大米α-球蛋白的原核表达、抗体制备及检测

大米α-球蛋白是大米胚乳中主要的盐溶蛋白,也是大米的主要致敏原之一。为了建立起大米α-球蛋白的检测分析方法,将大米α-球蛋白的编码基因亚克隆到表达载体p QE30中,并在大肠杆菌中进行了重组大米α-球蛋白的表达。通过金属亲和层析法对重组大米α-球蛋白进行纯化,以纯化的重组大米α-球蛋白为抗原免疫白兔,制备出了抗大米α-球蛋白多克隆抗体。Western Blotting检测结果显示,该抗体能够特异性地与大米α-球蛋白进行免疫结合反应,抗大米α-球蛋白抗体与目标蛋白的结合呈现出一定的定量关系。并且,利用该抗体构建起了大米α-球蛋白的ELISA检测分析方法,并对3种大米样品中α-球蛋白的含量进行了检测分析。

α-球蛋白与稀土金属离子钆(Ⅲ)的配位作用

采用固定顺磁金属离子浓度,逐渐改变α-球蛋白浓度,测定溶剂水质子弛豫时间变化的方法,研究了稀土离子钆(Ⅲ)与人血α-球蛋白的配位作用.研究结果表明,α-球蛋白中有3个钆(Ⅲ)离子的结合部位,其配合物的离解常数K_d=2.5×10^(-4)(mol/L)。

大米α-球蛋白肽YGEGSSEEG对TNF-α诱导的血管内皮细胞损伤的影响

目的研究从大米α-球蛋白中获取的活性肽发挥抗动脉粥样硬化功效的机制。方法大米α-球蛋白经体外消化产物,采用外翻肠囊法收集可吸收组分,利用凝胶色谱和半制备高效液相色谱分离纯化,液相质谱串联测定氨基酸序列。利用TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞损伤模型来评价肽的功效。检测细胞存活率,筛选肽的合适剂量;流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白质印迹检测Bcl-2、Bax、p-p38、血管细胞黏附分子及NF-κB信号通路等蛋白表达水平;酶联免疫检测谷胱甘肽过氧化物酶等氧化应激因子含量。结果从可吸收组分中获得肽YGEGSSEEG。50 mg·L^(-1)合成肽能够明显抑制TNF-α引起的细胞凋亡,调控Bcl-2/Bax蛋白表达以及阻碍p38蛋白的磷酸化;同时,明显抑制HUVEC产生黏附分子、阻碍NF-κB信号通路的激活;此外,肽对细胞中的氧化应激水平并无明显影响。结论大米α-球蛋白肽YGEGSSEEG可通过抑制细胞凋亡和降低黏附分子表达,发挥血管内皮细胞保护作用。

糙米食品级α-球蛋白制备工艺研究

糙米中α-球蛋白是重要的生理活性蛋白。本试验以巨胚稻糙米为原料，研究了淀粉酶解预处理和不同去杂工艺对α一球蛋白提纯效率的影响，建立了可食用型糙米α-球蛋白的制备新工艺。结果表明：（1）淀粉酶解预处理使总球蛋白提取率比对照降低18．9％（P〈0．05），但并没有引起蛋白组分改变。（2）硫酸铵盐析获得的a-球蛋白粗品主要包含21ku和13～16ku的杂蛋白，碳酸氢铵的去杂效果显著优于70％乙醇和蒸馏水。（3）优化的α-球蛋白制备工艺如下：脱脂糙米粉按质量体积比1：8加入1．0mol／L氯化钠振荡提取2h，重复1次；30％饱和度的硫酸铵沉淀得α-球蛋白粗品，对蒸馏水透析3h，沉淀采用0．05mol／L碳酸氢铵洗涤2次去杂，即获得28ku的α-球蛋白，得率为4．92mg／g米粉。工艺中采用的试剂均符合食品工业规范。

凝血酶产品中的α-2巨球蛋白活性研究

凝血酶作为一种快速止血药,主要从血液中提取,而血液中的血浆蛋白有100多种,因此国内生产的凝血酶不可避免地含有多种血浆杂质蛋白。α-2巨球蛋白(α-2M)是一种重要的血浆蛋白之一。由于巨球蛋白保护胰蛋白酶,用大豆胰蛋白酶抑制剂灭活未被保护的胰蛋白酶后,利用Na-benzoy-DL-arginine-pnitroanilide(BAPNA)作为底物检测凝血酶中巨球蛋白的活性的方法,证明了从血浆中提取的凝血酶易存在α-2巨球蛋白,从而为凝血酶进一步纯化提供了研究方向。

