绿豆蛋白α-淀粉酶抑制肽的制备与鉴定

采用胃-胰蛋白酶水解绿豆蛋白及其分级蛋白,以水解物α-淀粉酶活性抑制率为主要指标,结合水解度、氨基酸组成及分子质量分析其抑制效果差异及原因。结果表明,绿豆蛋白肽对α-淀粉酶活性抑制率最高,为16.51%;与绿豆分级蛋白相比,绿豆蛋白的疏水氨基酸含量和水解度最高,分别为32.68%和6.28%,水解物的肽分子质量最小,均小于20kDa,因此选用绿豆蛋白制备α-淀粉酶抑制肽。然后分离鉴定绿豆蛋白肽,新发现了17条有潜在α-淀粉酶抑制效果的肽。本研究表明绿豆蛋白较其分级蛋白具有更强的α-淀粉酶抑制效果,能够用于降血糖的功能性食品或药物中。

不同品种白芸豆α-淀粉酶抑制剂的活性和含量差异分析

探究不同品种白芸豆α-淀粉酶抑制剂(α-AI)的活性和含量差异,为α-AI专用型白芸豆的品种选育和加工生产提供指导。以大白芸豆(YWL1、YWL2)、中白芸豆(Tbh1、Tbh2)、小白芸豆(云白1、云白2)品种为材料,对其营养成分、α-AI的活性和含量进行测定分析,并采用超滤膜进行不同分子量α-AI1(6~20 ku)、α-AI2(21~40 ku)、α-AI3(41~60 ku)的分离,测定不同分子量α-AI的活性差异。结果表明,不同品种白芸豆的蛋白质、脂肪、淀粉和灰分含量差异明显,含量分别为17.5%~26.9%、1.1%~2.3%、32.9%~43.5%、3.8%~4.6%。云白1蛋白质含量最高(26.9%);YWL2灰分含量最高(4.6%),Tbh2脂肪含量最高(2.3%);α-AI的活性依次排序为YWL1>YWL2>云白1>Tbh1>Tbh2>云白2;α-AI的含量依次为云白1>YWL1>Tbh1>YWL2>Tbh2>云白2;将α-AI提取液进行膜分离得到3种不同分子量结构的α-AI1(6~20 ku)、α-AI2(21~40 ku)、α-AI3(41~60 ku),活性平均值分别为(2315±313)、(11491±1226)、(45683±1914)U/g,依次是α-AI3>α-AI2>α-AI1。综合比较发现,YWL1具有较高的α-AI活性和含量,分别为23156 U/g和7.04%,更适于α-AI的生产。

白肾豆中α-淀粉酶抑制剂的超声波辅助提取工艺研究

目的:研究白肾豆中α-淀粉酶抑制剂提取的最优工艺。方法:采用超声波辅助提取白肾豆中α-淀粉酶抑制剂,研究了白肾豆粉细度、提取时间、提取温度、超声功率和料液比对白肾豆中α-淀粉酶抑制剂得率的影响。结果:通过单因素和正交实验,确定了最佳工艺条件为料液比1∶10(g∶mL)、提取温度60℃、提取时间100 min、超声功率200 W。依照优化条件进行重复试验,此时白肾豆中α-淀粉酶抑制剂的得率为4.51%。

白芸豆提取物中α-淀粉酶抑制剂活性检测方法对比分析

本研究基于现有α-淀粉酶抑制剂(α-amylase inhibitor,α-AI)活性检测方法的试验原理,通过验证3,5-二硝基水杨酸法和碘-淀粉显色法2种方法的精度,分析了不同检测方法在检测原理和检测结果准确性2个方面的差异。结果表明,3,5-二硝基水杨酸法是通过测量α-AI对3,5-二硝基水杨酸显色产物的吸光度变化来确定其活性,而碘-淀粉显色法则是利用碘离子与淀粉形成淀粉-碘络合物,通过观察溶液颜色的变化来测定α-AI的活性。从原理上来看,2种方法在测定α-AI活性时采取了不同的测定方式。从检测结果准确性方面来看,2种方法的准确性可能存在差异。3,5-二硝基水杨酸法能够准确测量α-AI对3,5-二硝基水杨酸的抑制能力,从而反映出其活性水平。而碘-淀粉显色法则是通过观察淀粉-碘络合物的颜色变化来判断α-AI的活性,这种方法可能受到其他因素的干扰,从而影响测定结果的准确性。本研究为准确并快速测定白芸豆α-AI产品提供方法,并为精确控制产品质量和生产流程提供参考。

