上皮细胞钠离子通道ENaC及其基因研究现状

人类上皮细胞钠离子通道（hENaC）由α、β、γ3个亚单位组成，分别由CNN1A、SCNN1B、SCNN1G基因所编码。ENaC负责钠离子的限速重吸收，对于维持钠的自身平衡、细胞外液量和血压起重要作用。功能获得性ENaC基因突变可引起一种罕见的遗传性高血压——Liddle综合征；而功能丧失性ENaC基因突变可引起一种遗传性低血压——假性低醛固酮血症；原发性高血压是受遗传因素和环境因素共同影响的复杂性疾病，由于ENaC的维持钠的自身平衡和血压的重要作用，因此ENaC基因作为原发性高血压的候选基因而备受关注。

上皮细胞钠通道α亚单位基因4种单核苷酸多态性与新疆哈萨克族人原发性高血压的相关性

目的研究上皮细胞钠通道(ENaC)基因启动子区G2139A、G3091A、第13外显子区T663A及第2内含子区T3593C位点的单核苷酸多态性(SNPs)及其构成的单体型与新疆哈萨克族人原发性高血压(EH)的相关性。方法采用病例-对照研究的方法,选择牧区哈萨克族EH患者(EH组)252例和血压正常者(NT组)254例,采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性的方法,鉴定不同个体上述4个位点的基因型及等位基因的类型,分析4种SNPs基因型及等位基因在该民族人群的分布特征及其在EH与NT组分布频率的差异,分析4个位点连锁不平衡关系,观察4种SNPs组成的单体型与新疆哈萨克族人EH的相关性。结果新疆哈萨克族αENaC基因存在上述4个位点的SNPs,在总体人群中,G2139A位点AA、AG、GG基因型的频率分别为26.2%、52.3%和21.5%,A、G两种等位基因的分布频率分别为52.37%和47.63%;G3091A位点AA、AG、GG基因型的频率分别为19.0%、52.5%和28.5%,A、G两种等位基因的分布频率分别为45.56%和59.44%;T663A位点AA、AG、GG基因型的频率分别为15.6%、49.9%和34.5%,A、G两种等位基因的分布频率分别为40.53%和59.47%;T3593C位点TT、TC、CC基因型的频率分别为88.5%、10.5%和1.0%,T、C两种等位基因的分布频率分别为93.77%和6.23%。4个位点基因型的分布均符合Hardy-weinberg平衡(P>0.05)。4种SNPs基因型及等位基因的分布频率在EH和NT组差异均无显著性(P>0.05)。4个位点间不存在连锁不平衡关系。单体型分析显示由2139G、3091A、663G和3593T等位基因构成的单体型在EH组显著高于NT组(P<0.01),由2139A、3091A、663A和3593C等位基因构成的单体型在NT组显著高于ET组(P<0.05)。结论虽然αENaC基因G2139A、G3091A、T663A及T3593C SNPs作为单个位点可能不足以引起个体EH的发生或者仅对EH的发生产生极其微效的作用,但其所构成的单体型可能对新疆哈萨克族人EH的发病发挥重要作用,其中2139G、3091A、663G和3593T等位基因构成的单体型可能与该民族EH的发生相关,而2139A、3091A、663A和3593C等位基因构成的单体型可能是该民族EH发生的保护因子,可降低该民族EH的患病风险,ENaC基因是新疆哈萨克族高血压发生的重要易感基因。

