肝细胞肝癌的IVIM-DWI多定量参数与病理的相关性研究

目的探讨体素内不相干运动-扩散加权成像(IVIM-DWI)多定量参数对肝细胞肝癌(HCC)微循环状态的评估价值。方法前瞻性纳入行腹部常规MRI及IVIM-DWI检查且经手术病理证实的HCC病人30例,其中男17例,女13例,平均年龄(56.13±7.45)岁。在肝脏IVIM-DWI中分别测量肿瘤实质区多定量参数[表观扩散系数(ADC)、扩散系数(D)、假扩散系数(D^*)和灌注分数(PF)]值。对HCC行病理分级,并采用Weidner方法对CD34-微血管密度(CD34-MVD)、α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)进行计数。采用Pearson相关或Spearman秩相关分析多定量参数与HCC的病理分级及其CD34-MVD、α-SMA的相关性,采用多组间方差分析比较HCC不同病理分级间多定量参数值及病理免疫组化指标的差异。结果ADC、D值与CD34-MVD、α-SMA呈负相关,D^*、PF值分别与CD34-MVD、α-SMA呈正相关。ADC、D值与HCC病理分级呈中度负相关,D^*、PF值与HCC病理分级呈中度正相关,且ADC、D及PF值在不同病理分级间差异有统计学意义(P<0.05),随着病理级别的增高,ADC、D值逐渐减小,PF值逐渐增大,D*值在不同病理分级组间差异无统计学意义(P>0.05)。CD34-MVD、α-SMA与HCC病理分级呈强正相关,且在不同病理分级间差异有统计学意义(P<0.05)。结论IVIM-DWI的多定量参数可以反映HCC的病理分级及微循环功能状态,为HCC的诊断与治疗评估提供活体检测的客观指标。

乳腺肿瘤组织间质中CD34、α-SMA的表达及意义

目的：探讨乳腺肿瘤组织间质中CD34、α-平滑肌激动蛋白（α-SMA）的表达及其临床意义。方法：选取我院2010年1月-2013年1月间收治的病历资料完整的乳腺肿瘤患者400例，其中乳腺导管上皮普通型增生患者100例（A组），乳腺导管上皮非典型增生患者100例（B组），乳腺导管原位癌患者100例（C组），乳腺浸润性导管癌患者100例（D组），4组患者均行择期手术治疗，术后取病变组织制备标本块，采用免疫组化法检测4组患乳腺肿瘤组织间质细胞中CD34、α-SMA的表达情况。结果：乳腺浸润性导管癌间质中CD34阳性率显著低于A、B、C3组，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05），α-SMA阳性率明显高于A、B、C3组，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）；A、B、C3组间CD34、α-SMA的阳性表达率比较无统计学差异（P〉0．05）。结论：乳腺肿瘤组织间质中CD34表达的丢失及α-SMA表达的增强在乳腺肿瘤从良性到恶性发展过程中起重要作用。

多沙唑嗪通过刺激半乳糖凝集素-3的表达促进心肌纤维化的研究

目的探究多沙唑嗪(Doxazosin)引起的心肌纤维化具体的作用机制。方法(1)HL-1心肌细胞用浓度分别为0μmol/L,0.1μmol/L,1μmol/L和10μmol/L的Doxazosin刺激12 h,检测半乳糖凝集素-3(Galectin-3)的表达量。(2)选取1μmol/L Doxazosin作为参考浓度刺激HL-1心肌细胞12 h,检测胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)以及α平滑肌激动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平。(3)提前用50 mmol/Lβ-乳糖(β-lactose)预处理HL-1心肌细胞2 h,随后用1μmol/L Doxazosin再次刺激HL-1心肌细胞12 h,检测CollagenⅠ以及α-SMA的表达水平。结果①Doxazosin呈剂量依赖性诱导Galectin-3表达增加,在0.1μmol/L的低剂量浓度下即具有统计学意义(P<0.05)。②在HL-1心肌细胞中,Doxazosin刺激组较空白对照组CollagenⅠ的表达量增加约2.4倍,α-SMA增加约3.2倍。③经过Galectin-3抑制剂50mmol/Lβ-lactose预处理HL-1心肌细胞2 h,随后用1μmol/L Doxazosin再次刺激HL-1心肌细胞12 h,可见CollagenⅠ和α-SMA表达均下降(P<0.001)。结论Doxazosin对心肌细胞具有损伤作用,其通过刺激Galectin-3的表达,进一步增加CollagenⅠ以及α-SMA的表达水平,进而发挥其促进心肌纤维化的作用。

Heme oxygenase-1 prevents liver fibrosis in rats by regulating the expression of PPAR_γ and NF-_κB

