基于EGFR/AKT和JAK2/STAT3通路研究α-常春藤皂苷单独或与顺铂联用对非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨α-常春藤皂苷(α-Hed)诱导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡的作用靶点及其潜在机制,明确α-Hed与顺铂(DDP)联用后对相应的靶点蛋白表达的影响。方法:采用CCK-8法检测不同浓度α-Hed处理后NSCLC细胞A549、H1299和PC-9的存活率,采用AnnexinⅤ-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率,采用WB法检测细胞中C-caspase-3和Bcl-2蛋白的表达。通过网络药理学相关方法筛选α-Hed的潜在靶点,利用分子对接法分析其结合效果,WB法检测靶点蛋白的表达。通过CCK-8法、细胞集落形成实验和WB法检测α-Hed与DDP联用对NSCLC细胞的抑制作用。结果:给药24和48 h后,10、15和20μmol/Lα-Hed可以显著抑制NSCLC细胞增殖活力(均P<0.01);与对照组相比,20μmol/Lα-Hed处理后细胞凋亡率显著升高(P<0.01);α-Hed可上调NSCLC细胞中C-caspase-3的表达(P<0.05),下调Bcl-2的表达(P<0.05)。网络药理学和分子对接筛选出结合亲和力小于-5 kcal/mol的靶点AKT1、STAT3、EGFR和JAK2。WB法检测结果显示,α-Hed处理后A549、H1299细胞中EGFR、p-AKT/AKT、p-STAT3/STAT3和JAK2蛋白的表达均明显下调(均P<0.05)。α-Hed与DDP联用后,更显著地抑制NSCLC细胞的增殖(P<0.01),进一步下调EGFR、p-AKT/AKT、p-STAT3/STAT3和JAK2蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:α-Hed通过下调EGFR和JAK2的表达抑制STAT3和AKT的磷酸化,诱导NSCLC细胞凋亡,与DDP联用后其抑制效果增强,EGFR/AKT和JAK2/STAT3通路也进一步被抑制。

α-常春藤皂苷通过激活和稳定p53/Noxa信号诱导肝癌细胞凋亡

目的研究预知子活性成分α-常春藤皂苷对肝癌细胞的体内外抑制作用及其机制。方法将肝癌细胞分为4组,分别给予0、10、20和30μmol·L^(-1)α-常春藤皂苷至24、48 h。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测凋亡率,转录组学筛选α-常春藤皂苷作用的信号通路,核糖核酸(RNA)干扰、实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹检测信号通路和凋亡通路信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达,体内移植瘤试验验证α-常春藤皂苷体内对肝癌细胞生长的抑制作用。结果α-常春藤皂苷通过激活腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9(Caspase9)和Caspase3诱导肝癌细胞凋亡。转录组学、qRT-PCR和蛋白免疫印迹检测发现α-常春藤皂苷上调了p53和Noxa的表达,并抑制p53和Noxa蛋白的降解,α-常春藤皂苷还能逆转p53/Noxa敲低所致的凋亡减少。动物实验结果表明,α-常春藤皂苷可抑制肝癌细胞移植瘤的增殖。结论α-常春藤皂苷可通过激活和稳定p53/Noxa信号诱导肝癌细胞凋亡。

α-常春藤皂苷抗肿瘤活性研究进展

α-常春藤皂苷(α-hederin)是一种单桥糖三萜皂苷,存在于常春藤叶片,具有广泛的药理活性。其中,人们发现α-常春藤皂苷最诱人的功能是其极高的抗肿瘤活性。目前,α-常春藤皂苷被发现的抗肿瘤机制包括自噬激活、一氧化氮调控、上皮间质转化阻滞、Hippo-Yap信号通路激活和促进活性氧积累等,且不仅于此。在这些细胞效应中,活性氧是α-常春藤皂苷发挥功能的核心桥梁。有足够的证据表明,α-常春藤皂苷诱导的肿瘤细胞凋亡、糖代谢水平下调、氧化应激发生和铁死亡敏感性上调都是由ROS所介导的;同时,也有理由相信,ROS还可能参与了α-常春藤皂苷诱导的Hippo信号通路激活和自噬启动。近年来,有一些研究对α-常春藤皂苷进行了改良,包括靶向递送的设计,生物利用度的调整和溶血活性的规避等。这给α-常春藤皂苷的开发和应用增加了更多的可能性。目前,关于α-常春藤皂苷的抗肿瘤药理研究仍然在广泛地开展,其丰富的生物学功能和极高的生物学活性使之成为一种十分具有前景的化合物。以近些年α-常春藤皂苷在抗肿瘤药理学上的成果作一综述,以期为该先导化合物的后续研发和临床应用提供理论参考依据,并提供新的思路。