白芸豆中α-淀粉酶抑制剂活性的测定

根据碘试液与淀粉溶液呈蓝色这一特性,采用可见分光光度法,通过添加α-淀粉酶抑制剂(α-AI)前、后淀粉酶对淀粉水解促进作用的变化确定其抑制活性。结果表明,碘与淀粉络合后,在580 nm处产生特征吸收,ρ(α-AI)=0.003~0.018 mg/L,对α-淀粉酶活性抑制率与其质量浓度线性关系良好(r2=0.9905)。该实验方法条件易于控制、操作简单,为α-AI活性的研究提供参考。

结合分子对接技术研究牦牛乳干酪苦味肽RK7和KQ7的α-淀粉酶抑制活性

以牦牛乳干酪苦味肽RPKHPIK(RK7)和KVLPVPQ(KQ7)为研究对象,通过生物信息学方法,使用ExPASy-ProtParam、Innovagen和PepDraw等工具计算RK7和KQ7的理化性质,利用分子对接技术揭示抑制α-淀粉酶的作用机制,结合体外实验测定α-淀粉酶抑制活性。研究表明:RK7和KQ7的分子质量分别为875.07 Da和779.98 Da,疏水性分别为42.86%和71.42%;分子对接显示α-淀粉酶中的His305、Glu233、Trp59和Trp58与RK7和KQ7的结合起重要作用,并且Asp197、Glu233和Asp300是影响α-淀粉酶活性的关键氨基酸;体外活性验证发现,RK7和KQ7α-淀粉酶的IC50分别为0.45 mg/mL和0.86 mg/mL。本研究通过生物信息学方法结合体外活性实验,高效快速获得牦牛乳源α-淀粉酶抑制肽,并通过分子对接技术探究分子间的作用机制,为α-淀粉酶抑制肽的研究提供新思路。

体外模拟胃部消化对白芸豆α-淀粉酶抑制剂活性及结构的影响

为探究体外模拟胃部消化对α-淀粉酶抑制剂(α-AI)活性和结构特征的影响,实验以白芸豆为原料制备α-AI,探究体外模拟胃部消化不同时间产物的活性、粒径分布、Zeta电位、二级结构,以及巯基和二硫键含量。白芸豆中α-AI的分子质量约为34 ku,当消化时间大于90 min时产物对α-淀粉酶的抑制活性显著增加(P<0.05),粒径和Zeta电位绝对值显著降低(P<0.05);β-转角相对含量增加,无规则卷曲相对含量降低,总巯基、游离巯基含量均显著降低,二硫键含量显著升高。研究结果表明,体外模拟胃部消化过程中,白芸豆α-AI蛋白分子间的交互和聚集现象不断加剧,部分巯基发生氧化现象形成二硫键,形成稳定的蛋白质构象,能够在体内较好地发挥其抑制α-淀粉酶的活性。

谷物蛋白类α-淀粉酶抑制剂及其功能特性的研究进展

谷物是人类重要的食物,含有丰富的淀粉、蛋白质等营养物质,同时也是蛋白类α-淀粉酶抑制剂的良好来源。α-淀粉酶抑制剂(α-amylase inhibitor,α-AI)是一类具有抑制糖苷酶水解作用的物质,具有降血糖、降血脂、减肥及抗虫等作用,在医学与农业方面都有广泛的应用。该文对谷物中蛋白类α-AI的分离纯化、检测方法、功能特性等进行综述,并对其在食品及其它领域的应用前景进行展望。

具有α-淀粉酶抑制活性的白芸豆多肽的制备及其热稳定性研究

以白芸豆为原料,酶法制备多肽。以α-淀粉酶抑制率为指标,比较酸性、中性和碱性蛋白酶的酶解效果。结果表明：3.350酸性蛋白酶的酶解效果最好。通过加酶量、酶解p H值、酶解温度和酶解时间的单因素试验和正交试验,得到制备白芸豆多肽的最佳工艺条件为：加酶量3 200 U/g、酶解p H 2.2、酶解温度55℃、酶解时间60 min,此条件下白芸豆多肽α-淀粉酶抑制率为80.82%。热稳定性研究表明,白芸豆多肽的热稳定性高于α-淀粉酶抑制剂（α-amylase inhibitor,α-AI）粗提液,该多肽在85、90℃条件下的α-淀粉酶抑制活性能保持更长时间。凝胶电泳分析表明白芸豆多肽的分子质量为7.53~9.09 ku。

