儿童原发性肾病综合征α-辅肌动蛋白4mRNA表达的临床意义

目的探讨在儿童原发性肾病综合征中α-辅肌动蛋白4(α-actinin-4)mRNA表达及其意义。方法经肾活检获取34例原发性肾病综合征患儿(病例组)的肾组织,其中局灶节段硬化性肾小球肾炎(FSGS)21例、微小病变(MCNS)6例、系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)7例;另外,12例对照组标本取自肾肿瘤切除术后肿瘤周边的正常组织。通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR)的方法检测每份肾组织中α-actinin-4 mRNA表达,同时分析FSGS患儿中mRNA表达与24 h尿蛋白、内生肌酐清除率(Ccr)的相关性。结果 FSGS组α-actinin-4 mRNA表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而MCNS组和MsPGN组α-actinin-4 mRNA表达与正常对照组的差异均无统计学意义(P>0.05)。在FSGS组中,表现为肾炎型肾病(伴发镜下血尿)患儿的α-actinin-4 mRNA表达明显高于表现为单纯性肾病的患儿,差异有统计学意义(P<0.05);FSGS患儿α-actinin-4mRNA表达量与24 h尿蛋白及Ccr无相关性(P>0.05)。结论在儿童原发性肾病综合征中,α-actinin-4 mRNA表达量增高可能是促进肾小球足细胞骨架修复的因素之一;该骨架分子的mRNA表达变化与病程及病理类型相关。

糖尿病大鼠肾脏α-辅肌动蛋白-4表达变化及作用机制

目的:动态观察肾小球足细胞骨架蛋白α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)在糖尿病大鼠模型肾组织中表达的变化,探讨α-actinin-4与蛋白尿发生的关系及导致其出现变化的可能机制。方法:将SD大鼠随机分为两组:对照组及糖尿病组,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病大鼠模型,分别于2、4、6、8周末检测每组大鼠24h尿蛋白定量并处死大鼠留取肾标本。电镜观察足细胞超微结构的变化;应用酶免法检测肾组织糖基化终产物(AGEs)的含量;应用免疫组化及Western-blot检测α-actinin-4蛋白的表达;RT-PCR检测α-actinin-4mRNA表达量的变化。结果:6周糖尿病组大鼠24h尿蛋白明显高于对照组(P<0.01),增高持续到8周(P<0.01);透射电镜显示8周糖尿病组大鼠足突出现节段性融合;从4周时糖尿病组大鼠肾组织AGEs含量明显升高(P<0.05),并持续到8周(P<0.01);与对照组相比,从4周时糖尿病组大鼠肾组织α-actinin-4蛋白表达明显降低(P<0.05),并持续到8周(P<0.05);与对照组相比,从2周时糖尿病组大鼠肾组织α-actinin-4mRNA表达明显降低(P<0.05),并持续到8周(P<0.01)。结论:α-actinin-4表达降低参与了糖尿病大鼠蛋白尿的发生,而AGEs可能是导致α-actinin-4表达下调的原因之一。

α-辅肌动蛋白4及其与肾脏疾病关系的研究进展

α-辅肌动蛋白4是由ACTN4基因编码的辅肌动蛋白家族成员之一,广泛表达于各种组织或器官,在肾脏中其主要表达于肾小球足细胞。α-辅肌动蛋白4与去氧肾上腺素、足突蛋白和CD2相关蛋白等的相互作用共同维系肾小球足细胞正常结构及功能。多种肾脏疾病存在ACTN4基因突变及α-辅肌动蛋白4表达、分布异常。本文主要就α-辅肌动蛋白4对肾脏疾病的影响以及在治疗中的应用研究进展做一综述。