预知子中α-常春藤皂苷提取工艺研究

目的优选预知子中α-常春藤皂苷(3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷)的提取工艺。方法采用HPLC法测定α-常春藤皂苷,以转移率为考察指标,对乙醇浓度、料液比、提取时间、提取次数进行逐一考察。结果适合生产的预知子中α-常春藤皂苷最佳提取工艺为乙醇浓度70%,料液比1∶8,回流提取2次,每次1.5 h,在此条件下,转移率高达98.40%。结论优选得到的工艺合理、稳定、可行,为确定预知子提取工艺提供了可靠的依据。

预知子中α-常春藤皂苷的HPLC分析

目的分析不同种与不同产地预知子中α-常春藤皂苷（常春藤皂苷元-3-O-α—L-吡喃鼠李糖基（1→2）-α-L-吡喃阿拉伯糖苷）的含量，为预知子质量标准建立提供参考。方法采用高效液相色谱分析，Allteeh C18色谱柱，乙腈-水-磷酸（45：55：0．1）为流动相，检测波长203nm。结果口嫦春藤皂苷的保留时间为16min，线性范围为1．088—5.44μg （r=0.9999），加样回收率100．02％。所测样品中α-常春藤皂苷的含量在0.199—33．481mg·g^-1。结论该法快捷、简便、准确，可用于预知子的质量评价.

α-常春藤皂苷通过活性氧—线粒体途径促进食管癌细胞凋亡的研究

目的 探讨α-常春藤皂苷(α-Hederin)对食管癌细胞凋亡的作用及其机制。方法 2017年1-12月于武汉大学人民医院中心实验室进行实验。培养食管癌Eca109细胞,加入浓度梯度的α-Hederin作用24 h,CCK-8法检测细胞增殖能力。将实验分为空白对照组及α-Hederin 5、10、20μmol/L组,GSH试剂盒检测各组GSH水平;将实验分为空白对照组、α-Hederin(10μmol/L)组、α-Hederin(10μmol/L)+BSO组、α-Hederin(10μmol/L)+NAC组,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,活性氧试剂盒检测活性氧水平,Western blotting法检测相关蛋白水平。结果 α-Hederin呈浓度依赖性抑制Eca109细胞增殖(IC_(50)=18.45μmol/L),α-Hederin降低Eca109细胞内GSH含量。与空白对照组比较,α-Hederin(10μmol/L)组细胞凋亡率增高(t=21.73,P=0.000),细胞内活性氧水平明显升高(t=9.967,P=0.001)。BSO或NAC能够促进或抑制α-Hederin对细胞凋亡及细胞内活性氧的作用。Western blot显示,与空白对照组比较,α-Hederin促使胞浆中AIF和Cyt C水平增高(t=20.790,P=0.002;t=9.466,P=0.011)。结论 α-Hederin通过活性氧一线粒体途径促进食管癌细胞凋亡。

α-常春藤皂苷壳聚糖纳米粒的制备及其体外评价

目的制备α-常春藤皂苷壳聚糖纳米粒并评价其体外特性。方法选取乳化-溶剂扩散法制备α-常春藤皂苷壳聚糖纳米粒,以平均粒径、多分散指数和包封率为综合指标,通过单因素试验和正交试验设计,考察纳米粒处方和制备工艺。通过红外、X射线衍射、差示扫描量热分析、体外释放试验等,评价纳米粒的相关性质。结果制备的α-常春藤皂苷壳聚糖纳米粒平均粒径88.9 nm,多分散指数值0.144±0.037,包封率(75.63±4.06)%。相关性质考察均表明药物被纳米粒有效包裹,其体外释放具有一定的缓释特性。结论乳化-溶剂扩散法制备的α-常春藤皂苷壳聚糖纳米粒大小分布均匀、外观形态圆整、包封率高,有缓释特性。

