α-亚麻酸甾醇酯的理化特性及氧化稳定性研究

本文研究了采用无溶剂直接酯化法合成得到的α-亚麻酸甾醇酯的理化特性、脂溶性、结晶特性、油脂氧化稳定性。结果表明,α-亚麻酸甾醇酯具有理想的理化特性,酸价和过氧化值分别为1.2 mg KOH/g和0.56meq/kg,反式脂肪酸含量小于0.1%,在不同植物油脂中的溶解性达到30%以上,结晶温度区间在-25.9～-29.6℃之间。α-亚麻酸甾醇酯在大豆油、油菜籽油和亚麻籽油中的浓度分别小于0.1%、0.1%和0.3%,油脂的氧化诱导时间随浓度增加而增加。因此α-亚麻酸甾醇酯良好的理化特性表明其在不同形态食品、保健品和医药产品等中将具有较广的应用范围,是一种具有较高营养价值的功能性食品添加剂。

α-亚麻酸甾醇酯检测技术研究

植物甾醇酯是一种新型功能性食品添加剂,具有良好亲脂性和降胆固醇效果。采用薄层色谱法、紫外分析法、红外分析法和气相色谱法相结合的方法对α-亚麻酸甾醇酯产品进行分析检测,为α-亚麻酸甾醇酯和甾醇的分离、定性和定量提供参考。

酶法和化学法制备α-亚麻酸甾醇酯的降脂活性研究

目的:探明由酶法和化学法制备的α-亚麻酸甾醇酯的降脂活性。方法:在对α-亚麻酸甾醇酯组成和品质特性测定的基础上,采用金黄色地鼠高脂模型为研究对象,以市售甾醇酯为对照,研究合成产物对动物血清和肝脏中脂质水平、抗氧化能力以及肝脏LDL受体mRNA表达水平的影响。结果:由酶法和化学法制备的α-亚麻酸甾醇酯纯度在95%以上,共轭二烯值和共轭三烯值未超过2.5mmol/kg和0.6mmol/kg,反式脂肪酸含量小于0.1%。与高脂对照相比,由α-亚麻酸甾醇酯饲喂的金黄地鼠血清中TC,TG,LDL-C和HDL-C以及肝脏中TC,TG水平显著下降,且效果显著优于市售甾醇酯;由α-亚麻酸甾醇酯饲喂的地鼠肝脏中LDL受体mRNA表达水平显著高于高脂对照组和市售甾醇酯组;甾醇酯对机体抗氧化水平均未产生显著影响。结论:酶法和化学法制备的α-亚麻酸甾醇酯组成较为一致,并且均具有显著的降脂活性,但两者没有显著差异,其降脂机制与增加肝脏中LDL受体mRNA表达水平有密切关系。

微波催化合成α-亚麻酸植物甾醇酯技术研究

采用微波技术合成α-亚麻酸植物甾醇酯,研究了植物甾醇和α-亚麻酸不同摩尔比、催化剂添加量、微波功率、反应时间对α-亚麻酸植物甾醇酯产率的影响。正交优化α-亚麻酸甾醇酯合成的优化工艺条件为:α-亚麻酸与植物甾醇的摩尔比3.5:1,微波功率660W,反应30min(4min/次,加热8次),甲醇钠添加量0.75%,此时α-亚麻酸甾醇酯的产率为60.8%;产品经重结晶后产品纯度达90.2%。

无溶剂直接酯化法合成α-亚麻酸植物甾醇酯工艺研究

研究了植物甾醇与α-亚麻酸无溶剂直接酯化法合成α-亚麻酸植物甾醇酯的最佳工艺条件。通过单因素试验研究了α-亚麻酸和植物甾醇不同质量比、催化剂添加量、反应时间及反应温度对α-亚麻酸植物甾醇酯酯化率的影响。通过正交试验对α-亚麻酸植物甾醇酯合成工艺进行优化，最终得到优化工艺条件为：即真空度为0．03～0．04MPa，α-亚麻酸与植物甾醇的质量比4：1，催化剂量为2．5％，反应时间为8h，反应温度140℃，在此条件下，α-亚麻酸植物甾醇酯的酯化率为（98．88±0．984）％。因此，通过本论文的研究得到了一种绿色、安全、高效的α-亚麻酸植物甾醇酯合成工艺。

脂肪酶催化合成α-亚麻酸植物甾醇酯的工艺研究

酶法催化合成甾醇酯工艺是当前的研究重点之一。本文首次研究了脂肪酶催化合成α-亚麻酸植物甾醇酯,重点通过单因素和正交实验考察了多种脂肪酶、有机溶剂及其添加量、物料比、反应温度、反应时间等多种因素对酯化率的影响,并采用薄层色谱法和红外光谱法对产品进行了分析鉴定。研究结果表明,选取Novozyme 435和异辛烷作为合成反应的催化剂和溶剂,添加量分别为5%和1∶1.6(溶剂体积?底物质量),在α-亚麻酸和甾醇摩尔比为3∶1、反应温度为55℃条件下反应24h时,酯化率达到40.65%,产品经精制后α-亚麻酸植物甾醇酯纯度能达到85%以上。通过本文的研究,成功得到了一种酶法催化合成α-亚麻酸植物甾醇酯的工艺。

