α-突触核蛋白的突变体A53T对小胶质细胞激活的影响

目的:探究重组人的野生型α-突触核蛋白(wild type alpha-Synuclein,WTα-Syn)和重组人的α-突触核蛋白突变体A53T(α-Synuclein mutant A53T,α-Syn A53T)对原代小胶质细胞的影响。方法:无菌培养原代小胶质细胞,细胞静息状态下加药处理,通过免疫荧光染色观察小胶质细胞的形态和Western Blot半定量分析CD11b的变化。结果:高浓度的WTα-Syn可以激活小胶质细胞;CD11b蛋白表达量明显升高;而2μmol/L和5μmol/L的α-Syn A53T均能激活小胶质细胞,CD11b蛋白表达量均升高。结论:相同浓度的WTα-Syn和α-Syn A53T,α-Syn A53T更容易激活小胶质细胞。

A53T转基因小鼠体内α-突触核蛋白改变研究

目的研究α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)A53T转基因小鼠体内α-syn的分布和修饰变化情况。方法采用α-syn A53T转基因小鼠作为帕金森病(parkinson's disease,PD)模型小鼠,应用Western blot实验方法来检测A53T转基因小鼠和野生型C57BL/6小鼠的胃、黑质和纹状体中α-syn的表达含量和异常聚集情况。结果相比于野生型小鼠,A53T转基因小鼠的胃、黑质和纹状体中α-syn(C-20)、硝基化α-syn(n-syn)表达均显著增加;胃和黑质中的磷酸化α-syn(p-syn)含量降低,纹状体中p-syn含量升高;黑质和纹状体中寡聚体形式的α-syn(5G4)含量升高,胃中含量降低。其中,n-syn在胃组织中含量最高,寡聚体形式的α-syn在黑质部位含量最高,p-syn在纹状体部位含量最高。结论A53T转基因小鼠体内α-syn总蛋白增加,而异常修饰和聚集化的α-syn在不同器官内的含量变化有所差异,提示A53T相关的α-syn病变有组织特异性分布特点。

白藜芦醇改善α-突触核蛋白A53T转基因小鼠运动功能障碍和调节外周免疫的作用研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)A53T转基因小鼠运动功能障碍及外周免疫的影响。方法选取8月龄的A53T转基因小鼠,随机分成4组:对照组(WT)、对照治疗组(WT+RES)、模型组(PD)、模型治疗组(PD+RES)。治疗组每3 d灌胃RES,用药3个月;对照组和模型组给予等量生理盐水。通过爬杆实验、转棒实验、前脚抓力实验、四肢抱紧实验检测各组小鼠运动水平。流式细胞仪检测小鼠T淋巴细胞亚群,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-18(IL-18)以及转化生长因子-β(TGF-β)的水平。结果与对照组相比,模型组运动功能评分均较低;与模型组相比,模型治疗组运动功能评价显著改善。流式结果显示,与对照组比,模型组小鼠外周T细胞占比、CD4^(+)T细胞占比、CD4^(+)/CD8^(+)比值均降低,CD8^(+)T细胞占比无统计学意义。与模型组相比,模型治疗组T淋巴细胞占比和CD4^(+)T细胞占比均显著升高,有统计学意义,CD4^(+)/CD8^(+)比值也升高,但差异无统计学意义。外周血血清ELISA结果显示,与对照组相比,模型组小鼠IL-6、IL-18均升高,TGF-β降低,TNF-α浓度无统计学差异。与模型组相比,模型治疗组IL-6、IL-18浓度显著下降,TGF-β有所上升,结果无统计学意义。结论RES通过调节小鼠外周免疫,减少神经炎症反应,从而显著改善A53T转基因小鼠的运动功能障碍。

过表达E46K突变体α-突触核蛋白抑制线粒体自噬的研究

目的研究E46K突变体α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)对线粒体自噬的影响。方法构建稳定表达E46K突变体α-syn的PC12细胞株,检测细胞内活性氧含量和细胞凋亡的发生,并通过western blot和免疫共沉淀方法检测线粒体自噬相关蛋白Parkin、PINK1的细胞内定位和相互作用情况。结果本研究成功构建稳定表达E46K突变体α-syn的细胞株。在线粒体解偶联剂CCCP作用下,过表达E46K突变体α-syn可导致细胞内活性氧含量和细胞凋亡显著增加,并抑制线粒体自噬蛋白Parkin由细胞浆向线粒体募集,导致Parkin与PINK1相互作用减少。结论过表达E46K突变体α-syn可能通过抑制线粒体自噬发生促进帕金森病(PD)的发生和发展。