AIM:To investigate the effects of heme oxygenase(HO)-1 on liver fibrosis and the expression of peroxisome proliferator-activated receptor gamma(PPARγ) and nuclear factor-kappa B(NF-κB) in rats.METHODS:Sixty Wistar rats were used to construct liver fibrosis models and were randomly divided into 5 groups:group A(normal,untreated),group B(model for 4 wk,untreated),group C(model for 6 wk,untreated),group D [model for 6 wk,treated with zinc protoporphyrin Ⅸ(ZnPP-Ⅸ) from week 4 to week 6],group E(model for 6 wk,treated with hemin from week 4 to week 6).Next,liver injury was assessed by measuring serum alanine aminotransferase(ALT),aspartate aminotransferase(AST) and albumin levels.The degree of hepatic fibrosis was evaluated by measuring serum hyaluronate acid(HA),type Ⅳ collagen(Ⅳ-C) and by histological examination.Hydroxyproline(Hyp) content in the liver homogenate was determined.The expres-sion levels of alpha-smooth muscle actin(α-SMA) in liver tissue were measured by real-time quantitative polymerase chain reaction(RT-PCR).The expression levels of PPARγ and NF-κB were determined by RT-PCR and Western blotting.RESULTS:The expression of HO-1 increased with the development of fibrosis.Induction of HO-1 by hemin significantly attenuated the severity of liver injury and the levels of liver fibrosis as compared with inhibition of HO-1 by ZnPP-Ⅸ.The concentrations of serum ALT,AST,HA and Ⅳ-C in group E decreased compared with group C and group D(P < 0.01).Amount of Hyp and α-SMA in the liver tissues in group E decreased compared with group C(0.62 ± 0.14 vs 0.84 ± 0.07,1.42 ± 0.17 vs 1.84 ± 0.17,respectively,P < 0.01) and group D(0.62 ± 0.14 vs 1.11 ± 0.16,1.42 ± 0.17 vs 2.56 ± 0.37,respectively,P < 0.01).The expression of PPARγ at levels of transcription and translation decreased with the development of fibrosis especially in group D;and it increased in group E compared with groups C and D(0.88 ± 0.15 vs 0.56 ± 0.19,0.88 ± 0.15 vs 0.41 ± 0.11,respectively,P < 0.01).The expression of NF-κB increased with the development of fibrosis especially in group D;and it decreased in group E compared with groups C and D(1.43 ± 0.31 vs 1.89 ± 0.29,1.43 ± 0.31 vs 2.53 ± 0.54,respectively,P < 0.01).CONCLUSION:Our data demonstrate a potential mechanism that HO-1 can prevent liver fibrosis by enhancing the expression of PPARγ and decreasing the expression of NF-κB in liver tissues.

诱导心脏肌成纤维细胞向心肌样细胞转分化的miRNA

背景:微小RNA(miRNA)是一类非编码小分子RNA,miRNA参与调控基因表达,在促进前体细胞增殖与分化中发挥了重要的作用。miRNA是否可促进前体细胞向心肌细胞的分化则鲜见报道。目的:验证转入特定miRNA(miRNA-1、miRNA-499)诱导新生小鼠心脏肌成纤维细胞转分化为心肌样细胞的可行性。方法:体外培养新生小鼠心脏成纤维细胞,常氧培养传代至P2;37℃低氧(体积分数3%O2)培养48 h;免疫荧光染色检测心脏成纤维细胞特异性标记物波形蛋白的表达,免疫荧光染色、流式细胞技术检测心脏成纤维细胞向心脏肌成纤维细胞表型转化的标记物α-平滑肌激动蛋白的表达。实验分为4组:miRNA-1转染组、miRNA-499转染组、miRNA-1/miRNA-499共转染组及空白对照组,采用miRNA芯片检测心脏肌成纤维细胞与心肌细胞中微小RNA的表达差异;real-time qPCR方法验证芯片检测结果。结果与结论:心脏肌成纤维细胞中过表达miR-1、miR-499后,心脏发育不同阶段特异性因子发生不同程度的表达变化,与空白对照组相比,其余3组GATA4、Tbx5、Mef-2c、α-MHC表达明显增高,Mesp1、Isl1表达均无显著变化。结果表明,特定miRNAs可诱导心脏肌成纤维细胞表达心肌细胞特异性性标志物,具备诱导心脏肌成纤维细胞向心肌细胞直接转分化的潜力。

EGCG对人肝星状细胞的生长状态及活化表型的影响

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养的人肝星状细胞株(LX-2)生长状态及活化表型的影响。方法利用实时无标记细胞分析技术系统连续监测72h不同浓度EGCG(0、25、50、75、100、125、150、175μmol/L)对LX-2细胞生长状态的影响;通过流式细胞仪检测LX-2细胞的凋亡率和活化标志物α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)的表达变化;采用吖啶橙/溴乙锭染色法在倒置荧光显微镜下观察EGCG处理后的LX-2细胞形态改变。结果随药物浓度增加,EGCG对LX-2细胞的增殖抑制作用增强,细胞增殖速率降低(P<0.05);EGCG能诱导LX-2细胞的凋亡(P<0.05),同时抑制α-SMA的表达(P<0.01)。结论EGCG能通过诱导细胞凋亡的方式抑制LX-2的增殖和活化。