PW_(12)/SnO_2催化合成α-亚麻酸植物甾醇酯

用SnO2固载磷钨杂多酸(PW12/SnO2)催化合成α-亚麻酸植物甾醇酯,研究了醇酸摩尔比、反应温度、催化剂用量、反应时间等因素对酯化率的影响。实验结果表明:PW12/SnO2是合成α-亚麻酸植物甾醇酯的优良催化剂,在植物甾醇与α-亚麻酸摩尔比为1∶3,催化剂用量为(占总反应物料的质量分数)0.6%,温度50℃,反应时间5 h条件下,植物甾醇的酯化率为85.92%,所得产品α-亚麻酸植物甾醇酯的纯度为91.7%。

植物甾醇α-亚麻酸酯的制备及在负载虾青素脂质体中的应用

目的:提高虾青素的水溶性、稳定性。方法:以植物甾醇和α-亚麻酸为原料制备植物甾醇α-亚麻酸酯;以大豆磷脂为膜材,采用薄膜—超声法构建虾青素—植物甾醇α-亚麻酸酯复合脂质体。结果:红外光谱法和核磁共振法结构分析表明产物为植物甾醇α-亚麻酸酯,气相色谱测定其纯度为(90.72±2.09)%;虾青素—植物甾醇α-亚麻酸酯复合脂质体的包封率为(95.00±0.66)%,平均粒径为(158.70±9.70)nm,多相分散系数(PDI)为0.35±0.02,zeta电位为(-33.87±2.48)mV。透射电子显微镜观察到复合脂质体囊泡近似球形、形状规则、分散性好。结论:植物甾醇α-亚麻酸酯可用于制备负载虾青素的脂质体。

α-亚麻酸植物甾醇酯对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的保护作用

目的 探讨α-亚麻酸植物甾醇酯（ALA-PS）对动脉粥样硬化（AS）的影响及其分子机制.方法 苏木素-伊红（HE）和油红O染色观察高脂喂养和ALA-PS干预组载脂蛋白E（ApoE）基因敲除（ApoE KO）小鼠AS形成.酶比色法检测血清胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）含量.Western blot法检测肝脏羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMGCR）和过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）的蛋白表达.结果 与模型组比较,ALA-PS干预组小鼠AS面积显著减少,血清TC、TG显著降低（P＜0.05）,分别为10.33 mmol/L和1.39 mmol/L.同时肝脏HMGCR和PPARα蛋白表达分别降低46.8％和升高1.63倍.结论 ALA-PS能有效改善ApoE KO小鼠的AS,其分子机制可能与调节HMGCR和PPARα蛋白表达有关.

α-亚麻酸植物甾醇酯调控TGF-β1/Smad信号通路改善小鼠肝纤维化

目的探讨α-亚麻酸植物甾醇酯(PS-ALA)对高脂高胆固醇饮食(HFCD)诱导的肝纤维化的改善作用,及其抑制TGF-β1/Smad信号通路的分子机制。方法将50只雄性C57BL/6J小鼠随机分为Control、HFCD、ALA、PS和PS-ALA组,每组10只。Control组给予普通饲料;HFCD组给予高脂高胆固醇饲料(45%kcal脂肪、2%胆固醇);ALA、PS和PS-ALA组给予相同的高脂高胆固醇饲料并分别添加1.3%ALA、2%PS和3.3%的PS-ALA。24w后,Masson染色评估肝脏纤维化严重程度;试剂盒检测HYP、ALT和AST水平;免疫荧光法检测肝脏α-SMA的表达水平;Western-blot法检测肝脏TGF-β1、Smad2/3、P-Smad2、α-SMA、COL1A1及CTGF蛋白表达水平。结果与Control组相比,HFCD组小鼠肝脏组织出现大量胶原沉积,同时伴随α-SMA蛋白表达水平上调,提示肝脏纤维化发生。PS-ALA显著改善HFCD诱导的小鼠肝脏纤维化,并显著降低血清ALT、AST以及肝脏HYP水平(P<0.05);PS-ALA显著下调纤维化关键调节因子TGF-β1及其靶分子P-Smad2、COL1A1及CTGF的蛋白表达水平(P<0.05)。结论PS-ALA干预能有效改善HFCD诱导的肝纤维化,其分子机制与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关。

