经α-半乳糖酰基鞘氨醇体外扩增Vα24自然杀伤T细胞的生物学特性

目的建立α-半乳糖酰基鞘氨醇(α-GalCer)诱导Vα24自然杀伤T(NKT)细胞体外扩增方法,评价其生物学特性。方法将26份脐带血或外周血标本分为3组:A1组(n=5):脐带血单个核细胞(MNC)在负载α-GalCer的脐带血前体细胞源性树突状细胞(DC)刺激下诱导扩增Vα24NKT细胞;A2组(n=5):外周血MNC在负载α-GalCer的外周血单核细胞来源DC(Mo-DC)刺激下诱导扩增Vα24NKT细胞;B组(n=16):在外周血MNC中直接添加α-GalCer,诱导扩增其中的Vα24NKT细胞。采用MTT法检测NKT细胞增殖能力、肿瘤细胞杀伤活性和混合淋巴细胞反应抑制能力,ELISA法测定IL-4和干扰素(IFN)-γ生成。结果A1、A2和B组NKT细胞扩增倍数分别为128(95～207)、250.5(179.6～790.6)和326(101～2136)倍,B组扩增效果明显优于A1组(P=0.038)。NKT细胞在佛波酯刺激下,3d刺激指数为1.80±0.41;脐血或外周血NKT细胞24h分泌IL-4/IFN-γ比值为0.30±0.13和0.28±0.18;能杀伤HL60、KG1a和Raji细胞,对K562细胞无效;NKT细胞及其培养上清均能抑制混合淋巴细胞反应。结论α-GalCer能在短期内大量扩增Vα24NKT细胞。扩增细胞能大量分泌IL-4和IFN-γ,杀伤肿瘤细胞系,并抑制T细胞同种免疫应答。

篦齿虎耳草正丁醇部位的化学成分研究

目的对篦齿虎耳草Saxifraga umbellulata var.pectinata的正丁醇部位化学成分进行研究。方法利用多种色谱层析方法(硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、ODS反相柱色谱和半制备HPLC等)进行分离纯化,运用理化性质结合现代波谱学(紫外分光光度法、红外分光光度法、核磁共振波谱法、质谱等)技术进行结构鉴定。结果从篦齿虎耳草正丁醇部位中分离得到31个化合物,分别鉴定为(2S,4S)-6-(4-羟基苯基)已烷-2,4-二醇(1)、(4R)-4-羟基-6-(3,4-二羟基苯基)己烷-4-醇(2)、(2R)-6-(3,4-二羟基苯基)-2-羟基己烷-4-酮(3)、6-(4-羟基苯基)已烷-2,4-二醇(4)、(E)-9,10-二羟基-苯已基-2-烯-4-酮(5)、rhododendrin(6)、对香豆酸(7)、对羟基苯丙酸(8)、异落叶松脂素(9)、(5S)-5-丁氧基-7-(3,4-二羟基苯基)-1-(4-羟基苯基)-3-庚酮(10)、(5S)-5-丁氧基-1,7-二(4-羟基苯基)-3-庚酮(11)、1-(4-羟基苯基)-7-(3,4-二羟基苯基)-5-O-β-D-葡萄糖苷-3-庚酮(12)、5-羟基-1-(4-羟基苯基)-7-(3,4-二羟基苯基)-3-庚酮(13)、alusenone(14)、白桦林烯酮(15)、hannokinol(16)、alnuheptanoid A(17)、5-羟基-1,7-二(4-羟基苯基)-3-庚酮(18)、槲皮素-3,7-二-O-α-L-鼠李糖苷(19)、山柰酚-3,7-二-O-α-L-鼠李糖苷(20)、金丝桃苷(21)、鼠李亭-3-O-半乳糖苷(22)、鼠李素-3-O-鼠李糖苷(23)、槲皮苷(24)、杨梅素-3-O-β-D-半乳糖苷(25)、山柰酚-3-O-(6’’-乙酰基)-β-D-半乳糖苷(26)、槲皮素(27)、催吐萝芙木醇(28)、8,9-dihydromegastigmane-4,6-diene-3-one(29)、tubiflorone(30)、chakyunglupulin A(31)。结论化合物1~3为新化合物,依次命名为虎耳草酚二醇、虎耳草酚和(R)-纤孔菌酚A,化合物4、8~11、13、17~20、22、23、26、28~31均为首次从虎耳草属植物中分离报道,化合物6、7、12、14、15、16、24和25均为首次从篦齿虎耳草中分离报道,其中化合物10和11为人工产物。上述黄酮类、二苯庚烷类、单苯烷类和环烯类成分在虎耳草属植物中具有一定的化学分类学价值。

