威草胶囊对尿酸性肾病大鼠α平滑肌肌动蛋白和核因子kB蛋白表达的影响

目的:探讨威草胶囊对尿酸性肾病大鼠的作用机制。方法:用腺嘌呤加沙丁鱼造模,并将大鼠分为正常对照组、模型对照组、小剂量威草胶囊组、大剂量威草胶囊组、别嘌呤醇组,在造模的同时,分别给予上述药物灌胃。实验第4周,活杀所有大鼠,取肾组织,做肾脏病理组织检查,用点计数法计算肾小管的萎缩率、炎症细胞浸润面积、间质纤维化率;应用免疫组织化学技术检测大鼠肾组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和核因子kB(NF-kB)蛋白的表达情况。结果:与正常组相比,模型对照组和各给药组α-SMA、NF-kB阳性表达率增高(P<O.01);与模型对照组相比,给药组肾小管的萎缩率,炎症细胞浸润面积、间质纤维化率明显减轻(P<O.01);α-SMA、NF-kB阳性表达下降(P<O.01)。结论:威草胶囊防治尿酸性肾病可能与抑制肾小管和肾间质的上皮细胞表型转化及抵制NF-kB表达有关。

博莱霉素诱导α平滑肌肌动蛋白Cre重组酶转基因小鼠肺纤维化上皮细胞-间质转分化的研究

目的探讨在博莱霉素诱导的肺纤维化中是否发生了上皮细胞-间质转分化(EMT)现象,支气管上皮细胞是否参与了这一过程。方法采用α平滑肌肌动蛋白Cre重组酶转基因小鼠(α-SMA-Cre/R26R双转基因鼠)为实验动物,构建博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化模型,进行组织X-gal染色和α平滑肌肌动蛋白免疫荧光检测。结果气管内灌注博莱霉素的转基因小鼠支气管上皮下部分X-gal蓝染明显增多,终末小气道周围和肺血管壁蓝染细胞出现或增多,部分地区出现了支气管周围肺泡上皮细胞(ACE)阳性蓝染和浸润。结论在博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠模型中可以观察到EMT现象,气道上皮细胞和肺泡上皮细胞能向间充质细胞转化,参与肺纤维化病理过程。

吉非替尼对博莱霉素致肺纤维化小鼠α平滑肌肌动蛋白的抑制作用

目的观察吉非替尼对博莱霉素诱导肺纤维化小鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,探讨EGFR在肺纤维化上皮间质转分化中的作用。方法将30只SPF级雌性BALB/c小鼠分为三组:对照组(气管滴入生理盐水)、纤维化组(气管滴入博莱霉素3mg/kg)、纤维化吉非替尼干预组(气管滴入博莱霉素+吉非替尼灌胃20mg/Kg)。实验第14天杀鼠取肺,肺组织石蜡切片行HE染色与Masson染色;RT-PCR法检测α-SMA的mRNA表达水平;免疫组化检测总EGFR、磷酸化EGFR及α-SMA表达。结果纤维化吉非替尼干预组肺病理损伤较纤维化组减轻,气道上皮下胶原沉积减少,气道上皮及肺间质细胞磷酸化EGFR表达评分下降(P<0.05);同时,肺α-SMA的mRNA表达减少,免疫组化评分也明显降低(P<0.05)。结论吉非替尼抑制博莱霉素诱导小鼠肺纤维化可能与其抑制EGFR活性,下调α-SMA表达有关。

糖尿病大鼠肾脏α平滑肌肌动蛋白的表达

目的探讨肌成纤维细胞对糖尿病肾病发生发展的意义。方法链脲佐菌素诱导SD大鼠糖尿病模型,病程1、2、4、8周,利用组织学检查观察肾组织结构的改变,免疫组化法测定肾组织αSMA和型胶原(C-)的表达,同时用双抗体夹心法检测肾皮质αSMA含量。结果糖尿病大鼠肾皮质αSMA含量在各观察时点均高于正常对照组(P<0.05)。同时,8周内糖尿病大鼠肾组织C-的染色始终较正常对照组强(P<0.05),且与αSMA表达呈正相关。结论糖尿病早期大鼠肾脏αSMA表达增高,预示肌成纤维细胞的形成,它可能参与C-等细胞外基质的堆积。

