αA-晶体蛋白在2型糖尿病大鼠神经视网膜的异常表达

目的 用蛋白质组学方法观察αA-晶体蛋白在早期2型糖尿病大鼠神经视网膜的异常表达.方法 28只成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为正常对照组和糖尿病组.每组14只.糖尿病组大鼠采用高脂饮食饲养联合小剂量链脲佐菌素（STZ）注射诱导2型糖尿病模型（T2DM）,以随机血糖持续高于16.7 mmol/L为模型建立成功标准.对照组用常规饲料喂养.腹腔注射相同剂量枸橼酸钠缓冲液.成模56 d后断颈处死所有大鼠,剥离留存神经视网膜组织.从对照组和糖尿病组各取3只大鼠的神经视网膜组织,提取总蛋白,用二维凝胶电泳（2-DE）方法分别进行分离.应用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱（MALDI-TOF-MS/MS）和肽质量指纹图谱（PMF）技术对部分差异表达蛋白进行鉴定,并用蛋白免疫印迹（Western blot）和间接免疫荧光（IMF）方法对在糖尿病组表达上调的αA-晶体蛋白进行验证.结果 平均每块凝胶检测到的蛋白斑点,对照组为（3122±37）,糖尿病组为（2702±21）个.二者比较,表达水平差异有统计学意义的斑点约150个（t值均〉2.57,P值均〈0.05）.在糖尿病组表达上调68个,表达下调82个.质谱分析和数据库检索鉴定出20个差异表达蛋白斑点.其中二维凝胶中2369和1048斑点在糖尿病组呈现高表达.经质谱PMF鉴定为αA-晶体蛋白.Western blot检测结果显示,αA-晶体蛋白在糖尿病组大鼠神经视网膜表达明显增高.IMF结果显示αA-晶体蛋白在糖尿病组高表达,阳性表达主要位于视网膜的内外核层,在细胞的核周细胞浆区域有强荧光聚集.结论 αA-晶体蛋白在早期2型糖尿病大鼠神经视网膜表达增高.

静脉注射α-晶体蛋白对视网膜神经节细胞的保护作用及对重要脏器的影响

目的观察静脉注射α-晶体蛋白对Long Evans大鼠视神经损伤后视网膜神经节细胞（RGC）存活的保护作用及对重要脏器的影响。方法23只Long Evans大鼠用于本实验。荧光金经双侧上丘及外侧膝状体逆行标记RGC，7d后制作视神经钳夹伤模型。3只作为正常对照组，其余20只随机分为生理盐水对照组以及1×10^-2g／L、1×10^-1g／L、1g／L α-晶体蛋白组，每组5只大鼠。视神经钳夹伤后经尾静脉分别注射1．25ml的等渗生理盐水及3个浓度的α-晶体蛋白，每2天重复注射1次，共7次。2周后对实验大鼠行RGC计数，并对肝、肾、脑、脾、肺等脏器进行病理观察。结果正常对照组RGC计数（2074±150）个／mm^2，视神经钳夹伤后2周时RGC计数，生理盐水对照组（85±15）个／mm^2，1×10^-2g／Lα-晶体蛋白组（124±26）个／mm^2，1×10^-1g／L α-晶体蛋白组（128±31）个／mm^2，1g／L α-晶体蛋白组（164±20）个／mm^2。正常对照组RGC计数显著高于其他组，3个浓度α-晶体蛋白组存活的RGC数均显著高于生理盐水对照组（F=18．660，P〈0．01）。各组肝、肾、脑、脾、肺病理观察未见充血、肿大、炎症等病理改变。结论静脉注射α-晶体蛋白对视神经损伤后RGC存活具有一定保护作用，所用α-晶体蛋白浓度对重要脏器无病理性影响。

α晶体蛋白对活化视网膜小胶质细胞iNOS生物活性的影响

目的观察仪晶体蛋白对脂多糖（LPS）诱导活化的视网膜小胶质细胞增生及iNOS生物学活性的影响。方法以离体培养的小胶质细胞为对象，经细胞免疫荧光及流式细胞仪鉴定纯度，用不同浓度LPS和α晶体蛋白干预，MTT法检测α晶体蛋白对视网膜活化小胶质细胞活力的影响；RT—PCR法测定NO浓度，观察小胶质细胞分泌iNOS的表达变化。结果原代培养的小胶质细胞经GSA—IB4免疫组化鉴定及CD11b流式细胞仪鉴定纯度分别达到94．15％和93．34％，10^-4g／Ld晶体蛋白可以抑制10^-6g／LLPS对视网膜小胶质细胞的活力（P〈0．01）；联合用药组iNOS蛋白质量浓度及mRNA表达量明显降低（P〈0．05）。结论在病理情况下，仪晶体蛋白可以通过抑制小胶质细胞产生NO、iNOS，减轻其对视神经损伤后视网膜神经节细胞（retinal ganglial cells，RGCs）的损害。

早期生长因子1和晶状体蛋白α-A基因多态与近视的关联性研究

目的 本实验通过关联分析,研究早期生长因子1（EGR1）和晶状体蛋白α-A （CRYAA）基因的标签单核苷酸多态性（tSNPs）与人类近视的关系.方法 实验研究.抽取2870名志愿者外周静脉血并制备DNA,其中包括1052名对照者（对照组）、615名中度近视患者（近视组1）、640名高度近视患者（近视组2）和563名先天性高度近视患者（近视组3）.分别用直接测序和限制性片段长度多态性（ RFLP）的方法对EGR1基因的1个tSNP（rs11743810）和CRYAA基因的2个tSNPs（rs872331、rs3788061）进行基因型分析；然后用x2检验分析tSNPs与近视易感性的关系.结果 对于EGR1基因的1个tSNP和CRYAA基因的2个tSNPs的基因型和等位基因频率,近视（全部）组和对照组之间差异无统计学意义（rs11743810：P=0.700、0.922;rs872331：P=0.377、0.166；rs3788061：P=0.444、0.303）.近视各组与对照组分别进行比较,差异也无统计学意义.结论 EGR1和CRYAA基因的多态与本组人类近视的遗传易感性无关.与动物模型不同,EGR1对人类近视的遗传易感性很可能没有明显影响.

α-晶状体蛋白在视网膜病变中的作用

α-晶状体蛋白被归类为小分子休克蛋白家族，发挥分子伴侣的功能，在应激时维护各功能蛋白质的稳定性，防止细胞凋亡，增强细胞的适应能力。α-晶状体蛋白曾被认为仅存在于晶状体中，近年来发现其不仅存在于视网膜中，而且参与到多种视网膜病变过程中，如视神经损伤、黄斑变性、糖尿病视网膜病变等。本文回顾了近年来有关α-晶状体蛋白在正常视网膜中的表达及其在各种视网膜疾病中的表达变化，分析其在维护视网膜正常功能及病理过程中起到的作用及机制，为视网膜疾病开拓新的研究方向和寻找新的治疗思路奠定基础。

α晶状体蛋白对视网膜神经节细胞保护作用的研究进展

α晶状体蛋白是构成晶状体的重要结构蛋白，属于小分子热休克蛋白家族，具有热休克蛋白的共性，同时有保护视网膜神经节细胞的作用。近年来相继有多篇α晶状体蛋白对视网膜神经节细胞保护机制的研究成果发表，引起了相关研究者的关注。因此，有必要就α晶状体蛋白的生物学特性与功能、α晶状体蛋白保护视网膜神经节细胞的作用机制进行综述，旨在为视神经损伤的理论研究和临床治疗提供参考依据。