血清lncRNAs ABHD11-AS1、miR-1231表达与胃癌根治术后复发转移及远期预后的相关性

目的探究血清长链非编码RNAα/β水解酶域11反义RNA1(lncRNAs ABHD11-AS1)、微小RNA-1231(miR-1231)表达与胃癌根治术后复发转移及远期预后的相关性。方法选取2018年7月至2020年7月进行胃癌根治术治疗的147例患者(胃癌组),根据复发转移情况,将患者分为复发转移组48例和未复发转移组99例,根据3年预后情况,分为生存组40例和死亡组107例,选取同期体检的健康人员132例作为对照组,采用实时荧光定量PCR法测定血清lncRNAs ABHD11-AS1、miR-1231表达水平,采用Pearson法分析血清lncRNAs ABHD11-AS1、miR-1231的相关性,采用Logistic回归分析影响胃癌根治术后复发转移的因素。结果与对照组比较,胃癌组lncRNAs ABHD11-AS1表达水平显著升高(P<0.05),miR-1231表达水平显著降低(P<0.05)。血清lncRNAs ABHD11-AS1和miR-1231表达呈负相关(r=-0.691,P<0.05)。复发转移组肿瘤直径>5 cm、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、分化程度低分化、浸润深度T3+T4、有淋巴结转移的患者比例及lncRNAs ABHD11-AS1表达水平显著高于未复发转移组(P<0.05),miR-1231表达水平显著低于未复发转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤直径、浸润深度、lncRNAs ABHD11-AS1是胃癌根治术后复发转移的独立危险因素,miR-1231是保护因素(P<0.05)。死亡组lncRNAs ABHD11-AS1表达水平显著高于生存组(P<0.05),miR-1231水平显著低于生存组(P<0.05)。结论胃癌患者血清中lncRNAs ABHD11-AS1表达水平升高,miR-1231表达水平降低,与胃癌根治术后复发转移及远期预后密切相关,可能作为胃癌根治术后复发转移及远期预后的标志物。

LncRNA ABHD11-AS1在Erastin诱导的胰腺癌细胞铁死亡中的作用及其机制

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)α/β-水解酶结构域蛋白11的反义链1(α/β-hydrolase domain containing protein 11-antisense strand 1,ABHD11-AS1)在Erastin诱导的胰腺癌细胞铁死亡中的作用及其潜在机制。方法:通过GEPIA平台分析ABHD11-AS1在胰腺癌中的表达和患者预后。采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测人胰腺癌PANC1、MIApaca-2和PaTu8988细胞中ABHD11-AS1表达,CCK8法计算Erastin半数抑制浓度(IC_(50))。在PANC1细胞中过表达ABHD11-AS1,分别转染pcDNA3.1、pcDNA3.1-ABHD11-AS1质粒;在PaTu8988细胞中干扰ABHD11-AS1表达,分别转染siControl、siRNA1、siRNA2,qRT-PCR检测转染效率,分别予以对照(0μmol/L Erastin)、Erastin(IC_(50)浓度)处理,CCK8法检测细胞活性,ELISA法检测丙二醛和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;另在pcDNA3.1-ABHD11-AS1和siRNA1组加入Erastin的同时加入铁死亡挽救剂Ferrostatin-1,坏死挽救剂Necrostatin-1或凋亡挽救剂Z-VAD-FMK,CCK8法检测细胞活性;免疫印迹法检测5组胰腺癌细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)以及磷酸化mTOR(p-mTOR)表达水平。结果:胰腺癌组织中ABHD11-AS1表达水平明显高于癌旁组织,高表达ABHD11-AS1组患者预后较差(P<0.05)。ABHD11-AS1相对表达量由低到高依次是人胰腺癌PANC1、MIApaca-2和PaTu8988细胞,Erasin IC_(50)趋势与ABHD11-AS1表达量相同,依次是2.245、11.760、17.120μmol/L。与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-ABHD11-AS1组细胞活性及GSH含量明显增高,而丙二醛含量明显降低(P<0.05);与siControl组相比,siRNA1组和siRNA2组细胞活性及GSH含量明显降低,丙二醛含量明显增高(P均<0.05)。仅Ferrostatin-1可以挽救pcDNA3.1-ABHD11-AS1和siRNA1组细胞活性(P<0.05)。过表达ABHD11-AS1可促进mTOR活化,增强GPX4表达(P<0.05);而干扰ABHD11-AS1则相反。结论:LncRNA ABHD11-AS1可通过活化mTOR促进GPX4表达,从而促进胰腺癌细胞铁死亡抵抗。