宫颈组织α辅肌动蛋白4表达与HPV载量及病变程度的相关性

目的探讨α辅肌动蛋白4(ACTN4)在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达,及其与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的相关性。方法选取2014年6月至2015年2月期间就诊于山西医科大学第二临床医院妇科门诊,经宫颈活检及手术切除的宫颈组织病理标本120例,其中CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、早期宫颈鳞癌(Ia-IIa期)患者各30例,同时选择同期阴道镜门诊检查并且病理诊断正常的30例患者作为对照组:采用免疫组化法检测ACTN4在不同宫颈组织中的表达情况,同时采用HC-Ⅱ法检测各组高危型人乳头瘤病毒的感染情况及病毒负荷载量,分析ACTN4表达与HR-HPV感染、病毒负荷载量的相关性。结果 1.HC-ⅡHPV DNA检测法结果显示:150例标本中HR-HPV阳性98例,阴性52例,阳性低负荷量49例,阳性中负荷量36例,阳性高负荷量13例,并且从正常组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组到宫颈鳞癌患者组,随着宫颈病变加重,HR-HPV感染率逐渐增加(P=0.000)。2.免疫组化法结果显示:ACTN4在正常组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组、宫颈鳞癌患者组中阳性表达率分别为0%、33.3%、46.7%、56.7%、73.3%。随着宫颈病变程度的加重,ACTN4蛋白的阳性表达率逐渐上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。经过Spearman秩相关分析显示出HR-HPV病毒负荷载量与ACTN4的表达具有相关性(r=0.523,P=0.000)。结论随着宫颈病变程度加重,ACTN4与HR-HPV病毒负荷载量表达率均逐渐升高,且表现出相关性,可作为反映宫颈病变程度及生物学行为的指标,对临床诊断有参考价值。

肝内胆管癌组织中CircACTN4 mRNA和THBS1mRNA的表达与临床病理特征及预后的关系研究

目的研究肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)中环状核糖核酸辅肌动蛋白α4(CircRNAsActininα4,Circ ACTN4)和血小板凝血酶蛋白1(platelet thrombin protein 1,THBS1)mRNA表达与临床病理特征和预后的关系,为临床诊治提供参考。方法回顾性分析2017年5月~2020年6月西安交通大学第二附属医院诊治的84例ICC患者;采用实时荧光定量PCR及免疫组织化学检测组织中CircACTN4 mRNA,THBS1 mRNA和蛋白表达。Pearson相关分析ICC癌组织中CircACTN4 mRNA与THBS1 mRNA的相关性。Kaplan-Meier法(Log-rank检验)比较不同CircACTN4mRNA,THBS1 mRNA表达ICC患者预后差异。COX回归分析ICC患者预后影响因素。受试者工作特征(ROC)曲线分析CircACTN4 mRNA,THBS1 mRNA对ICC患者死亡预后的评估价值。结果ICC癌组织中CircACTN4 mRNA(3.14±0.42)表达高于癌旁组织(0.76±0.25),差异具有统计学意义(t=44.094,P<0.001);ICC癌组织中THBS1 mRNA(2.82±0.36)和蛋白阳性率(92.86%)均高于癌旁组织(0.81±0.24,7.14%),差异具有统计学意义(t/χ2=42.068,123.429,均P<0.001)。ICC癌组织中CircACTN4 mRNA与THBS1 mRNA表达呈正相关(r=0.669,P<0.001)。TNM分期Ⅲ期、低分化程度及有淋巴结转移ICC癌组织中CircACTN4 mRNA,THBS1 mRNA表达高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、高中分化程度及无淋巴结转移癌组织,差异具有统计学意义(χ2=7.949,9.164,12.207;23.270,18.625,19.828,均P<0.001)。CircACTN4 mRNA高表达组、THBS1 mRNA高表达组三年累积生存率分别低于CircACTN4 mRNA低表达组(25.00%vs 56.82%)和THBS1mRNA低表达组(19.51%vs 62.79%),差异具有统计学意义(Log rankχ2=13.601,24.310,均P<0.001)。CircACTN4mRNA(OR=1.839,95%CI:1.228~2.753)、THBS1 mRNA(OR=1.744,95%CI:1.245~2.443)、淋巴结转移(OR=1.925,95%CI:1.316~2.816)、TNM分期(OR=1.613,95%CI:1.223~2.126)及肿瘤分化程度(OR=1.510,95%CI:1.205~1.892)是影响ICC预后的独立因素(均P<0.01)。CircACTN4 mRNA,THBS1 mRNA联合检测对ICC患者死亡预后的评估曲线下面积为0.868,大于单项指标检测0.812,0.784,差异具有统计学意义(Z=3.348,3.847,均P<0.001)。结论ICC中CircACTN4 mRNA和THBS1 mRNA表达升高,两者与TNM分期、分化程度及淋巴结转移相关,是新的评估ICC患者不良预后的肿瘤标志物。