白豆α-淀粉酶抑制剂糖蛋白的提取纯化及降血糖活性研究

采用乙醇分级沉淀、CM纤维素离子交换柱层析及凝胶柱层析,从白豆中分离纯化得到一组分均一的白豆α-淀粉酶抑制剂(α-AI),其为一相对分子质量为36k的糖蛋白。通过对白豆α-淀粉酶抑制剂对四氧嘧啶高血糖模型大鼠空腹血糖及糖耐量的影响,研究其降血糖活性。当白豆α-AI使用剂量为150mg/kg体重,连续使用7d时,α-AI可明显降低高血糖大鼠的空腹血糖;使用剂量为300mg/kg时,对高血糖大鼠的糖耐量具有明显的改善作用。研究结果表明,从白豆中分离得到的淀粉酶抑制剂糖蛋白对高血糖大鼠具有明显的降血糖功能,其作为一种安全、天然的降糖药物具有良好的开发前景。

小麦中提取的α-淀粉酶抑制剂调节血脂及抗动脉粥样硬化的实验研究

目的:研究小麦中提取的α-淀粉酶抑制剂(简称-αAI)调节血脂及抗动脉粥样硬化的作用。方法:预防性给药时,给高脂饲料造模的同时连续给药9周,于第63天测定大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、MDA、SOD及肝脏TC、TG含量,同时观察其对大鼠血液流变学及动脉、肝脏病变的影响。治疗性给药时,给高脂饲料造模成功后连续给药3周,测定大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C及肝脏TC、TG含量。结果:预防性给药时,中、高剂量-αAI能显著降低血清TC、TG、LDL-C及肝脏TC、TG含量,显著升高HDL-C,还可以使MDA含量显著降低,SOD活性显著升高,同时可以改善血液流变学,缓解动脉及肝脏病变情况。治疗性给药时,高剂量-αAI能显著降低血清TC、TG、LDL-C及肝脏TC、TG含量,显著升高HDL-C。结论:-αAI能调节血脂平衡,预防高脂血症及动脉粥样硬化的生成,对已形成的高脂血症也有一定的治疗效果。

小麦α-淀粉酶抑制剂降血糖作用的实验研究

目的:研究从小麦中提取的α-淀粉酶抑制剂对糖尿病小鼠的影响。方法:四氧嘧啶性糖尿病小鼠灌胃给予α-淀粉酶抑制剂45 mg·kg-1,测定其淀粉耐量和糖耐量;四氧嘧啶性糖尿病小鼠灌胃给予α-淀粉酶抑制剂(5,15,45mg·kg-1),连续21 d后,测定血糖值和小肠内二糖酶活性。血清葡萄糖测定采用葡萄糖氧化酶法。结果:α-淀粉酶抑制剂能够增加四氧嘧啶性糖尿病小鼠的淀粉耐量而对其葡萄糖耐量没有影响;糖尿病小鼠灌服α-淀粉酶抑制剂45和15 mg·kg-1后,血糖值均明显低于模型组。α-淀粉酶抑制剂能有效抑制小鼠小肠内各肠段的麦芽糖酶和蔗糖酶活性。结论:小麦α-淀粉酶抑制剂对糖尿病小鼠有降血糖作用,其机制可能与抑制小肠内各肠段的麦芽糖酶和蔗糖酶活性有关。

燕麦肽的制备、抗氧化性及其对α-淀粉酶抑制作用的研究

采用酶法制备燕麦肽,并对其抗氧化性及α-淀粉酶抑制作用进行了研究。在单因素分析的基础上采用正交实验分析方法对燕麦肽水解条件进行优化,测定其抗氧化性;对超滤分离后的两种燕麦肽组分的α-淀粉酶抑制作用进行比较;选用<5ku的燕麦肽通过单因素分析对α-淀粉酶抑制作用条件进行优化。结果表明,燕麦肽的最优水解条件为pH7.5,料液比1∶14,温度60℃,加酶量6%,此条件下燕麦肽DPPH清除率可达到80.11%,1.8mg/mL燕麦肽对Fe2+的螯合能力达到60.24%,3.2mg/mL燕麦肽对羟自由基清除率达到49.15%;5mg/mL小于5ku燕麦肽组分对α-淀粉酶的抑制率为68.98%,5mg/mL大于5ku燕麦肽组分对α-淀粉酶的抑制率为51.06%,小于5ku燕麦肽生物活性较强;燕麦肽对α-淀粉酶抑制作用的最优条件为底物浓度90mg/mL,多肽浓度12mg/mL,抑制时间为10min。燕麦肽具有较好的抗氧化性和α-淀粉酶抑制作用,在开发功能性食品方面具有较大的应用价值。

α-淀粉酶抑制剂的研究进展

α-淀粉酶抑制剂是一种很有潜力抑制糖类在消化道吸收的药物,还可作为抗虫基因。目前在医学和农业上应用前景广阔。本文对α-淀粉酶抑制剂的发展概况、类型及特性进行了综述,并对其前景作了展望。