非小细胞肺癌中反义长链非编码RNA RAB11B⁃AS1的表达及临床意义

目的探究非小细胞肺癌(NSCLC)病人癌组织中反义长链非编码RNA RAB11B⁃AS1(lncRNA RAB11B⁃AS1)的表达水平及其临床意义。方法选取2014年9月至2017年3月在湖南省直中医医院进行手术切除的97例NSCLC病人作为研究对象,将术中所得癌组织作为试验组,并取癌旁(距肿瘤边缘>2 cm)组织作为对照组。采用实时荧光定量逆转录PCR(RT⁃qP⁃CR)检测lncRNARAB11B⁃AS1表达情况;分析lncRNARAB11B⁃AS1与NSCLC病理参数的关系;Cox回归分析影响NSCLC的预后因素;分析lncRNARAB11B⁃AS1表达情况对NSCLC病人生存情况的影响。结果试验组lncRNA RAB11B⁃AS1表达(2.61±0.74)明显高于对照组(1.35±0.41)(P<0.001);NSCLC病人癌组织中lncRNA RAB11B⁃AS1表达水平与病理类型、分化程度、淋巴结转移、远处转移和疾病分期有关(P<0.05);Cox回归分析显示,lncRNA RAB11B⁃AS1表达、远处转移和疾病分期均是影响NSCLC预后的独立危险因素(HR=2.69、2.70、2.93,95%CI:1.83~3.96、1.58~4.62、1.67~5.13,均P<0.05);lncRNA RAB11B⁃AS1高表达病人术后24个月的总生存率(28.30%)明显低于低表达病人(59.09%)(P<0.05)。结论lncRNA RAB11B⁃AS1在NSCLC病人癌组织中表达上调,其表达水平与病人临床病理特征有关,且与病人的预后状况密切相关,可为NSCLC的治疗提供参考。

长链非编码RNA ABHD11-AS1对结直肠癌细胞生长和转移的影响及调控机制

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)α/β水解酶域11反义RNA1(ABHD11-AS1)对结直肠癌细胞生长和转移的影响,并基于miR-133a/真核起始因子4A1(EIF4A1)轴分析其可能的调控机制。方法 (1)取人结直肠癌细胞HT-29、SW480、DLD-1、HCT116、LOVO、SW620,以及正常结直肠黏膜细胞FHC,检测细胞中lncRNA ABHD11-AS1的表达情况。(2)分别通过miRcode、TargetScan数据库预测ABHD11-AS1与miR-133a、miR-133a与EIF4A1的靶向关系,并进行双荧光素酶报告基因实验以验证。(3)将HT-29细胞分为NC组(转染Negative Control)、siABHD11-AS1组(转染lncRNA ABHD11-AS1 siRNA)、miR-133a inhibitor组(转染miR-133a inhibitor)、siABHD11-AS1+miR-133a inhibitor组(转染lncRNA ABHD11-AS1 siRNA和miR-133a inhibitor)和siABHD11-AS1+miR-133a inhibitor+siEIF4a1组(转染lncRNA ABHD11-AS1 siRNA、miR-133a inhibitor、EIF4A1 siRNA)。检测转染后除miR-133a inhibitor组以外的其他组细胞增殖、迁移和侵袭能力,NC组、siABHD11-AS1组、miR-133a inhibitor组、siABHD11-AS1+miR-133a inhibitor组细胞的EIF4A1蛋白表达量。结果 (1)ABHD11-AS1均高表达于各种结直肠癌细胞,在HT-29细胞中的表达最高。(2)miR-133a为ABHD11-AS1靶基因,EIF4A1为miR-133a靶基因。(3)siABHD11-AS1组HT-29细胞的增殖、迁移和侵袭能力均低于NC组(均P<0.05),siABHD11-AS1+miR-133a inhibitor组HT-29细胞的增殖、迁移和侵袭能力均高于siABHD11-AS1组(均P<0.05),siABHD11-AS1+miR-133a inhibitor+siEIF4A1组HT-29细胞的增殖、迁移和侵袭能力均低于siABHD11-AS1+miR-133a inhibitor组(均P<0.05)。(4)miR-133a inhibitor组HT-29细胞中EIF4A1蛋白表达量高于NC组(P<0.05);siABHD11-AS1组HT-29细胞中EIF4A1蛋白表达量低于NC组,而siABHD11-AS1+miR-133a inhibitor组HT-29细胞中EIF4A1蛋白表达量高于siABHD11-AS1组(均P<0.05)。结论 ABHD11-AS1在结直肠癌细胞中呈高表达,抑制其表达后结直肠癌细胞的生长和转移能力均下降,其可能通过调控miR-133a/EIF4A1信号轴发挥作用。

LncRNA DDX11-AS1靶向miR-627-3p调控氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞增殖和凋亡的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)DDX11反义RNA1(DDX11-AS1)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理后血管内皮细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用50μg/mL的ox-LDL刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)构建动脉粥样硬化细胞模型。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测DDX11-AS1和miR-627-3p表达水平,蛋白质印记(Western blot)检测核转录因子p65亚基(p65)和核因子кB抑制蛋白α(IкBα)的磷酸化水平。将DDX11-AS1过表达质粒、miR-627-3p抑制物分别转染HUVEC,检测上调DDX11-AS1或下调miR-627-3p对ox-LDL处理的HUVEC增殖和凋亡的影响。通过荧光素酶报告基因法和RT-qPCR测定DDX11-AS1和miR-627-3p之间的相互作用。结果ox-LDL处理后HUVEC中miR-627-3p表达、凋亡率及p65和IкBα磷酸化水平升高,DDX11-AS1表达、细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。上调DDX11-AS1表达后,ox-LDL处理后HUVEC存活率升高,凋亡率及p65和IкBα磷酸化水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。下调miR-627-3p表达后,ox-LDL处理后HUVEC存活率升高,凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-627-3p是DDX11-AS1的靶基因,DDX11-AS1负调控miR-627-3p表达。上调miR-627-3p表达可逆转DDX11-AS1上调对ox-LDL处理的HUVEC存活、凋亡以及p65和IкBα磷酸化的影响(P<0.05)。结论LncRNA DDX11-AS1通过靶向miR-627-3p抑制ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡,促进细胞增殖,进而减轻ox-LDL诱导细胞损伤。