β2肾上腺素受体基因、α上皮细胞钠通道基因和G蛋白β3亚基基因联合变异与维吾尔族人群高血压的关系

目的:探索β2肾上腺素受体(ADRB2)基因G1023A,α上皮细胞钠通道(ENaC)基因G2139A和G蛋白β3亚基(GNB3)基因C825T多态性与新疆维吾尔族人群原发性高血压的关系。方法:采用人群为基础的病例对照研究,高血压组269例,正常血压组229例。用聚合酶链反应一限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)的方法检测ADRB2基因G1023A基因型、ENaC基因G2139A基因型和GNB3基因C825T基因型,分析其与与维尔族人群高血压的关系。结果:高血压组和正常血压组的ADRB2基因型分布分别为GG:0.202、0.147;AG:0.266、0.339;AA:0.532、0.513,差异无统计学意义(P=0.119)。高血压组和血压正常组的ENaC基因型分布分别为GG:0.249、0.266;AG:0.472、0.476;AA:0.281、0.260,差异无统计学意义(P=0.840);高血压组和血压正常组的GNB3基因型分布分别为CC:0.346、0.293;CT:0.394、0.437;TT:0.260、0.271,差异无统计学意义(P=0.418)。用Logistic回归模型校正年龄、性别、吸烟、体重指数、腰围、臀围、血糖、甘油三酯、总胆固醇及胆红素之后,亦未发现三个位点与原发性高血压有关。进一步分析未发现三个位点对维吾尔族高血压的发病有交互作用(P=0.080)。结论:在新疆维吾尔人群中,未发现ADRB2基因G1023A、ENaC基因和GNB3基因多态性单独或联合作用在高血压发病中起作用。

上皮细胞钠离子通道β亚单位基因SCNN1B多态性与原发性高血压的关系研究

目的研究上皮细胞钠离子通道β亚单位基因SCNN1B羧基端单核苷酸多态性与北京市汉族高血压家系原发性高血压的关系。方法在北京市汉族常住人群中纳入原发性高血压家系108个（433人）,分成高血压患者组（229人）、高血压患者第一代和第二代亲属（血压正常）组（118人）和高血压患者配偶（血压正常）组（86人）。检测生化指标及心电图Sv1＋Rv5数值,并分析SCNN1B基因13号外显子及两翼部分单核苷酸多态性。结果在SCNN1B基因13号外显子的两翼部分符合最小等位基因频率≥5%的位点只有两个即rs3743966（A/T）、rs34618783（A/G）。3组间比较,高血压组的AA/rs3743966基因型频率明显高于其他两组（55.5%比44.9%和32.6%,χ^2=13.768,P〈0.01）,TT基因型频率明显低于其他两组（9.6%比15.3%和38.3%,χ^2=37.205,P〈0.01）。rs34618783位点基因型频率在3组间比较,差异无统计学意义。TT/rs3743966纯合子组的收缩压和舒张压水平比AA纯合子组平均低15.69 mmHg和9.14 mmHg,差异有统计学意义（均为P〈0.01）,其他生化指标在3组间比较差异均无统计学意义（均为P〉0.05）。多因素Logistic回归分析显示,TT/rs3743966基因型进入方程（OR：0.239,95%CI：0.117～0.489,P〈0.001）。结论 SCNN1B基因rs3743966位点TT基因型可能是北京市汉族高血压家系原发性高血压的保护性因素之一。