儿童原发性肾病综合征血清PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4检测的意义

目的探讨检测外周血磷脂酶CE1(PLCE1)、瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)、CD2相关蛋白(CD2AP)、α-辅肌动蛋白4(ACTN4)在儿童原发性肾病综合征(PNS)、激素敏感型肾病综合征(SSNS)、激素耐药型肾病综合征(SRNS)、激素依耐型肾病综合(SDNS)及不同病理类型表达的临床意义。方法采集原发性肾病综合征外周血清标本,采用双抗体夹心ELISA法检测样本中目PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4表达浓度。结果PNS组、SSNS组、SRNS组、SDNS组PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4表达与健康组比较降低,差异均有统计学意义(P<0.05),SRNS组、SDNS组表达与SSNS组比较降低,差异均有统计学意义(P均<0.05),SRNS组与SDNS组比较差异均无统计学意义(P>0.05);FSGS组、IgAN组血清PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4表达与MCD组比较降低,差异均有统计学意义(P<0.05),FSGS组、IgAN组分别与MsPGN组、MPGN组比较降低,差异均有统计学意义(P<0.05),MsPGN组与MPGN组比较差异无统计学意义(P>0.05),FSGS组与IgAN组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论①血清中PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4作为足细胞裂孔隔膜分子、足细胞信号分子、骨架分子等正常表达,对维系肾小球滤过膜的功能完整性起关键作用,一旦表达异常降低,可能导致肾病综合征发生、对激素治疗耐药或依耐;②血清中PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4表达与肾病综合征病理类型有关;③临床上检测血清中PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4表达水平对判断是否为难治性肾病、病理类型、指导用药及预测预后具有重大意义。

ACTN4在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测ACTN4蛋白及mRNA在肝细胞癌中的表达,探讨其与肝细胞癌患者临床病理特征的关系,并分析其与肝细胞癌患者术后生存期的关系。方法:利用qRT-PCR和免疫组化方法检测肝细胞癌标本及对应癌旁组织中ACTN4的表达,并利用统计学方法进行统计分析。结果:qRT-PCR结果发现ACTN4在肝细胞癌组织中表达显著高于癌旁组织,免疫组化结果发现肝细胞癌组织中ACTN4阳性率显著高于癌旁组织(P=0.029)。Mann-Whitney U检验发现肝细胞癌组织中ACTN4阳性表达与肝细胞癌患者淋巴转移情况呈正相关,且具有统计学意义,与其他临床病理特征无显著相关性。Kaplan-Meier生存曲线发现ACTN4阳性表达与患者术后生存期呈负相关,且具有统计学意义。结论:ACTN4在肝细胞癌的发生及进展中起着至关重要的作用。

RSK4、ACTN4和Ki-67在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究核糖体S6蛋白激酶4(RSK4)、α-辅肌动蛋白4(ACTN4)及核增殖抗原Ki-67在乳腺癌(BC)组织中的表达,分析三者表达水平与BC患者临床病理特征的关系。方法:收集2019年1月至2021年12月广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科100例手术切除并经病理确诊的BC组织及20例癌旁正常石蜡包埋组织标本。采用免疫组织化学法检测RSK4、ACTN4和Ki-67在BC及癌旁正常组织中的表达。采用Spearman等级相关分析法分析RSK4与ACTN4、Ki-67表达的相关关系。结果:与癌旁正常组织比较,癌组织中RSK4表达降低,ACTN4和Ki-67表达升高(均P<0.01)。RSK4与ACTN4、Ki-67表达均呈负相关关系,且三者表达水平与患者肿瘤大小、病理分级有关(均P<0.05)。结论:BC组织中RSK4表达下调,ACTN4和Ki-67表达上调,RSK4、ACTN4和Ki-67表达与BC进展有关,可作为BC临床诊疗的潜在标志物。