急性胰腺炎大鼠胰腺星形细胞激活与纤维化改变的研究

目的 检测急性胰腺炎早期转化生长因子- β1(TGF - β1)信使RNA的表达,Ⅰ型胶原(Collagen -Ⅰ)以及α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)的生成,探讨胰腺星形细胞在胰腺炎早期纤维化启动中的作用及其意义。方法 采用阻断胰腺导管同时腹腔注射雨蛙素(5 0 μg·kg-1·d-1)的方法诱导急性胰腺炎大鼠模型,假手术组施行开腹手术并腹腔注射生理盐水。分别于0、72、12 0h处死大鼠,取完整胰腺组织用免疫组化方法检测Ⅰ型胶原和α-SMA的表达,再以逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)检测TGF - β1mRNA的表达情况。结果 假手术组大鼠胰腺组织胰腺星形细胞染色偶尔阳性,实质无明显改变,胶原染色阴性,TGF - β1mRNA无表达。模型72h组胰腺炎症改变,Collagen -Ⅰ、α-SMA检测表现胰腺间质以及腺泡周围的黄染,涉及广泛,深浅不一,较正常组变化明显;TGF - β1mRNA表达明显增强。模型12 0h组,光镜检查炎症表现更甚,间质组织增生。Collagen -Ⅰ、α-SMA表现也呈进行性进展,TGF - β1mRNA表达比较72h模型组略有降低。结论 研究表明,在急性胰腺炎早期即出现TGF - β1的激活,并刺激胰腺星形细胞(α-SMA阳性细胞)激活、增生,并使Collagen -Ⅰ逐渐生成沉积,提示胰腺的纤维化进程的启动,且随时间延长胰腺星形细胞激活逐渐增多。

肾衰泄浊汤及其拆方对UUO大鼠VEGF/VEGFR信号通路的影响

目的研究肾衰泄浊汤及其拆方对单侧输尿管梗阻大鼠模型(UUO)大鼠VEGF/VEGFR信号通路的影响。方法144只健康雌性SD大鼠建立UUO模型,再随机分为假手术组、补虚方组、袪邪方组、肾衰泄浊汤组、贝那普利组及模型组,每组24只,各组大鼠于第7、14、21天处死。取肾脏组织行HE、Masson染色,并在光镜、电镜下观察,评分;采用Western blot检测各组大鼠肾组织中α-SMA、VEGFA、VEGFR2蛋白表达水平。结果同时期各组比较,模型组BUN、SCr较其他组升高明显(P<0.05);治疗组BUN、SCr较其他组明显下降(P<0.05);其中肾衰泄浊汤组疗效最明显(P<0.05)。HE、Masson染色结果:除假手术组外,术后7 d各组均可观察到炎症和坏死病变,术后14、21 d可观察到炎症和纤维化,模型组纤维化程度最重。Western blot结果:假手术组α-SMA、VEGFA、VEGFR2少量表达,模型组中α-SMA、VEGFA、VEGFR2的表达随时间增长逐渐增多(P<0.05)。同时期各治疗组α-SMA、VEGFA、VEGFR2蛋白的表达较模型组均有所减少,而补虚方、祛邪方组VEGFA蛋白表达较之稍有提升(P<0.05)。肾衰泄浊汤组第21天蛋白减少较其他治疗组更明显(P<0.05)。结论肾衰泄浊汤及其拆方可能通过抑制VEGF信号通路,减少α-SMA、VEGFA、VEGFR2表达,干预UUO大鼠周细胞-肌成纤维细胞转分化过程,达到抗肾间质纤维化的作用。

咪喹莫特抑制小鼠体表黑色素瘤生长和促使肿瘤特异性放疗增敏的实验研究

目的研究咪喹莫特联合外放疗对C57BL/6小鼠黑色素瘤模型肿瘤生长的影响,并判定咪喹莫特对肿瘤特异性放疗增敏的疗效。方法建立C57BL/6小鼠(n=20)的体表黑色素瘤模型,随机分为对照组、放疗组、咪喹莫特治疗组和放疗联合咪喹莫特治疗组。测量肿瘤生长体积,观察肿瘤生长延迟效应,并采用免疫组织化学检测和生存曲线评估咪喹莫特对肿瘤放疗增敏效果。结果放疗联合咪喹莫特治疗组肿瘤生长延迟最显著,其次治疗效果依次为咪喹莫特治疗组、放疗组和对照组。4组间两两比较,差异均有显著性意义(P<0.01)。C57BL/6小鼠黑色素瘤的组织病理学检测中,发现微管相关蛋白1轻链3B(MAP1LC3B)和α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)在放疗联合咪喹莫特治疗组呈高表达。3种不同治疗组的MAP1LC3B和α-SMA表达与对照组间比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。C57BL/6小鼠生存表证实,放疗联合咪喹莫特治疗组生存率明显优于其他治疗组和对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论咪喹莫特联合外放疗对C57BL/6小鼠黑色素瘤生长有绝对延迟效应,咪喹莫特可为新的肿瘤特异性放疗增敏诱导剂。