汞中毒肾损伤患者尿α_1-微球蛋白测定的临床意义

据报道,尿α1-微球蛋白(α1-MG)测定有助肾脏疾病早期诊断,能反映其他疾病对肾脏的早期影响[1].我们对23例中药偏方致亚急性汞中毒肾损伤(DMPR)患者进行尿α1-MG测定,并与20例正常人对照,探讨DMPR患者尿α1-MG含量测定的临床意义,现报告如下.

α-2巨球蛋白对骨关节炎的影响

骨关节炎是可动关节由于关节软骨退行性改变和在关节表面、边缘形成新骨为其特征的内在的非炎症性疾病。骨关节炎的发生发展与多种因素有关。基质金属蛋白酶家族是细胞外基质降解过程中的重要酶类。-α2巨球蛋白是血浆广谱的蛋白酶抑制剂。研究证实:细胞外基质中基质金属蛋白酶以及其组织抑制剂的失衡与多种病理机制有关。就与骨关节炎关系密切的几种发病因素及-α2巨球蛋白对关节基质及软骨代谢的影响及其调控机制的研究进展作一综述,以阐明-α2巨球蛋白参与骨关节炎的病理过程。

经阴道超声检查联合宫颈分泌物胎盘α-1微球蛋白及胎儿纤维连接蛋白预测先兆早产的价值研究

目的研究经阴道超声(TVU)测宫颈长度(CL)联合宫颈分泌物胎盘α-1微球蛋白(PAMG-1)和胎儿纤维连接蛋白(fFN)在先兆早产(TPL)预测中的临床价值。方法将2019年2月至2021年8月在湖南省妇幼保健院就诊的268例适龄TPL孕妇本次前瞻性研究。根据妊娠周不同分为第一阶段(28~30^(+6)周),第二阶段(31~33^(+6)周),第三阶段(34~36^(+6)周)。用TVU测量3个阶段孕妇的CL,同时收集宫颈分泌物PAMG-1和fFN进行检测。以TPL孕妇妊娠结局为早产与否为“金标准”,比较3个阶段不同CL、PAMG-1、fFN的早产发生率;分析各阶段上述3个指标联合预测TPL孕妇早产的价值;研究3个指标与TPL孕妇早产的定量关系。结果268例TPL孕妇第一阶段有71例,第二阶段有104例,第三阶段有93例。3个阶段CL<2.5 cm、PAMG-1(+)、fFN(+)的早产率均高(P<0.05);3个阶段的3个指标联合预测的早产率均高于任两指标联合(P<0.05)。3个阶段CL<2.5 cm预测早产的敏感度和特异度分别为[第一阶段(72.2%和67.9%)、第二阶段(77.1%和79.7%)、第三阶段(81.0%和58.8%)],PAMG-1(+)的为[第一阶段(72.2%和73.6%)、第二阶段(82.8%和79.7%)、第三阶段(85.7%和66.7%)],fFN(+)的为[第一阶段(83.3%和62.3%)、第二阶段(77.1%和73.9%)、第三阶段(83.3%和58.8%)],CL<2.5 cm联合PAMG-1(+)、fFN(+)的为[第一阶段(72.2%和86.8%)、第二阶段(66.70%和97.10%)、第三阶段(69.0%和92.2%)]。多因素Logistic回归分析显示,CL、PAMG-1、fFN均与TPL孕妇早产有定量关系(P<0.05)。结论CL、PAMG-1、fFN对预测TPL孕妇早产有一定价值,3个指标联合提高了早产预测的特异度,3个指标联合对预测妊娠31~33周TPL孕妇早产的应用价值较高。