小麦麸皮中α-淀粉酶抑制剂的分离、纯化及性质研究

α-淀粉酶抑制剂作为一种减肥和降血糖的辅助药物,越来越受到更多的关注。同时它可作为抗虫的基因,在医学和农业上应用前景广阔。该文中对小麦麸皮中α-淀粉酶抑制剂的分离、纯化工艺以及性质进行了研究。结果表明,小麦麸皮粗提物经纤维素离子交换柱和凝胶柱层析分离纯化,得到精制α-淀粉酶抑制剂,经PAGE-SDS凝胶电泳得到3条带,分子质量分别为33 ku,30 ku和26 ku。该提取物在80℃以下,pH3-10,抑制活力相对稳定。Na+,K+,Mg2+在0-200 mmol/L具有提高α-淀粉酶抑制剂活力作用,高浓度的Ca2+具有一定抑制作用。

双水相萃取法分离纯化白芸豆中α-淀粉酶抑制剂的研究

采用PEG/(NH4)2SO4双水相系统萃取α-淀粉酶抑制剂,考察了PEG浓度、(NH4)2SO4浓度和NaCl溶液浓度对α-淀粉酶抑制剂分配系数、相比和活力回收率的影响。确定了白芸豆中α-淀粉酶抑制剂提取的最佳条件,即PEG质量分数为12.0%,(NH4)2SO4的质量分数为13.3%,NaCl质量分数为0.003%时,分配系数、相比和活力回收率分别为4.40,0.57,71.41%。

白豆α-淀粉酶抑制剂糖蛋白的提纯及性质研究

目的从白豆中分离纯化得到α-淀粉酶抑制剂（α-Al）,研究其抑制动力学特征及化学稳定性,为其作为降糖减肥药物的开发提供技术资料。方法采用乙醇分级沉淀、CMII纤维素离子交换柱层析及凝胶柱层析,从白豆中分离纯化得到白豆α-Al;通过在不同底物及抑制剂浓度下的酶反应速度,研究其抑制动力学特征;通过在不同温度及pH条件下的抑制活性,研究其对温度及pH的稳定性。结果纯化得到一相对分子质量为36 ku的α-Al糖蛋白;其对α-淀粉酶的抑制类型为非竞争性抑制,ID50=1.7×10^-5mol/L,抑制常数Ki=9.412 5×10^-6mol/L;白豆α-AI在pH 3.0-10.0,温度70°C活性稳定。结论从白豆中分离得到的α-淀粉酶抑制剂糖蛋白对猪胰α-淀粉酶具有较高的抑制活性,对温度及pH具有较高的稳定性,其作为一种安全、天然降糖药物具有良好的开发前景。

白芸豆α-淀粉酶抑制剂在低GI方便粥中的应用

以淀粉水解率为指标,分析白芸豆α-淀粉酶抑制剂对淀粉水解的抑制作用,并进一步对白芸豆α-淀粉酶抑制剂对不同方便粥血糖生成指数(GI值)的影响进行研究.结果表明:随着大米粥中白芸豆α-淀粉酶抑制剂添加量由0%升到5.0%,大米粥的淀粉水解率不断下降,且其GI值由86.63降至32.03;进而将白芸豆α-淀粉酶抑制剂按3.0%的添加量添加到方便粥(燕麦粥、青稞粥和莲子粥)中,方便粥的GI值均降低至55以下,属于低GI食品范畴.

α-淀粉酶抑制剂AAI的核磁共振氢谱谱峰归属及结构分析

α -淀粉酶抑制剂AAI(α -AmylaseInhibitor)是从墨西哥苋属植物Amaranthushypochondriacus种子中提取的由32个氨基酸残基组成的多肽。它能强烈地抑制几种昆虫幼虫的α -淀粉酶活性 ,而不抑制人及哺乳类动物的α -淀粉酶活性。使用核磁共振方法收集了AAI的二维氢谱谱图 ,完成了全部主链和绝大部分侧链质子共振峰的序列归属 ,并利用X -PLOR软件计算出AAI的三维结构。AAI由三股反平行 β-折叠片与三对二硫键组成抑制剂胱氨酸结模体(inhibitorcystine -knotmotif)结构,与来自虎纹捕鸟蛛的神经毒素HWTX -I和凝集素SHL -I及其它来源的多种小分子活性多肽的结构类似 ,但它们的生物活力各不相同 ,表明该模体适用于结构功能关系的比较研究和作为蛋白质工程活力改造的结构骨架 (scaffold)。AAI对昆虫α -淀粉酶具有专一活性 ,可用于通过转基因技术来赋予植物抗虫活性。