ACTN4、HPV16 E7检测在食管癌患者诊断及预后判断中的价值

目的探讨α-辅肌动蛋白4(ACTN4)联合人乳头瘤状病毒(HPV)16 E7检测在食管癌患者诊断及预后判断中的价值。方法选取2019年1月至2021年5月该院收治的80例食管癌手术患者的癌组织及癌旁组织,采用免疫组化法检测胃癌组织及癌旁组织ACTN4、HPV16 E7的表达,并分析HPV16 E7、ACTN4表达与临床病理特征及食管癌患者预后的关系。绘制受试者工作特征(ROC)曲线对HPV16 E7、ACTN4用于诊断食管癌的价值进行分析。结果HPV16 E7在食管癌细胞膜和细胞质呈黄棕色,在食管癌组织中阳性表达率为70.00%(56/80),在癌旁正常组织阳性表达率为17.50%(14/80),两者比较差异有统计学意义(P<0.001)。ACTN4位于细胞质和细胞膜上,呈现淡黄色,在ACTN4组织中阳性表达率为65.00%(52/80),在癌旁组织表达为22.50%(18/80),两者比较差异有统计学意义(P<0.001)。HPV16 E7的阳性表达率与食管癌患者年龄、肿瘤最大径、肿瘤类型无关(P>0.05),而与病理分级、淋巴结转移、N分期、M分期有关(P<0.05);ACTN4的阳性表达与食管癌患者年龄、肿瘤最大径、肿瘤类型无关(P>0.05),而与病理分级、淋巴结转移、N分期、M分期有关(P<0.05)。HPV16 E7检测用于食管癌诊断的灵敏度为81.30%,特异度为80.70%,曲线下面积(AUC)为0.768;ACTN4检测的灵敏度为74.2%,特异度为76.5%,AUC为0.713;HPV16 E7、ACTN4联合检测的灵敏度为90.60%,特异度为86.20%,AUC为0.825。ACTN4阳性的食管癌患者的2年生存率为42.30%(22/52),ACTN4阴性的食管癌患者2年生存率为71.42%(20/28),两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论HPV16 E7、ACTN4均在食管癌中呈高表达,并且与病理分级、组织分期和淋巴结转移相关,二者联合检测对食管癌临床诊断及预后有重要价值。

ACTN4通过靶向NDUFV1对食管鳞状细胞癌的细胞增殖的影响

目的探究α-辅肌动蛋白-4(ACTN4)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达情况及其对ESCC细胞增殖的影响。方法采用免疫组化实验检测ESCC组织及配对正常组织中ACTN4的表达,统计学方法分析ACTN4与临床病理特征的相关性;构建ACTN4 shRNA慢病毒表达载体,利用慢病毒包装技术建立ACTN4稳定低表达的ESCC细胞株,Western blot检测敲低效果,克隆形成实验检测ACTN4敲低对细胞增殖的影响;基于前期黑色素瘤A375细胞中ACTN4敲低的蛋白质组学分析结果,选取候选下游靶蛋白并在ESCC细胞中进行验证。结果免疫组化实验结果显示,ESCC组织中的ACTN4表达量高于正常组织(P<0.0001);成功构建ACTN4 shRNA慢病毒质粒并获得稳定低表达ACTN4的ECA109细胞株;克隆形成实验结果表明,ACTN4敲低抑制ECA109细胞的增殖;ESCC细胞中ACTN4的敲低下调NADH∶泛素氧化还原酶核心亚基V1(NDUFV1)蛋白的表达。结论ESCC细胞中,高表达的ACTN4能够促进细胞增殖,并上调NDUFV1的蛋白表达。

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏α-actinin-4表达的影响及意义

目的研究糖尿病大鼠肾脏α-辅肌动蛋白-4(α-acti-nin-4)表达的变化以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)Ⅰ型受体(ATⅠ)拮抗剂氯沙坦(losartan)的调节作用。方法♂SD大鼠随机分为对照组(N组)、糖尿病组(D组)和氯沙坦治疗组(DL组),每组10只,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病大鼠模型,氯沙坦治疗组于造模成功后每日给予氯沙坦20mg·kg-1灌胃。8wk末电镜观察足细胞超微结构的变化;免疫组化、Western blot检测各组肾组织α-actinin-4蛋白的表达;半定量RT-PCR检测各组肾组织α-actinin-4mRNA的表达;应用放射免疫法检测肾组织AngⅡ的含量。结果D组大鼠肾重/体重、24h尿蛋白排泄量明显高于N组;肾组织α-actinin-4蛋白及mRNA的表达均明显低于N组。氯沙坦干预后可明显改善24 h尿蛋白与血肌酐水平,α-actinin-4蛋白及mRNA的表达水平明显高于D组。D组大鼠肾组织AngⅡ含量明显高于C组,但氯沙坦给药对其无影响。结论α-actinin-4表达降低参与了糖尿病肾病大鼠蛋白尿的发生,氯沙坦可以上调糖尿病大鼠肾脏α-actinin-4的表达,从而对肾脏起到保护作用。

