国产与进口α-^(32)p-dATP用于HBV DNA探针的对比研究

随着基因工程及分子生物学的快速进展,对检测基因所必需的探针及其应用研究已提到日程上来。为此制备国产的长臂生物质及光敏生物素已作为国家重大课题进行研究。鉴于同位素探针的高度敏感性及特异性,其在国内、外的有关工作中至今仍占有相当的比重。我们在制备^(32)P HBV DNA探针诊断药盒的过程中,对国产的和英国的α-^(32)P-dATP进行对比试验。

利用γ-^(32)P-ATP、^(51)Cr研究蛋白激酶C对血管内皮细胞CD44表达及内皮粘附功能的影响

利用γ-32P-ATP5、1Cr示踪法研究了蛋白激酶C(Protein Kinase C,PKC)对血管内皮细胞CD44分子表达及内皮粘附功能的影响及机制。通过测定外源性底物对γ3-2P-ATP的摄入量确定人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)PKC的活性;以γ-32P-ATP及聚丙烯酰胺凝胶电泳测定CD44分子的磷酸化;用流式细胞仪测定CD44分子的表达;以51Cr标记血小板测定HUVECs的粘附率。结果表明,用PKC激活剂十四酰佛波醇乙酯(Phorbol-myristate-acetate,PMA)作用人HUVECs 30 min,PKC的活性达到最高,CD44的磷酸化达最大,为4 960±136 min-1.μg-1,CD44分子表达及HUVECs的粘附率也达到最高水平;与对照组相比,P均<0.001。这说明PKC能通过磷酸化作用上调CD44分子的表达,并增强内皮细胞的粘附功能。

酶法合成高比活度[α-^(32)P]dATP

本文介绍了通过一系列连续的酶促反应制备高比活度[α-^(32)P]dATP的方法。该法简便、不需要中间产物的分离纯化、操作放射性步骤少、制备周期短,产品用高压液相制备色谱分离纯化,效率高、纯度在98%以上。用该法制备的[α-^(32)P]dATP比活度高,能够满足遗传工程研究中进行DNA缺口翻译标记及分子杂交等工作的需要。

α-^(32)P-dGTP的酶法制备

以γ－３２Ｐ－ＡＴＰ作磷酸供体，经三步连续的酶反应制备α－３２Ｐ－ｄＧＴｐ。相对于投料的３２Ｐｉ（Ｎａ３３２ＰＯ４）量，产品收率达９３％。分离后的标记物经高效液相色谱（ＨＰＬＣ）测淀，放射化学纯度为９７％。标记物比活度为１．６×１０１７Ｂｑ／ｍｏｌ。

碱性成纤维细胞生长因子对人胚肾HEK293细胞蛋白激酶B活性的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人胚肾HEK293细胞蛋白激酶B(PKB)活性的影响。方法以[γ3-2P]ATP掺入法观察不同作用时间bFGF对HEK293细胞膜、胞浆PKB活性的影响。结果75μg/LbFGF刺激HEK293细胞10 min,使胞液和膜性PKB酶活性达高峰。Wortmannin预处理后,HEK293细胞膜和胞浆PKB活性在各时间点均明显降低。结论bFGF能通过PI3K途径迅速激活HEK293细胞的PKB活性。

η-^(24)Mg和η-^(32)S介核的束缚态

η-^(24)Mg和η-^(32)S分别被看作为^(12)C-η-^(12)C和^(16)O-η-^(16)O三体系统,利用Born-Oppenheimer近似方法,先严格求解η介子相对于^(12)C+^(12)C(^(16)O+^(16)O)运动的双中心问题,再求解^(12)C+^(12)C(^(16)O+^(16)O)的相对运动方程.假设η-^(12)C和η-^(16)O相互作用为S波可分势,在上述情况下计算了η-^(24)Mg和η-^(32)S的结合能,所得计算结果与其它模型计算结果相接近.