ralb34k2-1刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞对蛋白质PTM代谢物修饰及DENV-2易感性的影响

目的探讨白纹伊蚊唾液蛋白34k2-1(ralb34k2-1)刺激的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7细胞)胞内蛋白翻译后代谢修饰(PTMs)的变化及对2型登革病毒(DENV-2)易感性的影响。方法利用抗乙酰化、乳酰化、琥珀酰化、巴豆酰化和丙二酰化的泛特异性抗体,通过免疫印迹法(Western blot)检测ralb34k2-1蛋白刺激后不同时相的RAW264.7细胞蛋白质翻译后代谢物修饰的情况,酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)检测细胞内外的乳酸含量;用2 mg/L ralb34k2-1预处理RAW264.7细胞24 h后、继续培养2 d、再用DENV-2感染细胞,通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)检测感染18 h和36 h后的病毒核酸变化,分析ralb34k2-1预处理后对病毒易感性的影响;检测感染前后胞内白细胞介素1β-(IL-1β)、白细胞介素10-(IL-10)、肿瘤坏死因子β-(TGF-β)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg-1)mRNA的相对表达情况,分析ralb34k2-1预处理对细胞免疫状态及细胞极化的影响。结果胞内不同的代谢物对蛋白质的修饰程度主要表现为乳酰化修饰>乙酰化修饰>琥珀酰化修饰;在时相上,除琥珀酰修饰外,随时间的延长其余代谢物对蛋白质的修饰有增多的趋势,其中以6 h乳酰化修饰最多;ralb34k2-1刺激对细胞的乳酸产生无明显影响;经ralb34k2-1预处理后胞内DENV-E相对表达量较对照组高5倍以上,IL-10 mRNA的相对表达在感染前后均保持高水平(6~8倍);在感染前iNOS/Arg比值为3.46±1.59,但受ralb34k2蛋白预处理的细胞在感染后表现iNOS表达下调的趋势。结论蚊唾液ralb34k2蛋白可能通过调控PTM代谢物修饰的方式,改变细胞的免疫状态从而增强登革病毒的易感性。

小鼠β-酪蛋白基因序列调控人-tPA突变体基因在小鼠乳腺的表达

为验证克隆的小鼠 β -酪蛋白基因序列调控外源基因表达的能力 ,将人t PA突变体基因的信号肽 -前肽编码序列用小鼠 β -酪蛋白的信号肽编码序列替换 ,人t PA突变体成熟肽cDNA融合到小鼠 β -酪蛋白基因的第 2外显子中 ,从而构建成旨在应用小鼠 β -酪蛋白基因序列调控人t PA突变体基因在小鼠乳腺中表达的载体。融合基因经显微注射至小鼠的受精卵中 ,2 85枚注射的受精卵移植到 13只受体小鼠。经PCR和Southern杂交鉴定 ,4 2只出生小鼠中有 12只为转基因阳性鼠。 7只转基因阳性鼠乳汁中表达人t PA突变体 ,最高表达水平为 3.6 5 93μg/ml,证明小鼠 β-酪蛋白基因序列能够调控人t PA突变体基因在转基因小鼠的乳汁中表达出具有生物活性的人t PA突变体 ,为进一步制备人t PA突变体基因敲入小鼠模型提供了理论和实验依据。

氧化型低密度脂蛋白新型受体-1的研究进展

目的 介绍氧化型低密度脂蛋白新型受体 1(LOX 1)的研究进展。方法 以近年来发表的文献为依据 ,从LOX 1的基因组结构、表达调控、蛋白质的分子结构、翻译后的加工和修饰、LOX 1的存在形式、表达调节、与NK(自然杀伤 )细胞表面表达的C型植物凝集素的关系及其与动脉粥样硬化的关系等几个方面对LOX 1的研究进展进行综述。结果与结论 对LOX 1的深入研究将有助于对心血管疾病发病机制的进一步理解 。

一种嵌合型调控元件在肿瘤靶向基因治疗中的应用

肿瘤靶向基因治疗成功的关键是调控治疗基因在肿瘤细胞中特异、高效地表达。首次构建一种嵌合型表达调控元件,旨在转录水平、转录后水平和翻译水平上实现联合调控目的基因在肿瘤细胞中特异性表达。体外实验表明,在前列腺癌细胞系LNCa P中,该调控元件可将报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和荧光素酶(luciferase)的肿瘤表达特异性分别提高420%和480%。体外细胞存活实验表明,运用该元件调控单纯疱疹病毒-1胸腺激酶(HSV-1 TK)的表达能特异性杀伤LNCa P细胞,验证了该元件可成功用于治疗基因的肿瘤靶向表达。

ST59型社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒力因子研究

了解ST59型社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(community-acquired methicillin-resistant Staphy-lococcus aureus,CA-MRSA)携带毒力因子的情况。用PCR方法扩增ST59型CA-MRSA PSMα、PVL、SEA、SEB、SEC、SED、SEE、TSST-1、ETA、ETB基因。5株CA-MRSA全部检出PSMα基因和PVL基因,均未检出SEA、SEB、SEC、SED、SEE、TSST-1、ETA、ETB基因。PSMα和PVL基因是ST59型社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌常见的毒力因子。