左旋氨氯地平与厄贝沙坦对高血压病早期肾小球滤过率、α-微球蛋白的影响

目的评价左旋氨氯地平与厄贝沙坦在高血压病病人早期肾保护作用方面的疗效。方法入选高血压病1级、2级病人71例,随机分为两组,左旋氨氯地平组(n=35)口服左旋氨氯地平2.5mg/d;厄贝沙坦组(n=36)口服厄贝沙坦150mg/d。观察12个月,治疗前后分别检测肾小球滤过率(GFR)、α-微球蛋白(α-MG)及血压。结果两组在治疗后GFR均升高;α-微球蛋白的降低均有统计学意义,且厄贝沙坦组的疗效优于左旋氨氯地平组(P<0.01)。两组在用药后收缩压、舒张压均达到目标值(P<0.01),两组间比较无统计学意义。结论左旋氨氯地平和厄贝沙坦在有效降压的同时,可使α-微球蛋白降低,使GFR升高;厄贝沙坦的作用优于左旋氨氯地平。它们对高血压病早期肾功能有保护作用。

肺炎支原体肺炎患儿血、尿α-1微球蛋白测定

目的 :探讨血、尿α 1微球蛋白检测在小儿肺炎支原体肺炎患儿肾脏损伤中的诊断意义。方法 :采用速率免疫散射比浊法和放射免疫法分别检测了 135例小儿肺炎支原体肺炎、130例其他病原所致肺炎患儿血、尿α 1微球蛋白异常率 ,并与血清肌酐异常率作对比 ;130例正常儿童作为对照。结果 :肺炎支原体肺炎组小儿指标水平均高于其他 2组 (P <0 .0 0 1)。支原体肺炎组血、尿α 1微球蛋白异常率及血肌酐异常率分别为 2 9.1%、33.5 %和 5 .5 % ,其他病原肺炎组异常率分别为 7.3%、7.1%和 3.3% ,正常对照组 0、0 .8%和 0 ,3组间比较差异均有统计学意义 (P <0 .0 1) ;结论 :血、尿α 1微球蛋白检测是反映小儿肺炎支原体肺炎早期肾损伤的一种较灵敏的指标。

中国人群中肿瘤坏死因子α-308A/G基因多态和α2-巨球蛋白基因缺失多态与晚发性阿尔茨海默病无相关性(英文)

晚发性阿尔茨海默病 (LOAD)是老年痴呆中最常见的一种 ,它是一种病因复杂、由遗传因素和环境等其他因素共同作用引起的老年期疾病。服用非甾类抗炎类药物能延缓或防止LOAD的发病说明炎症反应可能参与LOAD病理 ,肿瘤坏死因子 (TNF)是炎症反应中主要的细胞因子 ,并且能增加 β 淀粉样肽 (Aβ)的产生说明其可能是LOAD的易感基因。α2 巨球蛋白 (A2M)是一种血清蛋白酶抑制剂 ,它是低密度脂蛋白受体相关蛋白 (LRP)主要的配体 ,并且能与Aβ结合并介导其降解和清除 ,说明它可能是另一个LOAD的易感基因。在 6 7名晚发性阿尔茨海默病人和 14 2名正常对照中比较了载脂蛋白E基因 (APOE)、TNF启动子区 (- 30 8A G)多态和A2M一 5bp核苷酸缺失 (I D)多态 (A2M 2 )与LOAD发病风险的关系。结果显示 ,APOEε4等位基因在AD病人组中显著高于对照组 (χ2=11 6 6 ,P <0 0 1) ,而TNF(- 30 8A G)多态和A2M缺失多态的基因型和等位基因在LOAD病人组和对照组中都无显著差别 (P >0 1)。按年龄和APOEε4等位基因分组同样无相关性 ,说明TNF 30 8A

α-2u球蛋白与化学物质危害性的评价

动物实验结果是评价外源化学物质暴露是否对人类构成危害的资料来源。α 2u球蛋白是雄性大鼠肝脏分泌的特殊蛋白质 ,部分经肾小管重吸收而被代谢 ,部分随尿液排出体外 ,当大鼠服用某些化学物质如糖精钠等后 ,可致大鼠肾及膀胱的特异性损害 ,甚至导致肿瘤的发生。由于人类体内不合成与分泌此类蛋白质 ,因而从雄性大鼠得到的实验结果外推至人类时其意义不同。为此本文就近年来研究较多的雄性大鼠肝脏特异性分泌的α 2u球蛋白在评价和研究化学物质是否对人类构成危害方面进行综述。