Ⅱ型肺泡上皮细胞来源外泌体miR-21-5p调控上皮钠离子通道减轻高氧性急性肺损伤

目的探讨Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells,AEC-Ⅱ)来源外泌体(exosomes,Exos)-miR-21-5p(miR-21)调控上皮钠离子通道(epithelial sodium channel,ENaC)对高氧性急性肺损伤(hyperoxia-induced acute lung injury,HALI)的保护效应及可能机制。方法6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠60只,其中20只使用差速贴壁离心法提取原代AEC-Ⅱ并培养,采用密度梯度离心法提取AEC-Ⅱ来源外泌体,透射电镜鉴定外泌体形态。余40只小鼠按随机数字表法分为(n=10):常氧(Control)组、高氧(HALI)组、高氧+Exos-miR-21(HALI+miR-21)组和高氧+siPI3K+Exos-miR-21(HALI+siPI3K+miR-21)组。除Control组外,余3组小鼠暴露于95%O 2的自制高氧饲养箱中构建HALI模型。72 h后RT-qPCR检测肺组织及外泌体miR-21表达;HE染色观察肺组织形态学变化并行肺损伤病理评分,计算肺组织湿/干质量比及肺泡液体清除率(alveolar fluid clearance,AFC);可见分光光度法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)及总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)水平;荧光分光光度法测定活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平;Western blot检测PTEN、AKT、p-AKT、PI3K及α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与PTEN靶向关系。结果原代AEC-Ⅱ提取的囊泡状物质经鉴定为外泌体,外泌体中miR-21表达显著增高(P<0.05),PTEN为miR-21靶基因。与Control组比较,HALI组HE染色可见肺组织肺间隔增厚、大量炎症细胞浸润及肺泡萎陷,HALI组、HALI+miR-21组及HALI+siPI3K+miR-21组肺损伤病理评分、肺湿/干质量比、MDA及PTEN蛋白表达升高(P<0.05);SOD、T-AOC、AFC、miR-21及p-Akt、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC蛋白表达水平降低(P<0.05),以HALI+siPI3K+miR-21组最明显。与HALI组比较,HALI+miR-21组HE染色可见肺间隔增厚、炎症细胞浸润明显减少,肺泡萎陷显著减轻;肺损伤病理评分、肺湿/干质量比、MDA及PTEN蛋白表达显著降低(P<0.05);而SOD、T-AOC、AFC、miR-21及p-Akt、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论Ⅱ型肺泡上皮细胞来源外泌体miR-21-5p通过靶向PTEN激活PI3K/AKT信号通路调控上皮钠离子通道减轻高氧性急性肺损伤。

上皮细胞钠通道基因多态性与血压关系研究现状

上皮细胞钠通道(ENaC)在维持远端肾单位对Na+的限速重吸收、体液平衡和血压的长期调节中有关键作用。ENaC3个亚单位基因共存在着数百个单核苷酸多态性(SNP),其中许多SNP与血压变化关系密切。Liddle综合征和假性Ⅰ型低醛固酮血症是显示ENaC基因功能改变能直接影响血压的有力证据。越来越多的研究显示,ENaC基因作为盐敏感基因,也是原发性高血压的重要候选基因之一。

上皮细胞钠通道γ亚单位基因和神经前体细胞表达发育调控样基因多态性性与维吾尔族高血压病的相关分析

目的探讨上皮细胞钠通道γ亚单位基因启动子区rs5718多态性及神经前体细胞表达发育调控样基因第一外显子rs4149601多态性同维吾尔族高血压病的关系。方法应用病例对照方法研究新疆吐鲁番地区农村高血压病个体344例及对照组322例。检测所有个体体质指数、空腹血糖、胆固醇、甘油三酯。用Taqman技术进行rs5718及rs4149601多态基因分型。结果rs5718多态及rs4149601多态均符合Hardy-Weinberg平衡。rs5718多态GA基因型、AA基因型和A等位基因的频率在高血压组及对照组中分别为34.6%、5.6%、22.9%及36.6%、4.0%、22.4%;rs4149601多态GA基因型、AA基因型和A等位基因的频率在高血压组及对照组分别为28.9%、1.9%、16.4及30.0%、3.3%、18.3%。rs5718与rs4149601多态基因型及等位基因分布在高血压组与对照组中差异均无显著性;对性别、年龄进行校正后也发现两个位点使高血压病患病风险显著改变。进一步协方差分析发现rs5718与rs4149601多态不同基因型间收缩压、舒张压、体重指数、腰臀比、血糖、甘油三酯、胆固醇水平差异无显著性。结论上皮细胞钠通道γ亚单位基因及神经前体细胞表达发育调控样基因两个重要的多态性(rs5718及rs4149601)同维吾尔族人群高血压病发病无关。