红景天抑制阿霉素肾病大鼠肾小管间质α平滑肌肌动蛋白表达

目的探讨红景天对阿霉素肾病大鼠肾小管上皮细胞表型转化的作用。方法用阿霉素诱导制成大鼠肾病模型,红景天治疗组第4周起喂服诺迪康胶囊[即圣地红景天0.672g/(kg.d)],对照组及肾病组喂水[3mL/(kg.d)],于第4、8、12、16和20周末分批处死大鼠,观察肾组织病理变化,检测肌成纤维细胞(MFB)的标记蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肾小管间质中的表达。结果16周肾病组大鼠肾小管间质α-SMA半定量为6.24±0.57,明显高于红景天治疗组3.84±0.28(P<0.01),且与小管间质损害程度相关(r=0.872,P<0.01)。结论红景天能抑制肾小管间质细胞表型转化,对肾间质的纤维化有较好的防治作用。

哮喘小鼠气道重塑中α平滑肌肌动蛋白的表达

目的:用屋尘螨提取液(House DustMite Extract,HDM)构建哮喘小鼠气道重塑模型,检测肺组织中α平滑肌肌动蛋白(Smooth Muscle Actin-α,α-SMA)的表达。方法:BALB/c小鼠随机分为空白组、HDM低、高剂量三组,每组再分为3、6、9周3个亚组。用不同浓度的HDM皮下/腹腔致敏,滴鼻激发。用医学图像软件分析气道重塑的病理改变,分别用qRT-PCR和IH检测肺组织中α-SMAmRNA和蛋白的表达。结果:与空白组对比,HDM高、低剂量组肺组织病理炎症计分增加,气道内外径比值降低,α-SMA蛋白及其mRNA表达增加,随激发时间延长改变越来越显著;高剂量组较低剂量组更显著。结论:HDM诱导BALB/c小鼠支气管哮喘气道重塑中,α-SMA随气道重塑的加剧而表达增加。

HMGB1 RNA干扰对博莱霉素诱导肺纤维化小鼠α平滑肌肌动蛋白的抑制作用

目的观察RNA干扰降低高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在肺内的表达对博莱霉素致肺纤维化小鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,探讨HMGB1在肺纤维化上皮间质转分化中的作用。方法将40只4～6周龄C57BLB/c雄性小鼠随机分为PBS对照组(气管滴入PBS),纤维化组(气管滴入博莱霉素3 mg/kg),HMGB1 RNAi组(气管滴入博莱霉素3 mg/kg+气管滴入siRNA 20μl)和RNAi阴性对照组(气管滴入博莱霉素3 mg/kg+气管滴入siRNA阴性对照20μl)。实验第10天处死小鼠,肺组织切片行HE和Masson染色观察肺组织病理改变,RT-PCR法检测HMGB1和α-SMA的表达。免疫组化检测HMGB1和α-SMA蛋白表达。结果 RNAi组肺病理损伤较纤维化组减轻,气道上皮下胶原沉积减少,肺组织HMGB1 mRNA表达和蛋白表达均显著下降(P<0.01);同时,RNAi组肺α-SMA的mRNA表达和蛋白表达亦较纤维化组明显减少(P<0.01)。结论 HMGB1 RNAi抑制了HMGB1表达,减轻了博莱霉素诱导的肺纤维化改变,可能与其抑制α-SMA的活化和表达有关。

丹参注射液对高糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞的过氧化损伤及E钙黏素和α平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的研究丹参注射液对高糖作用下的大鼠腹膜间皮细胞过氧化损伤及E钙黏素和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法体外培养大鼠原代腹膜间皮细胞,第3代细胞经无血清培养基同步培养24 h后分为正常对照组、高糖诱导组(25 mg/mL葡萄糖)、甘露醇对照组(25 mg/mL甘露醇)和丹参干预组(15 mg/mL丹参注射液+25 mg/mL葡萄糖),测定各组细胞内丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用RT-PCR技术和Western blotting方法检测各组细胞内E钙黏素和α-SMA的mRNA和蛋白表达。结果与正常对照组比较,高糖诱导组细胞内ROS和MDA含量增高,而SOD活性降低,E钙黏素mRNA和蛋白的表达减少,α-SMA mRNA和蛋白的表达增加,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与高糖诱导组比较,丹参干预组细胞内ROS和MDA含量减少,SOD活性增强,E钙黏素mRNA和蛋白的表达增加,而α-SMA mRNA和蛋白的表达减少,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丹参注射液可明显减轻高糖诱导的腹膜间皮细胞的过氧化损伤,其对细胞内E钙黏素和α-SMA表达的调控作用可能与延缓腹膜纤维化作用有关。