嘌呤霉素损伤小鼠肾小球足细胞系中足细胞α-辅肌动蛋白4的表达与分布

目的观察嘌呤霉素（PAN）对足细胞α-辅肌动蛋白4（α-actin-4）mRNA表达和分布的影响，探讨α-actin-4与足细胞损伤的关系。方法将体外培养肾小球足细胞系（MPC5）随机分为实验组与对照组。实验组采用PAN刺激（剂量为50mg／L），分别于8h、24h和48h观察细胞形态，提取总RNA和细胞免疫组织化学观察α-actin-4的分布。对照组用100mL／LFBS的RPMI1640培养液培养。应用Image J图像软件处理细胞图像，计算2组随机选择的30个细胞在上述3个时间点200倍镜下的细胞相对面积，实时定量荧光聚合酶链反应（RT—PCR）和间接免疫荧光法检测α-actin-4mRNA表达和分布变化。结果对照组足细胞生长情况良好，胞体呈不规则星形，与增殖状态足细胞比较，细胞体和细胞核均显著增大，自胞体伸出树枝样突起，相邻细胞问足突相互连接。实验组细胞胞体缩小，足突回缩、消失，细胞间失去相互连接。2组间α-ctin-4mRNA各时间点表达比较，8h差异无统计学意义（P＞0．05），24h、48h差异有统计学意义（P均＜0．01），实验组在24h、48h后α-actin-4mRNA表达升高。对照组α-actin-4在胞质内呈细丝状均匀分布，在足突中呈放射状分布；8h后在实验组α-actin-4压力丝纤维变短，排列紊乱，PAN刺激24h后细胞质中α-actin-4分布明显减少，刺激48h后出现细胞质分布缺失。结论α-actin-4表达分布的异常与PAN损伤足细胞的时间呈正相关，α-actin-4是足细胞损伤机制中的一个重要分子。

妇科恶性肿瘤中α辅肌动蛋白4的研究进展

临床上妇科恶性肿瘤患者以手术治疗为主,手术方式常采用全子宫、附件及周围淋巴组织广泛性切除,虽然术后患者常进行预防性辅助化疗对残留癌细胞进行杀伤性治疗,但仍有较高复发风险,这与癌细胞具有远处侵袭转移特性密切相关。α辅肌动蛋白4(ACTN4)是一种血影蛋白超家族成员的肌动蛋白网状交联蛋白,它被发现与癌细胞的远处转移高度相关,并且高表达的患者常常预后较差。随着ACTN4在妇科恶性肿瘤中的研究深入,近年来发现不仅它与肿瘤的侵袭性相关,而且还能通过活化AKT信号通路,来诱导上皮间质转化及肿瘤发生。该文对ACTN4的结构、功能及其与妇科恶性肿瘤的关系作一综述。