尿α-1微球蛋白和尿免疫球蛋白G与移植肾功能的关系

目的研究肾移植术后受者尿α-1微球蛋白、尿免疫球蛋白G(IgG)的变化规律及其与移植肾功能短期转归之间的关系。方法29例肾移植受者,于肾移植术后第1、7、14、21、28天分别检测晨尿α-1微球蛋白和尿IgG含量;根据临床、实验室、影像学等检查综合评价移植肾功能状况;分析尿α-1微球蛋白和尿IgG与血清肌酐(SCr)的关系。结果在肾移植术后1月内,尿α-1微球蛋白、尿IgG与SC r水平相关。29例中移植肾功能恢复正常15例(A组),移植肾功能未恢复正常14例(B组);A组尿α-1微球蛋白显著降低(P<0.05),A组中符合尿α-1微球蛋白和尿IgG临界值(<10 mg/dL,<2 mg/dL)的受者检测例次明显多于B组(P<0.01)。两组间尿α-1微球蛋白/SC r比值存在显著差异。结论尿α-1微球蛋白和尿IgG与肾移植受者短期肾功能相关。

α-巨球蛋白对不同年龄阶段凝血酶生成能力的影响

目的分析α-巨球蛋白对不同年龄段凝血酶的生成能力的影响。方法采用全血TG测定方法年龄1月到1岁、1-5、6-10、11-15岁,以及成年4个组各20例正常人进行总ETP、与结合α-巨球蛋白结合的凝血酶EPT、游离凝血酶EPT测定。结果有11-15岁时期的与结合α-巨球蛋白结合的凝血酶EPT显著低于成年组,而总ETP和游离凝血酶EPT与成年组也有显著性差异,同时游离凝血酶EPT随年龄逐渐增高。α-巨球蛋白对ETP的测定有影响,游离ETP的测定是必需的。

α-巨球蛋白基因与阿尔茨海默病

淀粉样蛋白沉积导致的老年斑是阿尔茨海默病的主要病理特征。位于12号染色体的α-巨球蛋白基因介导淀粉样蛋白的清除和降解作用,而淀粉样蛋白是淀粉斑的主要组成部分。本文对α-巨球蛋白基因的生理特性、α-巨球蛋白基因突变在阿尔茨海默病发病中的作用进行综述,旨在为明确阿尔茨海默病的发病机理、寻求实验室诊断方法提供参考依据。

α-巨球蛋白对不同年龄阶段凝血酶生成能力的影响

目的:分析α-巨球蛋白对不同年龄段凝血酶的生成能力的影响。方法:采用全血TG测定方法年龄1个月～1岁、1岁～5岁、6岁～10岁、11岁～15岁,以及成年4个组各20例正常人进行总ETP、与结合α-巨球蛋白结合的凝血酶EPT、游离凝血酶EPT测定。结果:在11岁～15岁年龄段的与结合α-巨球蛋白结合的凝血酶EPT显著低于成年组;而总ETP和游离凝血酶EPT与成年组也有显著性差异,同时游离凝血酶EPT随年龄逐渐增高。结论:α-巨球蛋白对ETP的测定有影响,游离ETP的测定是必需的。

连续式微滤膜分离乳清蛋白的研究

文章研究了跨膜压力对连续式微滤膜分离技术工艺参数、分离效果及组分组成的影响。以脱脂乳为原料,使用0.1μm陶瓷微滤膜三级连续在线洗滤工艺分离乳清蛋白和酪蛋白。实验使用0.08、0.11、0.14 MPa 3个梯度,在50℃,3.5倍浓缩的条件下连续生产240 min。计算跨膜压力并且检测截留液和透过液中的α-乳白蛋白(α-La),β-乳球蛋白(β-LG)含量及钾、钙、钠、镁等金属离子的含量。结果表明一级膜通量下降是导致整体膜通量下降的主要因素,经过240 min实验通量下降约17.2%。研究了不同跨膜压力下的膜通量变化情况,膜通量与跨膜压力呈正相关关系,水洗恢复率与跨膜压力呈负相关关系。随着实验时间的延长,膜表面形成不可逆的污堵层,乳清蛋白分离率下降,透过液中乳清蛋白含量下降,150 min后α-乳白蛋白浓度下降37%,β-乳球蛋白浓度下降36.5%。乳清蛋白中2种主要蛋白质比例会随着跨膜压力变化而变化,随着跨膜压力的升高β-乳球蛋白含量会逐渐升高。三级连续膜过滤后,乳清蛋白最高分离率90%左右(α-乳白蛋白为90.4%,β-乳球蛋白为92.7%)。乳中蛋白质的形态和功能受金属离子影响,分离过程中一价阳离子在膜两侧分布较均匀(脱除率大于80%),而二价阳离子则主要集中在截留液一侧(钙离子脱除率为38%)。透过液中的每克蛋白质所对应的金属离子比例远远大于其在截留液中的比例。