α平滑肌肌动蛋白和转化生长因子β_1在小管间质纤维化模型大鼠肾组织中的表达

目的 探讨肾小管上皮细胞 -肌纤维母细胞表型转化在肾间质纤维化形成中的作用。 方法 制备大鼠单侧输尿管梗阻模型 ,在光学显微镜下观察大鼠肾组织病理变化 ,采用免疫组化法检测肾组织中α平滑肌肌动蛋白 (α -SMA)和转化生长因子β1(TGF- β1)的表达 ,并采用计算机图像软件进行定量分析。结果 肾脏病理检查显示形态学改变符合肾小管间质纤维化的病理变化 ;在输尿管梗阻14、28d后肾组织α -SMA和TGF - β1表达较对照组增加 (P<0.05)。 结论 α -SMA可作为肾小管上皮细胞 -肌纤维母细胞表型转化的重要标志物 ,TGF- β1 可能参与了肾小管上皮细胞 -肌纤维母细胞表型转化 ,且是进一步导致肾间质纤维化的重要因素。

高迁移率族蛋白B1和α平滑肌肌动蛋白在博莱霉素诱导肺纤维化中的表达

目的检测高迁移率族蛋白B1（HMGB1）和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在博莱霉素（BLM）致小鼠肺纤维化模型肺内的表达水平，探讨HMGB1在肺纤维化发病机制中的作用。方法取20只4．6周龄C57BL／6雄性小鼠，随机分为BLM组和生理盐水（NS）对照组，每组10只。分别向气管内灌注BLM（3mg／kg）和NS，10d后处死小鼠。应用RT—PCR法检测两组肺组织HMGB1和α—SMA的mRNA表达水平，应用免疫组织化学检测两组肺组织中HMGB1和α-SMA的蛋白表达水平。结果RT-PCR半定量和免疫组织化学半定量分析结果显示，BLM组HMGB1的mRNA和蛋白表达均较NS对照组显著增加（0．61±0．08比0．15±0．02，13．12±1．33比7．92±1．10，P均〈0．01）；BLM组α—SMA的mRNA和蛋白表达均较NS对照组显著增加（0．89±0．12比0．60±0．07，13．66±1．01比8．18±1．33，P均〈0．01）。结论在BLM诱导的肺纤维化中肺组织的HMGB1和α—SMA表达增加。肺纤维化病理过程可能与HMGB1表达增加并活化α—SMA的表达有关。

槟榔碱对α平滑肌肌动蛋白在口腔黏膜成纤维细胞中表达的影响

目的了解肌成纤维细胞与口腔黏膜下纤维性变(OSF)的关系并探讨肌成纤维细胞分化的来源和机制。方法体外培养正常口腔黏膜成纤维细胞和OSF成纤维细胞,用免疫组织化学方法和RT-PCR方法检测α平滑肌肌动蛋白的表达,并观察槟榔碱对其表达的影响,同时用ELISA方法检测了槟榔碱对成纤维细胞合成TGFβ1的影响。结果OSF来源的成纤维细胞中α平滑肌肌动蛋白表达明显高于正常口腔黏膜成纤维细胞,槟榔碱对体外培养成纤维细胞合成α平滑肌肌动蛋白和TGFβ1水平无明显影响。结论肌成纤维细胞可能在OSF的发病中起作用;OSF中肌成纤维细胞的来源可能与槟榔成分对成纤维细胞的直接作用无关。

α平滑肌肌动蛋白在慢性肾小球肾炎患者小管间质中的表达

目的 探讨α平滑肌肌动蛋白 (α -SMA)在不同病理类型的原发性慢性肾小球肾炎患者肾小管间质中的表达特征。 方法 采用免疫组织化学SAP法检测69例慢性肾小球肾炎患者肾穿刺标本中α -SMA的表达 ,并对小管间质病变进行分级。 结果 对照组肾组织中α -SMA仅在血管平滑肌细胞上有表达 ,患者组肾小管间质α -SMA表达均呈阳性 ;慢性肾小球肾炎患者小管间质α -SMA表达阳性率随小管间质损害程度增高而增加(P<0.01) ;小管间质α -SMA表达阳性率与患者血肌酐、尿素氮水平呈正相关 (n=69,r=0.514、0.582 ,均P<0.001)。 结论