MicroRNA-7-5p通过mTORC2/SGK-1信号通路负向调控人肺泡上皮细胞钠离子通道

目的:探讨microRNA-7-5p通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2(mTORC2)/血清糖皮质激素诱导激酶-1(SGK-1)信号通路负向调控人肺泡上皮细胞钠离子通道(ENaC)的机制。方法:对人类非小细胞肺癌肺泡上皮细胞系A549细胞转染microRNA-7-5p模拟剂,设为microRNA-7-5p组,阴性对照组A549细胞转染与目的基因序列无同源性的不表达microRNA-7-5p的阴性对照剂。雷帕霉素组在A549细胞培养基中加入雷帕霉素。PP242组在A549细胞培养基中加入PP242。空白对照组仅加入lipo fectamineTM 2000试剂。采用RT-qPCR检测各组SGK-1 mRNA;免疫印迹法检测SGK-1蛋白、ENaC蛋白的表达量。比较各组的microRNA-7-5p表达水平、SGK-1 mRNA及蛋白表达量、ENaC蛋白表达量。结果:microRNA-7-5p组的microRNA-7-5p表达水平高于空白对照组、阴性对照组、雷帕霉素组和PP242组,A549细胞转染成功上调microRNA-7-5p表达水平(P<0.05)。microRNA-7-5p组中,SGK-1 mRNA水平、SGK-1及ENaC-α、ENaC-β、ENaC-γ蛋白表达量均低于空白对照组、阴性对照组、雷帕霉素组(P<0.05)。结论:microRNA-7-5p可能通过mTORC2/SGK-1信号通路负向调控ENaC。

钠离子对成骨细胞的影响及其与上皮钠通道的关系

探讨不同浓度钠离子（Na ＋ ）对大鼠成骨细胞（Ob）成骨功能的影响，及其与上皮钠通道（ENaC）的相关性。方法 Ob经1×10 -4 ~1 mol/L Na ＋ 处理后，检测Ob的增殖和分化情况。再从中选3个浓度Na ＋ 处理Ob，RT-PCR测定成骨功能相关基因（Cbfa1，OPN，OC）及ENaC-α的表达变化。结果 在1×10 -4 ~1 mol/L范围内，Na ＋ 对Ob具有双向影响作用，与对照组相比低浓度Na ＋ 明显促进Ob分化，升高Na＋浓度则抑制Ob分化，而Na＋对Ob的增殖无影响。RT-PCR示：Na ＋ 对Ob中 Cbfa1、OPN 及 OC 表达同样具有双向作用，低浓度促进表达，高浓度抑制；并且 ENaC-α mRNA 在 Na ＋ 调控下的变化情况与成骨功能相关基因及Ob分化活性的变化相一致。 结论 Na ＋ 可直接影响Ob的分化及成骨功能相关基因的表达，而且 Na ＋ 对Ob的影响作用与ENaC相关。

上皮钠离子通道对大鼠破骨细胞分化和骨吸收功能的影响

目的本文探讨上皮钠离子通道(ENa C)对破骨细胞功能和活性的影响。方法采用大鼠巨噬细胞集落刺激因子和核转录因子-κB受体活化因子配体诱导大鼠骨髓单核细胞使其分化为破骨细胞。以1.5×104密度接种到12孔板,查随机表分3孔为1组,分为4组:Control组和不同浓度阿米洛利(Ami,ENa C的抑制剂)组。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色进行阳性破骨细胞鉴定;将破骨细胞和骨片共同培养,测定骨吸收陷窝的数目;用RT-PCR技术分析破骨细胞标志酶基因组织蛋白酶K(CK)的表达。结果不同浓度的Ami处理破骨细胞后,TRAP染色阳性破骨细胞减少,抑制破骨细胞的形成和骨吸收,而且降低破骨细胞特异性基因CK的表达。结论本次实验在细胞水平证明ENa C在破骨细胞上的表达并且调控破骨细胞的分化和骨吸收,说明ENa C可能参与破骨细胞的功能调节,提示破骨细胞可能存在一个与ENa C相关调节的新途径,为骨代谢的研究提供了一个新思路。