α-常春藤皂苷丙烯酸树脂L100-55纳米粒的制备及体外评价

目的采用肠溶材料丙烯酸树脂L100-55作为载体材料,制备α-常春藤皂苷丙烯酸树脂纳米粒(SPD-L100-55-NPs)并进行体外评价。方法采用改良乳化溶剂扩散法制备SPD-L100-55-NPs,以粒径、包封率(EE)和多分散指数(P.I.)为综合指标,通过单因素实验和正交设计实验优化纳米粒的处方工艺,以红外光谱(FT-IR)、X射线衍射(XRD)、差示扫描量热分析(DSC)等对制备的纳米粒进行评价,并考察其体外释放特性。结果制得的SPD-L100-55-NPs纳米粒外观圆整、分布均匀,平均粒径为(63.5±3.6)nm,包封率为98.91%±0.18%,P.I.为0.198±0.014。药物在纳米粒中被载体材料有效包裹,体外释放具有缓释特性和pH依赖性。结论所制得的纳米粒圆整均匀、包封率高,在体外具有良好的缓释特性和pH敏感性。

α-常春藤皂苷抗肿瘤作用机制研究

目的探讨α-常春藤皂苷(BD)对人脑胶质母细胞瘤细胞U251抗肿瘤的作用机制。方法MTT法、集落形成、吉姆萨染色检测不同浓度BD对U251细胞增殖影响;Hochest33342观察细胞凋亡形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot检测Bcl-2、Caspase-3蛋白凋亡变化。结果BD可以明显抑制U251的增殖,其抑制作用呈明显的时间、剂量依赖关系。在给药24h后,呈强蓝色荧光,并且细胞在BD18.75,25.00μmol·L-1出现显著凋亡,下调Bcl-2,Caspase-3蛋白表达。结论BD能显著地抑制U251细胞的增殖、诱导细胞凋亡,其作用机制可能与线粒体凋亡有关。

α-常春藤皂苷诱导肝癌Bel-7402细胞铁死亡的作用机制

目的:探讨α-常春藤皂苷(α-Hederin)诱导肝癌Bel-7402细胞发生铁死亡(ferroptosis)的可能机制。方法:采用梯度浓度的α-常春藤皂苷处理肝癌Bel-7402细胞24 h,MTT法检测细胞活力并计算半数抑制浓度(IC_(50))。将细胞分为空白对照组、α-常春藤皂苷(25μmol/L)组和α-常春藤皂苷(50μmol/L)组。谷胱甘肽试剂盒测定分组后细胞内GSH含量,Western blot检测铁死亡相关蛋白胱氨酸-谷氨酸的反向转运体亚基xCT、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、二价金属转运蛋白1(DMT1)的表达,DCFH-DA探针用以检测细胞活性氧(ROS)水平。利用铁死亡抑制剂进行细胞功能恢复试验,测定了同时使用Ferrostatin-1和α-常春藤皂苷后的细胞活力、GSH含量、铁死亡相关蛋白表达水平以及ROS水平。结果:随α-常春藤皂苷浓度增加Bel-7402细胞的存活率显著降低,24 h对应Bel-7402细胞的IC_(50)为40.32μmol/L。α-常春藤皂苷能减少细胞内GSH含量,下调xCT和GPX4的表达,上调DMT1的表达和升高ROS水平。Ferrostatin-1可有效抑制α-常春藤皂苷诱导的细胞铁死亡,主要表现为细胞活力、GSH含量恢复以及ROS生成减少。结论:α-常春藤皂苷可通过抑制GPX4和xCT的表达,促进DMT1的表达,诱导ROS大量生成并导致肝癌Bel-7402细胞铁死亡。