α平滑肌肌动蛋白红色荧光蛋白报告基因载体的构建及其在细胞中的表达

目的构建α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,为研究细胞内α-SMA的基因表达调控提供重要工具。方法克隆并构建含α-SMA启动子区的红色荧光报告质粒pDsRed-SMAp;用脂质体瞬时转染上皮细胞A549,观察α-SMA启动子对转化生长因子(TGF-β1)刺激的反应。结果酶切和DNA测序证明所构建的红色荧光蛋白报告基因载体是pDsRed-SMAp重组载体;该表达载体在上皮细胞静息状态下表达水平很低,经TGF-β1刺激后,在荧光显微镜下可看到高亮度的红色荧光。结论成功构建了α-SMA启动子驱动的红色荧光蛋白报告质粒pDsRed-SMAp,对生理相关刺激有很好的反应,可有效地用于α-SMA基因表达调控机制的研究。

C-met蛋白和α平滑肌肌动蛋白在肝纤维化大鼠部分肝切除后肝组织中的表达

目的:研究C-met蛋白和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肝纤维化大鼠部分肝切除后肝组织中的表达情况及两者之间的关系。方法:成年雄性SD大鼠正常组、肝纤维化组和肝纤维化大鼠部分肝切除组(PH)。免疫组织化学、免疫荧光组织化学和免疫印迹法检测各组大鼠肝组织中C-met蛋白和α-SMA的表达情况。结果:肝纤维化大鼠部分肝切除后肝组织中C-met蛋白和α-SMA的表达都呈现出先降低后升高的规律,两者的变化具有高度的相关性。结论:C-met蛋白和α-SMA在纤维化肝再生过程中的表达都呈现出先降低后升高的规律性变化,肝星状细胞活化可能是纤维化肝再生过程中C-met蛋白表达的重要影响因素。

多肽类化合物Urantide对动脉粥样硬化大鼠心脏组织中骨桥蛋白和α平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的观察Urantide对动脉粥样硬化(AS)大鼠心脏组织中骨桥蛋白(OPN)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,探讨其防治大鼠心肌纤维化损伤的作用机制。方法选取120只3周龄SPF级健康雄性Wistar大鼠,高脂饲料饲养及腹腔注射维生素D3(Vit D3)的方法建立AS大鼠模型,按照随机化原则分为:对照组、AS模型组、辛伐他汀组、Urantide(3 d、7 d、14 d)组。采用HE和Masson三色染色法观察大鼠心脏组织形态和胶原纤维表达情况,免疫组织化学和Western blotting检测大鼠心脏组织OPN和α-SMA蛋白表达情况。结果 AS模型组大鼠心脏组织中出现心肌细胞肥大或萎缩、大量炎性细胞浸润和少量泡沫细胞等病理变化;心脏组织胶原纤维增多及OPN和α-SMA蛋白表达水平较对照组显著升高。与AS模型组相比,经Urantide治疗后心脏组织损伤明显改善,胶原纤维和OPN及α-SMA蛋白表达水平降低。结论 Urantide可以抑制AS大鼠心脏组织中OPN和α-SMA蛋白表达,缓解心肌纤维化,同时保护AS大鼠的心肌组织。

α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与陷窝蛋白1在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的观察α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与陷窝蛋白1在乳腺癌间质和正常乳腺组织中的表达变化。方法收集2012年1月至2013年3月在沧州市人民医院手术治疗并经病理证实的女性乳腺癌患者60例纳入病例组,选择同期乳腺活检的女性正常乳腺组织30例纳入对照组。采用免疫组织化学的方法检测两组间α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与陷窝蛋白的表达变化。结果α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与陷窝蛋白1在正常乳腺组织及乳腺癌间质中阳性表达率分别为:0 vs73.4%、10.0%vs 61.2%、76.7%vs 60.0%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);三种标志物在不同年龄、组织学分型、临床分期及有无淋巴结转移的患者中表达水平均有不同,差异有统计学意义。结论α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白在乳腺癌进展过程中表达逐渐增高,而陷窝蛋白1则呈现负性表达的趋势,提示三者在乳腺癌浸润和转移过程中起重要作用。早期乳腺癌监测此三项指标有助于乳腺癌危险度分级。