地塞米松对海水浸泡人肺泡上皮细胞钠通道的影响

目的探讨地塞米松对海水浸泡的人肺泡上皮细胞(A549)钠通道的影响。方法将常规培养的A549细胞分为海水处理组(SG)、阴性对照组(NG)和地塞米松处理组(DG)。SG组经灭菌配方海水常规孵育,DG组在经海水处理后,加入地塞米松(终浓度1μmol/L)处理,NG组常规培养至实验终点。配方海水渗透压1300mmol/L,pH8.2,相对密度1.05。采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡和坏死情况,Western blotting法检测钠钾泵α1亚单位(NKA-α1)、钠通道α亚单位(α-ENaC)的表达,水解比色法检测NKA活性。结果流式细胞术检测结果显示,海水孵育30min后A549细胞的存活率为90.60%±2.11%,地塞米松(1μmol/L孵育6h)处理对海水孵育后细胞的存活率无影响。NG组的NKA-α1和α-ENaC蛋白表达(0.113±0.041、0.396±0.124)显著高于SG组(0.038±0.009、0.093±0.038;P<0.01)或DG组(0.067±0.015、0.165±0.078;P<0.01),但DG组显著高于SG组(P<0.05)。与NG组[31.298±5.779μmol/(mg·h)]比较,SG组NKA酶活性[14.211±3.885μmol/(mg·h)]明显降低(P<0.05);DG组的NKA酶活性[18.641±1.921μmol/(mg·)]较SG组有升高(P<0.05)。结论在不影响人肺泡上皮细胞存活状况的情况下,地塞米松可以抑制海水孵育导致的α-ENaC、NKA-α1含量及NKA活性的下降。

表达心脏SCN5A基因的人胚肾细胞钠电流特性及其对钠通道阻滞剂的反应性

目的利用人胚肾293细胞表达心脏钠通道SCN5A基因并研究其钠电流特性和对钠通道阻滞剂的反应性。方法野生型SCN5A基因和SCN1B基因共表达于人胚肾293细胞,应用全细胞膜片钳技术记录给药(氟卡尼与利多卡因)前后的钠电流。结果 SCN5A基因转染效率约为60%;测试电压为-40mV时记录到钠电流峰值大小约为-8nA;100μmol/L的氟卡尼轻度抑制钠电流,使钠电流峰值减少(21.1±4.6)%[(-435.8±30.5)pA/pF vs.(-343.9±27.1)pA/pF,P<0.01];氟卡尼使钠通道激活曲线和失活曲线均呈负向移动,改变的幅值分别是-6.08mV[(-51.88±1.20)mVvs.(-57.96±0.79)mV,P<0.05]和-9.08mV[(-94.12±0.13)mVvs.(-103.20±0.11)mV,P<0.05];1Hz和10Hz频率刺激时,氟卡尼使钠电流分别减少(64.5±10.7)%和(83.5±12.2)%(P<0.01);30μmol/L利多卡因使钠通道失活后快恢复时间常数和慢恢复时间常数分别延长2倍和3倍。结论表达心脏钠通道SCN5A基因的人胚肾293细胞模型可用于基因特异性的钠通道阻滞剂安全性与药效学筛查。