非综合征型先天缺牙致病基因和分子机制的研究进展

先天缺牙是牙齿发育过程中常见的牙数目发育异常,对患者的颌面部发育及美观和咀嚼功能产生严重的影响。根据有无伴发全身症状,先天缺牙可分为综合征型先天缺牙与非综合征型先天缺牙。近几年发现新的相关基因和新的突变位点及分子机制已成为目前非综合征型先天缺牙基因研究的主要方向。本文通过对近年来文献的回顾,对与非综合征型先天缺牙主要相关的Wnt/β-catenin信号通路、TGF-β/BMP信号通路、PAX9基因和MSX1基因、EDA/EDAR/NF-κb信号通路的分子机制以及相互调节的紧密联系进行综述,为未来先天缺牙的防治提供了新的理论基础。非综合征型先天缺牙致病基因的分子机制的研究目前甚少,对于其机制的精准探索将成为先天缺牙未来主要的研究方向之一。

祛瘀生肌膏对糖尿病大鼠创面组织卵泡抑素样蛋白1、转化生长因子β1及H型剪接调控蛋白的表达影响

目的探讨祛瘀生肌膏对糖尿病大鼠皮肤创面组织中卵泡抑素样蛋白1(follistatin-like protein 1,FSTL1)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及H型剪接调控蛋白(H-splicing regulatory protein,KSRP,又称KHSRP)表达的影响效应。方法以糖尿病大鼠皮肤创面模型为研究对象,将18只SD大鼠分为祛瘀生肌膏组、糖尿病创面组和正常创面组,每组6只。采用祛瘀生肌膏进行干预,运用免疫组化法检测FSTL1、TGF-β1及KRSP蛋白表达。结果在成模各时间点,各组糖尿病大鼠血糖水平差异无统计学意义(P>0.05),而与正常创面组比较显著升高(P<0.01)。创面面积处理前后差值方面,祛瘀生肌膏组、正常创面组均明显优于糖尿病创面组(P<0.05)。免疫组化法检测结果显示,祛瘀生肌膏组FSTL1蛋白表达、TGF-β1蛋白表达均高于糖尿病创面组(P<0.05);而KSRP蛋白表达低于糖尿病创面组(P<0.05);与正常创面组比较,祛瘀生肌膏组FSTL1蛋白表达、TGF-β1蛋白表达和KSRP蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论祛瘀生肌膏促进创面愈合的作用可能是通过上调TGF-β1促进FSTL1表达,从而促进角质形成细胞的迁移和上皮化;同时下调KSRP以促进FSTL1的稳定性。

Ataxin-7蛋白在基因调控中的作用及与SCA7疾病的关系

Ataxin-7(Atx7)蛋白是真核细胞SAGA(Spt-Ada-Gcn5 acetyltransferase)复合物中的重要组成亚基,能将其去泛素化模块锚定到整个复合物上并起到骨架支撑作用,进而参与SAGA复合物对染色质组蛋白乙酰化和去泛素化修饰的调控。Atx7通过调控SAGA复合物与视锥视杆细胞同源盒基因蛋白(cone-rod homeobox,CRX)的结合,对依赖CRX的基因转录激活起到调节作用。然而,Atx7的N-端多聚谷氨酰胺(polyglutamine,PolyQ)序列的异常延伸,会使其在细胞内发生蛋白质积聚(aggregation),进而引起Ⅶ-型脊髓小脑共济失调症(spinocerebellar ataxia 7,SCA7)的发生。现综述Atx7在细胞内的正常生理功能及其PolyQ延伸引起的蛋白质积聚,探讨PolyQ延伸的Atx7对细胞功能的影响,以及最终引发神经退行性疾病的分子机制。

人胎儿γ-珠蛋白基因的再活化及在β血红蛋白病治疗中的

在个体发育过程中,人β类珠蛋白基因的表达存在从胎儿（γ）到成人（β）珠蛋白基因的表达转换（或称开关）.β-地中海贫血和镰刀型贫血症是两种最为常见的严重危害人类健康的单基因遗传病,通过诱导胎儿期血红蛋白（HbF,α2γ2）在成人期表达对该病的治疗是一种有效的策略.一些活化γ珠蛋白基因表达的转录因子和辅助因子已经被鉴定,一些可以增加胎儿血红蛋白在成人红细胞中表达的药物也已被鉴别和实验,它们的作用机制被部分揭示,这些研究为发展通过活化γ-珠蛋白基因治疗镰刀形细胞贫血和重型β-地中海贫血的方法提供了重要线索和实验依据.

离子转运／交换蛋白在缺血性脑卒中后脑水肿中的作用机制

脑卒中严重危害着人类生命健康，目前高居世界人类死因排名第二位、中国居民死亡率第二位，且发病率近年来仍呈上升趋势。脑卒中分为缺血性脑卒中及出血性脑卒中，其中缺血性脑卒中的发病率更高，约占脑卒中总数的80％。

社区相关的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒力因子的研究进展

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA）是一种重要的人类病原体.过去,MRSA感染仅在医院中发生,并局限于有潜在危险因素的免疫能力减弱的个体.近年来,能引起医疗保健场所外健康人群坏死性筋膜炎甚至死亡等严重感染的社区相关的MRSA（CAMRSA）菌株正在全世界范围内流行.人们一直试图解释CA-MRSA毒力增强的原因,该文就近年来对4种毒力因子,即Panton-Valentine杀白细胞素、α-溶血素、α-型苯酚可溶解的调控蛋白、精氨酸分解代谢可动元件的研究进展作一综述.