他克莫司对嘌呤霉素损伤的足细胞中α-辅肌动蛋白-4表达的影响

目的研究他克莫司( FK506)和嘌呤霉素( PAN)对肾小球足细胞凋亡和α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)mRNA及蛋白表达的影响,探讨FK506对足细胞的保护作用.方法体外培养小鼠肾小球足细胞,设置对照组、PAN组和FK506组,处理8 h、24 h、48 h后观察细胞形态,检测细胞凋亡率,并收集细胞进行实时荧光定量-PCR、Western blot检测α-actinin-4的mRNA及蛋白表达情况.结果 PAN组各时间段胞体面积较对照组明显缩小,FK506组胞体面积较PAN组增大.8 h时各组间足细胞凋亡率无明显差异(均P>0. 05);24 h及48 h时PAN组足细胞凋亡率[(8. 21 ± 0. 41)%、(16. 32 ± 0. 17)%]较对照组[(4. 28 ± 0. 35)%、(6. 27 ± 0. 28)%]明显升高,差异均有统计学意义(均P<0. 05),FK506组足细胞凋亡率[(6. 26 ± 0. 24)%、(13. 32 ± 0. 24)%]均明显低于PAN组,差异均有统计学意义(均P<0. 05).8 h时各组α-actinin-4 mRNA和蛋白表达无明显差异(均P>0. 05),24 h、48 h 时PAN组mRNA(2. 42 ± 0. 21、3. 78 ± 0. 25)和蛋白(0. 77 ± 0. 04、1. 22 ± 0. 10)表达量较对照组mRNA(1. 50 ± 0. 22、2. 15 ± 0. 15)和蛋白(0. 44 ± 0. 03、0. 83 ± 0. 07)显著增高,差异均有统计学意义(均P<0. 01);FK506组mRNA(1. 65 ± 0. 24、1. 70 ± 0. 32)和蛋白(0. 52 ± 0. 05、0. 56 ± 0. 07)表达量均明显低于PAN组,差异均有统计学意义(均P<0. 05).结论 FK506可有效抑制PAN对足细胞的损伤作用,稳定α-actinin-4的表达,为临床应用FK506治疗肾小球疾病提供依据.

糖尿病肾病患者肾小球中α-辅肌动蛋白-4和肾病蛋白的表达及其临床意义

目的通过检测α-actinin-4mRNA和nephrinmRNA在糖尿病肾病（DN）患者肾小球组织中的表达，探讨其在糖尿病肾病患者蛋白尿发生中的作用。方法用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测α-actinin-4mRNA和nephrinmRNA在测糖尿病肾病组、单纯糖尿病组、单纯血尿组及对照组患者肾小球组织中的表达。结果糖尿病肾病组nephrinmRNA表达显著低于单纯糖尿病、单纯血尿组及对照组，糖尿病肾病组α-actinin-4mRNA表达显著低于单纯糖尿病、单纯血尿组及对照组，两者表达存在正相关。结论糖尿病肾病患者肾小球组织nephrin和α-ctinin-4mRNA的表达减少，导致蛋白尿的产生。

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠肾小球α-actinin-4和Desmin表达的干预作用及机理研究

目的:观察祛风通络方对阿霉素肾病(AN)大鼠肾小球滤过屏障及α-actinin-4和Desmin的影响,探讨"祛风通络方"治疗MCN、改善蛋白尿的作用机理,同时对"风伏肾络"的病机理念进行理论的探讨和阐述,为"祛风通络方"的临床应用提供分子原子依据。方法:86只雄性清洁级Sprague-Dawley(SD)健康大鼠随机分为空白对照组(A组)和模型组(B组)、祛风组(祛风通络方、C组)、激祛组(激素+祛风通络方、D组)和激素组(E组)。分别给予相应干预,再次于不同时间测24h蛋白尿及相关生化指标,同时观察大鼠一般情况,肾小球滤过屏障超微结构变化,同时免疫组化染色结果判定[1],测定各组大鼠肾脏组织中α-actinin-4和Desmin的阳性面积百分比,及肾小球中着色的阳性物质光密度值,以判断表达和分布变化。并分析α-actinin-4和Desmin表达变化与尿蛋白的关系,两者之间的关系等。结果:造模成功时与空白对照组比较,模型组大鼠出现:超微结构显示GBM大致正常,足突间距增宽、融合甚至脱落、消失,α-actinin-4和Desmin在足细胞表达上调,高于空白对照组(Pn均<0.01)。α-actinin-4总体量没有显著变化(Pn>0.05),Desmin总体量明显上调(Pn<0.01)。干预结束时与模型组比较:各干预组超微结构病变均有不同程度改善,足突结构较前清晰,各干预组肾小球足细胞α-actinin-4蛋白和Desmin蛋白平均光密度值表达下调,D组减少最明显(Pn<0.01),C组和E组无显著差异(Pn>0.05)。各干预组分布较前规律,差异有统计学意义(Pn<0.05)。结论:1)祛风通络方可以降低阿霉素肾病大鼠尿蛋白排泄,且与激素联用效果更佳,表明其可以改善大鼠低蛋白状态、脂质代谢。2)祛风通络方可以改善α-actinin-4和Desmin的表达分布,可能是该方实现修复足细胞骨架的结构和功能并抑制足细胞进一步损伤的机制之一。