稳定沉默水通道蛋白5基因对异位子宫内膜腺上皮细胞增殖及迁移的影响

目的：探讨水通道蛋白（AQP）5基因对异位子宫内膜腺上皮细胞增殖及迁移的影响。方法：构建可靶向沉默AQP5基因的质粒，在293 T细胞中包装形成病毒颗粒后，感染原代培养的异位子宫内膜腺上皮细胞，分别通过逆转录PCR及蛋白质印迹法鉴定异位子宫内膜腺上皮细胞中AQP5 mRNA和蛋白表达。 MTT法测定细胞增殖；Transwell技术检测细胞的体外迁移能力；蛋白质印迹法检测丝氨酸／苏氨酸蛋白酶（ AKT ）活化情况。构建裸鼠腹腔内子宫内膜异位症体内模型，考察阴性对照组和AQP5沉默组子宫内膜腺上皮细胞在裸鼠腹腔内瘤体生长情况及腹膜转移情况。结果：体外实验结果显示，AQP5沉默后异位子宫内膜腺上皮细胞的增殖能力在第7天时明显抑制（ P＜0．05）；AQP5沉默组异位子宫内膜腺上皮细胞磷酸化（ p－AKT）表达减少，而AKT表达无改变，p－AKT／AKT减少（ P＜0．05）；AQP5沉默组比阴性对照组迁移细胞数减少（ P＜0．05）。体内实验结果显示，与阴性对照组比较，AQP5沉默组瘤体结节数相对较少，体积较小，其中腹膜瘤体结节数少于阴性对照组（ P＜0．05）。结论：AQP5基因沉默可抑制异位子宫内膜腺上皮细胞的增殖及迁移能力，其机制可能与AKT活化有关。

上皮细胞钠通道α亚基在大鼠和人睾丸、精子中的表达及其与精子活力的关系

目的:研究上皮细胞钠离子通道α亚基(ENaC-α)在大鼠和人的睾丸、精子上的表达及其与人精子活力之间的关系。方法:用western-blot检测ENaC-α在大鼠和人睾丸、精子上的表达,同时免疫荧光检测其在大鼠睾丸的分布特点。用计算机辅助精液分析检测ENaC-α的特异阻断剂EI-PA[5-(N-ethyl-N-isopropyl)-amiloride hydrochloride]对精子活力的影响。结果:ENaC-α亚基表达于大鼠睾丸精母细胞、精子细胞,以及大鼠成熟精子的鞭毛中段;它也存在于人睾丸和成熟精子的鞭毛中段。体外精子活力实验表明,获能过程中ENaC的阻滞,可以促进人精子活力的增加,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:ENaC-α构成的离子通道在生精细胞中表达,最终局限分布于成熟精子的鞭毛中段的质膜中。而特异阻断剂EIPA可以抑制上皮细胞钠离子通道,从而提高精子活力。

钠通道重叠综合征相关基因SCN5A在H9C2细胞中的表达

目的构建表型重叠家系相关基因SCN5A del QKP1507-1509突变型真核表达载体,研究其在H9C2细胞中的表达。方法一步法定点诱变技术构建SCN5A基因del QKP1507-1509突变型真核表达载体,电穿孔方法将野生型和突变型质粒转染至H9C2细胞,应用实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)及Western blot技术检测其mRNA及蛋白表达情况。结果琼脂糖凝胶电泳法及DNA直接测序法均表明定点突变成功,RFQ-PCR及Western blot结果显示,野生组、突变组和混合组SCN5A基因mRNA相对表达量分别为1.089±0.459、1.011±0.840和1.069±0.492,3组SCN5A基因mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。野生组、突变组和混合组SCN5A蛋白在H9C2细胞的相对表达量分别为3.781±0.221、3.466±0.176和3.714±0.198,3组SCN5A蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建钠通道基因del QKP1507-1509突变型真核表达载体并转染至H9C2细胞,该突变未引起钠通道在细胞膜的异常表达,为进一步功能研究提供了研究基础及方向。

急性分离的肺泡Ⅱ型上皮细胞钠通道亚基mRNA表达

目的研究急性大鼠肺泡II型细胞钠通道各亚基的表达。方法20只健康SD大鼠,对其肺泡II型上皮细胞进行分离、纯化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术半定量检测ENaC三个亚单位α、β、γmRNA水平。结果急性分离纯化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞ENaC三个亚单位均有表达,其中α-亚基mRNA表达最强,显著高于β-和γ-亚基,β-和γ-亚基mRNA表达无显著性差别。结论大鼠肺泡II型细胞钠通道在DNA水平上表达以α-亚基为主,α-亚基在肺水清除中起主要作用。