α-突触核蛋白A53T基因多态性与帕金森病相关性研究

目的分析中国人群α-突触蛋白A53T基因多态性与帕金森病（Parkinson’sdisease，PD）的相关性。方法采用常规聚合酶链式反应测定224例散发性PD患者（PD组）、154例健康体检人员（对照组）的α-突触蛋白A53T基因多态性。PD患者根据Hoehn—Yahr分级（H—Y分级）标准分为H-Y≥3组（n=172）与H．Y≤2．5组（n=52）。使用SPSS19．0软件对各组基因型和等位基因频率以及A53T基因的表达与PD病情严重程度的相关性进行χ2检验分析。结果PD组与对照组A53T基因型A／A频率分别为40（17．9％）、10（6．5％）（χ2=10．267，P=0．001，OR=3．13，95％CI=1．514～6．473）；等位基因A频率分别为160（35．7％）、70（22．7％）（χ2=14．543，P=0．000，OR=1．889，95％CI：1．359-2．625）。H-Y≥3组A53T基因型A／A频率为30（17．4％），H—Y≤2．5组A53T基因型A／A频率10（19．2％），与对照组比较，均差异有统计学意义（P=0．003，0．007）；H—Y≥3组等位基因A频率为122（35．5％），H—Y≤2．5组等位基因A频率为38（36．5％），与健康对照组比较，均差异有统计学意义（P=0．000，0．006）。H—Y≥3组与H—Y≤2．5组A53T基因型A／A、等位基因A频率比较，均差异无统计学意义（P=0．768，0．841）。结论中国人群中A53T基因多态性为帕金森病发病的易感因素，但其与散发性PD病情严重程度无明显相关。

主要组织相容性复合体调控帕金森病的免疫反应

背景:免疫反应与帕金森病的病理发展密切相关。研究表明,主要组织相容性复合体在免疫应答中发挥关键作用。目的:综述主要组织相容性复合体调控免疫反应的机制以及对帕金森病病理标志物α-突触核蛋白的影响。方法:以“Parkinson’s disease,the major histocompatibility complex,innate immunity,adaptive immunity,microglia,T cell,B cell,α-syn,inflammation,MHC-Ⅰ,MHC-Ⅱ,immunotherapy”为检索词在PubMed数据库检索文献,最终纳入92篇文献进行分析。结果与结论:①先天性免疫反应参与帕金森病的发生发展,小胶质细胞的促炎和抗炎表型的变化可能加剧帕金森病退行性变;②T细胞的表型和功能与帕金森病的进展有关,调节性T细胞促进抗炎小胶质细胞活化,抑制Th亚群;B细胞介导的体液免疫可清除病理性α-突触核蛋白,具体机制需要进一步研究;③主要组织相容性复合体与先天性免疫和适应性免疫的发生密切相关,对帕金森病的炎症产生影响;④α-突触核蛋白调控小胶质细胞的激活和主要组织相容性复合体的表达,导致帕金森病的炎症变化;⑤α-突触核蛋白与帕金森病的免疫反应密切相关,成为治疗帕金森病的重要靶点。

一个农药接触群发性帕金森病家系α-突触核蛋白基因的研究

目的 探讨α-突触核蛋白（SNCA）基因A53T位点突变、A30P位点突变与一个群发性帕金森病家系的关系,进而探讨该家系帕金森病的发病病因是否与遗传因素相关。方法 该家系病史特点其父为当地农药商人,他们共同特点有长期农药接触史（其中包括百草枯和有机磷农药）。对该家系3例患者及3例正常成员进行系统的临床检查明确诊断原发性帕金森病后,提取该家族患者及健康人的静脉血,提取人类白细胞组DNA后,通过聚合酶链反应技术（PCR）对SNCA的4号外显子（Exon4）A53T位点及3号外显子（Exon3）上的A30P位点进行扩增,扩增后的产物经限制性内切酶反应多肽技术充分反应,限制性内切酶消化后的产物经紫外线凝胶电泳成像仪分析是否存在基因突变。结果 所有研究对象的SNCA基因Exon3经PCR扩增后的片段长度为192 bp,经特异性限制性内切酶MvaⅠ充分消化后,凝胶电泳成像结果为单一条带,即未发现A30P突变。SNCA基因Exon4经PCR扩增后的片段长度为216bp,经限制性内切酶Tsp45Ⅰ充分反应后,凝胶电泳成像结果为单一条带,即未发现A53T突变。结论 SNCA基因A30P、A53T点突变可能不是该家系患帕金森病的易感因素,而是与该家系长期接触农药相关,或与其他基因相互作用。

天麻对帕金森小鼠神经元保护作用机制的转录组学分析

目的：研究天麻水煎液对A53Tα-突触核蛋白（α-synuclein）转基因帕金森小鼠的治疗作用,及其对凋亡相关通路表达的影响。方法：以A53Tα-synuclein转基因帕金森小鼠为实验对象,设置模型组、天麻组、空白组、阳性组（美多芭组）;采用基因型鉴定法、苏木素-伊红（HE）染色法和行为学实验测定小鼠中脑黑质神经元病理改变,以判断造模是否成功;Illumina Hi Seq 2500平台测序,检测天麻组所有基因转录本的差异表达,通过功能注释和富集分析筛选出与帕金森保护相关的基因及代谢途径。结果：预给予天麻水煎液治疗后能改善A53Tα-synuclein转基因帕金森小鼠中脑黑质神经元病变,转录数据分析显示其作用机制主要涉及原癌基因大鼠肉瘤（Ras）,p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）及Ca2＋等相关凋亡途径的抑制或激活调控。与模型组相比,天麻组中多巴胺第三受体,神经肽Y,Ras蛋白特异鸟嘌呤核苷酸释放因子1,钙/钙调蛋白依赖的磷酸二酯酶1A等基因表达上调,原癌基因c-Fos,p38 MAPK和人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3等凋亡基因表达下调。结论：天麻水煎液对A53Tα-synuclein转基因帕金森小鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与抑制多种凋亡相关信号通路有关。