.5μg/(kg bw)]+锌[Zn,5 mg/(kg bw)]+AD组、脑复康[Piracetam,230 mg/(kg bw)]+AD共6组,每组10只。连续60d腹腔注射D-半乳糖[150 mg/(kg bw)],建立老年性痴呆模型,采用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中α、β、γ-分泌酶含量以及脑组织中Aβ1-40含量;Western-blot法检测脑组织中糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和磷酸化Tau(Ph-tau)蛋白水平。结果 ELISA法显示,与AD组比较,硒、锌可以增强α-分泌酶活性,抑制β、γ-分泌酶的活性,且硒锌联合作用增强,脑组织中Aβ_(1-40)含量明显降低。Western-blot法检测显示,与NC组比较,AD模型组GSK-3β、Ph-tau蛋白表达水平升高,而硒、锌处理组和硒锌联合作用组,GSK-3β、Ph-tau蛋白表达水平明显降低。结论硒、锌通过增加内源性α-分泌酶的活性,抑制β、γ-分泌酶的活性,减少Aβ_(1-40)的生成,降低GSK-3β、Ph-tau蛋白表达水平,可能对AD的发病及进展有一定预防保护作用。