血清lncRNA DLX6-AS1 Actinin-4表达与宫颈癌术后复发及预后的关系

目的:研究宫颈癌患者血清长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)DLX6-AS1、辅肌动蛋白4(Actinin-4)表达与宫颈癌根治术后复发及预后的关系。方法:选取自2016年2月至2018年2月期间行宫颈癌根治术的120例宫颈癌患者为研究对象(宫颈癌组),以同期健康体检的50例健康人为对照组。宫颈癌组根据术后3年肿瘤复发进展情况,分为无复发组(101例)及复发组(19例)。采用荧光实时定量聚合酶链反应法检测血清lncRNA DLX6-AS1表达,采用酶联免疫吸附实验检测血清Actinin-4表达。分析血清lncRNA DLX6-AS1、Actinin-4表达水平与宫颈癌患者临床病理特征的关系。随访3年,采用Kaplan-Meier生存分析分析血清lncRNA DLX6-AS1、Actinin-4表达与宫颈癌患者术后预后差异。分析影响宫颈癌患者术后复发的因素。结果:与对照组相比,宫颈癌组血清lncRNA DLX6-AS1、Actinin-4表达显著升高(P<0.05)。Pearson相关分析结果,宫颈癌组血清lncRNA DLX6-AS1与Actinin-4的表达呈显著正相关性(r=0.560、P=0.000)。不同FIGO分期、病理分级、间质浸润深度及淋巴结转移患者血清lncRNA DLX6-AS1、Actinin-4表达差异具有统计学意义(P<0.05)。lncRNA DLX6-AS1高表达组、Actinin-4高表达组3年无进展生存率及无进展生存时间均低于低表达组(均P<0.05)。病理分级低分化、FIGO分期ⅡA期、lncRNA DLX6-AS1高表达、Actinin-4高表达是影响宫颈癌根治术术后复发的独立危险因素(均P<0.05)。结论:宫颈癌患者血清lncRNA DLX6-AS1、Actinin-4表达升高、两者的表达与宫颈癌术后复发有关、可能是新的预后判断的血清标志物。

miR-153-3p通过靶向ACTN4调节食管癌细胞的恶性生物学行为

为探究miR-153-3p靶向调控α-辅肌动蛋白4(α-actinin-4,ACTN4)对食管癌(esophageal cancer,ESCA)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。通过qRT-PCR检测不同细胞系中miR-153-3p和ACTN4 mRNA表达,双荧光素酶实验验证miR-153-3p和ACTN4的靶向关系。体外培养ECA109细胞并将其分为6组:空白组、对照模拟物(miR-NC)组、 miR-153-3p模拟物(miR-153-3p)组、空载体组、 ACTN4过表达(ACTN4)组以及miR-153-3p模拟物和ACTN4过表达(miR-153-3p+ACTN4)组。qRT-PCR和Western blotting检测miR-153-3p、 ACTN4表达水平;CCK-8和集落形成实验检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞迁移、侵袭情况。Western blotting检测Ki67、 E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白水平。构建皮下异种移植肿瘤裸鼠模型,检测上调miR-153-3p对肿瘤生长的影响,免疫组化检测ACTN4、 Ki67、 E-cadherin和N-cadherin表达。结果显示,miR-153-3p在ESCA细胞系中低表达(P<0.05),ACTN4 mRNA高表达(P<0.05)。miR-153-3p可负向调节ACTN4表达。miR-153-3p过表达可降低细胞活力、集落形成能力和迁移、侵袭能力,并抑制Ki67和N-cadherin表达,上调E-cadherin表达(P<0.05)。ACTN4过表达则表现出与之相反的效果(P<0.05);过表达ACTN4可逆转miR-153-3p过表达对ESCA细胞行为的影响(P<0.05)。体内研究表明,miR-153-3p过表达可抑制ACTN4、 Ki67、 N-cadherin表达,升高E-cadherin表达,减缓肿瘤生长。该研究提示,miR-153-3p过表达可能通过靶向负调控ACTN4抑制ESCA细胞增殖、侵袭和迁移。

