Dynactin调控α-微管蛋白乙酰化和微管修饰的机制研究

目的探讨动力蛋白激活蛋白Dynactin对α-微管蛋白乙酰化水平和微管修饰的调控作用。方法利用蛋白印迹方法检测Dynactin亚基p150~(Glued)N端缺失(KO)和对照(Ctrl)小鼠原代皮质神经元和原代成纤维细胞中α-微管蛋白乙酰化水平和总蛋白水平。利用免疫荧光染色方法观察Ctrl和KO原代成纤维细胞中微管乙酰化百分比的变化情况。结果p150~(Glued)N端缺失不影响原代皮质神经元中Dynactin及乙酰化α-微管蛋白水平。与Ctrl小鼠原代成纤维细胞比,KO原代成纤维细胞中Dynactin亚基蛋白水平降低,且乙酰化α-微管蛋白水平明显升高。此外在KO原代成纤维细胞中也观察到微管乙酰化的百分比显著增多。结论Dynactin功能缺失可显著上调乙酰化α-微管蛋白水平,增加细胞微管乙酰化的百分比。

α-微管蛋白乙酰化调控NLRP3炎症小体活化的研究进展

NLRP3炎症小体在固有免疫系统中发挥重要作用,介导caspase-1激活并促进炎症因子IL-1β分泌应答机体的病原微生物感染和细胞损伤,但异常活化的NLRP3炎症小体也会导致多种炎症性疾病的发生。NLRP3炎症小体的激活涉及多种细胞内分子和信号通路,导致细胞内离子流动变化、线粒体功能紊乱和溶酶体损伤等一系列事件发生,然而NLRP3炎症小体组装的详细调控机制尚不清楚。本综述着重介绍α-微管蛋白的乙酰化介导线粒体通过动力蛋白转运到内质网附近,从而促进线粒体上的ASC与内质网上的NLRP3接触,诱导NLRP3炎症小体组装。

棉铃虫α-微管蛋白基因的克隆、序列分析及表达模式检测

【目的】克隆及序列分析棉铃虫(Helicoverpa armigera)α-微管蛋白基因的cDNA序列,并检测棉铃虫α、β两种微管蛋白基因的表达情况。【方法】以棉铃虫3龄幼虫为试验材料,采用RT-PCR及RACE技术克隆棉铃虫α-微管蛋白基因(HeTubA),采用荧光定量PCR(QRT-PCR)技术分析棉铃虫α、β-微管蛋白基因在不同生长发育阶段及成虫器官中的表达模式。【结果】克隆得到棉铃虫α-微管蛋白基因(GenBank登录号为JQ069957)。序列分析表明,HeTubA开放阅读框1 353 bp,编码450个氨基酸组成的多肽,氨基酸序列包含多个α-微管蛋白保守区。与其它一些昆虫的一致性分析表明,HeTubA与八字地老虎(Xestia c-nigrum)、柑橘凤蝶(Papilio xuthus)及家蚕(Bombyx mori)的α-微管蛋白氨基酸序列同源性最高,α-微管蛋白基因在长期进化中非常保守。荧光定量PCR表明,棉铃虫α、β-微管蛋白基因不具有生长发育阶段及成虫器官特异性,且二者均在复眼表达高,腹部表达低;HeTubA在末龄幼虫期和蛹期高水平表达,HeTubB在末龄幼虫期和成虫期高水平表达。【结论】成功克隆了棉铃虫α-微管蛋白基因,对2种微管蛋白基因的表达模式进行了检测,进一步进行了蛋白质3D结构的构建,可用于深入研究2种微管蛋白基因的功能及开发新型杀虫剂。

禾谷镰孢菌α-微管蛋白基因克隆及其与多菌灵抗药性关系分析

根据禾谷镰孢菌参考菌株NRRL310 84 (PH 1)的α- 微管蛋白基因核苷酸序列设计 4对引物 ,采用PCR方法克隆并测序了禾谷镰孢菌 (Fusariumgraminearum)对多菌灵 (MBC)不同敏感性表型的 6个中国菌株的α 微管蛋白基因全序列。DNA序列对照表明中国的 3个敏感菌株和 3个抗药菌株的α- 微管蛋白基因核苷酸序列同源性没有差异 ,多菌灵抗药性与α- 微管蛋白无关。该基因全长 1718bp ,含有 6个内元 ,编码 4 4 9aa ;与NRRL310 84的α- 微管蛋白基因核苷酸序列同源性为 99% ,存在 5个差异核苷酸 ,与其所编码的氨基酸序列同源性为 99 78% ;与其他 6种真菌α- 微管蛋白基因所编码的氨基酸序列同源性为 37%～ 86 %。