α-亚麻酸植物甾醇酯抑制氧化应激改善非酒精性脂肪性肝病

目的探讨α-亚麻酸植物甾醇酯(plant sterol ester ofα-linolenic acid,ALA-PS)对非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的改善作用,并从抑制氧化应激(oxidative stress,OS)角度探讨其可能的分子机制。方法50只雄性C57BL/6J小鼠随机分为5组(n=10):即对照组(control)、高脂高胆固醇组(HFD)、植物甾醇组(PS)、α-亚麻酸组(ALA)和α-亚麻酸植物甾醇酯组(ALA-PS)。Control组给予普通饲料,HFD组给予高脂高胆固醇饲料,PS、ALA和ALA-PS组给予相同的高脂高胆固醇饲料,并分别添加2%PS、1.3%ALA和3.3%ALA-PS。16w后,油红O染色检测小鼠肝脏脂质沉积情况;DCFH-DA探针检测肝脏ROS水平;试剂盒检测血清及肝脏MDA和GSH水平;蛋白免疫印迹法检测小鼠肝脏抗氧化关键调控因子Nrf2和抗氧化酶HO-1的蛋白表达水平。结果与Control组相比,HFD组小鼠肝脏组织出现大量脂质沉积、肝脏ROS的产生显著增多、血清及肝脏MDA水平显著增加、GSH水平显著降低、肝脏Nrf2和HO-1蛋白表达水平显著下调,差异均具有统计学意义。与HFD组相比,ALA-PS干预显著减轻HFD诱导的肝脏脂肪变性、减少肝脏ROS水平、降低血清及肝脏MDA水平、增加GSH水平,并显著上调肝脏Nrf2和HO-1的蛋白表达水平,差异均具有统计学意义。结论ALA-PS对NAFLD具有显著的改善作用,其分子机制与抑制OS有关。

α-亚麻酸植物甾醇酯调节SIRT1抑制油酸和胆固醇联合诱导的HepG2细胞焦亡

目的 探讨α-亚麻酸植物甾醇酯(PS-ALA)对油酸和胆固醇(OA/Cho)联合诱导的肝细胞焦亡的改善作用,并基于SIRT1信号分子进一步探索潜在的分子机制。方法 采用OA/Cho联合诱导HepG2细胞焦亡,同时给予PS-ALA、PS、ALA干预。油红O染色观察细胞脂质沉积;Hoechst33342/PI双染评价焦亡发生情况;蛋白免疫印迹检测细胞焦亡信号通路关键蛋白NLRP3、Caspase-1 p20、GSDMD-N的表达水平;免疫荧光染色检测NLRP3的表达水平;免疫荧光双标记进行SIRT1和NLRP3以及SIRT1和GSDMD-N共定位。结果 与正常对照组相比,OA/Cho组细胞内有大量脂滴沉积,并且发生明显的细胞焦亡,细胞焦亡信号通路关键蛋白NLRP3、Caspase-1 p20和GSDMD-N的表达水平显著增加,PS-ALA干预后显著改善OA/Cho诱导的细胞内脂质沉积,并有效抑制细胞焦亡。进一步的分子机制研究发现PS-ALA显著上调SIRT1的表达水平并同时降低NLRP3和GSDMD-N的表达水平。结论 PS-ALA能有效抑制OA/Cho诱导的HepG2细胞焦亡,其分子机制可能与激活SIRT1信号分子有关。

α-亚麻酸植物甾醇酯调控Nrf2/GPX4信号通路抑制HepG2细胞铁死亡

目的探讨α-亚麻酸植物甾醇酯(PS-ALA)对油酸与铁死亡诱导剂(OA/erastin)联合诱导的HepG2细胞铁死亡的改善作用,并基于Nrf2/GPX4信号通路进一步探索其潜在分子机制。方法采用1mmol的OA和10μmol的erastin联合诱导HepG2细胞发生铁死亡,同时给予ALA、PS和PS-ALA干预。油红O染色观察HepG2细胞脂肪变性程度;Hoechst/PI双染评价铁死亡发生;蛋白免疫印迹检测铁死亡相关蛋白Nrf2、GPX4、HO-1、NQO1及ptgs2的表达水平;荧光探针检测细胞内ROS与脂质过氧化物水平。结果与Control组相比,OA/erastin组细胞内有大量脂质沉积,ROS和脂质过氧化物显著增多,发生明显铁死亡。PS-ALA干预显著减轻OA/erastin诱导的HepG2细胞脂质沉积、减少细胞ROS与脂质过氧化物产生,抑制铁死亡。进一步的分子机制研究表明PS-ALA显著上调HepG2细胞Nrf2及其靶基因GPX4、HO-1与NQO1的蛋白表达水平。结论PS-ALA能有效抑制OA/erastin诱导的HepG2细胞铁死亡,其分子机制可能与上调Nrf2/GPX4通路有关。