聚乙二醇/(NH_4)_2SO_4双水相体系分离纯化α-磷酸甘油氧化酶

铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus)在诱导剂甘油存在的条件下,经发酵培养可合成和分泌α-磷酸甘油氧化酶。该菌的无细胞抽提液可通过聚乙二醇(PEG)/(NH4)2SO4双水相萃取法有效进行α-磷酸甘油氧化酶的分离和纯化。研究结果表明,PEG分子大小、PEG浓度、pH、(NH4)2SO4浓度和无机盐及粗酶液的加入量是影响该萃取系统的主要因素,最终确定的最适双水相系统为16.5%(m/m)PEG2000、13.2%(m/m)(NH4)2SO4、pH7.5和30%(m/m)的粗酶加入量。无机盐NaCl的加入对萃取α-磷酸甘油氧化酶会产生负面影响,导致低的纯化倍数和活性回收率。此双水相萃取体系用于放大提取α-磷酸甘油氧化酶,其酶活性回收率可达89%、分配率为1.2、纯化倍数为7.0。

半自然驯化条件下黑线姬鼠冬夏两季产热的比较

为探讨小型哺乳动物适应于季节性环境的产热机制,本文测定了户外半自然条件下驯化的黑线姬鼠(Apodemus agrarius)冬、夏两季的体重以及肝和褐色脂肪组织(Brown adiposetissue,BAT)的细胞色素c氧化酶及BATα-磷酸甘油氧化酶活力等指标。结果显示黑线姬鼠冬季体重显著降低,BAT绝对重量、BAT和肝的线粒体蛋白含量及BAT和肝酶的活力冬季均显著高于夏季。冬季BAT细胞色素c氧化酶活力是夏季的9.5倍,肝脏细胞色素c氧化酶活力是夏季的5倍;冬季BAT的α-磷酸甘油氧化酶活力高达夏季的19倍。以上结果表明,在寒冷的冬季为保证存活,黑线姬鼠降低体重以减少绝对能量需求,并极大地增加BAT重量及肝和BAT细胞水平上的产热能力。