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魏氏梭菌α-毒素基因探针的制备及应用 被引量:1
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作者 王开功 周碧君 +3 位作者 王琛 方英 李海阔 文明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期198-201,共4页
以A型魏氏梭菌贵州分离株为材料,提取染色体DNA,经PCR扩增和酚:氯仿抽提回收得到242bp的α 毒素基因部分片段,用地高辛标记制备了α 毒素基因探针。该探针不与埃希氏大肠杆菌、都柏林沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪丹毒杆菌、蜡样芽胞杆... 以A型魏氏梭菌贵州分离株为材料,提取染色体DNA,经PCR扩增和酚:氯仿抽提回收得到242bp的α 毒素基因部分片段,用地高辛标记制备了α 毒素基因探针。该探针不与埃希氏大肠杆菌、都柏林沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪丹毒杆菌、蜡样芽胞杆菌及多杀性巴氏杆菌等细菌的DNA样品发生反应,只与魏氏梭菌DNA样品呈阳性反应,能检出300pg的DNA样品;应用探针对40株魏氏梭菌进行了Dot Blotting检测,结果与生化试验鉴定的符合率达到90%,表明该探针具有较高的特异性和灵敏度,可应用于临床上魏氏梭菌的检测。 展开更多
关键词 魏氏梭菌 α-毒素基因探针 制备技术 染色体DNA PCR扩增
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运用压电石英晶体生物传感器检测产气荚膜梭菌α毒素的实验研究 被引量:6
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作者 赵渝徽 陈鸣 +4 位作者 黄庆 姚春艳 闫慧慧 匡红 府伟灵 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期320-323,共4页
目的研究运用压电石英晶体生物传感器对产气荚膜梭菌α毒素(CPα)进行检测的方法和反应条件。方法按照碱基配对的原则,设计特异的产气荚膜梭菌α毒素基因寡核苷酸探针并利用巯基自组装技术固定在石英晶体上,运用压电石英晶体生物传感器... 目的研究运用压电石英晶体生物传感器对产气荚膜梭菌α毒素(CPα)进行检测的方法和反应条件。方法按照碱基配对的原则,设计特异的产气荚膜梭菌α毒素基因寡核苷酸探针并利用巯基自组装技术固定在石英晶体上,运用压电石英晶体生物传感器的"质量效应"对聚合酶链反应(PCR)扩增得到的产气荚膜梭菌α毒素靶基因进行杂交检测,并探讨不同pH值和不同离子强度的缓冲液对检测的影响。结果压电石英晶体生物传感器成功检测出产气荚膜梭菌α毒素;pH7.6的缓冲液和0.64mol/L的NaCl溶液最适合于检测。结论压电石英晶体生物传感器能够有效地检测产气荚膜梭菌α毒素,有望对临床上开展毒素诊断提供一种新的手段。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌α毒素 基因 压电石英晶体生物传感器 寡核苷酸探针
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分子生物学技术在赤潮毒素分析监测中的应用 被引量:1
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作者 冀秀玲 金桂文 +1 位作者 程金平 王文华 《海洋科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期107-113,共7页
有毒赤潮事件的频繁爆发,不仅对海洋生物及自然资源造成了极大的危害,还严重威胁到公众健康。因此,各国都在积极寻求快速灵敏的检测方法,加强对赤潮毒素的分析及监测。现代分子生物学技术的发展为新型快速检测方法的建立提供了可能。对... 有毒赤潮事件的频繁爆发,不仅对海洋生物及自然资源造成了极大的危害,还严重威胁到公众健康。因此,各国都在积极寻求快速灵敏的检测方法,加强对赤潮毒素的分析及监测。现代分子生物学技术的发展为新型快速检测方法的建立提供了可能。对利用分子生物学技术对赤潮毒素进行检测的几种方法———全细胞PCR法、DNA探针法及信使基因细胞受体法进行了讨论。这些新技术旨在检测出环境中的痕量赤潮毒素和有害生物,杜绝赤潮毒素或有毒藻进入到食物链,从而最大限度保护公众健康、水环境及自然资源。 展开更多
关键词 分子生物学 毒赤潮 海洋生物 自然资源 全细胞PCR法 DNA探针法
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El Tor霍乱弧菌的霍乱毒素基因测定
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作者 蒋小皖 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1996年第1期40-42,共3页
霍乱弧菌的主要致病因素是霍乱毒素(cholera toxin,CT)蛋白(CT 蛋白)。对未引起流行的46株 El Tot 霍乱弧菌进行 CT 基因测定,用 CT 基因1Kb 片断作探针,行分子杂交。原位杂交和Southernblot 实验结果相吻合:46株 El Tor 菌中,45株含有 ... 霍乱弧菌的主要致病因素是霍乱毒素(cholera toxin,CT)蛋白(CT 蛋白)。对未引起流行的46株 El Tot 霍乱弧菌进行 CT 基因测定,用 CT 基因1Kb 片断作探针,行分子杂交。原位杂交和Southernblot 实验结果相吻合:46株 El Tor 菌中,45株含有 CT 基因,其中单拷贝为44株,占98%,双拷贝为1株,占2%。这些发现表明:尚未引起流行的霍乱菌株,也含有 CT 基因,具有使人致病,引发流行的可能性。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 霍乱毒素 基因探测
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TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR联合检测难辨梭菌菌属基因及毒素基因方法学的建立 被引量:5
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作者 邵冬华 季娜 +1 位作者 梁国威 刘静 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期576-580,共5页
目的:建立一种简便、快速难辨梭菌菌属鉴定及其毒素基因筛查的荧光定量PCR检测方法。方法采用TaqMan-MGB探针,通过real-time PCR分析系统,同时检测难辨梭菌菌属基因磷酸丙糖异构酶(Tpi)、A毒素(TcdA)、B毒素(TcdB)及缺失部分... 目的:建立一种简便、快速难辨梭菌菌属鉴定及其毒素基因筛查的荧光定量PCR检测方法。方法采用TaqMan-MGB探针,通过real-time PCR分析系统,同时检测难辨梭菌菌属基因磷酸丙糖异构酶(Tpi)、A毒素(TcdA)、B毒素(TcdB)及缺失部分基因的A毒素(TcdAT),从特异度、灵敏度及其抗干扰性等方面评价该方法,并联合全自动酶联荧光免疫系统(VIDAS)检测50例临床不明原因腹泻病例粪便标本探讨其应用价值。结果难辨梭菌非产毒株Tpi基因(tpi)的检测下限是6×10-2 CFU/μl,产毒株tpi、tcdA、tcdB、tcdAT的检测下限为6×10-1 CFU/μl;难辨梭菌非产毒株tpi检测下限批内、批间变异率分别为2.1%和2.3%;产毒株tpi、tcdA、tcdB、tcdAT的检测下限批内、批间变异率依次为3.0%和3.4%、2.9%和3.2%、5.3%和5.7%、2.7%和2.8%。临床常见分离菌株及梭菌属其他细菌对检测无干扰。50例不明原因腹泻病例粪便标本中,采用TaqMan-MGB探针实时荧光PCR与VIDAS酶标免疫检测39例阴性标本其符合率为100%;6例两方法检测均为阳性;3例VIDAS酶标免疫检测为可疑及2例为阴性,经TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测为A-/B+菌株。结论建立的TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR具有高通量、高灵敏度和重复性好的特性,且可筛查携带缺失部分基因的TcdA难辨梭菌菌株。 展开更多
关键词 难辨梭菌 TAQMAN-MGB探针 实时荧光定量PCR 菌属基因 毒素基因
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