α-常春藤皂苷协同雷公藤红素对SMMC7721肝癌细胞增殖和周期的影响

目的 探索α-常春藤皂苷协同雷公藤红素对SMMC7721肝癌细胞增殖和周期的影响。方法 MTT法检测细胞存活率,CompuSyn软件获取相互作用指数(CI)并筛选出最佳协同组合。流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2、周期蛋白依赖性激酶(CDKs)和细胞周期蛋白(Cyclins)的表达。结果 单用α-常春藤皂苷或雷公藤红素均能抑制细胞增殖,且呈剂量依赖性;作用48 h后,当α-常春藤皂苷质量浓度为10.0μg/mL,雷公藤红素质量浓度为0.30μg/mL时,CI值为0.24,协同效应最佳。在以上质量浓度条件下,协同组早期凋亡率高于其余3组(P<0.05)。α-常春藤皂苷组及协同组晚期凋亡率高于对照组(P<0.05);总凋亡率以协同组最高且高于对照组(P<0.05)。雷公藤红素及协同组G_(0)/G_(1)期比例较对照组升高(P<0.05);α-常春藤皂苷组S期比例较对照组升高(P<0.05);协同组G_(1)+S期总比例最高且高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,各给药组Bax、Bcl-2及Bax/Bcl-2比值无明显变化(P>0.05);协同组CDK2和CDK4蛋白表达降低(P<0.05);雷公藤红素组和协同组Cyclin D1表达均升高(P<0.05);各给药组Cyclin E1表达均升高(P<0.05)。结论 α-常春藤皂苷协同雷公藤红素抑制SMMC7721细胞增殖效应确切,该效应可能与诱导G_(0)/G_(1)期周期阻滞、G_(1)+S期总比例增加有关,而Cyclin D1可能是参与其中的关键分子。

α-常春藤皂苷的抗肿瘤药理作用研究进展

α-常春藤皂苷是从中药复方肠胃清中高压液相质谱分析所得的一个典型的五环三萜类皂苷,具有广泛的药理作用,如抗肿瘤、抗炎症反应和免疫调节等,其中最引人注目的是抗肿瘤作用。随着研究的不断深入,α-常春藤皂苷的抗肿瘤作用分子机制有一定突破,本文主要就近年来α-常春藤皂苷的抗肿瘤药理作用研究进展作简要综述,为今后研究和开发α-常春藤皂苷抗肿瘤作用提供依据。

α-常春藤皂苷调控SREBP1/FASN通路抑制非小细胞肺癌的恶性表型

目的探讨α-常春藤皂苷对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的调控作用及其相关分子机制。方法采用梯度浓度α-常春藤皂苷分别处理A549和HCC-1833细胞24和48 h后,CCK8法检测细胞活力值(OD_(450nm))并计算半数抑制浓度(IC50)。根据IC50值将A549细胞和HCC-1833细胞分为空白对照组和α-常春藤皂苷组。EdU试剂盒检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,Transwell检测细胞迁移率,划痕实验检测细胞侵袭率,Western blot检测SREBP1和FASN蛋白表达水平,油红O染色检测细胞脂质积累。结果肺癌细胞的存活率随α-常春藤皂苷的浓度升高显著降低,48 h对应的A549细胞和HCC-1833细胞的IC50分别为15μg/ml和25μg/ml。与对照组相比,α-常春藤皂苷处理后,细胞的增殖、迁移被显著抑制,细胞阻滞于G1/S期,细胞凋亡率增加,SREBP1和FASN的蛋白表达和细胞脂质积累都显著降低。结论α-常春藤皂苷可抑制NSCLC细胞增殖、迁移,诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G1/S期,通过下调SREBP1和FASN的表达,减少细胞脂质积累,阻碍非小细胞肺癌恶性进程。

α-常春藤皂苷与奥沙利铂联用对HCT116结肠癌细胞的化疗增敏作用

目的 探讨α-常春藤皂苷(HED)与奥沙利铂(OXA)联用对HCT116结肠癌(CRC)细胞的化疗增敏作用。方法 噻唑蓝(MTT)法检测α-HED与OXA单用或联用对HCT116细胞增殖抑制率的影响;CompuSyn软件检测协同效果,得到最佳给药剂量;采用平板克隆实验、流式细胞术及Western印迹法检测α-HED与OXA联用对HCT116细胞克隆及凋亡的影响。体内实验构建HCT116细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分为Control、α-HED、L-OXA、N-OXA及α-HED+L-OXA组,观察α-HED与OXA单用或联用处理CRC模型对肿瘤生长的影响。结果 6μmol/L α-HED显著促进25μmol/L OXA对HCT116细胞的增殖抑制率和克隆形成率,显著促进细胞凋亡(P<0.05)。α-HED与OXA单用显著抑制CRC裸鼠移植瘤的生长增殖,联用时抑瘤效果更明显(P<0.05)。α-HED与OXA联用显著下调Ki67、CD31的表达,较α-HED组和OXA低剂量组更显著(P<0.05)。结论 α-HED与OXA联用在体内外存在对HCT116 CRC细胞的化疗增敏效果。