家蚕微孢子虫(浙江株)α-微管蛋白基因部分片段的克隆及系统发育分析

基于微孢子虫分类学地位的争议,通过克隆家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)的α-Tubulin基因,利用BioEditor将核苷酸序列翻译成氨基酸序列,并从NCBI中收集不同物种的α-Tubulin基因,用CLUSTALX(1.81)、Mega2以及在线生物信息学软件CLUSTALW(1.83)分析序列并构建系统发育树。结果显示:家蚕微孢子虫及其它微孢子虫与真菌聚为一类,且微孢子虫以一个独立群与接合菌(zygomycetes)的噬虫霉属(Entomophaga)、耳霉属(Conidiobolus)关系最近,与子囊菌(ascomycetes)、担子菌(basidiomycetes)、壶菌(chytrids)及其它接合菌互为姐妹群。

三种鳞翅目夜蛾科昆虫α-微管蛋白基因的克隆与mRNA表达水平

根据昆虫微管蛋白的分子特征筛选对昆虫微管有效的抑制剂来控制昆虫的生长发育或不同器官的有效功能的表达来达到控制害虫的目的，在未来的害虫综合治理中具有广泛的应用前景。以预蛹期甜菜夜蛾Spodoptera exigua、小地老虎Agrotis ypsilon和八字地老虎Agrotis c-nigrum为材料提取总RNA，利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术（RACE），分别扩增得到以上3种夜蛾科昆虫的α-微管蛋白基因的cDNA序列，3种昆虫的该基因序列均包括1个1353个碱基的开放阅读框。这3个cDNA序列均编码1个含450个氨基酸的蛋白，分子量约为50kDa。氨基酸的142～148位存在1个微管蛋白信号片段GGGTGSG，在氨基酸序列的C-端都有1个酪氨酸残基，N-端存在1个对转录后调控非常重要的保守区MRECI序列，以上特点与其他昆虫α-微管蛋白氨基酸序列保守区序列相同。序列比对表明，克隆得到的α-微管蛋白基因的核苷酸序列是高度保守的，同源性为94．4％～97．0％，而氨基酸的序列同源性达到100％。利用RT—PCR技术在3种昆虫4龄、5龄、6龄幼虫、蛹期4个不同发育阶段和6龄期的肠道、体壁、脂肪体3种不同组织中都检测到了α-微管蛋白基因在mRNA水平的表达。

JWA蛋白与α-微管蛋白结合和对微管稳定性的调节

目的探讨了JWA蛋白与琢鄄微管蛋白在细胞内的分布和相互关系,特别是在有丝分裂过程中的动态变化及与微管蛋白的关系。方法用荧光显微镜技术研究低温处理、处理后恢复的NIH3T3细胞JWA蛋白和微管蛋白的相互作用;用激光共聚焦技术检测NIH3T3细胞的JWA蛋白与琢鄄微管蛋白在细胞内的分布。结果JWA蛋白在细胞内与琢鄄微管蛋白的分布基本平行。结论JWA蛋白,作为一种新的微管相关蛋白,在微管动力学变化过程和有丝分裂过程中与琢鄄微管蛋白有交互作用,与琢鄄微管蛋白结合,可能对微管稳定性起一定的调节作用。

促红细胞生成素对血管性痴呆模型大鼠认知功能、脑保护作用及海马α-微管蛋白表达的影响

目的研究促红细胞生成素(Epo)对血管性痴呆(VD)模型大鼠认知功能、脑保护作用和海马α-微管蛋白(tubulin)表达的影响。方法用"两血管阻断+硝普钠降压"法建立大鼠VD模型,并给予Epo腹腔注射治疗,采用Morris水迷宫试验检测大鼠的认知功能,Nissle染色、α-tubulin免疫组化染色观察细胞形态和Western blot法检测海马α-tubulin表达水平。并与VD大鼠及假手术组大鼠比较。结果与VD组比较,Epo组大鼠水迷宫试验逃避潜伏期明显缩短(除试验第1d)(均P<0.05);海马神经元形态规则,尼氏小体数量多,α-tubulin阳性轴突数多,α-tubulin含量显著升高(P<0.05)。而Epo组与假手术组水迷宫试验逃避潜伏期及海马α-tubulin含量差异无统计学意义。结论Epo可改善VD大鼠的认知功能,减轻缺血性脑损害,促进海马α-tubulin的表达。