上皮细胞钠通道α亚基Thr663Ala多态性与中国人群脑出血发病无关

目的了解上皮细胞钠通道α亚基(αENaC)Thr663Ala多态性与中国人群脑出血之间的关系。方法利用多聚酶链反应和分子杂交技术对该位点在中国人群脑出血患者(202例)中的分布进行了检测和分析,并与对照组人群(190例)进行比较。结果αENaCThr663Ala多态性在两组人群中的分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,ThrThr、ThrAla、AlaAla三种基因型在脑出血组分布频率分别为30·69%、44·55%和24·75%,对照组中分别为25·26%、43·68%和31·05%,两组人群663Ala等位基因频率分别为47·03%和52·89%,差异均无统计学意义。此外,中国人群663Ala等位基因频率与日本人相仿,显著高于美国白人和黑人。结论αENaCThr663Ala多态性不是中国人群脑出血的分子遗传学标记物,663Ala等位基因频率分布在亚洲人和美国人中存在种族差异。

成骨细胞上皮钠离子通道研究进展

骨质疏松是一种最为常见的代谢性骨病,其发病机制比较复杂,且与成骨细胞的功能息息相关。上皮钠离子通道(epithelial sodium channel,ENaC)蛋白是细胞膜上的一种糖基化大分子蛋白,现已发现其结构、功能异常与许多疾病的发生和发展有关。骨骼中的钠离子占体内总钠量的一半,钠离子的平衡受上皮钠离子通道(ENaC)调节。研究表明,成骨细胞上有ENaC的表达,其对成骨细胞的增殖、分化及功能均有影响,可能与骨质疏松发病机理有关。本文综述了近年来成骨细胞上皮钠离子通道的相关研究进展。

腺苷A2a受体对肺泡上皮细胞钠离子通道α亚基的上调作用

目的研究腺苷A2a受体对肺泡上皮A549细胞钠离子通道α亚基(epithelial sodium channelα-subunit,α-ENaC)表达变化的影响,探讨其在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征中的作用。方法不同剂量(0、0.1、1、10、100μmol/L)和不同时间(0、1、4、8、24、48h)的腺苷A2a受体激动剂CGS-21680干预A549细胞,分别用RT-PCR和Western blot检测α-ENaC mRNA和蛋白表达情况。结果①不同剂量CGS-21680作用A549细胞8h后,α-ENaC mRNA和蛋白表达水平从0.1μmol/L开始增加,并与CGS-21680剂量呈正相关(mRNA表达:r=0.959,P<0.01;蛋白表达:r=0.988,P<0.01),与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。②100μmol/LCGS-21680作用A549细胞1h后,α-ENaC mRNA和蛋白表达水平开始增加,4h后与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论激动腺苷A2a受体能上调α-ENaC的表达,有益于急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的预后。

黄芪注射液对人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549钠离子通道表达的影响及其机制

目的:探讨黄芪注射液(AI)对肺泡上皮细胞钠离子通道(ENaC)表达的影响及其作用机制。方法:选择典藏A549细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测AI对其增殖的影响,采用Western Blot筛查AI促进ENaC蛋白各亚基(α、β、γ)高水平表达的最佳浓度和最佳作用时间。继而将培养A549细胞分为自身空白对照组、AI组、抑制剂组和AI+抑制剂组,在对应培养细胞中加入不同抑制剂孵育2h,再加入AI孵育12h后,采用Western Blot检测抑制剂AG490、PDTC、SB203580和Wortmannin对AI处理的A549细胞中α、β、γENaC蛋白表达的影响,统计比较它们之间的差异。结果:AI对A549细胞的增殖无明显影响,但能上调α-ENaC、β-ENaC和γ-ENaC的表达,最佳浓度为8mg/ml,最佳作用时间为12h。PDTC可抑制AI上调的β-ENaC(t=3.01,P<0.05)和γ-ENaC(t=4.53,P<0.05)表达。其它抑制剂不能抑制AI上调的各亚基ENaC表达。结论:AI可通过NF-κB信号通路增加A549细胞的ENaC表达;对研究AI调节肺内水钠平衡,防治肺水肿等有积极作用。