稳定自然杀伤T细胞相关的哮喘发病机制及iNKT细胞为靶向的哮喘治疗进展

稳定自然杀伤T细胞(iNKT)同时具备NK细胞受体和T细胞受体,对保守进化的抗原提呈细胞CD1d有限制作用,且具备产生Th1-和Th2-细胞因子的突出能力,已经被证明在哮喘等过敏性气道炎症的病理变化中起重要作用。研究iNKT细胞在过敏性哮喘机制中的作用及以iNKT细胞为靶向的哮喘治疗进展对进一步研究过敏性哮喘具有积极意义。

NKT细胞及其功能

近年来发现存在一类与传统的αβT细胞(CD4^+CD8^+)不同的T细胞,其αβTCR结构单一,既有T细胞抗原受体又有NK受体且显示T细胞与NK细胞两方面性质,因而称为NKT细胞。NKT细胞通过识别由非经典的MHCI类分子——CD1d分子递呈的糖脂类抗原(a-半乳糖酰基鞘氨醇,α-Gal-Cer)或寄生虫的糖磷脂酰肌醇(GPI),在Th1和Th2的细胞因子的产生及穿孔素介导的细胞毒作用中发挥了重要的作用。

辅助性T细胞17/调节性T细胞失衡在大鼠自身免疫性肝炎模型中的研究

目的研究辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)失衡在Wistar大鼠急、慢性免疫性肝炎模型中的意义和作用。方法将30只雌性Wistar大鼠随机分为对照组(0.9%NaCl),实验组-1[α-半乳糖酰基鞘氨醇(α-galcer)40μg·kg^-1],实验组-2[刀豆蛋白A(ConA)12.5 mg·kg^-1]。给药7周后,检测肝功能生化指标;用苏木精-伊红(HE)染色法观察病理改变情况;用免疫组织化学方法检测叉头盒蛋白3(Foxp3)、维A酸相关孤儿核受体γt(RORγt)蛋白表达情况;用酶联免疫吸附实验法检测外周血白细胞介素(IL)-17 A、IL-6、IL^-10、转化生长因子-β1(TGF-β1)细胞因子的含量;用流式细胞分析术检测Th17和Treg频率变化,并计算Th17/Treg比值。结果对照组、实验组-1、实验组-2血清中谷丙转氨酶(GPT)分别为(48.44±27.00),(82.50±8.61)和(278.96±34.44)U·L^-1;谷草转氨酶(GOT)分别为(95.02±22.10),(186.08±72.36)和(293.64±27.26)U·L^-1;血清总胆红素(TBiL)分别为(0.86±0.42),(1.82±0.78)和(14.88±7.67)μmol·L^-1;白蛋白(ALB)分别为(34.64±1.90),(27.13±4.26)和(21.55±2.65)g·L^-1;IL^-17A分别为(39.84±21.04),(68.24±13.01)和(238.11±32.80)pg·mL^-1;IL-6分别为(69.23±14.24),(91.84±5.62)和(99.09±22.44)pg·mL^-1;IL^-10分别为(53.83±9.14),(81.67±15.26)和(99.38±25.98)pg·mL^-1;TGF-β1分别为(105.86±24.98),(161.86±29.89)和(219.73±59.68)pg·mL^-1;对照组、实验组-1、实验组-2外周血中Th17细胞频率分别为(1.33±0.20)%,(5.55±1.57)%和(3.06±0.56)%;Treg细胞频率分别为(2.53±0.42)%,(4.96±0.61)%和(12.05±1.00)%;Th17/Treg比率分别为0.52±0.31,1.12±0.30和0.25±0.04;对照组、实验组-1、实验组-2肝组织中Foxp3蛋白表达(IOD值)分别为(1.67±0.12),(1.36±0.11)和(1.99±0.14);对照组分别与实验组-1与实验组-2相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Th17/Treg比值在急性免疫性肝炎模型中明显上升,在慢性自身免疫性肝炎模型中明显下降,Th17/Treg的失衡参与自身免疫性肝炎疾病的发生发展且与其免疫状态和病情进展密切相关。