LncRNAMNX1-AS1调节miR-744-5p/SH3BGRL3对喉癌细胞生长、迁移的影响

目的分析长链非编码RNA MNX1反义RNA 1(MNX1-AS1)调节miR-744-5p/SH3域结合谷氨酸丰富蛋白样蛋白3(SH3BGRL3)对喉癌细胞生长、迁移的影响。方法构建敲低MNX1-AS1稳定转染Hep-2细胞(sh NC组和sh MNX1-AS1组),构建miR-744-5p瞬时转染细胞系(NC mimics组、miR-744-5p mimics组、NC inhibitor组、miR-744-5p inhibitor组、sh SH3BGRL3组、miR-744-5p inhibitor+sh SH3BGRL3组)。实时荧光定量检测MNX1-AS1、miR-744-5-p和SH3BGRL3表达,CCK8检测细胞生长,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力,蛋白免疫印迹实验检测细胞SH3BGRL3蛋白表达,荧光素酶报告基因测定MNX1-AS1和miR-774-5p的靶标关系。结果与sh NC组相比,MNX1-AS1组MNX1-AS1 mRNA水平降低(<0.05);与NC mimics组相比,miR-744-5p mimics组miR-744-5p mRNA水平升高(<0.05);与NC inhibitor组相比,miR-744-5p inhibitor组miR-744-5p mRNA水平降低(<0.05);与sh NC组相比,sh SH3BGRL3组SH3BGRL3 mRNA水平降低(<0.05)。敲低MNX1-AS1表达抑制细胞增殖和迁移能力,过表达mi R-744-5p抑制细胞增殖和迁移能力。与NC mimic和MNX1-AS1 WT共转染组相比,miR-744-5p mimic和MNX1-AS1 WT共转染组细胞的荧光素酶活性明显降低(<0.05)。与NC mimics组相比,miR-744-5p mimics组中SH3BGRL3蛋白表达降低(<0.05)。与NC inhibitor组相比,miR-744-5p inhibitor组细胞吸光值、迁移细胞数量均高于miR-744-5p inhibitor组(均<0.05);miR-744-5p inhibitor+sh SH3BGRL3组吸光值、迁移细胞数量低于miR-744-5p inhibitor组,但高于NC inhibitor组(均<0.05)。结论MNX1-AS1可能通过miR-744-5p/SH3BGRL3轴促进喉癌发展进程,其可能为临床诊断和治疗喉癌提供潜在靶点。

蒲公英萜醇调控ABHD11-AS1介导上皮间质转化对膀胱癌细胞侵袭转移的作用

[目的]探究蒲公英萜醇通过调控α/β水解酶域11反义RNA1(ABHD11-AS1)对膀胱癌细胞侵袭转移的作用,并分析相关机制。[方法]将对数生长期的人膀胱癌细胞系EJ细胞分为空白对照组(细胞不做特殊处理)、蒲公英萜醇组(给予蒲公英萜醇100μmol/L处理24 h)、蒲公英萜醇-pcDNA组(转染pcDNA 24 h给予细胞蒲公英萜醇100μmol/L处理24 h)、蒲公英萜醇-pcDNA-ABHD11-AS1组(转染pcDNA-ABHD11-AS124 h后细胞给予蒲公英萜醇100μmol/L药物处理24 h)。实时荧光定量PCR法检测细胞ABHD11-AS1水平;细胞增殖-毒性8检测试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;划痕实验、Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力;蛋白免疫印迹法检测上皮间质转化标志蛋白E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达变化。[结果]与空白对照组比较,蒲公英萜醇组EJ细胞ABHD11-AS1水平、侵袭细胞数、细胞迁移率、N-Cadherin、Vimentin蛋白水平均降低(P<0.05),EJ细胞增殖抑制率、E-cadherin蛋白水平升高(P<0.05)。与蒲公英萜醇组、蒲公英萜醇-pcDNA组比较,蒲公英萜醇-pcDNA-ABHD11-AS1组EJ细胞ABHD11-AS1水平、侵袭细胞数、细胞迁移率、N-Cadherin、Vimentin蛋白水平均升高(P<0.05),EJ细胞增殖抑制率、E-cadherin蛋白水平降低(P<0.05)。[结论]蒲公英萜醇能够抑制膀胱癌细胞侵袭及迁移,可能是通过抑制ABHD11-AS1介导的上皮间质转化发生实现的。