miR-369-3p靶向α-辅肌动蛋白4调控肝癌细胞增殖和凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA miR-369-3p靶向调控α-辅肌动蛋白4(ACTN4)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot法分别检测肝癌及癌旁组织中miR-369-3p、ACTN4的表达水平。采用脂质体法将miR-369-3p mimics、miR-NC、si-ACTN4、si-NC转染至肝癌MHCC97H细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,双荧光素酶报告实验验证miR-369-3p对ACTN4的靶向调控作用,Western blot法检测细胞周期蛋白1(cyclin D1)、p21、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)的表达。结果肝癌组织中miR-369-3p mRNA的表达水平为0.46±0.04,低于癌旁组织(1.00±0.08,P<0.001);ACTN4 mRNA的表达水平为3.12±0.29,高于癌旁组织(1.01±0.09,P<0.001);ACTN4蛋白的表达水平为0.61±0.06,高于癌旁组织(0.25±0.03,P<0.001)。与miR-NC组细胞比较,miR-369-3p过表达肝癌MHCC97H细胞增殖能力降低(细胞培养72 h吸光度分别为0.71±0.06和1.26±0.11,P<0.001),G1期细胞比例升高[分别为(51.56±5.23)%和(31.14±3.36)%,P<0.001],S期细胞比例降低[分别为(14.33±1.45)%和(32.44±3.56)%,P<0.001)],细胞凋亡率升高[分别为(20.16±2.11)%和(6.25±0.64)%,P<0.001],cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达量降低(均P<0.001),p21和Bax蛋白相对表达量升高(均P<0.001)。与si-NC组比较,抑制ACTN4的表达后,肝癌MHCC97H细胞增殖能力降低(细胞培养72 h吸光度分别为0.78±0.07和1.24±0.12,P<0.001),G1期细胞比例升高[分别为(48.69±4.21)%和(30.33±3.01)%,P<0.001],S期细胞比例降低[(分别为18.54±1.61)%和(36.21±3.42)%,P<0.001],细胞凋亡率升高[分别为(18.32±1.82)%和(6.58±0.66)%,P<0.001],cyclin D1和Bcl-2蛋白水平降低(均P<0.001),p21和Bax蛋白水平升高(均P<0.001)。与miR-369-3p+pcDNA组比较,过表达ACTN4后,肝癌MHCC97H细胞增殖能力提高(细胞培养72 h吸光度分别为1.12±0.11和0.68±0.06,P<0.001),G1期细胞比例显著降低[(38.81±3.24)%和(51.80±4.57)%,P<0.001],S期细胞比例显著升高[(31.65±3.11)%和(15.69±1.44)%,P<0.001],细胞凋亡率降低[分别为(13.86±1.37)%和(22.69±2.24)%,P<0.001],cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达量升高(均P<0.001),p21和Bax蛋白相对表达量降低(均P<0.001)。结论miR-369-3p可通过靶向调控ACTN4的表达使肝癌细胞周期阻滞于G1期,抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡。

肾炎消白颗粒对糖尿病肾病大鼠α-actinin-4表达的影响

目的探讨肾炎消白颗粒对糖尿病肾病(DN)模型大鼠α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)表达的影响,探讨肾炎消白颗粒防治DN的机制。方法采用高糖、高脂饮食并行单侧肾切除加链脲佐菌素(STZ)方法致DN大鼠模型,随机分为空白对照组、模型对照组、盐酸贝那普利(洛汀新)组、肾炎消白颗粒高剂量组、肾炎消白颗粒低剂量组共5组。观察8周,检测大鼠尿白蛋白排泄率(UAE);将肾脏病理切片进行PAS染色,用光镜观察大鼠肾脏组织的病理改变;采用Westernblot技术检测大鼠肾组织α-actinin-4蛋白表达水平;采用RT-PCR方法检测大鼠肾组织α-actinin-4 mRNA表达。结果肾炎消白颗粒能明显降低尿UAE,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);肾炎消白颗粒能减轻肾组织中系膜基质增生、基底膜的增厚及减轻足突的融合;采用Western-blot法,肾炎消白颗粒能上调肾组织α-actinin-4蛋白表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);肾炎消白颗粒能上调肾组织α-actinin-4 mRNA的表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论肾炎消白颗粒能够降低DN模型大鼠尿UAE,通过上调DN大鼠肾脏足细胞相关蛋白α-actinin-4及α-actinin-4 mRNA的表达,降低尿蛋白的排出,达到保护肾脏的目的,延缓模型大鼠DN进展。