α-微管蛋白与玉米细胞质雄性不育的相关性研究

采用两个核背景(Mo17,77)的同核异质、同质异核细胞质雄性不育系及正常品系为材料,以合成的α 微管蛋白基因片段为探针,对玉米细胞质雄性不育系转育前后的mRNA进行Northern杂交分析,首次直接从转录水平上比较了玉米细胞质雄性不育系在败育前后α 微管蛋白基因转录量的差异.结果表明,玉米细胞质雄性不育系α 微管蛋白基因在败育前后的转录量存在着明显的差异,败育前的相对转录量大于败育后的相对转录量,证明了α 微管蛋白基因在花粉发育中起着重要作用,与玉米细胞质雄性不育性密切相关.

毛白杨α-微管蛋白基因家族的克隆与序列分析

采用本地化软件Blast P对杨树全基因组数据库和Gen Bank数据进行搜索,根据搜索结果对毛白杨TUA基因家族进行克隆,并利用软件Clustal W和MEGA对TUA基因进行了核酸和氨基酸序列的比对分析和系统进化分析;利用SWISS-MODEL服务器对TUA的蛋白质三维结构进行模拟。结果显示:毛白杨α-微管蛋白由8个成员构成,8个成员的氨基酸序列和其它植物α-微管蛋白序列的相似性在80%以上;TUA基因可分为2个家族,每个家族成员都有其独特的内含子外显子特征;TUA蛋白的三维结构表现出极高的相似性。毛白杨TUA基因在序列和结构上都十分保守;8个TUA基因起源于2个祖先TUA基因。

高血压大鼠心脏细胞骨架蛋白α-微管蛋白和结蛋白

目的探讨高血压大鼠心血管重构时,心肌细胞骨架蛋白α-微管蛋白(tubulin)和结蛋白(desmin)的变化。方法建立腹主动脉缩窄高血压大鼠模型,术后2周、4周用尾动脉测压法观察大鼠血压和心率的变化,术后11周用免疫组织化学和形态计量学方法,观察心血管形态改变、细胞骨架蛋白α-微管蛋白、结蛋白在心脏原位蛋白表达的变化。结果与假手术组比较,高血压大鼠2周和4周血压显著升高[(144·7±4·9比110·0±4·0)mm Hg,P<0·01;(151·4±14·9比114·4±5·5)mm Hg,P<0·01)、心血管重构,细胞骨架蛋白在心脏过表达和聚集、分布异常,而且阳性表达面积和阳性表达面积百分数增大,α-微管蛋白[(102927·8±20561·9比18304·4±9661·0)μm2,P<0·01]、结蛋白[(153271·7±15193·7比48686·1±14693·3)μm2,P<0·01]。结论细胞骨架蛋白α-微管蛋白、结蛋白表达上调,参与了高血压心血管重构时心肌细胞骨架重构。

碘过量对仔鼠脑α-微管蛋白表达的影响及硒的干预作用

目的研究碘过量摄入对小鼠仔鼠脑α-tubulin基因表达的影响及硒的干预作用。方法将60只BALB/c小鼠随机分为四组正常对照组(饮用自来水,NC)、碘过量组(饮水含碘3000μg/L,EI+)、补硒组(饮水含Se200μg/L,Se+)、碘过量加硒(饮水含碘3000μg/L+Se200μg/L,EI+Se+)组。以纯系鼠饲料饲养。4个月后,雌雄交配。测定D14和D28仔鼠血清总T4和总T3水平,分别用实时荧光定量PCR和Western Blot测定D0、D14和D28仔鼠大脑组织α-微管蛋白和α-微管蛋白mRNA表达。结果D14仔鼠血清T4水平碘过量组显著低于对照组和碘过量加硒组(P<0.05)。D0仔鼠脑组织α-微管蛋白mRNA水平碘过量组显著低于对照组、单独补硒组和碘过量补硒组(P<0.05)。14d仔鼠脑组织α-微管蛋白mRNA和蛋白表达水平碘过量组显著高于其它组(P<0.05)。碘过量和补硒对D28仔鼠血清T4水平和脑组织α-微管蛋白表达水平无明显影响。结论碘过量引起仔脑α-微管蛋白的发育迟滞,补硒具有缓解作用。