负载α-常春藤皂苷聚合物胶束的制备与体内外评价

目的 制备α-常春藤皂苷(α-Hed)聚合物胶束(α-Hed-PMs),并评价其对HepG2细胞的抑制效果。方法 以Pluronic F127和TPGS作为载体材料,采用溶剂蒸发-薄膜水化分散法将α-Hed制备成α-Hed-PMs,通过对粒径分布、Zeta电位和包封率进行综合评估确定α-Hed-PMs的处方组成;测定α-Hed-PMs的临界胶束浓度;在透射电镜下观察α-Hed-PMs的微观形貌;通过差示扫描量热法(DSC)判断α-Hed在胶束中的存在状态;考察α-Hed-PMs在pH 5.0、6.0、7.4缓冲液中的稀释稳定性及释药速率;比较α-Hed原料药和α-Hed-PMs(4、8、16、32、64μg·mL^(-1))对HepG2细胞的体外抑制作用;制备HepG2细胞荷瘤小鼠,考察股静脉注射0.9%氯化钠溶液(对照组)、α-Hed和α-Hed-PMs(给药剂量均为30 mg·kg^(-1))对肿瘤体积的影响。结果 α-Hed-PMs的最优处方组成:Pluronic F127和TPGS质量比为6∶1,所形成的聚合物胶束临界胶束浓度为0.031 mg·mL^(-1);在透射电镜下可观察到α-Hed-PMs呈类球形分布;DSC测定结果显示α-Hed在胶束中以非结晶形式存在;α-Hed-PMs经pH 5.0、6.0、7.4缓冲液稀释后,在24 h内均未出现絮凝或沉淀,粒径也基本未发生改变;α-Hed原料药4 h基本释放完全,α-Hed-PMs在不同pH值缓冲液中均为前期药物释放较快,后期药物释放平缓,在50 h基本释放完全;体内外实验结果显示α-Hed-PMs对HepG2细胞的抑制作用均优于α-Hed原料药。结论 以Pluronic F127和TPGS作为载体材料将α-Hed制备成α-Hed-PMs,可达到更好的抗肿瘤效果。

β-环糊精-聚乙二醇-α-常春藤皂苷自组装胶束的制备和抗肿瘤活性研究

目的研究β-环糊精-聚乙二醇-α-常春藤皂苷自组装胶束的制备、溶血性和体内外抗肿瘤活性。方法采用自组装方法制备了β-环糊精-聚乙二醇-α-常春藤皂苷的纳米胶束,考察了胶束在大鼠全血中的溶血性,研究了胶束在不同细胞上的体外活性,以荷HT29肿瘤细胞的小鼠为模型,研究了胶束的体内抗肿瘤活性。结果β-环糊精-聚乙二醇-α-常春藤皂苷在水性介质中能自组装成粒径较小的纳米胶束。该胶束能显著降低α-常春藤皂苷的溶血性;在体外细胞实验中,胶束的抗肿瘤活性明显低于α-常春藤皂苷,这可能与在体外环境中α-常春藤皂苷不能从胶束中释放出来有关。β-环糊精-聚乙二醇-α-常春藤皂苷自组装胶束在HT29荷瘤小鼠体内显示非常好的抗肿瘤活性。结论β-环糊精-聚乙二醇-α-常春藤皂苷自组装胶束为皂苷的减毒增效提供了一个非常好的研究模式。