宫颈长度联合宫颈分泌物胎盘α-1微球蛋白预测先兆早产孕妇早产的价值研究

背景预防早产是现代医学围生期的一项重要任务,也是降低新生儿发病率和死亡率的关键。目的探究宫颈长度(CL)联合宫颈分泌物胎盘α-1微球蛋白(PAMG-1)预测先兆早产孕妇早产的价值。方法选取2017年1月—2020年1月在金华市妇幼保健院就诊的适龄(20~32岁)先兆早产孕妇252例为研究对象。依据孕周及其他研究结果将研究对象划分为3个阶段,第一阶段为妊娠28~30周,第二阶段为妊娠31~33周,第三阶段为妊娠34~36周。采用经阴道超声测量孕妇CL,并检测宫颈分泌物PAMG-1。以先兆早产孕妇临床是否发生早产为金标准,比较第一阶段、第二阶段、第三阶段不同CL、PAMG-1先兆早产孕妇早产发生率;分析各阶段CL、PAMG-1及CL联合PAMG-1对先兆早产孕妇早产的预测价值;探究CL、PAMG-1与先兆早产孕妇早产的定量关系。结果252例先兆早产孕妇处于第一阶段67例、第二阶段95例、第三阶段90例。第一、二、三阶段CL<2.5 cm、PAMG-1(+)先兆早产孕妇早产发生率高(P<0.05);第一、二、三阶段不同CL联合PAMG-1情况先兆早产孕妇早产发生率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。第一阶段CL<2.5 cm预测先兆早产孕妇早产的灵敏度和特异度分别为69%和67%,PAMG-1(+)的灵敏度和特异度分别为63%和75%,CL<2.5 cm联合PAMG-1(+)的灵敏度和特异度分别为56%和78%;第二阶段CL<2.5 cm预测先兆早产孕妇早产的灵敏度和特异度分别为74%和79%,PAMG-1(+)的灵敏度和特异度分别为56%和66%,CL<2.5 cm联合PAMG-1(+)的灵敏度和特异度分别为53%和87%;第三阶段CL<2.5 cm预测先兆早产孕妇早产的灵敏度和特异度分别为76%和56%,PAMG-1(+)的灵敏度和特异度分别为83%和65%,CL<2.5 cm联合PAMG-1(+)的灵敏度和特异度分别为62%和71%。多因素Logistic回归分析结果显示,CL[OR=0.331,95%CI(0.182,0.601)]、PAMG-1[OR=0.332,95%CI(0.182,0.605)]与先兆早产孕妇早产有定量关系(P<0.05)。结论CL、PAMG-1对预测先兆早产孕妇各阶段早产具有一定的指导价值,CL联合PAMG-1提高了早产预测的特异度,而灵敏度稍有降低;CL联合PAMG-1对预测妊娠31~33周先兆早产孕妇早产具有较高的价值。

糖尿病早期肾病患者超敏C反应蛋白与尿α_1-微球蛋白的检测分析

目的:探讨尿α1-微球蛋白(α1-MG)和血超敏C反应蛋白(Hs-CRP)对诊断糖尿病早期肾损伤的应用价值。方法:采用免疫比浊法对50例糖尿病肾病患者的血清Hs-CRP和尿α1-MG进行了检测,与正常对照组做了比较分析。结果:糖尿病组α1-MG和Hs-CRP明显高于对照组(P<0.01),且联合检测异常检出率达92%,明显高于单项检测。结论:Hs-CRP和尿α1-MG是诊断2型糖尿病早期肾损伤的敏感指标,两指标联合使用可提高糖尿病肾病(DN)的阳性检出率。