阿尔采默病患者皮肤α-微管蛋白的免疫细胞化学与胶体金免疫电镜观察

目的观察阿尔采默病(AD)患者皮肤基底细胞α微管蛋白的变化。方法取患者背部皮肤,用免疫细胞化学和胶体金免疫电镜技术观察,并进行定量分析。结果免疫细胞化学染色显示,对照组皮肤免疫阳性染色主要位于表皮层基底细胞的胞质内,棘细胞层和颗粒层可见少量的阳性细胞;AD组基底细胞内着色深,棘细胞层和颗粒层亦有表达,但数量少。胶体金标记结果显示,对照组基底细胞可见较丰富的微管,标记的胶体金散在于胞质。AD组微管较对照组减少;标记的金颗粒数量较对照组明显增多。定量结果显示,AD组α微管蛋白免疫细胞化学染色的AOD值(1. 165±0. 079)、VIOD值(186. 000±15. 853)均较对照组(0. 814±0. 152, 96. 020±14. 755)明显增高(P<0. 01);α微管蛋白胶体金标记颗粒数目AD组(20. 74±3. 99)亦较对照组(15. 50±3. 41)增多明显(P<0. 01)。结论AD患者皮肤基底细胞内微管数量的减少,结构破坏,对皮肤组织的观察可能间接反映神经组织的改变。

不同基因型棉纤维α-微管蛋白基因的特异性分析

目的:探讨α-微管蛋白基因与棉纤维发育的关系,为利用基因工程培育棉花新品种提供理论依据。方法:利用PCR与测序技术相结合的方法,对4个纤维品质差异较大、基因型不同的棉纤维α-微管蛋白基因进行序列分析。结果:4个品种均得到了1条约250bp的电泳谱带,对其测序发现品种之间存在不同程度的差异。结论:α-微管蛋白基因的保守性很强,只存在个别碱基的差异;α-微管蛋白基因参与调控棉纤维的形态建成,控制着纤维素的沉积方式,即对纤维伸长及次生壁增厚有重要作用。

血管性痴呆与正常老年人皮肤基底细胞α-微管蛋白定量比较研究

目的 :探讨基底细胞α -微管蛋白能否作为判断血管性痴呆患者脑认知功能的一项外周生物学指标 方法 :使用免疫组化LSAB法对血管性痴呆患者和正常老年人皮肤基底细胞α -微管蛋白进行检测 ,用图象分析仪进行定性与定量分析 结果 :正常老年组的积分光密度 (IOD) =139.70 ,平均光密度 (AOD) =1.0 0 ,显著高于血管性痴呆组 (VD组 )的IOD =12 0 .55和AOD =0 85,P值均 <0 .0 1 结论 :本研究提示血管性疾呆患者基底细胞α -微管蛋白的定性与定量分析 。

立体定向移植人骨髓间充质干细胞对局灶性脑缺血大鼠海马区α-微管蛋白表达的影响

目的探讨立体定向移植人骨髓间充质干细胞(hMSCs)治疗对局灶性脑缺血大鼠海马区α-微管蛋白表达的影响。方法体外培养、扩增hMSCs;100只大鼠随机分为正常对照(NC)组、假手术组、缺血再灌注(IR)组、假移植组、移植组,每组再分为1d、3d、7d、28d4个时间点;制作大鼠局灶性脑缺血90min再灌注1h的IR模型,制模成功后移植组大鼠立即进行立体定向hMSCs移植,移植后相应时间点应用免疫组化及免疫荧光染色,观察各组大鼠海马区α-微管蛋白表达。结果 NC组、假手术组大鼠各时间点海马区α-微管蛋白表达的差异无统计学意义;与之相比,IR组、假移植组各时间点及移植组移植后1d、3d时表达明显下降(均P<0.01);但移植组各时间点海马区α-微管蛋白表达明显高于IR组及假移植组(均P<0.01),移植7～28d时与NC组比较,差异无统计学意义。结论局灶性脑缺血大鼠海马区α-微管蛋白表达减少;hMSCs移植促进α-微管蛋白表达增加,这可能是其减轻脑缺血后神经损伤的机制之一。

玉米根细胞中类整合素蛋白与α-微管蛋白的共定位及其可能的相互作用(英文)