α-常春藤皂苷大鼠在体肠吸收特性研究

目的考察α-常春藤皂苷的肠道吸收特性,探讨α-常春藤皂苷生物利用度低的原因。方法采用大鼠在体肠单向灌流模型、运用HPLC法测定药物的质量浓度,分别研究吸收部位、药物质量浓度、pH值、肠道菌群以及P-糖蛋白(P-gp)抑制剂对α-常春藤皂苷吸收的影响。结果α-常春藤皂苷在不同肠段的吸收速率常数(Ka)顺序为回肠>结肠>空肠>十二指肠;且以质量浓度为75、150、300μg/mL的供试液进行实验,Ka和Peff没有显著性差异;药物的吸收随pH值升高而增加;扰乱大鼠肠道菌群会干扰α-常春藤皂苷的吸收;含P-gp抑制剂组和不含P-gp抑制剂组相比,α-常春藤皂苷的Ka和Peff值均无显著性差异。结论α-常春藤皂苷在全肠道均有吸收,但在肠道下部吸收较好;在实验质量浓度范围内,药物的吸收无浓度饱和现象,吸收机制为被动扩散;药物在碱性环境下吸收较好;肠道菌群对α-常春藤皂苷吸收有显著影响;α-常春藤皂苷不是P-gp底物。

α-常春藤皂苷的平衡溶解度及表观油水分配系数的测定

目的:测定α-常春藤皂苷的平衡溶解度及表观油水分配系数(Papp)。方法:采用HPLC测定α-常春藤皂苷在水、有机溶剂及缓冲液中平衡溶解度,在正辛醇-水及缓冲盐溶液中表观油水分配系数,流动相乙腈-0.2%磷酸水溶液(45∶55),检测波长203 nm。结果:25℃时,α-常春藤皂苷在水中平衡溶解度0.011 g·L-1,Papp=24.73(logPapp=1.39),在正丁醇和乙醇中平衡溶解度分别为86.10,28.18 g·L-1。结论:α-常春藤皂苷的水溶性较差,改善其口服制剂的溶出度有利于提高体内生物利用度。

超高效液相色谱-质谱联用法分析α-常春藤皂苷在大鼠体内的代谢产物

目的研究大鼠口服α-常春藤皂苷后粪便中的代谢产物。方法大鼠igα-常春藤皂苷150 mg/kg后,采集其0~24h粪便样品,应用超高效液相色谱-复合三重四级杆线性离子阱质谱（UPLC-Q/Trap-MS）联用技术对样品进行分析。结果检测到原形药物、原形药物的同分异构体及7个可能的代谢产物,包括去甲基化代谢物（M1）、脱糖代谢物（M2、M3）、葡萄糖醛酸化代谢物（M4）和双键加成代谢物（M5、M6-1、M6-2）。结论α-常春藤皂苷在大鼠胃肠道内会发生多种代谢反应,主要有脱糖代谢、葡萄糖醛酸化代谢、去甲基化代谢等。

α-常春藤皂苷对黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的：探讨α-常春藤皂苷（α-HN）对黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法：常规培养B16细胞至对数生长期,给予不同浓度α-HN（50,100,200μmol·L^-1）处理,设未经α-HN处理的B16细胞为空白组;采用噻唑蓝（MTT）比色法检测α-HN处理24,48,72 h后各组细胞的增殖情况,采用膜联蛋白V/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）凋亡试剂盒检测α-HN处理48 h后的细胞凋亡率,半胱天冬蛋白酶（Caspase）活性检测试剂盒检测Caspase-3和Caspase-9的活性,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）,磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶（p-PI3K）,磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）及磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）的表达情况。结果：与空白组相比,经50,100,200μmol·L^-1α-HN处理24,48,72 h后,B16细胞增殖抑制率显著增加（P〈0.01）,且随着观察时间的延长,增殖抑制率有逐渐增加趋势,该抑制作用呈时间依赖性和浓度依赖性;与空白组相比,α-HN处理48 h后B16细胞的凋亡率升高,Caspase-3和Caspase-9活性增强,且Bcl-2水平降低而Bax水平升高（P〈0.01）;α-HN处理48 h后的p-PI3K,p-Akt,p-mTOR蛋白表达较空白组降低（P〈0.05,P〈0.01）。结论：α-HN具有抑制B16细胞增殖及诱导凋亡作用,其可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路来发挥细胞毒及诱导凋亡作用,在黑色素瘤治疗中有较好的应用前景。