转化生长因子β1和α平滑肌肌动蛋白在肝内胆管癌血管形成中的作用

目的探讨转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)和α平滑肌肌动蛋白(αsmooth muscle actin,α-SMA)在肝内胆管癌血管形成中的作用。方法选择50例肝内胆管癌患者的癌组织和远端正常肝组织,通过HE染色观察基本病理变化,天狼猩红染色观察胶原沉积情况。免疫组织化学和qRT-PCR检测α-SMA、CK19、TGF-β1及CD31在肝内胆管癌组织中的表达情况,并分析这些指标在肝内胆管癌中表达的相关性。结果在癌组织中可见明显异形性的癌细胞,细胞核大而不规则,细胞排列紊乱,伴不同程度淋巴细胞浸润。50例肝内胆管癌患者,高、中分化38例(76%),低分化12例(24%),伴有淋巴结转移11例(22%)。天狼猩红染色结果显示,胶原主要沉积在间质细胞、血管或胆管周围,在癌组织与远端肝组织中胶原沉积的差异具有统计学意义(P<0.01)。免疫组织化学结果显示,α-SMA、CK19、TGF-β1及CD31阳性细胞主要在肝内胆管癌组织中高表达,而在远端肝组织中仅少量表达,差异具有统计学意义(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,在癌组织中α-SMA、CK19、TGF-β1及CD31 mRNA的相对表达量较远端肝组织明显增加,差异具有统计学意义(P<0.01)。α-SMA与CK19、TGF-β1、CD31,CK19与TGF-β1、CD31,TGF-β1与CD31在肝内胆管癌组织中的表达均呈明显正相关(P<0.01)。结论TGF-β1和α-SMA在肝内胆管癌血管形成中起关键作用。

二甲基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化过程中α平滑肌肌动蛋白与门脉压力的变化

目的 :观察肝纤维化形成过程中 α平滑肌肌动蛋白 (α- SMA)与门脉压力变化及两者的关系。方法 :采用二甲基亚硝胺 (DMN)诱发大鼠肝纤维化模型 ,共 4周。分别于造模开始后 2 d,1、2、3、4、5、6、8、12及 2 4周末观察大鼠肝纤维化程度、α- SMA表达与门脉压力。结果 :造模过程中肝纤维化程度逐渐加重 ,至第 4周末最为明显 ,其后逐渐减轻 ;α- SMA表达与肝纤维化程度的变化相一致 ,两者呈正相关 ;门脉压力的变化与纤维化程度及 α- SMA表达均呈正相关。结论 :肝星状细胞 (HSC)的活化在肝纤维化形成中起着重要作用 ,并对门脉压力起调节作用。

水飞蓟宾对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞整合素连接激酶、转化生长因子β1及α平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的研究水飞蓟宾对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）整合素连接激酶（ILK）、转化生长因子β1（TGF—β1）及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响。方法胰蛋白酶消化法原代及传代培养RPMC，经鉴定后第2代用于实验。细胞随机分组：（1）正常对照组；（2）高糖组：不同质量浓度的葡萄糖（1．5％、2．5％、4．25％）作用24h；2．5％葡萄糖分别作用RPMC12、24、48、72h；（3）水飞蓟宾组：不同质量浓度的水飞蓟宾（5、10、20mg／L）预孵育2h，加入2．5％葡萄糖再作用24h。实时定量PCR检测ILK及α-SMA mRNA的表达。Western印迹法检测ILK蛋白表达。ELISA法检测细胞培养上清液中TGF—β1的表达。结果与正常对照组相比，高糖可以刺激RPMCILK及α-SMAmRNA的表达增高（均P〈0．05）；高糖诱导RPMCILK及TGF-β1蛋白的表达增高（均P〈0．05）；与高糖组相比，水飞蓟宾能显著降低高糖所致的RPMCILK、TGF-β1及d．SMA的高表达（均P〈0．05）。结论高糖可上调RPMCILK、TGF—β1及α-SMA的表达；水飞蓟宾可以抑制高糖所致的RPMCILK、TGF-β1及α—SMA的高表达。