采用间接免疫荧光标记法对玉米根细胞中的类整合素蛋白和细胞骨架主要组分之一的α-微管蛋白进行了荧光定位。结果表明:类整合素蛋白主要分布在质膜上。与对照相比,用与类整合素蛋白特异结合的5肽GRGDS处理后,质膜上类整合素的分布更为均匀,微管的排列密度降低,而用不与类整合素蛋白特异结合的GRGDS类似物SDGRG处理则对类整合素蛋白分布和微管蛋白的排列均无明显影响。微管蛋白解聚剂或稳定剂处理改变类整合素在质膜上的分布。这些结果表明类整合素蛋白与微管蛋白间有复杂的相互作用。

刺激隐核虫α-微管蛋白基因的克隆、原核表达及在生活史不同阶段的mRNA表达

从本实验室已有刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)转录组数据中筛选获得α-微管蛋白基因片段,利用5'RACE和3'RACE技术首次克隆获得其cDNA,全长为1602 bp,包含1356 bp的开放阅读框,编码451个氨基酸,预测蛋白质分子量为49.78 kD。生物信息学分析表明α-微管蛋白为亲水性非跨膜蛋白,氨基酸序列的第142～148位有特异且保守的GTP核苷酸结合位点(GGGTGSG)。对刺激隐核虫α-微管蛋白氨基酸序列进行同源性比对及进化树分析,发现其与间日疟原虫(Trypanosoma vivax)、丹氏锥虫(Trypanosoma danilewskyi)、八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)、尾刺耐格里原虫(Naegleria gruberi)、眼虫(Euglena gracilis)等的序列一致性高达94%～95%,且在系统进化树上聚为一支。采用实时荧光定量PCR技术对α-微管蛋白基因在刺激隐核虫3个生活史阶段的表达进行检测,结果显示α-微管蛋白基因的表达量在纤毛虫时期显著高于包囊和滋养体时期(P<0.05)。我们进一步构建了α-微管蛋白重组表达载体,并转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行原核表达,SDS-PAGE分析表明,诱导表达的重组蛋白分子量约为50 kD,与预测的结果一致,即成功诱导表达α-微管蛋白。本实验结果为后续制备α-微管蛋白有效亚单位疫苗防治刺激隐核虫病奠定了基础。

禹州漏芦含药血清对人多发性骨髓瘤细胞株α-微管蛋白乙酰化水平热休克蛋白90分子伴侣功能影响的研究

多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）又称浆细胞骨髓瘤，是浆细胞恶性克隆大量增生，出现以广泛溶骨病变和（或）骨质疏松、肾功能损害为特征的恶性肿瘤［1］。瘤细胞增殖比例低（通常＜1．5%）、多药耐药，且治疗反应差，最终因多药耐药而复发。迄今，MM作为一种不可治愈的恶性肿瘤正严重地危害着人们的健康，因此，寻找新的植物来源的药物显得非常必要。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸调节α-微管蛋白乙酰转移酶1抑制矽肺纤维化

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)能否通过对α-微管蛋白乙酰转移酶1(α-TAT1)调节而发挥抗矽肺纤维化作用。方法Wistar大鼠随机分为3组:对照组、矽肺模型组、Ac-SDKP处理组,每组6只。原代培养大鼠的肺成纤维细胞分为5组:对照组、转化生长因子(TGF-β1)诱导组、Ac-SDKP预处理组(TGF-β1+Ac-SDKP)、α-TAT1沉默组(α-TAT1-siRNA+TGF-β1+Ac-SDKP)、α-TAT1过表达组(α-TAT1-cpDNA+TGF-β1+Ac-SDKP)。免疫组化检测大鼠肺组织中α-TAT1的表达与分布,Western blot检测大鼠肺组织及大鼠肺成纤维细胞中I型胶原(Col I)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、乙酰化微管蛋白-α(Ac-Tubα)、α-TAT1蛋白的表达水平。结果矽肺模型组大鼠的肺组织中出现矽结节,α-TAT1在矽结节中表达缺失,Western blot结果显示,矽肺模型组和TGF-β1诱导的肺成纤维细胞中Col I和α-SMA蛋白表达上调,Ac-Tubα和α-TAT1蛋白表达下调。Ac-SDKP治疗可抑制该变化。Ac-SDKP对Col I、α-SMA表达抑制效应可被α-TAT1-siRNA阻断,而α-TAT1过表达可加强Ac-SDKP对Col I、α-SMA表达的抑制作用。结论Ac-SDKP通过调节α-TAT1的表达抑制肌成纤维细胞分化,发挥抑制矽肺大鼠肺纤维化的作用。